Atlas Interactivo de Pruebas Bioquimicas

Universidad Nacional
Autónoma de México
Facultad de Estudios
Superiores Zaragoza
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Universidad Nacional Autónoma
de México
Facultad de Estudios Superiores

Zaragoza
Q.F.B LUCÍA BAILÓN LIRA
Q.F.B. ROBERTO C. GONZÁLEZ

MELÉNDEZ
M. en C. ARMANDO CERVANTES
SANDOVAL
MEDIOS DE CULTIVO
TÉCNICAS DE
INOCULACIÓN
PRUEBAS
Ingraham J.L.2000. . BIOQUÍMICAS
MEDIOS DE
Definición
CULTIVO
Medios
básicos
Medios
enriquecidos
Pruebas Medios selectivos

bioquímicas diferenciales y de
enriquecimiento
Medios
especiales
Por consistencia
Otras
clasificaciones
Por composición FINALIZAR
Tipos de asas
TÉCNICAS DE
INOCULACIÓN
Medio líquido
Medio sólido
Inoculación en tubo
Medio semisólido
Inoculación en placa
Estría Vaciado en placa
Estría cruzada Estría simple Estría en Z Inoculación masiva
FINALIZAR
REDUCCIÓN DE LA
FERMENTACIÓN DE PRUEBA DE
LECHE CON AZUL DE
CARBOHIDRATOS METILENO FENILALANINA
PRUEBA DE OXIDACIÓN
PRUEBA DE
CITRATO
Y S I M
FERMENTACIÓN (O/F)
LICUEFACCIÓN PRUEBA DE UREA

DE GELATINA
T S I
LECHE CON REACCIÓN RMVP

TORNASOL
L I A
REDUCCIÓN DE
NITRATOS M I O
FINALIZAR
Un medio de cultivo es cualquier sustancia que
pueda ser usada para el cultivo de microorganismos.
Los medios sirven para uno de dos propósitos

principales:
Fomentar el crecimiento microbiano en forma que
puedan comprobarse las características de cultivo.
Facilitar algunas reacciones bioquímicas que luego
puedan ser demostrables por observación directa o
bien indirectamente por la reacción en presencia de
algunos reactivos adicionales.
Todas las reacciones de cultivo así como las
bioquímicas, dependen de la composición del medio y
de la naturaleza del cultivo que se estudie.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en: Koneman,1992
1. Medios básicos
2. Medios enriquecidos
3. Medios selectivos, diferenciales y de Placas de agar soya tripticasa inoculado con una
enriquecimiento bacteria que produce un pigmento amarillo, importante
4. Medios especiales característica diferencial para identificar bacilos gram
negativos no fermentadores.
FINALIZAR MENÚ MEDIOS DE CULTIVO

 Son aquellos medios que solo contienen algún extracto de carne u otra infusión
simple, peptona, sal y agua.
 El extracto o la infusión de carne proporcionan al organismo los aminoácidos,

vitaminas, sales, y pequeñas cantidades de carbono, nitrógeno, hidrógeno y otros
elementos.
 Las sales usualmente cloruro de sodio sirven para obtener isotonicidad requerida
para el mantenimiento de presiones osmóticas constantes.
 El agua sirve como disolvente, como medio de transporte o para ambos fines.
 Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, son
líquidos; para el estudio de las características de las colonias es indispensable el uso
de medios sólidos.
 La solidificación se consigue agregando agar, gelatina, albúmina de suero o de

huevo, a los otros ingredientes.
 Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio sólido que no se desintegra por los
medios físicos usados en el cultivo de la mayoría de los microorganismos.
Ejemplos
FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

Ejemplos de medios básicos
1. Caldo nutritivo
2. Agar nutritivo
3. Caldo de triptona y soya
4. Caldo de infusión de cerebro y corazón
5. Agar de infusión de cerebro y corazón
6. Caldo de infusión de corazón

Koneman,1992
7. Agar y extracto de hígado Agar EMB con crecimiento de E. coli,

colonias de color verde birillante, las
Dextrosa de Saboraud
especies de Shigella no fermentan lactosa,
8. por eso se ven translucidas.
Son aquellos medios básicos que han
sido complementados con líquidos
corporales, vitaminas específicas,
aminoácidos, proteínas y otros
nutrientes claramente definidos como
tales.
Ejemplos:
 Agar sangre
 Agar sangre chocolate
 Caldo de suero
 Agar con suero
 Suero de Loeffler con sangre
 Medios inclinados con suero
 Agar de Bordet Gengou
 Medio de Levinthal
 Agar de Mueller-Hinton
 Agar infusión de cerebro corazón
 Agar proteosa
Hacer clic
Hemólisis

Los medios selectivos son usualmente medios de agar básico, o
enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que
impiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias, permitiendo por
lo tanto el aislamiento de unas cuantas seleccionadas en los
especimenes que contengan grandes números de organismos
indeseables.
Los medios diferenciales son medios básicos o enriquecidos, a los

cuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarán con
algunos tipos específicos de bacterias en cierta forma observable.
Los medios de enriquecimiento son por lo general medios líquidos

enriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con lo
que se crea un medio ambiente especialmente favorable para límites
más bien estrechos de bacterias.
Ejemplos

Ejemplos de medios selectivos,
diferenciales y de enriquecimiento
 Medio de Thayer Martin  Agar de Mac Conkey
 Agar con feniletanol  Agar Salmonella – Shigella
 Agar con sangre y bilis al  Agar con eosina y azul de metileno
40% (EMB)
 Agar con esculina y bilis  Agar de bilis y rojo de violeta
 Agar con sangre y telurito  Agar dextrosa y tripticaseina
 Medio de Tinsdale modificado  Agar entérico Hektoen
 Agar con Lowenstein Jensen  Agar S-110
en tubos inclinados  Agar tergitol 7
 Agar con citrato y  Agar verde brillante
desoxicolato  Agar Vogel Jhonson
 Agar de sulfito de bismuto  Agar Baird-Parker
 Caldo de selenito de sodio  Agar sal y manitol
 Agar XLD (xilosa, lactosa,  Agar sangre con azida
desoxicolato)
Son los medios que no pueden ser fácilmente
agrupados bajo alguno de los anteriores grupos.
La mayoría de ellos serán medios empleados para

comprobar una o más a características bioquímicas, lo cual
facilita la clasificación, en este caso de las bacterias y
hongos.
Ejemplos:
Pruebas bioquímicas

Koneman,1992 Koneman,1992
1. Medios sólidos. Son útiles para el crecimiento, aislamiento y

obtención de cultivos puros de bacterias.
2. Medios semisólidos. Útiles para la observación de metabolismo,

así como la propagación y obtención de cultivos de bacterias
anaeróbicas.
3. Medios líquidos. Permiten la difusión del microorganismo.

 Medios sintéticos
Es aquel en el que se conoce la Hacer clic
composición química exacta de Clasificación de reinos
los ingredientes.
Medio no sintético
No se conoce de una manera
definida la composición precisa de
alguna o de todas las sustancias
nutritivas.
Koneman,1992

Por picadura en forma
vertical
Cuando se inocula agar

semisólido en un tubo para
pruebas de motilidad (aunque
no sea la única prueba que se
valora) es importante que el
asa de inoculación sea
retirada a lo largo del mismo
camino que se usó para
atravesar inicialmente el
medio. Solo se pica el agar
con un movimiento uniforme
y recto y para ello se utiliza el
asa recta.
Documento electrónico
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Hacer clic

Difusión
 Los medios líquidos se inoculan como en el método ilustrado; el tubo debe

inclinarse aproximadamente 30°, con un asa de inoculación se toca la superficie
interna del vidrio, exactamente por encima del punto donde la superficie del medio
forma un ángulo agudo. Se debe utilizar el asa con arillo.
 Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posición erecta, el área de
inoculación queda sumergida en el medio.
 Agitar suavemente cada tubo. No dejar que el líquido salpique la tapa del tubo.
 Sí se inocula una batería con una misma especie de bacteria no hay necesidad de
pasar por la llama entre cada inoculación.
 Cuando se utiliza una aguja o asa para inocular una batería con un solo inóculo, el
traspaso de azúcares de un tubo a otro es tan infinito que no hay problema de que
un tubo contenga una mezcla de carbohidratos.
 Sí se inocula una batería no es necesario observar en forma apreciable el inóculo en
cada uno de los tubos. Un solo inóculo espeso tomado de cultivo contiene millones
de bacterias que son suficientes para inocular cada tubo con un número apreciable
de bacterias necesarias para que se produzca el metabolismo.
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN

Hacer clic
Pico de flauta o cola de pescado (en tubo)
a) Por punción (picadura) b)
b) Por estría
c) Por punción y estría
Los picos de flauta (planos inclinados) de

agar se inoculan de la siguiente forma:
primero se atraviesa todo el fondo del agar
con el asa recta de inoculación, esto cuando
sea necesario ya que no todos los medios lo
requieren, posteriormente éste se retira con
un movimiento en “S” a través del agar,
con lo que se disemina el inóculo. Se utiliza
el asa recta.
a) c)
Hacer clic
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Hacer clic
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Documento electrónico
Estría simple Estría en Z
Inoculación
masiva

MUESTRA POR SER 9 ml DE SOLUCIÓN.
CONTADA SALINA
COLONIAS
AGAR
FUNDIDO
VERTIDO EN PLACA COLONIAS AISLADAS
Ingraham L.J. 2000, modificado
Hacer clic
FINALIZAR TÉCNICAS DE INOCULACIÓN Vaciado en placa
Asa en arillo
Asa recta
Hisopo Documento electrónico

Condiciones de
Medio de cultivo
incubación
Fundamento Inoculación
Consistencia
Aplicaciones
del medio
Reporte de
Interpretación
resultados
Resultados
ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Medio de cultivo: Caldo básico rojo de
fenol y carbohidratos.
Composición:
a) Peptona
b) Extracto de carne
c) Cloruro de sodio
d) Agua destilada
e) Indicador de pH: Rojo de fenol
 Ácido: Color amarillo (pH = 6.8)
 Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4)
 Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4) Tinción de Gram: Micrococcus sp
Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina,

lactosa, inositol, sacarosa, salicina y rafinosa, principalmente.
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ

Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar)
un carbohidrato específico incorporado a un medio básico.
La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción que ocurre en

un medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirve
como el aceptor final de hidrógeno (electrones). En los sistemas de prueba
bacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores
de pH a medida que se forman productos ácidos.
Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general

anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentación un carbohidrato es
degradado y descompuesto en dos moléculas de carbono (triosas) que son
nuevamente degradadas en un número de compuestos de 1,2,3 y 4 carbonos. Los
productos finales varían con cada especie bacteriana y depende del sistema
enzimático existente en la especie y las condiciones del medio ambiente.
El más importante ciclo fermentativo de la degradación de la glucosa es el ciclo

de Embden - Meyerhof aun cuando éste también puede producirse por la derivación
de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos de
carbono.

