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MEM. CONF. INTERNA MED. APROVECH. FAUNA SILV. EXT. CONV.

2013, 9: 1

ASPECTOS GENERALES DE LA EVALUACIN


HEMATOLGICA EN FAUNA SILVESTRE Y NO
CONVENCIONAL
Copete-Sierra M*
* BLC, MSc (c). Analista Clnica Veterinaria Centro Especializado de Diagnstico
Veterinario CESDIVET Ltda. Correo electrnico: mcbact@gmail.com

Resumen
El uso de la evaluacin hematolgica en animales silvestres y no
convencionales es fundamental para la evaluacin general del estado de
salud de estas poblaciones. La estandarizacin de los procedimientos de
laboratorio, el conocimiento y la experiencia del analista en la identificacin
de las diferencias morfolgicas, son fundamentales para obtener resultados
confiables que proporcionan la mayor utilidad clnica. El objetivo de este
documento es recopilar informacin bsica para la realizacin adecuada de
la evaluacin hematolgica en animales silvestres y no convencionales, as
como los aspectos generales para su interpretacin.
Palabras clave: evaluacin hematolgica, diferencias morfolgicas, mamferos,
aves, reptiles.

Introduccin
La Hematologa es la rama de la medicina, tanto humana como veterinaria,
que estudia los elementos formes de la sangre, los precursores en mdula
sea y los analitos qumicos plasmticos relacionados, abarcando un anlisis
estructural, funcional y la determinacin de concentraciones de estos
elementos. Dentro de las pruebas hematolgicas disponibles el hemograma
es la ms solicitada, ya que permite tener una visin global de la
homeostasis del sistema hematopoytico y obtener excelentes indicadores
de varios aspectos del estado de salud de un animal.
La evaluacin hematolgica, hemograma, cuadro hemtico, biometra
hemtica o hemoleucograma, en realidad no se trata de una prueba
individual sino de un conjunto de anlisis cuantitativos y cualitativos, en el
cual la utilidad clnica es directamente proporcional a la calidad del material
obtenido, la calidad analtica y el nmero de parmetros determinados. [10,
16]

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Pese a que en las ltimas dcadas se han estandarizado procedimientos


para desarrollar estas pruebas en especies silvestres y no convencionales,
an se presentan algunas limitaciones para su desarrollo. La primera de ellas
es la variacin morfolgica de las clulas sanguneas que existe en
condiciones normales, entre la gran cantidad de especies a evaluar. Si el
analista encargado no cuenta con los conocimientos y la experiencia
suficiente en el rea, difcilmente podr detectar los cambios celulares
producidos por alteraciones como el estrs, as como los que se hacen
evidentes en los diferentes procesos de enfermedad. En aves y reptiles,
especficamente, se pueden presentar confusiones entre tipos celulares
como linfocitos y trombocitos o entre heterfilos y eosinfilos. [15, 18]
Cuando la hematologa es remitida a laboratorios externos, es imprescindible
verificar la capacidad del analista para trabajar este tipo de animales.
Estas diferencias morfolgicas constituyen un obstculo para la
disponibilidad de recursos tcnicos. Actualmente los avances tecnolgicos
han hecho posible adaptar analizadores automatizados para hematologa
veterinaria similares a los de uso en humanos, capaces de crear resultados
ms precisos tanto desde un punto de vista cualitativo como cuantitativo. Sin
embargo, este tipo de tecnologa es aplicable a animales convencionales y a
muy pocas especies de mamferos no domsticos, ya que sigue siendo
necesaria la revisin manual del extendido para recuentos diferenciales y
observacin de inclusiones y parsitos sanguneos. En el caso de las aves,
reptiles, peces y anfibios es ms complicado, debido a que sus eritrocitos son
clulas nucleadas y esto dificulta el conteo con mtodos automatizados y su
posterior interpretacin. [2]
En cuanto a interpretacin de resultados hematolgicos, si bien existe el
Sistema de Informacin Internacional de Especies (ISIS), los valores de
referencia siguen siendo una limitante, ya que los rangos establecidos en
esta base de datos son muy amplios y no todas las especies estn incluidas.
El presente artculo pretende proporcionar informacin bsica para la
realizacin adecuada de la evaluacin hematolgica en animales silvestres y
no convencionales, haciendo nfasis en los parmetros que hacen parte del
hemograma manual y las caractersticas morfolgicas de las clulas
sanguneas, teniendo en cuenta que constituyen la mayor limitacin que
pueden presentarse en la prctica hematolgica para estas especies.

Recoleccin, almacenamiento y preparacin de muestras


El procedimiento de toma de muestra es el principal factor determinante
durante la fase preanaltica. El proceso de extraccin de sangre puede ser
innecesariamente estresante para un animal, sencillamente por el trato, el
tipo de anestesia o la incomodidad que se asocia a una determinada tcnica.
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[21] Las recomendaciones generales para una correcta extraccin de sangre


son las mismas para todas las especies.
Toda muestra debe acompaarse de una solicitud que indique el anlisis
requerido, la informacin bsica del animal y una corta anamnesis (cuando
se trata de hematologa para diagnstico).

Sitios de puncin
Se debe escoger el sitio de puncin ms adecuado de acuerdo con la
especie y el tamao del animal (tabla 1). Puede usarse el sistema tradicional
con jeringa o el sistema al vaco tipo Vacutainer (figura 1). Se debe tener
en cuenta que el calibre de la aguja debe asegurar una extraccin de sangre
rpida sin colapsar la vena, dentro de la limitacin de evitar hematomas; el
calibre deber ser justo menor que el dimetro de la vena. [21]
Figura 1. Toma de muestra en un puma (Puma concolor) con sistema
tradicional de jeringa, en la vena femoral. Fotografa: Santiago LozadaCardona.