Utilizando un indicador de pH con un determinado
carbohidrato puede determinarse si una bacteria ha degradado
el mismo en varios productos terminales, observando un cambio
de color visible en el medio.
bacteria
Indicador de pH + CHO H2CO2 (aldehídos) + cambio de color
glucólisis

Consistencia del medio
Líquido
Condiciones de incubación
Tiempo: 24 - 48 horas
Temperatura: 35 - 37° C
Inoculación
Por difusión, inóculo denso

Interpretación
Positiva = Color amarillo (ácido)
Negativa = Color rosa – rojizo
(alcalina)
Color anaranjado
Reporte de resultados
Koneman,1992 A = ácido
K = alcalino
Agar XLD con crecimiento de E. coli a las 24 horas. El G = gas
aspecto amarillo alrededor de las colonias indica
utilización de lactosa y sacarosa, por que se ha
producido una caida suficiente del pH por debajo del
punto decisivo del indicador rojo de fenol.
Identificación de
Staphylococcus
Hacer clic
MEDIO NO INOCULADO NEGATIVO
POSITIVO NEGATIVO

Microorganismos Fermentadores de
Carbohidratos:
 Fermentadores de glucosa: Todos los

miembros de las Enterobacteriaceae.
 Fermentadores de glucosa y lactosa: Ingraham L.J. 2000
Escherichia coli, Klebsiella y grupos
Enterobacter.
 Fermentadores de manitol: Staphylococcus
aureus
 Fermentadores de inositiol: Proteus rettgeri
 Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica
 Fermentadores de adonitol: Providencia
alcalifaciens
 Fermentadores de inulina: Streptococcus
salivarius y Streptococcus sanguis
 Fermentadores de sacarosa: Yersinia
enterocolitica
 Fermentadores de salicina: Listeria
monocytogenes Yersinia enterocolitica. American
Museum of Natural History, 1998.

Microorganismos no Fermentadores de
Carbohidratos:
 No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas

como Salmonella y Shigella.
 No fermentadores de manitol: Staphylococcus
epidermidis
 No fermentadores de salicina: Especies de
Corynebacterium
 No fermentadores de rafinosa: Otras especies de
Aeromonas
 No fermentadores de inositol: P roteus morganii
 No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii
 No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D
 No fermentadores de sacarosa: Otras especies de
Escherichia coli vista en Yersinia
microscopio electrónico

Condiciones de
Medio de cultivo incubación
Consistencia
del medio
Interpretación Reporte de
resultados
Resultados Aplicaciones

 Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única
fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando
alcalinidad.
 El medio incluye citrato de sodio un anión como única fuente de carbono, y

fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno.
 Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de

acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El
desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin la
intervención de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citrato
desmolasa. El oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismo
del citrato.

Los productos obtenidos del metabolismo del citrato
dependen del pH del medio:
pH básico:
Citrato CO2 + ácido fórmico + 2 ácido acético
pH ácido:
2 Piruvato acetato + CO2 + lactato
2 Piruvato acetoína + 2CO2

Medio de cultivo: Citrato de Simmons
Composición:
a) Sulfato de magnesio
b) Monofosfato de amonio
c) Fosfato dipotásico
d) Citrato de sodio
e) Cloruro de sodio
f) Agar
g) Agua destilada
h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH = 6)
Alcalino : color azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)
Ingraham L.J. 2000

Consistencia del medio
Sólido inclinado (pico de flauta)
Inoculación
Se inocula como una estría única
Black, 1996
en la superficie del pico de flauta.
Pseudomona sp, (8100x)
 Incubación
Tiempo = 24 - 48 horas
Temperatura = 35 - 37° C

Interpretación
Positivo : Crecimiento aunque no exista
Hacer clic
cambio de color.
Crecimiento y el medio de color azul
Características de
intenso en pico de flauta.
Corynebacterium diphteriae
Negativo : No se observa crecimiento y
medio de color verde.
Si se utiliza carbono a partir de
citrato de sodio, también se extrae
nitrógeno del fosfato de amonio
contenido en el medio, liberándose
amoniaco. En ocasiones se detecta
un crecimiento visible a lo largo de
la línea de siembra antes de la
aparición de color. Este crecimiento
visible también indica resultado
positivo.
Ingraham L.J. 2000 Reporte de resultados

Negativo (-)
Positivo (+)

MEDIO NO INOCULADO NEGATIVO
POSITIVO
POSITIVO POSITIVO
Microorganismos Microorganismos
positivos negativos
 Edwarsiella
Especies de :
 Yersinia enterocolitica
 Salmonella  Escherichia coli
 Arizona  Shigella
 Citrobacter  Yersinia
pseudotuberculosis
 Enterobacter
 Otras especies de
 Klebsiella Moraxella
 Serratia licuefaciens  Proteus morganii
 Pseudomonas cepacia
Black J.G. 1996

Condiciones de
Consistencia
del medio
resultados

Medio de cultivo : Gelatina nutritiva
Composición:
a)Extracto de carne
b)Peptona
c) Gelatina
d)Agua destilada
Streptococcus sp.

 Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo
proteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina.
 Las proteínas que se producen naturalmente son demasiado grandes para
entrar en una célula bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilice
las proteínas, primero debe ser catabolizada en componentes más
pequeños. Las enzimas exonucleares de tipo protelítico, gelatinasas, son
secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteínas y esta
capacidad ayuda a la identificación bacteriana.
gelatinasas
Proteína + H2O polipéptidos
proteasas
gelatinasas
Polipéptidos + H2O aminoácidos individuales
peptidasas

 Consistencia del
medio
Semisólido Black J.G. 1996
Colonias de Serratia marcescens en agar

EMB, produciendo pigmento
 Inoculación
Picadura en posición vertical
hasta una profundidad de 2 - 2.5
cm, inóculo denso. Condiciones de
incubación
Temperatura : 35 - 37° C
Al termino de la incubación se coloca el tubo en

un refrigerador o baño de hielo durante dos
horas para determinar si se ha producido o no la
digestión de la gelatina (licuefacción).
Pseudomona aeruginosa University of Missouri-Columbia,
1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm

 Interpretación Hacer clic
Identificación de
Positivo : Medio licuado (estado líquido) Staphylococcus
Negativo : Medio sólido
El medio de gelatina nutritiva para punción no es conveniente para

las pruebas de rutina de la actividad de la gelatinasa, dado que muchas
especies requieren una incubación prolongada antes de que aparezcan
muestras de licuefacción. En los métodos diagnósticos de rutina para
identificar bacterias, la duración de la incubación deberá alcanzar un
período razonable.
Reporte de resultados
Positivo (+)
Negativo (-)

MEDIO NO NEGATIVO POSITIVO
INOCULADO

Microorganismos positivos
 Staphylococcus aureus
 Staphylococcus epidermidis (lenta)
 Serratia liquefaciens
 Serratia marcescens
 Pseudomona aeruginosa (rápida)
 Especies de Flavobacterium
Microorganismos negativos
 Listeria monocytogenes

Condiciones de
Consistencia
del medio
resultados

Medio de cultivo: Medio de leche
tornasolada
Composición:
1. Leche descremada
2. Agua destilada
3. Indicador de pH: Tornasol
 Ácido : Color rojo (pH = 4.5) Clostridium perfringens, tinción
 Alcalino : Color azul ( pH = 8.3) de Gram.
 Medio no inoculado: Azul

purpúreo (pH = 6. 8)

Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiples
reacciones metabólicas en un medio lácteo como: fermentación de lactosa,
caseólisis, y coagulación de la caseína. El tornasol incorporado a la leche es
un indicador de pH y de oxidación-reducción que hace que el medio pueda
indicar diversas funciones metabólicas. La leche contiene lactosa, caseína,
lactoalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostrar
una o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada ayudando así
a la identificación bacteriana:
1. Fermentación de lactosa
2. Reducción del tornasol
3. Formación de coágulo
4. Peptonización (digestión)
5. Formación de gas

Fermentación de lactosa
 Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce

principalmente ácido láctico, con una condición ácida indicada por el
cambio de color del medio que se vuelve rojo rosado. A veces el ácido
butírico es el producto final.
 Ciertas bacterias que forman álcalis no fermentan lactosa, pero actúan

sobre las sustancias nitrogenadas que se encuentran en la leche
liberando amoniaco, y dando en consecuencia un pH alcalino que se
manifiesta por un color púrpura azulado.
Lactosa glucosa + galactosa
ácido láctico
Glucosa ácido pirúvico ácido butírico
CO2 + H2
Reducción del tornasol

 El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidación
reducción; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una
leucobase.

Formación de coágulo
 Las enzimas proteolíticas provocan la hidrólisis de las proteínas de la leche lo que resulta en su
coagulación. La principal enzima responsable de la formación de coágulo es la renina.
 La formación del coágulo es causada por la precipitación de la caseína, por la formación de

ácidos o por la conversión de la caseína en paracaseína por la enzima renina. La caseína es una
fosfoproteína compleja y es la proteína más importante de la leche.
Formación de un coágulo ácido

 La precipitación de la caseína provocada por los ácidos orgánicos a partir de lactosa en
condiciones ácidas produce un coágulo firme, gelatinoso que no se separa de las paredes del
tubo.
caseasa
Lactosa ácido Láctico + caseínato de Ca caseinógeno (pp)
Otra forma de coágulo es el coajo, o sea el proceso de coajado de la leche por la conversión
de la caseína en paracaseína por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina contenidas en la
leche. La renina provoca el coajado de la leche convirtiendo la sal de caseína soluble en una
paracaseína insoluble que es el cuajo o requesón.
renina
Caseína paracaseína (pp)
Ca

Peptonización (digestión)
La hidrólisis de la caseína por la actividad enzimática produce
una conversión final del precipitado caseinógeno en un líquido
claro; el proceso se denomina peptonización y se manifiesta por
una aclaración acuosa del medio causada por una digestión del
precipitado (coágulo) y las proteínas de la leche por las enzimas
proteolíticas de las bacterias. Sin embargo, solo se produce una
peptonización cuando la bacteria que se desarrolla en la leche
tornasolada contiene la enzima proteolítica caseinasa.
Formación de gas
Los gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la
fermentación de la lactosa.

medio
Líquido
 Inoculación
Difusión
 Condiciones de
incubación
Tiempo : 24 - 48 horas
Ingraham L.J. 2000

Hacer clic
Diferencición de especies
de Streptococcus
 Rojo rosado: Ácido; fermentación de lactosa
 Azul purpúreo: No fermentación de lactosa; sin

cambio del indicador de pH.
 Azul : Alcalino; Ausencia fermentación de lactosa.

El organismo ataca las sustancias nitrogenadas que
se encuentran en el medio.
 Blanco : Reducción del tornasol a una leucobase.
 Formación de coágulo : Coagulación de la proteína

de la leche.
 Aclaración del medio : Digestión; se ha ingerido la

proteína de la leche.
 Gas : Producción de burbujas en la campana de

Durham.