La cardiocentesis no es recomendada como proceso rutinario de extraccin


sangunea en ninguna especie, ya que presenta un riesgo elevado de
muerte para el animal. [7, 8]

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Tabla 1. Sitios de puncin para extraccin de muestras sanguneas en


mamferos, aves y reptiles
Grupo
Mamferos
Aves
Reptiles

Sitios de Puncin Venosa


Safena, popltea, femoral, humeral, baslica, braquial, ceflica,
yugular
Baslica (ulnar, radial o braquial), metatarsiana medial, yugular
Cervical dorsal (supravertebral), coccgea dorsal, caudal,
subcarapacial (subvertebral)*, ulnar (radio-humeral), yugular**

Convenciones: *, Exclusiva en quelonios [8]; **, Minimiza los cambios que se producen con
frecuencia por contaminacin linftica de la sangre durante la extraccin, debido a que en
reptiles los vasos linfticos acompaan a los sanguneos [8, 28]

Recoleccin y almacenamiento
Existen tubos para recoleccin de sangre con fines hematolgicos,
comercialmente disponibles, en diferentes tamaos y presentaciones.
Generalmente se usan los tubos de tapa lila los cuales contienen cido
Etilendiamino Tetractico (EDTA) lquido o liofilizado, compuesto
anticoagulante de eleccin en hematologa; el EDTA es el que mejor
conserva las caractersticas morfolgicas y permite la tincin adecuada de
los leucocitos. [32] Sin embargo, en algunos casos la sangre debe
recolectarse en tubos con heparina, material que se encuentra disponible
comercialmente (tabla 2). [20, 40] Los tubos con heparina se encuentran
disponibles en diferentes tamaos y se identifican con la tapa de color verde.
Los tubos con anticoagulante tambin pueden ser preparados en el
laboratorio.
En reptiles se prefiere la recoleccin con heparina ya que en algunas
especies, sobre todo en quelonios, el EDTA produce hemlisis. Algunas
especies aviares presentan una anticoagulacin incompleta y hemlisis
parcial cuando se mezclan con EDTA. En estos casos tambin se utiliza
heparina como anticoagulante. [7] La relacin anticoagulante/sangre debe
ser la correcta para evitar fenmenos de dilucin y/o distorsin celular por
exceso.
Durante el proceso de extraccin sangunea se debe evitar el exceso de
succin para no provocar hemlisis; es necesario usar la jeringa y la aguja
adecuadas al calibre de la va utilizada. Una vez extrada la sangre, se
mezcla por inversin suavemente. Es ideal realizar el frotis sanguneo
inmediatamente, ya que el contacto prolongado de la sangre con el
anticoagulante induce distorsiones celulares e incluso hemlisis; no se
deben hacer recuentos celulares en sangre con ms de 4 das de
almacenamiento. Si la muestra no se va a procesar durante la primera hora
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posterior a la toma, debe refrigerarse de 2 8C; jams debe congelarse


pues esto causa hemlisis. [40]
Tabla 2. Anticoagulantes de uso frecuente en hematologa de animales
silvestres y no convencionales
Anticoagulante

Mecanismo
de accin

Ventajas

Heparina (litio,
sodio)

Antitrombnico

Reversible,
no txico

cido
Etilendiamino
Tetractico:
Na2EDTA,
K2EDTA y
K3EDTA

Quelante de
calcio

Proporciona
la mejor
preservacin

Desventajas

Usos

Alteracin
morfologa
lecucocitaria y
agregacin; fondo
azul en la
coloracin de
frotis; artefactos
en eritrocitos;
costoso.
Irreversible; en
altas
concentraciones
contrae los
eritrocitos.

Aves
(cuando la
muestra va
usarse
para
bioqumica)
y reptiles.

Mamferos,
aves y
algunos
reptiles.

Parmetros de la evaluacin hematolgica


La composicin del hemograma vara desde unos pocos parmetros como la
hemoglobina, el hematocrito y los recuentos total y diferencial de leucocitos,
obtenidos mediante tcnicas manuales, hasta ms de 30 parmetros
obtenidos determinados por autoanalizadores de hematologa, agrupados
tradicionalmente en el eritrograma, el leucograma y el trombograma. [10, 11]
Adicional a estos tres grupos, en hematologa veterinaria se realiza la
determinacin de protenas plasmticas.
Eritrograma. Comprende el anlisis de todos los parmetros relacionados
con los eritrocitos en circulacin. En los hemogramas simples consta del
recuento eritrocitario, hematocrito, hemoglobina e ndices eritrocitarios. En
los cuadros hemticos ms completos y, necesariamente, automatizados se
incorporan parmetros como el ancho de distribucin eritrocitaria y el
recuento de reticulocitos. [10 ,40] Para el estudio de la morfologa celular y la
deteccin de hemoparsitos, es necesaria la observacin del extendido de
sangre perifrica. El eritrograma brinda informacin para detectar y
caracterizar anemias, as como para evaluar la presencia de agentes
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patgenos relacionados de manera directa o indirecta con la cantidad de


clulas y cambios morfolgicos. [19, 46]

Recuento eritrocitario
Determina el nmero total de eritrocitos o hemates que se encuentran en un
volumen de sangre perifrica expresado en clulas por milmetro cbico
(mm3), por microlitro (L) o por litro (L). [10] El sistema de unidades en que
se reporta el resultado puede variar en cada laboratorio, pero la
interpretacin del parmetro sigue siendo la misma y va acorde con los
valores de referencia. Para el recuento pueden usarse mtodos manuales o
automatizados.
El recuento manual consiste en preparar una dilucin de la sangre en
solucin salina en el caso de mamferos, o en solucin de Natt y Herrick para
aves, reptiles, peces y anfibios. [31] Esta dilucin se pone en un
hemacitmetro o cmara de Neubauer para realizar el conteo. [40] Este
mtodo requiere de mucho tiempo y habilidad visual, desventajas para ser
usado de rutina en el laboratorio. Adems, su alto coeficiente de variacin le
resta confiabilidad a los parmetros que a partir de l se calculan. [10]
El conteo automatizado tradicional se basa en el principio de impedancia
elctrica. [4] Los analizadores ms recientes usan centrifugacin asociada a
colorantes y anticuerpos monoclonales, y citometra de flujo por equipos
lser. Estas tecnologas son poco aplicables a muestras de animales
silvestres y no convencionales.
El conteo de eritrocitos es necesario para calcular el volumen corpuscular
medio (VCM) en los hemogramas realizados por mtodos manuales. Este
recuento en sangre perifrica es menor en los reptiles que en los mamferos
y aves. [5]