En la tabla de resultados
solo se escribirán las letras que
aparecen dentro del paréntesis.
 Rojo rosado (A)

 Azul purpúreo (SC)
 Azul ( K)
 Blanco (Red)
 Coágulo (C) Encarta 2002
 Digestión (D)
 Gas (G)

MEDIO NO INOCULADO
FERMENTACIÓN DE
FINALIZAR
LACTOSA
DIGESTIÓN
LACTOSA
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
COÁGULO
NO FERMENTACIÓN DE
MENÚ
REDUCCIÓN DE
TORNASOL
Ayuda a la diferenciación de
especies sobre todo del género
Clostridium.
Sin crecimiento:
 Clostridium choleraerium
 Clostridium difficile
 Clostridium putrefaciens
 Clostridium tetanomorphum
 Streptococcus equinus
Con crecimiento:
Características de especies de
Bacillus y Clostridium
 Streptococcus bovis Hacer clic

Condiciones de
Consistencia
del medio
resultados

Medio de cultivo: Medio de leche
Composición:
1. Leche descremada deshidratada

2. Agua destilada
3. Indicador : Azul de metileno
Incoloro : Estado reducido
Azul : Estado oxidado ; medio no
inoculado (pH= 6.4)

Diferencía organismos por su capacidad de reducir el azul de metileno en un medio
con leche.
El sistema citocromo oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por el
oxígeno molecular que a su vez actúa como un aceptor de electrones en el periodo
terminal del sistema de transferencia de electrones. Cuando existen condiciones aeróbicas
el oxígeno es el aceptor final del hidrógeno, produciendo agua o peróxido de hidrógeno
según la especie bacteriana y su sistema enzimático.
Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptores
de electrones naturales en cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones,
donde actúan como reductores del sistema citocromo. Cuando se agrega el colorante
sintético reducible, azul de metileno a un medio que contenga organismos
metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su
ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante.
Cuando se agrega el colorante a un medio con organismos metabolizantes, los

electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se
produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Anaerobicamente la forma
oxidada del color azul es reducida por un organismo a un compuesto incoloro,
hidrogenado, leuco-azul de metileno.

Custom Medical Stock, 1999.
N
El azul de metileno, sal

básica, es un indicador de la
oxidación reducción que cuando
es incorporado a un medio,
indica los cambios en el N(CH3)2
potencial de oxidación-reducción (CH3)2N Azul de metileno (estado
producidos por un organismo. oxidado color azul)
Algunos organismos, Reductasa

utilizando el oxígeno disuelto en
un medio, son capaces de H
reducir el potencial redox, la N
reducción es catalizada por la
enzima reductasa, enzima
respiratoria vinculada con la
oxidación celular.
Diferenciación de especies N(CH3)2

de Streptococcus (CH3)2N
S
Hacer clic Leuco-azul de metileno (estado
reducido, incoloro)

 Consistencia del medio
Líquido
 Inoculación
Difusión, inóculo denso
Black J.G. 1996
Enterococcus feacalis, fisión

binaria.
 Condiciones de
incubación
Black J.G. 1996
Beta hemólisis Temperatura : 35- 37° C

MEDIO NO NEGATIVO POSITIVO
INOCULADO

 Interpretación
Positiva : Incoloro; reducción
Negativa : Azul; no hay

reducción Ingraham L.J. 2000
Streptococcus sp,
tinción de Gram
 Reporte de resultados
R = Reducción
(-) = Negativo, sin cambio

de color

Hacer clic
Características bioquímicas de
especies de Streptococcus
Esta capacidad enzimática se utiliza fundamentalmente para

diferenciar los enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) de
otros miembros del género Streptococcus.
Microorganismos positivos
 Enterococos (Streptococcus del grupo D)
 Especies de Streptococcus que por lo general no son Enterococos.
La oxidación del azul de metileno reducido produce peróxido de hidrógeno como

su producto final. La mayoría de las bacterias contienen la enzima catalasa, que
degrada el peróxido de hidrógeno, dado que su acumulación es tóxica.
Sin embargo, las especies de Estreptococos no producen catalasa y por lo tanto
mueren. Los Enterococos del grupo D si producen catalasa sobreviviendo al medio.

Condiciones de
Consistencia
del medio
resultados

Medio de cultivo : Medio básico de Hugh Leifson, medio OF
Composición:
1. Peptona
2. Cloruro de sodio
3. Fosfato de potasio
4. Hidratos de carbono ( glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa )
5. Agar
6. Agua destilada
7. Indicador de pH : Azul de bromotimol
Ácido : Color amarillo (pH = 6)
Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6)
Medio no inoculado : Verde (pH = 7.1)
 Se deben tener dos tubos para esta prueba uno abierto y otro con
sello de parafina.

Semisólido (también permite la observación de movilidad).
 Inoculación
Picadura, inóculo poco denso. Picar ambos tubos

aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.
 Condiciones de incubación
Temperatura : 35 - 37° C Aislamiento de bacterias
en heces
Hacer clic

 Amarillo: ácido
 Burbujas : Gas
Incubación
 Verde : alcalino
Oxidativo Fermentador No oxidativo

No fermentador No fermentador

METABOLISMO TUBO CON TUBO SIN TUBO CON
REACCIÓN SELLO SELLO
Oxidación (O) Abierto Amarillo (A) Verde (-)
Fermentación (F) Cubierto Amarillo (A) Amarillo (A)
Fermentación (F) Cubierto Amarillo (AG) Amarillo (AG)
Ni fermentación Ninguno Azul o verde (-) Verde (-)

ni oxidación (-)
Fermentación y Ambos Amarillo (A ó Amarillo (A ó
oxidación (O+F) AG) AG)

MEDIO NO INOCULADO OXIDATIVO NO FERMENTADOR
FERMENTADOR NO OXIDATIVO NO FERMENTADOR

1.Fundamentalmente para
diferenciar géneros intestinales no
entéricos, gram negativos de las
Enterobacterias.
2. Ayuda a la diferenciación entre

los géneros de la familia
Micrococcaceae.
 Micrococcus oxida glucosa

 Staphylococcus fermentan glucosa.
3. Ayuda a la identificación de
Enterobacterias
 Fermentadoras de glucosa: Escherichia

coli
 Oxidativas de glucosa: Pseudomonas
aeruginosa
 No sacarolítico: Especies de Moraxella
Características de la
Familia Micrococcacea
Hacer clic
World Book, 1991
Condiciones de
Consistencia
del medio
resultados

Medio de cultivo: Agar urea de Christensen
Composición:
a) Peptona
b) Cloruro de sodio
c) Fosfato monopotásico
d) Glucosa
e) Urea
f) Agar
g) Agua destilada
h) Indicador de pH : Rojo de fenol
Ácido: Amarillo (pH = 6.8)
Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4)
Medio no inoculado : Amarillo (pH = 6.8)

 Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea
formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima
ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.
 La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la

descomposición de los compuestos orgánicos.
H2 N
C=O + 2 HOH CO2 + H2O + 2
NH3
(NH4)2CO2
Carbonato de amonio
H2 N
urea

Sólido en pico de flauta (cola de
pescado) Koneman,1992
 Inoculación Cultivo mixto de crecimiento de 24 horas

en agar sangre de colonias no
pigmentadas, mucoides y relativamente
grandes de Klebsiella, en comparación de
Estría en pico de flauta (no hacer las colonias amarillas más pequeñas de S.
aureus.
punción).
 Condiciones de
incubación
Efecto swarming producido por

Proteus vulgaris

MEDIO NO NEGATIVO
INOCULADO
POSITIVO POSITIVO

 Interpretación
Positivo : Rojo rosado intenso en el pico de flauta
Negativo: Amarillo
Positivo (+)
Negativo (-) Black J.G. 1996
 OBSERVACIONES
En muchas especies, la reacción positiva de ureasa se detecta primero por un
cambio de color rojo en la parte de pico de flauta, el cual, al principio se vuelve rojo
porque la acción alcalina, resultado de la degradación de pequeñas cantidades de urea,
es aumentada por las aminas formadas a partir de la descarboxilación oxidativa de los
aminoácidos en la parte del medio expuesta al aire.

Se usa para diferenciar los organismos Proteus rápidamente
ureasa positivos de otros miembros de las Enterobacterias, otros
géneros pueden ser positivos retardados.
 Klebsiella sp (+)
 Escherichia coli (-)
 Proteus sp (+ rápido)
 Providencia sp (-)
Koneman,1992
Placa de agar sangre que indica un patrón

de swarming como ondas de una cepa
móvil de Proteus.
Pruebas para la identificación de Enterobacterias

Hacer clic

Fundamento
Medio de cultivo Inoculación
Interpretación
Consistencia Reporte de
del medio resultados
Aplicaciones
Resultados Reactivos
adicionales
Condiciones de
incubación

Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP)
Composición:
1. Polipeptona
2. Dextrosa
3. Fosfato de potasio
4. Agua destilada
5. Indicador: rojo de metilo
 pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo.
 Ácido: rojo (pH = 4.4)
 Alcalino: amarillo (pH = 6)

 Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables
los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la
capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de
ácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía de
fermentación de ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener un
pH menor de 4.4.
 La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para

determinar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismo
fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendo
una alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración y
entonces cesa toda actividad.
 Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menor
concentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidad
debida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos.
 La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente como

para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los
organismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días, lo que permite que todos
los organismos con baja proporción gaseosa muestren su límite en la concentración
de iones hidrógeno.

Determina la capacidad de algunos organismos de producir un
producto final neutro, la acetoína a partir de la fermentación de glucosa.
La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como producto

final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada
en ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácido
pirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína
(precursor de la producción de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para la
degradación de la glucosa en las bacterias. La formación de acetoína y
butilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico. Las
bacterias que utilizan esta vía producen solo pequeñas cantidades de ácidos
mixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de
metilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo
muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas
excepciones son RM negativas y viceversa.

 El primer reactivo agregado a una alícuota incubada es el catalizador alfa-naftol
porque este actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la
reacción sin pérdida de su especificidad.
 El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la

absorción de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionará con
la peptona dando un color rosado salmón y con el agregado posterior de alfa-naftol
no habrá alteración del color.
 El hidróxido de potasio actúa como agente oxidante para apresurar la oxidación de la

acetoina en diacetilo.
 El diacetilo es la sustancia reactiva activa por ello esta prueba se basa en la reacción
entre el diacetilo y el núcleo guanina presente en la peptona, en condiciones
alcalinas.
 Por lo tanto cuando se mezclan cantidades correctas de diacetilo, la peptona y el

alfa-naftol, se produce casi instantáneamente un color rojo en la superficie del
medio. La velocidad de desarrollo de color depende del volumen de acetoína que se
encuentra en el cultivo de prueba.

OH CH3
CH3
KOH
C O
C O
+
O2 OXIDADO
C O
CHOH
Alfa-naftol (catalizador)
CH2
CH2
Diacetilo
Acetoína
+
NH2
condensación
Color rojo rosado C NH
NH R
Núcleo de guanidina

Líquido
 Inoculación
Difusión
Tiempo : 24 - 48 horas Salmonella typhi, tinción de flagelos,
observada en microscópio electrónico
Temperatura: 35 - 37° C
Coprocultivo
Hacer clic

 Reactivos adicionales para Rojo de Metilo
Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas al tubo previamente incubado.

Interpretar el resultado del color inmediatamente.
Conservación: Guardar el reactivo en refrigeración (4° C) mientras no se usa.
 Reactivos adicionales para Voges Proskauer

Alfa naftol al 5%, intensificador del color
Hidróxido de potasio 40%, agente oxidante
Agregar directamente los reactivos al tubo después de la incubación en el siguiente orden

:
1) 0.6 ml de alfa naftol
2) 0.2 ml de KOH
3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la
interpretación.
PRECAUCIONES
 El orden de adición de los reactivos es importante, ya que la inversión de incorporación dará como
resultado un débil positivo o falso negativo.
 No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reacción VP
débilmente positiva.

MEDIO NO POSITIVO NEGATIVO
INOCULADO

 Reacción de rojo de  Reacción de Voges-
metilo Proskauer
No debe intentarse interpretar un Positivo: Rojo rosado en la superficie
resultado con el rojo de metilo del medio (presencia de acetoína)
después de menos de 48 horas de
incubación. Negativo : Amarillo. Puede formarse
un color cobrizo pero aún así la
Positiva: Rojo en la superficie del reacción es negativa.
medio (pH = 4.4)
Algunas bacterias pueden producir

menores cantidades de ácido a partir
del sustrato por ello es posible que  Reporte de resultados
aparezca un color naranja. Esto (ambas reacciones)
indica una prueba positiva.
Positivo (+)
Negativo : Amarillo (pH = 6) ó
naranja Negativo (-)

Prueba de rojo de metilo Pruebade Voges Proskauer
Microorganismos positivos Microorganismos positivos
 Escherichia coli  Klebsiella pneunoniae
 Especies de Yersinia
 Yersinia enterocolitica
 Enterobacter aerogenes
 Enterobacter cloacae  Escherichia coli
 Klebsiella  K. ozaenae
Urocultivo
Hacer clic Encarta, 2002

Fundamento
Interpretación
Aplicaciones
adicionales
Condiciones de
incubación

Medio de cultivo: Caldo con nitrato
Composición:
 Extracto de carne
 Peptona
 Nitrato de potasio
 Agar
 Agua destilada
 pH inicial = 7.0

 Determina la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o
en nitrógeno libre.
 La reducción de nitrato en nitrito y en gas nitrógeno tiene lugar
generalmente en condiciones anaeróbias, en las cuales un organismo
obtiene su oxígeno del nitrato. El oxigeno sirve como un aceptor de
hidrógeno.
 Esta respiración anaerobica es un proceso de oxidación por el cual las
sustancias inorgánicas, especialmente nitrato y sulfato o raramente hidratos
de carbono proporcionan oxígeno para que sirva como aceptor de electrones
para suministrar energía.
 Reducción del nitrato en nitrito

NO3 + 2 e + 2 H + NO2 + H2O
Nitrato Nitrito
 Nitrato en nitrógeno molecular

2 NO3 + 10 e + 12 H+ N2 + 6 H2 O

 La reducción de nitrato en nitrito está indicada por la aparición de
color cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reacción
de color resultante se debe a la formación de un compuesto
diazoico, p-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina.
 El enlace del grupo azo –N=N- da como resultado un compuesto

coloreado por medio de una reacción nitrosa. El colorante diazoico
se forma por acoplamiento a través del enlace azo de una amina
aromática con un compuesto de tipo fenólico por lo general en la
posición para de un grupo (OH) o amino.
 La reducción de la sal diazóica por el agente reductor polvo de zinc,

en presencia del ácido acético produce un compuesto coloreado, la
arilhidracina.

N N
NH2
+ HNO2
SO2H NH2
SO2H NH2
Ácido sulfanilico Alfa-naftilamina

P-sulfobenceno-azo-affa-
(incoloro) naftilamina (rojo)
N N
Zn
+ CH2COOH (C6H3NHNH3) – OSO3H
Ácido acético Arilhidracina
SO2H NH2

Consistencia del
Hacer clic

medio
Características de Bacterias
Gramnegativas no fermentadoras
Líquido
 Inoculación
Difusión, inóculo denso.
 Condiciones de
incubación
Temperatura 35 - 37 ° C
Raramente es necesaria una

incubación prolongada de hasta 5 días.
Crecimiento de Salmonella thypi en agar sangre, La mayoría de los organismos capaces
observese la producción de H2S (colonias de color negro). de reducir el nitrato, lo hacen dentro
de las primeras 24 horas.

1. Alfa - naftilamina 0.05%
2. Ácido sulfanílico 0.8 %
 Adicionar directamente al tubo de reacción en el siguiente orden:
1. Alfa - naftilamina 1ml.
2. Ácido sulfanílico 1 ml.
Conservación: Guardar ambos reactivos en el refrigerador mientras no se usan. Por lo general

se mantienen estables durante tres meses.

 Interpretación
Se interpretan los resultados  Reporte de
un minuto después de resultados
adicionar los reactivos.
Positivo: Rosado a rojo Positivo (+)

intenso
Negativo (-)
Negativo: Amarillo
PRECAUCIONES
Una prueba negativa indica que los nitratos,
no han sido reducidos o que han sido
reducidos a otros productos, como amoniaco,
nitrógeno molecular, oxido nítrico u óxido
nitroso e hidroxilo. Dado que los reactivos de
prueba detectan solo nitritos, este último
proceso llevaría a una lectura falso –
negativa. Por ende es necesario agregar una
pequeña cantidad de polvo de zinc a todas
las reacciones negativas.
Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y la Koneman,1992
aparición de color rojo después del agregado
de zinc indica una reacción positiva.

 Aplicaciones
Ayuda a la identificación de
Enterobacterias que por lo general son
positivas.
Todas las Enterobacterias, con

excepción de ciertos tipos de
Enterobacter agglomerans y especies
de Erwinia, reducen nitratos a nitritos.
MEDIO NO
INOCULADO
POSITIVO NEGATIVO

Fundamento
Interpretación
Aplicaciones
adicionales
Condiciones de
incubación

Medio de cultivo: medio de fenilalanina
Composición:
1. D-L-fenilalanina
2. Extracto de levadura
3. Cloruro de sodio
4. Fosfato de sodio
5. Agar
6. Agua destilada
7. pH inicial = 7.3

 Determina la capacidad de un organismo de desaminar la
fenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática, con
la consiguiente acidez resultante.
 El aminoácido aromático fenilalanina sufre una desaminación

oxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa para producir el
ácido cetónico.
 La desaminación oxidativa da como resultado la extracción del

grupo amino del aminoácido para formar un doble enlace alfa-
cetoácido y libre de amoniaco.
 Este es un proceso en dos etapas:

1. La extracción del hidrógeno dando un aminoácido y un hidrógeno,
se combina con el oxígeno para formar agua.
2. El aminoácido es hidrolizado en un cetoácido.

CH2 CH COOH
- 2H
NH2 + 1/2 O
FLAVOPROTEÍNA
FENILALANINA
CH2 C COOH
O
+ NH2
AMONIACO
ÁCIDO FENILPIRÚVICO

 Como la fenilalanina se encuentra desaminada, el color producido como consecuencia
del agregado de cloruro férrico al 10% se debe a la formación de un cetoácido, el ácido
fenilpirúvico.
 La reacción positiva con este reactivo se debe a la formación de una hidrazona. El

cloruro férrico actúa como agente quelante actuando con el ácido fenilpirúvico para
formar un color verde.
 Cuando se expone al oxígeno atmosférico un tubo de cultivo con fenilalanina después

del agregar el cloruro férrico aumenta la producción y la intensidad de la reacción
positiva.
C COOH CH2 C COOH

CH2
N NHR
O + RNH - NH2
Hidracina
Ácido
fenilpirúvico Fenilhidrazona

 Consistencia del medio Reactivos adicionales
Sólido en pico de flauta Cloruro férrico 10%
Adicionar de 4-5 gotas a un tubo

 Inoculación 
incubado
Estría en pico de flauta, inóculo  Hacer rotar suavemente el tubo

denso. para que el crecimiento se
separe.
 Esperar de 1 a 5 minutos para
leer la reacción
Temperatura 35 - 37 ° C  Guardar los reactivos en
refrigeración y colocarlos en
frascos oscuros para evitar la
descomposición.
Características de Bacilos
Gramnegativas oxidasa positivas
Hacer clic

NEGATIVO
MEDIO NO POSITIVO
INOCULADO
NEGATIVO

 Interpretación  Aplicaciones
Esta actividad enzimática es
Positiva: Verde claro a intenso en característica de todas las
el pico de flauta. especies de Proteus y del grupo
Providencia, y se usa para
separar estos dos géneros de
Negativo: Amarillo otros miembros de las
Enterobacterias
Positivo (+)
Negativo(-)

Fundamento
Interpretación
Aplicaciones
adicionales
Condiciones de
incubación

Medio de cultivo: Medio SIM
Composición:
 Extracto de carne
 Peptona
 Hierro peptonizado (Indicador de
SH2)
 Tiosulfato de sodio (indicador de
SH2)
 Agar
 Agua destilada
 pH = 7.3

 Prueba de ácido sulfhídrico
La proteolisis de las proteínas en aminoácidos (aa.) individuales, algunas especies
bacterianas son capaces de liberar azufre enzimaticamente de los diferentes aa. que las contienen,
produciendo el gas ácido sulfhídrico (SH2). La peptona, cisteína y tiosulfato, todos son fuentes de
azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. que contienen azufre para
producir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.
 Primera etapa
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que
da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiración anaeróbica donde el átomo de azufre
sirve como aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos orgánicos. El tiosulfato
reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo.
 Segunda etapa
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio para producir un
precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.
Bacteria (medio ácido) + tiosulfato de sodio gas SH2
SH2 + iones férricos sulfuro ferroso (pp. negro)

 El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para
formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. Diversas enzimas
intracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo
que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. El
principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpírúvico.
 La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. El

ácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico o
entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía.
El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminoácidos empleando la energía
que se encuentra para la reacción anabólica.
 La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de

fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentación
de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El
agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la
inhibe.

 La prueba de indol se basa en la formación de un complejo de color rojo
cuando el indol reacciona con el grupo aldehído de p-
dimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs).
COOH
NH2 Triptofanasa
N H2O
H Desaminación
L - Triptófano
+ + NH3
H3C COOH
N
H
Indol Ácido Pirúvico Amoniaco

Xileno
P-dimetilaminobenzaldehído
Color rojo
INDOL
PIRUVATO NH3
TRIPTÓFANO
Triptofanasa
BACTERIAS
 Determina si un organismo es móvil o
inmóvil. Las bacterias tienen movilidad
por medio de sus flagelos, que se
encuentran principalmente entre los
bacilos; sin embargo algunas formas
de cocos son inmóviles.
 Las bacterias móviles pueden contener

Black J.G. 1996 Black J.G. 1996 un solo flagelo o muchos; además su
localización varía con su especie
Monotricas Atricas bacteriana y las condiciones de cultivo.
 A veces, las bacterias con movilidad

producen variantes no móviles que
parecen ser estables y raramente se
revierten en formas móviles. Los
organismos no móviles carecen de
flagelos.
Black J.G. 1996 Black J.G. 1996
Lofotricas Peritricas

Medios para la detección de Medios para la detección de
H2 S movilidad
 Agar sulfito de bismuto

 SIM
 Agar citrato sulfuro
 Agar desoxicolato-citrato  MIO
 Medio LIA
 Medio TSI
 Agar acetato de plomo
 Agar S-S
 Agar XLD
 Medio SIM

Semisólido en forma vertical
 Inoculación
Picadura en forma vertical
Salmonella typhimurium,
tinción de Gram.
 Condiciones de
incubación
Temperatura 35 - 37° C
Los cultivos que van a someterse a pruebas

de indol deberán ser incubados
aeróbicamente el descenso de la tensión de Klebsiella pneumoniae en
oxígeno disminuye la producción de indol. sedimento, tinción de Gram

 Reactivo de Kovacs
Composición:
a) Alcohol amílico
b) p-dimetilaminobenzaldehído
c) HCl
 Adicionar 5 gotas directamente al tubo después

de la incubación.
 Agitar suavemente
 Leer inmediatamente la reacción
Coprocultivo
Hacer clic
H2S H2S
NEGATIVO POSITIVO
MEDIO SIN INDOL INDOL

INOCULAR NEGATIVO POSITIVO
GAS MOVILIDAD

 Ácido sulfhídrico
Positivo: Ennegrecimiento del medio
Negativo: Sin ennegrecimiento Streptococcus pneumoniae:
las cápsulas se observan de
color blanco.
 Indol
Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio.
Negativa: No se produce color
Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un
compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.

Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la
prueba.
Black J.G. 1996
 Movilidad
Positiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbiedad.
Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.

Bacteria Producción Prouducción Movilidad
de H2S de indol
Salmonella +o- - +
thypi
Salmonella +o- - +
sp.
E. coli - + +o-
Klebsiella - +o- -
Enterobacter - - +
Citrobacter + - +
Shigella +o- +o- +o-
Interpretación
Condiciones de
Resultados incubación
Fundamento Aplicaciones

Medio de cultivo: Agar hierro triple azúcar (Agar Hierro de Kliger, AHK)
Composición:
1. Extracto de carne
2. Extracto de levadura
3. Peptona
4. Proteasa
5. Lactosa
6. Dextrosa
7. Sulfato ferroso
8. Cloruro de sodio
9. Tiosulfato de sodio
Koneman,1992
10. Agar
11. Agua destilada Superficie de agar Mac Conkey con crecimiento
12. Indicador : Rojo de fenol de 24 horas de colonias fermentadoras de
 Ácido: amarillo lactosa rojas.
 Alcalino: rojo
 Medio no inoculado: anaranjado rojizo (pH = 7.4)

No fermentador
No fermentación O2 Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina
pH = 7.4
No fermentador de lactosa
Dextrosa O2 Pico de flauta ácido/profundidad ácida
Ácidos mixtos Reacción inicial
Dextrosa Pico de flauta alcalino/profundidad ácida

O2
Ácidos mixtos Reacción retardada
Fermentador de lactosa (sacarosa)

Dextrosa + lactosa O2 Pico de flauta ácido/profundidad ácida
Ácidos mixtos

medio
Sólido en pico de flauta
 Inoculación
Picadura y estría en pico de
flauta
 Condiciones de
incubación
Temperatura: 35 - 37 ° C
Urocultivo
Hacer clic

Klebsiella pneumoniae agar Mac Conkey. University
of Missouri-Columbia, 1998:
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradación aeróbica de glucosa

Amarillo en capa profunda: ácido; degradación anaeróbica de la glucosa
2. Amarillo en pico: ácido

Amarillo en capa profunda: ácido
3. Rojo en pico de flauta: alcalino

Sin cambio de color en capa profunda: alcalina.
Producción de H2S: precipitado negro
Producción de gases: Producción de burbujas, descomposición del medio, ligera
muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo
dejando un espacio libre.
OBSERVACIONES
 Una bacteria productora de H2S puede dar tal cantidad de precipitado negro de sulfuro ferroso que
oculte completamente la acidez producida en la capa profunda. Sin embargo, si se forma H2S es
que existe en la capa profunda una condición ácida, aun cuando no se observe, y debe ser
registrada como tal.
 Es esencial que se interprete la fermentación al término de 18 – 24 horas de incubación, ya que
una interpretación prematura o demorada dará formas de fermentación no válidas que llevarán a
errores en el agrupamiento del género o especie.

1. K / A (Fermentación de glucosa solamente)
2. A / A (Fermentación de glucosa y lactosa)
3. K / K (No fermentación de glucosa y lactosa).
Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la reacción del pico
de flauta seguida por la reacción de la capa profunda, separadas por una barra.
Reacciones de TSI
 Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentación de hidratos de
carbono. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas
aeruginosa.
 Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no

fermentada. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies
de Shigella.
 Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada,

lactosa no fermentada; producción de H2S. Característico de bacterias no
fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona,
Citrobacter y algunas especies de Proteus.
 Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas.

Característico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-
Enterobacter.

 Este tipo de pruebas se utilizan principalmente para la
identificación primaria de los miembros de las Enterobacterias.
Especie Superficie Fondo Gas H 2S

bacteriana inclinada
Enterobacter A K ++ -
Hafnia K A + -
Klebsiella A A ++ -
E. coli A A + -
Shigella K A - -
Salmonella thypi K A - +

S. parathypi K A + -
S. choleraesuis K A + -
Otras Salmonellas K A + +++
Citrobacter K A + +++
Edwarsiella K A + +++
Serratia K A - -
Proteus vulgaris K A + +++
P. mirabilis K A + +++
P. morganii K A - -
P. retgeri K A - -
Providencia K A +o- -

Interpretación
Condiciones de
Resultados incubación
Fundamento Aplicaciones

Medio de cultivo: base de descarboxilasa de Moller
Crecimiento de Pseudomona aeruginosa en
Composición: agar sangre.University of Missouri-
Columbia,1998:
1. Peptona http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
2. Extracto de carne
3. Piridoxal
4. L-lisina
5. Citrato de amonio
6. Tiosulfato de sodio
7. Glucosa
8. Agua destilada
9. Agar
10. Indicador de pH: Púrpura de bromocresol
Ácido: color amarillo (pH = 5.2)
Alcalino: color púrpura (pH = 6.8)
Medio no inoculado: color púrpura intenso
brillante (pH = 6.0)

 Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un
aminoácido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguiente
alcalinidad.
 La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen

enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los
aminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y
anhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produce
anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, no
oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.
 El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2

por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa.
 El aminoácido L-arginina es catabolizado a través de dos sistemas que

pueden ocurrir simultánea o separadamente. Estos sistemas son de
arginina deshidrolasa y arginina descarboxilasa.

medio
Sólido en pico de flauta
 Inoculación
Por picadura y estría,
inóculo liviano Koneman,1992
 Condiciones de Superficie de placa de agar EMB que ilustra el
incubación
brillo verde producido por miembros de
Enterobacterias fermentadoras de lactosa, como
Escherichia coli.
Temperatura: 35 – 37° C
Tiempo: 18 – 24 horas

 K/K = azul de Prusia /azul de Prusia
Desaminación oxidativa / descarboxilación
 K/A= azul de prusia / lila
No desaminación
 Producción de H2S = Ennegrecimiento del medio
 Producción de gas = Burbujas o levantamiento del
medio del tubo.

 A = Ácido
 K = Alcalino
 N = Neutra
 R = Rojo ( desaminación
oxidativa)
Hacer clic Encarta, 2002
Clasificación y pruebas para Streptococcus

K/K
H2S
K/A
GAS
MEDIO PRODUCCIÓN K/K

DE H2S
NO INOCULADO

Especie Superficie Fondo Gas H2S
bacteriana inclinada
E. coli K KoN -o+ -
Shigella K A - -
Salmonella K K - +o-
thypi
S. parathipy K A +o- -o+
Otras K KoN - +
Salmonellas
Arizona K KoN - +
Citrobacter K A -o+ +o-
Edwarsiella K K - o+ +

Klebsiella K K oN +o- -
Enterobacter K A +o- -
cloacae
E. aerogenes K KoN + -
E. hafniae K KoN -o+ -
Proteus R A - -
vulgaris
P. mirabilis R A - -
P. morganii KoR A - -
P. rettgeri R A - -
Providencia R A - -

Fundamento
Interpretación
Aplicaciones
adicionales
Condiciones de
incubación

 Medio de cultivo
 Composición:
 Extracto de levadura
 Peptona
 L- ornitina
 Dextrosa
 Agar
 Agua
 Indicador de pH: púrpura de bromocresol
Ácido: color amarillo (pH = 5.2)
Alcalino: color púrpura (pH = 6.8)
Medio no inoculado: color púrpura
intenso brillante (pH = 6.0)

 La prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base de
movilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol.
 Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido

(ornitina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad.
 La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas

descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupo
carboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposición
de los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es
irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal.
 El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acción
de la enzima específica lisina-descarboxilasa.
 El aminoácido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa para

dar la diamina putrescina y CO2, producidos en condiciones anaerobias.

 Consistencia del medio  Reactivos adicionales
Semisólido en forma vertical
Prueba de indol
Reactivo de Kovacs
 Inoculación
Por picadura, en forma vertical Adicionar 5 gotas y agitar
suavemente el tubo
 Condiciones de incubación Interpretar inmediatamente.

Temperatura: 35 – 37° C
Tiempo: 24 – 48 horas
Conservación: Los reactivos deberán
guardarse en el refrigerador (4° C) mientras
no se usan su estabilidad es variable, por lo
tanto se hará todas las semanas un control
de calidad, desechándolos si muestran una
reacción débil o negativa con un organismo
positivo conocido.
Black J.G. 1996 Exudado faringeo
Bacteria flagelar mostrada Hacer clic

por la técnica de anticuerpo
fluorescente

ORNITINA POSITIVO ORNITINA NEGATIVO
MOVILIDAD NEGATIVO MOVILIDAD POSITIVO
(turbidez)
INDOL INDOL
NEGATIVO POSITIVO
MEDIO NO
INOCULADO

 Ornitina descarboxilasa
Positivo: color púrpura del medio
Negativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser púrpura al final
 Indol
Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio.
Negativa: No se produce color
Negativa: Color anaranjado en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un
compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol.
La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa.

Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.
 Movilidad
Positiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el
medio provocando turbidez.
Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.
Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar el
reactivo de Kovacs para la prueba de indol.

Prueba Positivo Negativo Bacterias Indol Movilidad H2S
Salmonella - + +o-
thypi
Movilidad + - Otras - + +o-
Salmonellas
E. coli + + -
Indol + - Klebsiella +o- - -
Enterobacter - + -
Ornitina + - Citrobacter - + +
Shigella +o- +o- -

Microorganismos Microorganismos ornitina
ornitina positivos negativos
 Especies de  Especies de Klebsiella

Enterobacter  Enterobacter aglomerans
 Proteus mirabilis  Proteus vulgaris
 Proteus morganii  Proteus rettgeri
 Yersinia enterocolitica  Yersinia pestis
 Yersinia
pseudotuberculosis
Urocultivo
Hacer clic

Robert Koch (1843-1910), científico alemán galardonado con el premio Nóbel
iniciador de la bacteriología médica moderna; aisló varias bacterias patógenas,
incluida la de la tuberculosis, y descubrió los vectores animales de transmisión de
una serie de enfermedades importantes.
Nacido en Klausthal-Zellerfeld el 11 de diciembre de 1843, Koch se incorporó a la

Universidad de Gotinga en 1862, donde estudió botánica, física y matemáticas e
inició la carrera médica, que ocuparía el resto de su vida. Tras breves estancias en el
Hospital General de Hamburgo y en una institución para niños discapacitados
psíquicos, comenzó a ejercer la medicina privada. Sus actividades profesionales no le
impidieron desarrollar otros intereses como la arqueología, la antropología, las
enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y el emergente
campo de la bacteriología.
Su primer descubrimiento importante se produjo en la década de 1870, cuando

demostró que el carbunco infeccioso, también conocido como ántrax, sólo se
desarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguíneo
contenía bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. El aislamiento del bacilo
del carbunco por parte de Koch constituyó un hito histórico, ya que por primera vez
pudo demostrarse sin duda cuál era el agente causante de una enfermedad
infecciosa. Quedó claro que las enfermedades infecciosas no estaban causadas por
sustancias misteriosas, sino por microorganismos específicos, en este caso bacterias.
Koch mostró también cómo debe trabajar el investigador con dichos
microorganismos, cómo obtenerlos a partir de animales infectados, cómo cultivarlos
artificialmente y cómo destruirlos. Koch comunicó sus observaciones al gran patólogo
alemán Julius Friedrich Cohnheim y sus colaboradores, uno de los cuales era el
bacteriólogo Paul Ehrlich, pionero de la inmunología moderna.
 Prueba del ácido sulfhídrico
 Prueba de indol
 Prueba de movilidad
 Medios para la detección de H2S
 Medios para la detección de movilidad