Hematocrito
Es la relacin del volumen de eritrocitos con el de sangre total, es decir, es el
valor de sangre que se compone realmente de eritrocitos. Se expresa como
un porcentaje o, preferiblemente, una fraccin decimal. El hematocrito se
puede medir directamente por centrifugacin con un micromtodo o, de
forma indirecta como lo hacen los analizadores automatizados, calculando el
producto del volumen corpuscular medio (VCM) multiplicado por el recuento
de eritrocitos. [10, 40]

Hemoglobina
La hemoglobina (Hb), componente principal de los eritrocitos, es una protena
conjugada especializada que sirve de vehculo para el transporte de oxgeno
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y de CO2. [44] La determinacin de hemoglobina, ya sea manual o


automatizada, consiste en medir la cantidad de esta protena por unidad de
volumen expresada en g/dL. Este parmetro es de gran utilidad clnica, ya
que define los conceptos de anemia y policitemia. [10]
El mtodo manual empleado es el de la cianometahemoglobina, compuesto
que se forma al disolver un volumen de sangre en el reactivo o solucin de
Drabkin. Es una tcnica sencilla y su principio de reaccin consiste en la
oxidacin de la hemoglobina a metahemoglobina por parte de ferricianuro
potsico, para formar cianometahemoglobina, compuesto que tiene una
absorcin mxima a una longitud de 540 nm. La sangre debe diluirse en el
reactivo de Drabkin y en el caso de animales con eritrocitos nucleados, la
dilucin debe someterse a centrifugacin para lisar las membranas
eritrocitarias. Los ncleos libres de los eritrocitos lisados deben ser
removidos antes de realizar la lectura de la absorbancia, para evitar una
sobrestimacin de la concentracin de hemoglobina. [42, 43]
El mtodo de la cianometahemoglobina tambin es utilizado de forma ms
refinada por algunos analizadores automatizados. [30] Sin embargo,
teniendo en cuenta la toxicidad del cianuro y su impacto en el medio
ambiente y la salud ocupacional, en analizadores ms recientes se ha
reemplazado la solucin de cianuro por lauril sulfato sdico, una sustancia
atxica. La hemoglobina de la sangre diluida en este lisante es transformada
en lauril sulfato de sodio-metahemoglobina (metahemoglobina sdica de
lauril sulfato). Este compuesto tiene un pico de mxima absorcin a 555 nm,
lectura que realiza el autoanalizador. [23]
Otro de los mtodos automatizados descritos para la determinacin de la
concentracin de hemoglobina se basa en la medicin de la cantidad de luz
lser dispersada, tcnica descrita en 1986 y aplicada en la actualidad en
hematologa automatizada. [30]

ndices eritrocitarios
Las determinaciones del eritrograma descritas hasta ahora, se conocen como
ndices eritrocitarios bsicos o primarios. Aquellos que derivan de estos se
les conoce como parmetros derivados o secundarios. [10, 40] Estos
parmetros son la base para la clasificacin de las anemias y pueden ser
calculados o determinados por analizadores automatizados. A continuacin
se describen los ndices eritrocitarios secundarios que hacen pueden
componer el eritrograma manual y el automatizado:
Volumen corpuscular medio (VCM). Ofrece informacin sobre el tamao
promedio de los eritrocitos, expresado en fentolitros (fL) como unidad de
volumen. A partir del VCM se define el tamao de los eritrocitos como
normocitosis (normales), microcitosis (pequeo) y macrocitosis (grandes),
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caracterstica fundamental para la clasificacin de las anemias. [33] Su


clculo manual se obtiene de la relacin del hematocrito y del recuento
eritrocitario, aplicando la siguiente frmula:
VCM (fL) = (hematocrito/recuento de eritrocitos en millones por L) x 10
Se debe tener en cuenta que El VCM calculado no tiene la misma
confiabilidad del obtenido por analizadores automatizados, ya que depende
del recuento de eritrocitos que por mtodos manuales tiene un coeficiente de
variacin muy alto (>5%). [4]
Hemoglobina corpuscular media (HCM). Es el valor promedio de la
hemoglobina contenida en cada eritrocito, expresada en picogramos (pg). Se
calcula a partir del valor de hemoglobina y del recuento de eritrocitos
mediante la siguiente frmula:
HCM (pg) = (Hb en g/dL/recuento de eritrocitos en millones por L) x 10
La HCM es considerada como redundante a otros parmetros y de poca
utilidad si es calculada manualmente. [10, 40]
Concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM). Provee un ndice
de la cantidad de hemoglobina en relacin al hematocrito, expresada en g/dL.
La frmula para su clculo es la siguiente:
CHCM (g/dL) = (hemoglobina en g/dL/ hematocrito %) x 100
La CHCM define los conceptos de hipocroma, normocroma e hipercroma
(concepto hipottico), necesarios para la clasificacin de las anemias. [10]

Morfologa eritrocitaria
Un perfil hematolgico siempre debe incluir el examen de un frotis sanguneo
para determinar, si existen o no, cambios morfolgicos en los eritrocitos y
dems clulas sanguneas. Esta evaluacin se realiza mediante un extendido
de sangre en lmina teido con coloracin de Wright u otra tipo Romanowsky
como son Wright-Giemsa, May Grnwald-Giemsa o Diff-Quick. [19] La
relevancia de la informacin derivada es proporcional al conocimiento y
experiencia del analista.
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Los eritrocitos normales de todos los vertebrados, a excepcin de los


mamferos diferentes a los Camelidae, son nucleados y ovales sin palidez
central (Figura 2). La variacin en el tamao tambin es evidente; por regla
general, los eritrocitos aviares son de mayor tamao que los de los
mamferos, y los de los reptiles son ms grandes que los de las aves. A
pesar de las diferencias en tamao, la similitud entre los eritrocitos de reptiles
y aves es notoria, corroborando la hiptesis de un ancestro comn. [45] Los
glbulos rojos ms grandes son los de los anfibios. [19]
Figura 2. Eritrocitos normales en diferentes especies. Izq. Mamfero
(Saguinus leucopus): discos bicncavos, con palidez central evidente,
anucleados. Centro. Ave (Ara macao): contorno y ncleo elpticos. Der. Reptil
(Iguana iguana): contorno y ncleo elpticos, ms redondeados que en las
aves. (1000X, coloracin de Wright). Fotografas: Copete-Sierra M.