PRUEBA POSITIVO NEGATIVO
Sulfuro + -
Indol + -
Movilidad + -

K/A K/K GAS
MEDIO H2S
A/A
NO INOCULADO

En 1880, tras finalizar un importante trabajo bacteriológico sobre infecciones en las
heridas, fue nombrado consejero del gobierno en el Departamento Imperial de la
Salud en Berlín, donde, a partir de entonces, llevó a cabo la mayoría de sus
investigaciones. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al año
siguiente anunció que había aislado el bacilo responsable de tan terrible enfermedad.
Sus hallazgos fueron confirmados por investigadores de todo el mundo. El
descubrimiento permitió mejorar las técnicas diagnósticas mediante la identificación
del bacilo en las excreciones corporales, especialmente en los esputos.
Koch dedicó entonces su atención al cólera, que en 1883 había alcanzado niveles de
epidemia en la India. Se desplazó allí, identificó el bacilo causante de la enfermedad
y descubrió que era transmitido a los seres humanos sobre todo a través del agua.
Más tarde viajó a África, donde estudió las causas de las enfermedades transmitidas
por insectos.
En 1891 Koch fue nombrado director del Instituto de Enfermedades Infecciosas de

Berlín (que en la actualidad lleva su nombre), creado para la investigación médica
especializada. Permaneció al frente del mismo hasta el día de su jubilación en 1904.
En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Murió el 27 de mayo de
1910 en el balneario alemán de Baden-Baden.
Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos
 Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de
carbono.
 La utilización que una bacteria hace de los hidratos de carbono tiene lugar
por alguno de dos procesos, de fermentación o de oxidación. Algunas
bacterias son capaces de metabolizar un carbohidrato solo en condiciones
aeróbicas, mientras que otras producen ácido tanto aeróbica como
anaeróbicamente.
 La diferencia principal entre el metabolismo fermentativo y oxidativo

depende de los requerimientos de oxígeno atmosférico y de la fosforilación
inicial.
 La fermentación es un proceso anaeróbico que requiere la fosforilación

inicial de la glucosa previamente a su degradación, mientras que la
oxidación, en ausencia de compuestos inorgánicos como nitrato y sulfato,
es un proceso estrictamente aeróbico que comprende la oxidación directa
de una molécula de glucosa no fosforilada (inicialmente).
 La fermentación produce una acidez más elevada que el proceso

metabólico oxidativo.

 Tamaño: diámetro en mm.
 Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide.
 Elevación: plana, sobreelevada, convexa, pulvinada, umbonada,
umbilicada.
 Margen (borde): entero, ondulante, lobulado, lacerado,
filamentoso, rizado.
 Color: blanco, amarillo, negro, marrón, naranja, etc.
 Superficie: brillante, opaca, erizada, rugosa
 Densidad: opaca, translúcida, transparente, etc.
 Consistencia: cremosa, seca, mucoide (viscosa), membranosa,
quebradiza.
http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html
FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS Hacer clic

Los tres tipos generales de reacciones producidas por bacterias que crecen en
agar hierro de Kligler.
En A se ilustran bacilos no fermentadores que son incapaces de producir

ácidos a partir de la fermentación de glucosa o lactosa; no existe ningún
cambio en el medio.
B ilustra una acidificación inicial de la profundidad y el pico de flauta del

medio por bacterias que fermentan glucosa, pero el pico de flauta retorna a un
pH alcalino a medida que se forman aminas alcalinas a partir de la
descarboxilación oxidatíva de péptidos (derivados de proteínas en el medio)
cerca de la superficie.
C ilustra la completa acidificación permanente de la profundidad y el pico de

flauta por bacterias que fermentan lactosa.
Black J.G. 1996 Black J.G. 1996
Beta hemólisis. Zona de Alfa hemólisis. Aclaramiento

aclaramiento total de sangre parcial de sangre alrededor
alrededor de las colonias de las colonias con
debido a la lisis de los coloración verde del medio,
eritrocitos. contorno de los eritrocitos
intacto.
 Prueba con Rojo de Metilo
 Prueba de Voges - Proskauer
 Bases bioquímicas
 Reacciones

http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html
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Hacer clic
REINO PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS EJEMPLOS DE ORGANISMOS
Monera Organismos procariotas unicelulares. Bacterias
Protistas Organismos eucariotas unicelulares y sus descendientes más inmediatos. Algas,

protozoos
Hongos Organismos heterótrofos que obtienen su alimento por absorción. No Levaduras, setas
realizan la fotosíntesis. La pared celular contiene generalmente quitina.
Vegetal Organismos inmóviles que realizan la fotosíntesis. Pared celular Musgos,

compuesta de celulosa. helechos,
árboles
Animal Organismos móviles sin pared celular. Ingieren el alimento. Presentan Moluscos, peces,
tejidos diferenciados. aves
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COPROCULTIVO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO PARA ENRIQUECIMIENTO PARA IDENTIFICACIÓN
Agar entérico Hektoen Base de caldo tetrationato Agar de hierro y triple azúcar
Agar de eosina y azul de metileno Caldo de selenito y cistina Caldo rojo de fenol y carbohidratos
Agar ENDO Medio urea
Agar XLD Medio SIM
Agar Salmonella Shigella Agar hierro y lisina
Agar verde brillante Medio MIO
Agar citrato de Simmons
AISLAMIENTO ENRIQUECIMIENTO
PLACAS: Agar S-S,

verde brillante, sulfito de TUBOS: Caldo
bismuto. tetrationato y/o
caldo selenito
Agar sangre
PLACAS: Agar verde
INCUBACIÓN brillante,sulfito de
24 hs – 37° C bismuto,XLD,EMB,
PLACA: Agar EMB ó ENDO, Mac Conkey.
ENDO, XLD, Mac IDENTIFICACIÓN
Conkey BIOQUÍMICA
TSI, MIO, LIA, SIM,
fenilalanina,
RMVP,Citrato de
Simmons, urea
Principales Pruebas para la identificación de
Enterobacterias
BACTERIA OXIDASA INDOL VP RM CITRATO SH2 UREA MOVIL GELA LISINA ARGI
IDAD TINA DESC. NINA
DESC
.
E. coli - + - + - - - - - - -
Shigella - + - + - - - - - - +
Edwardsiella - + - + - + - - - + -
Salmonella - - - + - + - - - + +
Arizona -- - - + + + - + + + +
Citrobacter - - - + + + - - - - -
Klebsiella - + + - + - + - - + -
Enterobacter - - + - + - - + + + -
Serratia - - + + + - - + + + -
Proteus - + - + + + + + + - -
vulgaris
Providencia - + - + + - - - - - -
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html
Hacer
Bacterias Gramnegativas no Fermentadoras
Prueba O/F Oxida Catala Reducci Red.ucc Movilida Mac SS Agar
glucosa sa sa ón de ión de d Conkey pseudo
bioq. NO2 N2 cel
Géneros
Pseudonomas O + + Variable Variable + (excepto + + +
P. mallei)
Acinetobacter O -- + - - - + V -
Achromobacter O + + + - + + + -
Alcaligenes Inactivo + + Variable - + + V V
Eikenella Inactivo + - + - - - - -
corrodens
Flavobacterium O + + - - - - - -
Grupos del CDC Variable + + Variable Variable Variable - V V
Moraxella Inactivo + + Variable Variable - - - -

ESTAFILOCOCOS
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO PARA IDENTIFICACIÓN
Agar S-110 Medio CTA
Agar sal y manitol Caldo rojo de fenol
Agar de Vogel Johnson Caldo SF
1.Examen directo Tinción de Gram
2. Siembra Agar S-110 3. Frotis

Agar sal y manitol 4. Pruebas bioquímicas
Agar de Vogel Johnson Coagulasa
Catalasa
Fermentación de
manitol
Susceptibilidad a
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
novobiocina
Hacer clic
FAMILIA MICROCOCCACEA
CARACTERÍSTICA MICROCOCCUS STOMATOCOCCUS PLANOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS
Racimos irregulares + + + +
Tetradas + - - -
Cápsula - + - -
Movilidad - - + -
Crecimiento G- + - - -
furazolidona
Fermentación de - + - +
glucosa
Oxidasa + - No desarrolla -
Resistencia de R R R S
lisostafina
Glicina de péptido- - - - +
glicana
Ácidos teicoicos en - - - +
pared celular
Identificación de Staphylococcus
PRUEBA S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
Pigmento colonial + - 10-90% cepas +
Coagulasa + - -
Factor de agregación + - -
Nucleasa termoestable + - -
Fosfatasa alcalina + + -
Ornitina descarboxilasa - 10-90% cepas + -
Ureasa 10-90% cepas + + +
Beta-galactosidasa - - +
Producción de acetoína + + +
Resistencia a novobiocina - - +
Resistencia a polimixina + + -
Trehalosa + - +
Manitol + - 10-90% cepas +
Manosa + + -
Xilosa - - -
Celulosa - - -
Maltosa + + +
Sacarosa + + +
ESTREPTOCOCOS
Especie Susceptibili Susceptibili Hidrólisi Crecimient Crecimient CAM Fenómen
dad dad s Hidrólisi o en bilis o en NaCl P o
bacitraci optoquin hipúrat s 6.5% satelitism
na a o esculina o
Estreptoco-
cos beta-
hemolíticos
Grupo A S R + - - - - -
Grupo B R R - + - + + -
Enterococos R R + - + + - -
No
enterococos R R - - + - - -
S. viridans R R - - - - - +
S. R R - - - - -
pneumoniae
http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm
Hacer clic
Diferenciación de especies de Streptococcus
Especie Reducción Crecimieto Lactosa Trehalosa Sorbitol Manitol Sacarosa
de Azul en Litmus
de milk
metileno
HEMOLÍTICO
PIOGÉNICO
S. pyogenes - - + + - - +
S. agalactiae - + + + - - +
S. equi - - - - - - -
ORALES
S. salivarius - + + + - - +
S. Mutanm - + + + + +
S. termophilus - + + - -
DEL ÁCIDO
LÁCTICO + + + -
S. lactis + + + -
S cremoris
ENTEROCOCOS
E. feacalis + + +
S. liquefaciens
S zymogenes
Características S. pneumoniae Streptococcus
sp.
Morfología Diplococo lanceolado Pequeñas cadenas de cocos
Cápsula + -
Hemólisis Alfa Alfa
Crecimiento en caldo Turbio uniforme Crecimiento granuloso
Solubilidad en bilis + -
Fermentación de inulina + -
Sensibilidad a Optoquina + -
Virulencia para ratón + -
http://catalog.cmsp.com/datav3/it010019.htm
Hacer clic
HEMOLISINAS DE STHAPYLOCOCCUS
Tipo serológico Eritrocitos Leucocitos Toxicidad
susceptibles susceptibles
ALFA Conejo Conejo Dermonecrótica

Borrego Humano para conejo
BETA Borrego Ninguno Letal para conejo

Humano en grandes dosis
GAMMA Conejo, humano, Dermonecrótica

borrego, cobayo, para conejo y
rata cobayo; letal para
conejo
DELTA Conejo, humano, Conejo, humano, Edema en conejo y
borrego, cobayo, ratón, cobayo cobayo
rata
BACILLUS Y CLOSTRIDIUM
CARACTERÍSTICA Bacillus Clostridium

Forma Bacilos Bacilos
Esporas + +
Movilidad + +
Crecimiento en:
Aerobiosis + -
Anaerobiosis - +
Catalasa + -
Ácido de glucosa + +
Diferencias de especies de Bacillus
Características B. anthracis B. cereus B. megaterium B. subtilis
Ácido de:
Arabinosa - - + +
Glucosa + + + +
Manitol - - + +
Salicina - +/- - +/-
Cápsula + - -
Crecimiento en:
Agar penicilina - + -
Anaerobiosis + + - -
Citrato + + + +
Glucosa O/F F F O O
Hemólisis ASC - BETA - +/-
Hidrólisis de:
Almidon + + + +
Gelatina + + + +
Indol - - - -
Movilidad - + + +
Peptonización LT - + +/- +
Reducción de Nitratos + + - +
Virulencia de ratón + - - -
Voges-Proskauer + + - +
Diferencias de especies de Clostridium
Características C. perfringes C. botulinum C. tetani
Ácido de:
Glucosa + + -
Lactosa + - -
Maltosa + Variable -
Manitol - - -
Sacarosa + Variable -
Sorbitol - Variable
Trehalosa Variable Variable
Crecimiento aeróbico - - -
Esporas Subterminal Subterminal Terminal
Hemólisis ASC + +/- +
H2S - +/- Variable
Indol - - Variable
Leche tornasolada ACG - Variable
Movilidad - + +
Reducciónd de nitratos Variable - -
Voges - Proskauer Variable - -
CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
Especie Morfología Morfología en Crecimiento Hemólisis Fermentación
celular ASC en caldo
Glu Sac Alm
Variedad Bacilos cortos Colonias 2-4mm, Película - + - +

gravis grises, cabeza
de margarita,
planas
Variedad mitis Bacilos largos, Colonias 1-2mm, Difuso + + - -

con granos en negras,
los extremos convexas, lisas y
brillantes
Variedad Bacilos largos Colonias Sedimento - - - -

intermedius en bastón >0.5mm, granular
negras, planas,
secas, duras
EXUDADO FARINGEO
MEDIOS
PARA AISLAMIENTO
Agar sangre Agar S-110
Agar eosina y azul de metileno Medio de transporte Stuart
Agar sal y manitol Agar BIGGY
Tinción de Gram
Hemolítico grupo A
Streptococcus Disco de bacitracina
Agar sangre Neumococos Disco de optoquina

Solubilidad de bilis
Agar eosina y Enterobacterias

azul de metileno TSI, LIA, MIO, citrato y urea
Agar S-110, sal Staphylococcus Catalasa y coagulasa

y manitol aureus y otros
Micrococcus
Tubos germinales y
Agar BIGGY Candida albicans clamidiosporas
UROCULTIVO
PARA IDENTIFICACIÓN PARA SENSIBILIDAD A
MEDIOS ANTIBIÓTICOS
TSI, Caldo rojo de fenol
PARA AISLAMIENTO Agar de Mueller Hinton
Urea, SIM, MIO, LIA,
Agar sangre Agar soya tripticaseína
Citrato de simmons
Agar EMB
Agar S-110
Agar sal y manitol
Agar Biggy Orina
AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIÓN
Agar sangre, Agar EMB Agar S-110 ó sal

identificación de: y manitol
Tinción de Gram Identificación de:
Estafilococos
Enterobacterias Identificación de
Estreptococos Staphylococcus y
Pseudomonas
Neumococos otros Micrococos
Salmonella y
Observación de Shigella
hemólisis
Aislamiento de bacterias patógenas en
heces
Salmonella, Shigella, Escherichia coli, Y. enterocolitica
Materia fecal
Mac Conkey EMB o XLD Sulfito de bismuto Caldo de selenito
Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Colonia negra = Salmonella Sulfito de bismuto XLD, VB
Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y
Shigella
Certifique Y. enterocolitica Colonia negra Colonia lactosa

Salmonella (-)=Salmonella typhi
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http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/coursew
are/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html
Clasificación y pruebas para Streptococcus
Grupo Especie Hemóli Habitat Enfermedades Pruebas de
de sis humano laboratorio
Lancefi
eld
S. pyogenes
A beta Faringe, piel Infecciones primarias:
Faringitis aguda, erisipela,
Disco de bacitracina A
Aglutinacion en látex
celulitis, impétigo, septicemia
Secuelas postinfecciosas:
Fiebre reumática,
glomerulonefritis,
endocarditis reumática.
S. agalactiae
B
beta Faringe, vagina Sepsis puerperal, Prueba de CAMP
endocarditis, neumonitis, Bilis esculina
neumonía, meningitis, Aglutinación en látex
septicemia.
S. equi
C
beta Faringe, vagina, Infecciones en heridas, sepsis Hidrólisis de hipurato,
beta piel puerperal, celulitis, Fermentación de
S. equisimilis endocarditis. glicerol, trehalosa,
alfa
S. dysgalactiae sorbitol
Aglutinación al látex
Grupo Especie Hemóli Habitat Enfermedade Pruebas de
de sis humano s laboratorio
Lancefi
eld
Enterococos:
D
Intestino grueso Infecciones en tracto Hidrólisis de bilis esculina
urinario, abcesos Aglutinación al latex
E. faecalis Alfa pelvianos, peritonitis, Tolerancia a 6.5% NaCl
E. faecium Beta infecciones en
E. turans heridas, endocarditis.
No enterococos: Gama
S. bovis Alfa
S. equinus
S. anginosus
F Beta Boca, dientes, faringe Sinusitis, caries Producción de ácido a
dental, meningitis, partir de glucosa,
abceso cerebral, maltosa, salicina y
neumonía sacarosa
Aglutinsación al latex
S. sanguis
H Alfa Boca, dientes, faringe Caries dental, Fermentación de inulina
endocarditis,
septicemia
S. salivarius
K Alfa Faringe, boca Endocarditis, Ácido aprtir de glucosa,
septicemia, sinusitis, sacarosa y maltosa
meningitis
S. pneuomoniae Alfa Faringe, boca, traquea Neumonía lobar, Serotipíficación

septicemia, otitis, Reacción de quellung
meningitis, Solubilidad en bilis
endocarditis
Susceptibilidad a la
optoquina
BACILOS GRAM NEGATIVOS OXIDASA
POSITIVOS
Prueba Aeromonas Plesiomonas Vibrio Pseudomonas
Fermentación + + + -
de glucosa
Crecimiento - - + -
en NaCl 6.5%
Ácido de - + - No aplicable
inositol
Ácido de + - + No aplicable
manitol
Crecimiento - - + -
en TCBS
Licuefacción + - + Variable
de gelatina
Bacteria con forma de bastón (bacilo), que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceas; está
considerada como el material biológico más utilizado en experimentación. Esta bacteria se encuentra en el
tracto intestinal de los mamíferos. La especie comprende varios grupos que se establecen según su
actividad. Las especies de Escherichia coli oportunistas producen infecciones sólo si abandonan el colon.
Otros grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada diarrea del viajero. Esta
última no es grave, pero la gastroenteritis aguda de los niños puede provocar la inflamación de la mucosa
intestinal, dando lugar a deshidratación grave y heces purulentas. La Escherichia coli es un organismo
adecuado para la investigación por su crecimiento rápido y porque su cultivo es sencillo. Ha facilitado
descubrimientos muy importantes sobre metabolismo, reproducción celular e ingeniería genética.
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Hacer clic
http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
Streptococcus, bacteria Gram positiva de forma esférica. Los estreptococos aparecen en

pares o cadenas, y algunas especies son patógenas en los seres humanos. Las infecciones
estreptocócicas comprenden la faringitis, la escarlatina, erisipelas, fiebre puerperal y algunas
neumonías. Los fármacos de elección en el tratamiento de estas infecciones son la penicilina
y la eritromicina. Los cultivos de los estreptococos no patogénicos lácticos se emplean en la
fermentación de productos lácteos como el queso y la mantequilla.
La bacteria Staphylococcus aureus es un patógeno común en el ser
humano que se localiza principalmente en las mucosas y la piel. Puede
originar abcesos y forúnculos en la piel además de provocar
osteomielitis, endocarditis y otro gran número de infecciones.
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La bacteria Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea, una
enfermedad infecciosa que origina fiebre alta, erupción de manchas
rojas en tórax y abdomen y a veces diarrea y hemorragia intestinal.
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Estructura proteica de un microtúbulo
Los microtúbulos son tubos finos y huecos que ayudan al soporte de ciertas estructuras
celulares como cilios y flagelos. Éstos son orgánulos filamentosos, destinados a la locomoción
y a la obtención de alimento, que están incrustados en la membrana celular de algunos
organismos eucariotas. Las paredes del tubo están formadas por dos tipos de subunidades de
una proteína globular, la alfa y la beta tubulina, que se reúnen para formar un dímero. Los
dímeros se ensamblan, se enrollan y componen un tubo de la longitud necesaria. Dentro de
cada cilio (corto) o flagelo (largo), aparecen nueve pares de microtúbulos que rodean a un
décimo par central.
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El ciclo de Krebs empieza y acaba con la combinación de la acetil coenzima A (acetil Co A) y el oxalacetato para
formar ácido cítrico. Este compuesto ácido tiene seis átomos de carbono y experimenta una serie de reacciones
químicas catalizadas por enzimas que separan dos de estos átomos. Las enzimas también modifican la
estructura del compuesto, que se transforma en oxalacetato al final del ciclo. Éste se combina a continuación
con la acetil Co A para iniciar de nuevo la cadena de reacciones. Cada ciclo genera una molécula de ATP rico en
energía (que se forma por liberación de cuatro electrones) y otra de GTP.
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Esta micrografía electrónica ilustra
la bacteria Vibrio cholerae,
causante del cólera, una grave
enfermedad infecciosa del hombre.
Produce una toxina que induce la
secreción de grandes cantidades de
líquido en el intestino delgado, lo
cual determina un cuadro de
vómitos, diarrea, calambres
musculares y, a veces, la muerte.
Hay una vacuna preparada con
bacterias muertas que proporciona
protección parcial.
Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Moredun Animal
Health LTD/Photo Researchers, Inc.
Bacilos Gram positivos grandes
que se agrupan formando
cadenas, forman esporas y son
aerobios La mayor parte de las
especies de Bacillus producen
catalasa, y la esporulación no
es inhibida por la incubación
aerobia característica positiva
que ayuda a la diferenciación
del género Bacillus del
Clostridium. El Bacillus
anthracis causa antráx en
animales y humanos. El
Bacillus cereus ha sido
asociado con brotes de
intoxicación alimentaría.
Diplococos Gram positivos,
frecuentemente lanceolados y
agrupados en cadenas, poseen
una cápsula formada por
Ingraham L.J. 2000 polisacáridos que permite una
fácil tipificación con antisueros
específicos. Pueden ser lisados
con facilidad por agentes
tensoactivos, como las sales
Black, 1996
biliares. Estos organismos son
habitantes del aparato
respiratorio superior del
hombre, y pueden causar
Ingraham L.J. 2000
neumonía, sinusitis, otitis,
bronquitis, meningitis entre
otros.
Corynebacterium diphteriae en tinción de Gram.
University of Missouri-Columbia, 1998:
Son bacilos Gram positivos,