Alteraciones del color


Policromasia o policromatofilia. Las clulas policromatfilas son eritrocitos
que han sido liberados tempranamente a la circulacin. Generalmente son
ms grandes que los eritrocitos maduros y su coloracin es azul violceo, en
frotis teidos con coloraciones tipo Romanowsky, permitiendo determinar un
grado cualitativo. Bajo la coloracin supravital con azul de metileno, se
observan de un tono azul claro con material reticular punteado o formando
agregados y son llamados reticulocitos, clulas que pueden ser
cuantificadas. Esta tonalidad es el resultado de organelas como ribosomas y
mitocondrias, que permanecen en las clulas inmaduras. La presencia o
ausencia de este tipo de clulas indica una eritropoyesis activa, importante
en la caracterizacin de las anemias. [7, 8, 9, 40]

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La policromasia debe ser interpretada con cautela de acuerdo con la especie


a evaluar. En los frotis sanguneos de pequeos mamferos es normal
encontrar un nmero moderado de eritrocitos policromatfilos, ya que estos
animales responden rpida y drsticamente a la prdida de glbulos rojos
(figura 3). Por el contrario, en el caso de grandes mamferos es raro
encontrar, en condiciones normales, clulas policromatfilas en un extendido.
[19]
Figura 3. Eritrocitos policromatfilos de un tit gris (Saguinus leucopus), que
se diferencian del resto de eritrocitos por su tincin azul-violcea y un tamao
ligeramente mayor. (1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra
M

En aves los eritrocitos policromatfilos son similares a los eritrocitos


maduros, pero aparecen con un citoplasma dbilmente basoflico y un ncleo
redondeado menos condensado (figura 4). Con coloracin supravital se
observan agregados de material reticular rodeando el ncleo. [7]
La respuesta regenerativa eritrocitaria en los reptiles parece ser ms lenta
que la observada en los mamferos. Los eritrocitos policromatfilos en estas
especies, al igual que en las aves, presentan un patrn de cromatina nuclear
menos denso pero su citoplasma es ms basoflico que el de los eritrocitos
maduros y, generalmente, son de menor tamao (figura 5). [8] En los reptiles
con policromatofilia, existe una menor CCMH y un VCM disminuido. [28]
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Figura 4. Eritrocitos policromtofilos de una guacamaya bandera (Ara


macao). Se puede observar las diferencias en la coloracin del citoplasma y
la densidad de la cromatina (1000X, coloracin de Wright). Fotografa:
Copete-Sierra M.

Figura 5. Eritrocitos policromatfilos de una tortuga carey (Eretmochelys


imbricata). Se observa intensa basofilia citoplasmtica y menor condensacin
del ncleo (1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

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Hipocroma. La hipocroma se produce por una disminucin en el contenido


de hemoglobina en los eritrocitos. En la mayora de mamferos, los eritrocitos
hipocrmicos aparecen con una palidez central aumentada (figura 6). [41] En
aves, la hipocroma se evidencia en eritrocitos con una palidez
citoplasmtica, que equivale a un rea mayor al 50% del total. [7]
Figura 6. Eritrocitos hipocrmicos de un mono churuco (Lagothrix lagotricha).
La palidez central de estas clulas es ms notoria que la de los eritrocitos
normocrmicos. En la imagen puede apreciarse un neutrfilo (sup der)
(1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Alteraciones de tamao
La variacin en el tamao eritrocitario se conoce como anisocitosis. En la
mayora de mamferos esta alteracin puede discriminarse en macrocitosis
(aumento de tamao) y microcitosis (disminucin de tamao).
En aves y reptiles suele describirse de forma general y es normal encontrar
una ligera variacin en el tamao eritrocitario (1+). Un grado mayor de
anisocitosis asociado con policromatofilia es observado en aves con anemia
regenerativa. [7]

Alteraciones de la forma
Poiquilocitosis es el trmino que se emplea para generalizar las variaciones
en la forma de los eritrocitos. Aunque en aves y reptiles se describe de
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manera general por cruces, en mamferos este trmino no es posible de


interpretar ya que son varios los cambios descritos en la forma eritrocitaria.
[41]
Algunas de las alteraciones morfolgicas eritrocitarias evidentes en el frotis
sanguneo de algunos mamferos, son reversibles. Generalmente estos
cambios estn asociados a la presencia de variantes de hemoglobina que se
polimerizan tras la manipulacin de las muestras, produciendo un fenmeno
in vitro. La forma de hoz observada en los eritrocitos de venados, antlopes y
pequeos carnvoros, es la alteracin reversible ms notoria. El cambio en
stos animales es el resultado de la polimerizacin de hemoglobinas
variantes de la hemoglobina del adulto, al someter la sangre a oxigenacin.
[19]
El significado de las alteraciones en el color, tamao y forma de los eritrocitos
puede variar entre mamferos, aves y reptiles (Tabla 3).

Inclusiones
Cuerpos de Howell-Jolly. Son remanentes nucleares y se observan como
grnulos densos y de color azul rojizo o violeta, localizados excntricamente
(figura 7). Es un hallazgo habitual en felinos, roedores, pequeos primates y
algunos marsupiales sanos. [19] Una cantidad incrementada de estas
inclusiones se asocia con anemia regenerativa e hipoesplenismo. [41]
Figura 7. Cuerpo de Howell-Jolly en un eritrocito de tit gris (S. leucopus).
(1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

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Tabla 3. Significado de algunos cambios morfolgicos eritrocitarios en


mamferos, aves y reptiles
Observacin

Indicacin

Mamferos

Aves y
reptiles

Hipocroma

Anemia, deficiencia
mineral (hierro)

Significativa

Significativa

Poiquilocitosis

Alteracin metablica,
eritropoyesis
incrementada
Alteracin metablica,
eritropoyesis
incrementada

Significativa

Significativa

Significativa si la
hemoglobina no
tiende a la
polimerizacin

Significativa

Codocitos o
dianocitos

Enfermedad heptica,
anemia hipocrmica

Significativa

No descrita

Estomatocitos

Enfermedad heptica,
anemia hemoltica

Significativa

No descrita

Esferocitos

Anemia hemoltica

Significativa

No descrita

Esquistocitos

Significativa

No descrita

Cuerpos de
Howell-Jolly

Coagulacin
intravascular
diseminada (CID),
sepsis
Hipoesplenismo, divisin
nuclear anmala

Significativa en
algunas especies

Probablemente
significativa

Punteado
basfilo

Deficiencia de hierro,
intoxicacin por plomo

Significativa en
adultos

Significativa

Cuerpos de
Heinz

Exposicin a oxidantes,
hemoglobina inestable,
defectos enzimticos,
hipoesplenismo

Significativa en
algunas especies

Significativa
(rara vez
descritos)

Anisocitosis

Tomado y adaptado de: Hawkey C M y Dennet T B. Atlas de Hematologa Veterinaria


Comparada. Grass Ed. Espaa, p. 15, 1989.