inmóviles y no esporulados, que
frecuentemente presentan sus
extremos en forma de mazas, así
como gránulos irregularmente
teñidos. A menudo se encuentran
formando asociaciones
características, semejando letras
chinas o palizadas. Algunas
especies forman parte de la flora
normal del aparato respiratorio del
hombre. C diphtheriae produce
una poderosa exotoxina que causa Corynebacterium diphtheriae en medio Tinsdale.
la difteria en el hombre.
Streptococcus faecalis en
fisión binaria, coco Gram
positivo, flora normal del
intestino grueso, sin
embargo causa infecciones
en el tracto genitourinario y
en sistema cardiovascular.
Los enterococos se pueden
desarrollar típicamente en
medios con concentraciones
de NaCl al 6.5% o bilis al
40%, son inhibidos pero no
destruidos por las
penicilinas.
http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm
Estafilococo, nombre común de un género de bacterias parásitas (Staphylococcus) de forma

redondeada, que se encuentran habitualmente en el aire, el agua, la piel (especialmente en
zonas con pelo o vello) y la parte alta de la faringe humana. Son de naturaleza patógena, y
cuando abandonan su localización en la piel y pasan a invadir otras estructuras pueden
producir procesos como los forúnculos, infecciones de heridas (abscesos; neumonía;
meningitis; septicemia). Casi siempre existe una puerta de entrada a través de la piel o la
faringe. El tratamiento de las infecciones estafilocóccicas se realiza mediante antibióticos,
como los de la familia de las penicilinas y sulfamidas, pero es frecuente la existencia de
cepas resistentes a los antibióticos habituales, que requieren antibióticos más específicos
para su control.Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Helicobacter pylori, bacteria implicada en el desarrollo de gastritis y úlceras pépticas. Se asocia
también con algunos cánceres de estómago. Con toda probabilidad, la infección por
Helicobacter pylori se produce en la edad infantil.
Es un bacilo Gram negativo corto, helicoidal, con múltiples flagelos, microaerófilo (con
preferencia por medios escasos en oxígeno), que coloniza las capas profundas del moco de
recubrimiento gástrico y duodenal y se adhiere a las células epiteliales superficiales de la
mucosa del estómago y duodeno, sin invadir la pared. La bacteria segrega amoníaco,
alcalinizando el medio; así se protege de la acción acídica del jugo gástrico (pH 3). El amoníaco
además irrita la mucosa, ayudado por proteasas y fosfolipasas bacterianas que destruyen el
moco protector. La mucosa y su lámina propia son invadidas por un denso infiltrado de células
inflamatorias, especialmente neutrófilos.
Se ha relacionado con el 95% de las úlceras duodenales, el 70% de las úlceras gástricas, el
100% de las gastritis crónicas activas y el 100% de las gastritis crónicas tipo B.
DIAGNÓSTICO
Las pruebas que se utilizan para diagnosticar esta infección pueden ser directas, si se basan en
la identificación del microorganismo (histología y cultivo) e indirectas, cuando estudian alguna
característica del germen (prueba de la ureasa y pruebas en aire espirado) o bien los
anticuerpos producidos por el paciente (serología). Las muestras utilizadas para el diagnóstico
pueden obtenerse por métodos invasivos (biopsia durante la endoscopia) o no invasivos
(suero, saliva, aliento).
Beyong,2001:http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html
Salmonella, género de bacterias patógenas descubiertas por el veterinario americano Daniel Elmer Salmon
en 1885. El organismo se transmite por determinados alimentos contaminados como carne de ave, huevos
u otras carnes. Se divide en tres especies: Salmonella typhi, S. choleraesuis y S. enterititis. Ésta última
presenta más de 1.400 variedades antigénicas distintas. La S. typhi produce la fiebre tifoidea. Las
diferentes S. enteriditis, la más típica de las cuales es la S. typhimurium, producen gastroenteritis
(salmonelosis) que son intoxicaciones alimentarias que producen dolor abdominal, fiebre, náuseas, vómitos
y diarrea. El periodo de incubación varía entre 8 y 48 horas y la duración de los síntomas oscila entre 3 y 7
días. Los casos leves se tratan con dieta y limonada alcalina (preparado rehidratante y reponedor de las
pérdidas de electrolitos); no se deben usar antidiarreicos porque pueden transformar al enfermo en
portador crónico de salmonelas. Los casos graves deben hospitalizarse y tratarse con rehidratación
intravenosa y, en ocasiones, con antibióticos. La prevención de estas infecciones pasa por extremar la
higiene, la limpieza cuidadosa y el aumento del tiempo y la temperatura en la preparación culinaria de los
alimentos.
Las arquebacterias constituyen
un grupo de bacterias adaptado
a vivir en condiciones extremas.
La especie Methanospirillum
hungatii es una arquebacteria
metanogénica Gram negativa
presente en ambientes carentes
de oxígeno. Estas bacterias
producen metano a partir de
dióxido de carbono e hidrógeno.
En la fotografía aparece la
bacteria en fase de escisión, es
decir, mientras se está
dividiendo para dar lugar a dos
células hijas.
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Lounatmaa/Science Photo Library/Phot Researchers, Inc.
Las espiroquetas son bacterias con una morfología y mecanismo de movilidad
únicos. Se encuentran diseminadas en ambientes acuáticos y en los cuerpos de
animales. Algunas de ellas causan enfermedades como la sífilis, originada por
Treponema pallidum. La célula espiroqueta es delgada, flexuosa y de forma
helicodal.
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La bacteria Neisseria
meningitidis que muestra
esta imagen, produce
meningitis bacteriana así
como otras enfermedades. Su
carácter Gram negativo se
debe a su incapacidad para
captar un tipo específico de
colorante bacteriano
denominado tinción de Gram.
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Neiseria meningitidis University of Missouri-

Columbia, 1998:
COOH
NH 2
N
H
L - Triptofano
COOH
O
N N
H DESAMINACIÓN H
Indolpiruvico
Indol
H
C
O
N
H
Indolacetaldehído
CH3
COOH
N
N H
H
Ácido Indolacético(indolacetato). Escatol (metilindol)
Incubación de corto tiempo incubación de largo término

G L U C O L I S I S
2 fosfoenolpiruvato
2 ADP
Glucosa
2 ATP
ATP ADP 2 piruvato
H2O
2 2-fosfoglicerato
Glucosa-6-fosfato
2 3-fosfoglicerato
Fructosa-6-fosfato
2 ADP 2 ATP
ATP ADP
Fructosa-1,6-bifosfato 2 1,3-bifosfoglicerato
2 NAD
2 NADH
2 PO4
Dihidroxiacetona fosfato 3-fosfogliceraldehído

NADH NAD
CoA
Piruvato CoA CO2

Acetil CoA
oxalacetato
citrato
DE KREBS
NADH
NAD
malato
isocitrato
NAD
H2O CO2
NADH
CICLO
fumarato
Alfa-cetoglutarato
FADH2 NAD CO2
FAD NADH
CoA
succinato Succinil CoA

CoA
GTP GDP
VIA HEXOSA MONOFOSFATO
NADP
NADP
Glucosa
Ribulosa-5-P
5-P-gluconato
Glucosa-6-fosfato
NADPH
CO2
NADPH
Ribosa-5-p Xilosa-5-P
Gliceraldehído-3-P Sedoheptulosa-7-P
GLUCOLISIS
Fructosa-5-P Eritrosa-4-P
Gliceraaldehído-3-P Fructosa-5-P
Microbial Systematics,2002
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm PRUEBAS BIOQUÍMICAS
http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Bacillus subtillis Proteus vulgaris
Microbiology lab index, 2002:

http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus
Microbiology lab index, 2002:

http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides
.htm
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes
Streptococcus viridans Streptococcus faecalis Streptococcus pneumoniae
Homepage of Microbiologia clínica, 2000

http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm#topo
 En algunos casos es necesario sembrar una muestra para conocer el número de
células viables o vivas, en este caso bacterias. Para ello se realiza entre otros
métodos el vaciado en placa.
 Para obtener el número apropiado de colonias, usualmente se debe diluir la
muestra a contar. Es común usar varias diluciones decimales de la muestra.
 Para la dilución se toma 0.1 ml de muestra problema y 9.9 ml de diluyente.
 En la mayor parte de los casos se necesita realizar diluciones seriadas.
 Cuando se hacen diluciones es importante que se utilice una pipeta diferente para
cada dilución, aun cuando sea de la misma muestra. Las cuales deben estar
esterilizadas previamente al igual que todo el material que se utilizará.
 Esto se debe a que la muestra inicial, que contiene la mayor cantidad de
organismos, no se expulsó a todos los microorganismos de la pipeta al expulsar el
contenido de esta.
 Los organismos que se adhieren a las paredes de la pipeta pueden ser arrastrados
fuera en diluciones posteriores y ocasionar un serio error en la cuenta final que se
obtiene.
 El número de colonias obtenidas sobre una placa no depende solamente de la
cantidad del inóculo, sino también de los adecuado del medio de cultivo y de las
condiciones de incubación.
 No todas las células depositadas sobre la placa formarán colonias a la misma
velocidad y si se usa un tiempo corto de incubación, se puede obtener menos del
máximo de colonias.
 El recuento de viables está sujeto a gran error. Si se desean cuentas exactas, se
debe tener gran cuidado y se deben preparar muchas placas por duplicado.
 Para expresar el resultado, el recuento de viables se expresa como el número de
unidades formadoras de colonias (UFC).

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Pruebas Medios selectivos

Estría Vaciado en placa

Estría cruzada Estría simple Estría en Z Inoculación masiva

LICUEFACCIÓN PRUEBA DE UREA

LECHE CON REACCIÓN RMVP

Los medios sirven para uno de dos propósitos

Los medios de cultivo se pueden clasificar en: Koneman,1992

FINALIZAR MENÚ MEDIOS DE CULTIVO

 El extracto o la infusión de carne proporcionan al organismo los aminoácidos,

 La solidificación se consigue agregando agar, gelatina, albúmina de suero o de

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3. Caldo de triptona y soya

4. Caldo de infusión de cerebro y corazón

5. Agar de infusión de cerebro y corazón

6. Caldo de infusión de corazón

7. Agar y extracto de hígado Agar EMB con crecimiento de E. coli,

FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

Los medios diferenciales son medios básicos o enriquecidos, a los

Los medios de enriquecimiento son por lo general medios líquidos

FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

La mayoría de ellos serán medios empleados para

FINALIZAR MEDIOS DE CULTIVO

1. Medios sólidos. Son útiles para el crecimiento, aislamiento y

2. Medios semisólidos. Útiles para la observación de metabolismo,

3. Medios líquidos. Permiten la difusión del microorganismo.

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composición química exacta de Clasificación de reinos

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Cuando se inocula agar

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 Los medios líquidos se inoculan como en el método ilustrado; el tubo debe

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Los picos de flauta (planos inclinados) de

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Ingraham L.J. 2000, modificado

Hisopo Documento electrónico

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ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

 Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4)

 Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4) Tinción de Gram: Micrococcus sp

Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina,

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La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción que ocurre en

Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general

El más importante ciclo fermentativo de la degradación de la glucosa es el ciclo

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 Fermentadores de glucosa: Todos los

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 No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas

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ATLAS FINALIZAR PRUEBAS BIOQUÍMICAS

 El medio incluye citrato de sodio un anión como única fuente de carbono, y

 Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de

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