Cuerpos de Heinz. Son el resultado de la desnaturalizacin oxidativa de la


hemoglobina. Aparecen como estructuras pequeas, plidas y excntricas
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dentro del eritrocito. Estn asociados a alimentos como la cebolla y el ajo, y a


frmacos como el acetaminofn. La presencia de cuerpos de Heinz reduce la
deformabilidad de la clula roja aumentado su susceptibilidad a hemlisis
intra y extravascular. [41] Estas inclusiones han sido descritas en aves que
han ingerido petrleo. [19]
Punteado basfilo. Aparece como grnulos pequeos, irregulares de tincin
basoflica, en el citoplasma eritrocitario, y est asociado con cambios
degenerativos del rRNA. En mamferos y aves, estos cambios son indicativos
de la respuesta a anemia o, rara vez, indican una intoxicacin. En reptiles es
comn que aparezca punteado basfilo en los reticulocitos (figura 8). [8, 45]
Figura 8. Punteado basfilo en eritrocito de una tortuga carey juvenil (E.
imbricata). La clula punteada puede observarse en el centro de la imagen
(1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Hemoparsitos. Especies de diferentes gneros se encuentran parasitando


las clulas sanguneas de mamferos, aves y reptiles. Algunos de estos
organismos tienen una baja o nula patogenicidad en especies silvestres y no
convencionales. [15, 41]
En primates, por ejemplo, es comn encontrar microfilarias y trypomastigotes
de Trypanosoma spp, sin enfermedad asociada (figuras 9 y 10). De la Horta
et al (2007), determinaron la prevalencia de microfilarias en primates de
zoolgicos colombianos, la cual fue de 6,39%, encontrando la mayora de
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parsitos en machos adultos de Saguinus leucopus,, sin signos de


enfermedad considerando a esta especie como reservorios y/o portadores.
[13] Otros hemoparsitos observados en primates y otros mamferos
pertenecen a los gneros Plasmodium, Babesia, Hepatozoon, Theileria y
Anaplasma. [41]
En frotis sanguneos de aves es comn encontrar parsitos de los gneros
Hemoproteus, Leucocytozoon, y Plasmodium,, as como algunas especies de
filarias y tripanosomas. [8, 25]
En reptiles pueden observarse con frecuencia Haemogregarina spp,
Trypanosoma spp y Plasmodium spp. Parsitos del gnero
Haemoproteus tambin han sido reportados en reptiles, describindolas
como especies similares a las que parasitan aves. [27, 42]
Figura 9. Tripomastigote de Trypanosoma sp en un tit gris (S.
( leucopus).
(1000X, coloracin de Wright). Fotografas: Copete-Sierra M

Eritrocitos inmaduros
En mamferos los precursores eritrocitarios aparecen como clulas
nucleadas. En aves y reptiles se observan con un ncleo de mayor tamao
que el de la clula madura
dura y acmulos irregulares de cromatina. Las
caractersticas detalladas de los eritrocitos inmaduros se recopilan en la
Tabla 4. [19]

32 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

EVALUACIN HEMATOLGICA EN FAUNA SILVESTRE Y NO CONVENCIONAL

Figura 10. Microfilaria compatible con Mansonella (Dipetalonema) perstans


en un tit gris (S. leucopus). Estos hemoparsitos
itos son observados con
frecuencia en pequeos primates (1000X, coloracin de Wright). Fotografas:
Copete-Sierra M.

Tabla 4. Clasificacin y descripcin de los precursores eritroides de


mamferos, aves y reptiles
Precursor
Rubriblasto

Prorubricito

Rubricito

Mamferos

Aves y reptiles

Redondo, de gran tamao,


ncleo grande que opaca la
mayor parte de la clula.
Cromatina nuclear finamente
granulada, nuclolos.
Citoplasma fuertemente
basoflico.
Redondo, pequeo, con
cromatina nuclear granulada,
sin nuclolo. Citoplasma
basoflico.

Redondo o ameboide de gran


tamao. Cromatina nuclear
formando reticulacin laxa con
co
acmulos. Nucleolo grande.
Citoplasma muy basoflico con
espacios mitocondriales.

Redondo de menor tamao,


con el ncleo ms pequeo
con relacin al citoplasma;
grupos irregulares de
cromatina. Citoplasma gris o
ligeramente eosinoflico.

Redondo, pequeo. Ncleo


relativamente
te pequeo con
acmulos de cromatina, ausencia
de nuclolo. Citoplasma grisceo
o ligeramente eosinoflico.

Redondo, de menor tamao, con


acmulos de cromatina nuclear.
Nucleolo de menor tamao,
visible. Citoplasma basoflico.

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COPETE-SIERRA M

Precursor

Mamferos

Aves y reptiles

Metarubricito

Citoplasma eosinoflico o algo


basoflico. Ncleo de tamao
reducido, uniformemente
basoflico o pigntico.

Policromatfilo

Redondo, anucleado, con


citoplasma grisceo o
azulado. Suele ser ms
grande que el eritrocito
maduro.

Pequeo, redondeado o
ligeramente oval. Ncleo
redondeado o ligeramente
ovalado y acmulos irregulares de
cromatina. Citoplasma grisceo o
rojo plido.
Citoplasma eosinoflico, ncleo de
mayor tamao que el de la clula
madura, con acmulos irregulares
de cromatina. Con tincin
supravital se observa una banda
perinuclear formada por
abundantes grnulos
citoplasmticos.

Tomado y adaptado de: Hawkey C M y Dennet T B. Atlas de Hematologa Veterinaria Comparada. Grass
Ed. Espaa, p. 10-11, 1989.

El eritrograma en respuesta a anemia


La anemia es el trastorno ms comn de la lnea roja y se define como la
disminucin en la masa eritrocitaria, lo cual resulta en una deficiencia del
transporte de oxgeno. Las tres causas bsicas de anemia en mamferos,
aves y reptiles son: disminucin de la produccin de eritrocitos (anemia
hipoplsica), prdida aguda o crnica (anemia hemorrgica) y destruccin
(anemia hemoltica). [2, 39]
Las anemias han sido clasificadas en tres esquemas generales descritos a
continuacin [39]:
Tamao eritrocitario (normoctica macroctica o microctica) y
concentracin de hemoglobina (normocrmica o hipocrmica).
Respuesta de la mdula sea (regenerativa o no regenerativa
Mecanismo fisiopatolgico (agrupa las anemias de acuerdo al
desorden subyacente)
En mamferos, aves y reptiles, la respuesta a anemias se evala con el
eritrograma.

Mamferos
La policromasia y la hipocroma son alteraciones eritrocitarias evidentes en
frotis teidos por sus patrones de coloracin, de gran utilidad en la
clasificacin y monitoreo de anemias. La policromasia tiende a producirse en
anemias por prdida de sangre y anemias por destruccin eritrocitaria,
34 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

EVALUACIN HEMATOLGICA EN FAUNA SILVESTRE Y NO CONVENCIONAL

mientras que en anemias por hipoplasia eritroide y anemia aplsica, no se


hace evidente. [39, 41]
La hipocroma es un signo indicativo de prdida de hierro. En mamferos
adultos la deficiencia de hierro se debe generalmente a prdidas crnicas de
sangre causadas por neoplasias, alteraciones de la coagulacin y trastornos
del sistema gastrointestinal como lceras y enfermedad inflamatoria
intestinal. En mamferos jvenes esta deficiencia se produce por dieta
inadecuada. [8]
En anemias hemolticas y anemias hemorrgicas por prdida crnica es
caracterstico observar anisocitosis, policromasia, eritrocitos nucleados y
cuerpos de Howell-Jolly, ya que son regenerativas. [9, 14] Las causas de
anemia en mamferos son similares a las descritas en aves y reptiles. [41]

Aves
La anemia es un hallazgo comn en los hemogramas aviares. [38] En las
aves, el desarrollo de la anemia por carencia de eritropoyesis parece ser ms
rpido que en los mamferos debido, probablemente, a la vida media
relativamente corta de sus eritrocitos, que puede variar de 28 a 45 das. [7]
La policromasia puede usarse como un indicador de eritrognesis. En aves
anmicas con una respuesta regenerativa apropiada el grado de
policromasia debe ser superior al 5% del total de eritrocitos (3+ y 4+). La
presencia de clulas en mitosis, eritrocitos inmaduros binucleados y de otros
precursores eritroides en el frotis sanguneo, son evidencias de eritropoyesis
activa (figura 11). [3, 7]

Reptiles
La respuesta regenerativa a anemia en reptiles es ms lenta comparada con
la de aves y mamferos, y se evidencia con aumento de eritrocitos
policromatfilos, presencia de eritrocitos inmaduros, anisocitosis (moderada a
marcada), eritrocitos en mitosis y poiquilocitosis. Sin embargo, algunos de
estos hallazgos pueden presentarse en reptiles posthibernacin o asociados
a estados de ayuno, malnutricin y enfermedad inflamatoria severa. [8, 28]
La hipocroma est asociada a la deficiencia de hierro al igual que en
mamferos. [43]
Leucograma. Consiste en el anlisis cuantitativo y cualitativo de los
parmetros relacionados con los glbulos blancos o leucocitos en sangre
perifrica. Comprende los recuentos total y diferencial lecucocitarios y la
evaluacin morfolgica de las clulas blancas en el frotis de sangre
perifrica. [10]

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Figura 11. Eritroblasto aviar en mitosis (Amazona amaznica).


amaznica (1000X,
coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Recuento total leucocitario


El recuento total de leucocitos es de gran utilidad clnica ya que define los
conceptos de leucopenia (disminucin) y leucocitosis (aumento),
(aumento) alteraciones
que pueden estar asociadas con una amplia variedad de enfermedades y
estados fisiolgicos. [10] Factores como el estrs y los cambios estacionales,
en algunos reptiles, producen variaciones en el total de leucocitos
ucocitos aumentado
los recuentos totales. [8, 28] Puede realizarse por mtodos automatizados o
tcnicas manuales.
Automatizado. Similar
imilar al recuento de eritrocitos en la mayora de los
autoanalizadores de hematologa, aplicando los principios de impedancia
elctrica y la dispersin de luz lser. [10] Este tipo de analizadores son tiles
slo en un pequeo grupo de mamferos y han sido de poca utilidad en aves
y reptiles, ya que por sus eritrocitos y trombocitos nucleados,, se presentan
interferencias que dificultan la interpretacin de los resultados obtenidos.
obtenidos [28]
En estudios preliminares se ha indicado la posibilidad de obtener un recuento
total leucocitario confiable en reptiles, empleando analizadores como el Cell
Dyn 3500 (Abbott Diagnostics) asociado al programa informtico para
veterinaria. [38] Sin embargo, incluso empleando analizadores de alta
complejidad, la variacin que existe entre las diferentes especies de reptiles
requiere la modificacin de parmetros y estudios de validacin para cada
especie estudiada. [28]

36 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

EVALUACIN HEMATOLGICA EN FAUNA SILVESTRE Y NO CONVENCIONAL

Manual. Para mamferos la muestra debe diluirse en reactivo de Turk, que es


una solucin de cido actico, compuesto que hemoliza los eritrocitos para
permitir la observacin de los leucocitos. [36] En el caso de animales con
eritrocitos nucleados el solvente utilizado es la solucin de Natt y Herrick, que
permite contar eritrocitos y leucocitos en una misma dilucin. [44, 45]. El
recuento se realiza mediante hemacitmetro o cmara de Neubauer.

Recuento diferencial leucocitario


El recuento diferencial leucocitario corresponde a la concentracin relativa y
absoluta de las subpoblaciones de glbulos blancos, en las que se dividen
las poblaciones principales, en sangre perifrica. [10] Al igual que el
recuento total de leucocitos, puede realizarse de forma automatizada o
manualmente, siendo esta ltima la ms aplicable en animales silvestres y no
convencionales.
Las dos poblaciones principales en las que se dividen los leucocitos son los
granulocitos o polimorfonucleares y los agranulocitos o mononucleares.
Aunque las subpoblaciones leucocitarias presentan diferencias morfolgicas
y en terminologa entre mamferos, aves y reptiles (tabla 5), son similares en
trminos de funcionalidad. [19]
Recuento automatizado. Realizado por autoanalizadores junto al recuento
total. Bajo el principio de impedancia elctrica el citoplasma celular es
reducido sin ser destruido, dando como resultado una nueva clula de un
tamao proporcional al ncleo de la misma para poder ser contadas y
medidas. El recuento diferencial arrojado consta de tres partes: granulocitos,
linfocitos y monocitos. [10]
Mediante luz lser el recuento diferencial de leucocitos se basa en el tamao
de las clulas por impedancia y en las caractersticas de stas de acuerdo
con ciertas propiedades qumicas de las clulas, obteniendo un diferencial de
cinco partes: neutrfilos, eosinfilos, basfilos, linfocitos y monocitos. [34]
Las variaciones en tamao, forma, granulacin y patrones de tincin de los
leucocitos en animales silvestres y no convencionales, dificulta la aplicacin
de este tipo de metodologas, limitndola a unas pocas especies de
mamferos como los felinos y primates.
Recuento manual. La diferenciacin manual de los leucocitos se basa en la
observacin microscpica de las variaciones morfolgicas y las
caractersticas de tincin de los constituyentes celulares, en el frotis
sanguneo. [19] Tradicionalmente se clasifican las subpoblaciones
leucocitarias de un total de 100 200 clulas contadas. Este mtodo depende
de la calidad del extendido de sangre, de la calidad de la coloracin y,
sobretodo, de la experiencia y habilidad del analista.
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Tabla 5. Clasificacin de las subpoblaciones leucocitarias en mamferos,


aves y reptiles
Poblacin

Mamferos

Aves

Reptiles

Granulocitos

Neutrfilos
Eosinfilos
Basfilos

Heterfilos
Eosinfilos
Basfilos

Heterfilos
Eosinfilos
Basfilos

Mononucleares

Monocitos
Linfocitos

Monocitos
Linfocitos

Azurfilos
Monocitos
Linfocitos

Evaluacin morfolgica
Mamferos
Neutrfilos. En todas las especies de mamferos los ncleos de los
neutrfilos son polimrficos y la variacin radica en el grado de lobulacin.
Existen diferencias en tamao, forma y patrones de tincin. Los grnulos de
los neutrfilos pueden ser basoflicos como en primates y algunos
artiodctilos, o fuertemente eosinoflicos como en algunos roedores (figura
12). [12, 41] Los neutrfilos son las clulas de mayor proporcin dentro del
recuento diferencial de mamferos adultos. [14, 19]
En el frotis sanguneo de mamferos pueden observarse neutrfilos
inmaduros. Estas clulas se caracterizan por su gran tamao, basofilia
citoplasmtica y disminucin o ausencia de lobulacin nuclear. [19] Un
incremento en la cantidad de neutrfilos inmaduros se conoce como
desviacin a la izquierda, alteracin en la que generalmente se observan
bandas, pero tambin pueden aparecer metamielocitos y mielocitos (figura
13).
La toxicidad en neutrfilos se refiere a los cambios morfolgicos que se
observan en el citoplasma como resultado de una liberacin temprana de
estas clulas, desde la mdula sea, a la circulacin. [9] Los cambios txicos
evidentes consisten en granulaciones y vacuolizacin citoplasmticas, e
inclusiones azul-grisceas llamadas cuerpos de Dhle.

38 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

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Figura 12. Izq. Neutrfilo tpico con grnulos basoflicos, de un primate


(Cebus capucinus). Der. Neutrfilo de roedor caracterstico en el cual puede
apreciarse la diferencia en la coloracin de la granulacin de tipo eosinoflico
(Hydrochaeris hydrochaeris).). (1000X, coloracin de Wright). Fotografas:
Fo
Copete-Sierra M.

Figura 13. Banda neutrfila en un zorro caero (Cerdocyon


Cerdocyon thous).
thous
Claramente se observa la ausencia de lobulacin nuclear. (1000X, coloracin
de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

La desviacin a la izquierda y los cambios txicos son indicios de hiperplasia


mieloide asociados a malignidad, infecciones y otras enfermedades
inflamatorias. [19]
Eosinfilos. Generalmente
eneralmente aparecen en un pequeo porcentaje de la
poblacin leucocitaria de los mamferos. Estas clulas contienen
conti
grandes
grnulos citoplasmticos eosinoflicos (figura 14)) que permiten diferenciarlos
claramente de los neutrfilos, con algunas excepciones. En el caso de
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conejos y roedores los neutrfilos tienen caractersticas


cas pseudoeosinoflicas,
pseudoeosinoflicas
lo cual dificulta la identificacin de sus eosinfilos. [9, 12, 19, 41] La
diferenciacin en estas especies se basa en la forma del ncleo y las
caractersticas de sus grnulos: el ncleo vara de bilobulado a una forma de
U, y los grnulos son de mayor tamao y se tien
en con menor intensidad
que los de los neutrfilos. [9]
Figura 14. Eosinfilos caractersticos de algunos mamferos. Izq. Lemur
(Varecia variegata). Der. Mono capuchino (Cebus apella). (1000X, coloracin
de Wright). Fotografas: Copete-Sierra M.

Un aumento en la cantidad de eosinfilos (eosinofilia) es considerado una


respuesta inespecfica que podra estar asociada a infestaciones por
helmintos, reacciones de hipersensibilidad e inflamacin de tejidos con un
alto contenido de mastocitos. [41]
Basfilos.
ilos. Son las clulas de menor proporcin dentro del recuento
diferencial de mamferos. Generalmente
eneralmente tienen el ncleo lobulado y
contienen grnulos citoplasmticoss fuertemente basoflicos (figura 15).
15) [9] Al
igual que la eosinofilia, la basofilia est asociada
ciada a reacciones de
hipersensibilidad.
Linfocitos. Los linfocitos tpicos son redondos, con ncleo redondo en
posicin central o ligeramente excntrico con un grado variable de
condensacin de cromatina. El citoplasma aparece de color azul claro u
oscuro y, en algunas especies, contiene grnulos azurfilos o basoflicos
(figura 16).. Los linfocitos inmaduros pueden distinguirse de las clulas
maduras por su mayor tamao, intensidad en la basofilia del citoplasma y
presencia de nuclolos. En animales juveniles
les de algunas especies, los
linfocitos pueden ser la subpoblacin predominante dentro del recuento
diferencial leucocitario. [19]

40 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

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Figura 15. Basofilo de un tit gris (S. leucopus).). En esta clula puede
apreciarse la fuerte granulacin basoflica que, enn ocasiones, esconde al
ncleo. (1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra
Sierra M.

Figura 16. Linfocitos de un mono ardilla (Saimiri


Saimiri sciureus).
sciureus (1000X,
coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

En algunos roedores los linfocitos de gran tamao presentan una inclusin


citoplasmtica conocida como cuerpo de Kurloff. Estas estructuras suelen
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observarse en machos, por lo que se sugiere una asociacin con las


hormonas sexuales. [41]
Los linfocitos reactivos pueden aparecer como clulas con un ncleo menos
denso mayor cantidad de citoplasma, que los linfocitos maduros. La
linfocitosis y presencia de linfocitos reactivos, sugiere estimulacin antignica
por infeccin crnica. Un aumento marcado de los linfocitos en mamferos as
como la aparicin de linfocitos inmaduros (linfoblastos) en el frotis sanguneo,
generalmente es asociado con un trastorno linfoproliferativo. [19, 41]
Monocitos. Usualmente son las clulas ms grandes entre las poblaciones
leucocitarias. Su ncleo vara de redondo u oval a lobulado. El citoplasma es
abundante, se tie de color azul grisceo y puede contener vacuolas y
grnulos azurfilos (figura 17). La monocitosis en mamferos ocurre en
inflamaciones agudas y crnicas como respuesta a un incremento en la
demanda. [9]
Figura 17. Monocitos en tit gris (S. leucopus). Izq. Ncleo caracterstico
lobulado. Der. Clula con vacuolas citoplasmticas. (1000X, coloracin de
Wright). Fotografas: Copete-Sierra M.

Aves
Heterfilos. Constituyen la subpoblacin ms abundante dentro del recuento
diferencial en aves son las clulas anlogas a los neutrfilos de los
mamferos. [39] Generalmente son redondos, con un ncleo lobulado de
cromatina densa que se tie de color morado. Su citoplasma es plido y
presenta grnulos de color rojo ladrillo de forma espiculada, aunque en
algunas especies estos grnulos pueden ser ovalados o redondos (figura 18).
[7, 19]

42 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

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Los cambios morfolgicos observados en heterfilos pueden deberse al


estrs o diferentes enfermedades. La toxicidad se evidencia con
degranulacin, vacuolizacin y/o basofilia del citoplasma. [3]
La heterofilia puede asociarse con inflamacin en respuesta a agentes
infecciosos como Chlamydophila, Mycobacterium y Aspergillus, y a causas
no infecciosas como toxicidad e injuria traumtica. [42]
Figura 18. Heterfilo de una lora frente amarilla (Amazona ochrocephala),
con ncleo bilobulado. (1000X, coloracin de Wright). Fotografa: CopeteSierra M.

Los heterfilos inmaduros presentan una fuerte basofilia citoplasmtica y


ausencia de segmentacin nuclear. Al igual que en mamferos pueden
encontrase bandas, metamielocitos y mielocitos. Estas clulas no suelen
observarse en aves sanas y su presencia est relacionada con
enfermedades infecciosas. En respuesta a enfermedades sistmicas los
heterfilos pueden exhibir cambios txicos como son degranulacin,
vacuolizacin y/o basofilia del citoplasma. [7]
Eosinfilos. El ncleo de los eosinfilos es lobulado y suele teirse ms
oscuro que el de los heterfilos. El citoplasma se colorea de azul claro y
contiene grnulos generalmente ovalados o redondos, de color rojo brillante
en la mayora de especies (figura 20). En algunas ocasiones los grnulos no
absorben el colorante y semejan vacuolas redondeadas de tamao uniforme

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que ocupan todo el citoplasma. [7] En algunas especies de psitcidos los


eosinfilos exhiben grnulos de color azul (figura 20). [19]
Aunque se considera un hallazgo inconsistente, la eosinofilia en aves puede
estar asociada a parasitosis, automutilacin, traumas severos, lesiones en
piel y reacciones de hipersensibildad. [15] Las aves rapaces sanas poseen
un nmero elevado de eosinfilos.
Basfilos. Usualmente el ncleo no est segmentado y es difcil de observar,
debido a que los grnulos metacromticos basoflicos del citoplasma
suelen enmascararlo. A diferencia de los mamferos, es frecuente encontrar
basfilos en frotis de aves sanas. Aunque se conoce que estas clulas
participan en la respuesta inflamatoria aguda y en reacciones de
hipersensibilidad tipo IV, su funcin no ha sido bien definida. [42]
Linfocitos. Similares a los de mamferos. Son redondos pero pueden
exhibir irregularidad en el citoplasma, por acmulos de eritrocitos a su
alrededor. El ncleo es redondo, de cromatina densa o reticulada, en
posicin central o ligeramente excntrico. El citoplasma es homogneo, se
tie dbilmente basoflico y carece de vacuolas y grnulos, caractersticas
importantes para la diferenciacin entre trombocitos y linfocitos pequeos [7].
Figura 19. Eosinfilos aviares. Izq. Eosinfilo de una lora de cachetes
amarillos (Amazona amazonica): clula con granulacin redonda, de color
rojo brillante; en la parte inferior se observa un heterfilo. Der. Eosinfilo de
una Guacamaya azul y amarillo (Ara ararauna), en el cual pueden observarse
los grnulos de color azul caractersticos en algunos psitcidos. (1000X,
coloracin de Wright). Fotografas: Copete-Sierra M.

Los linfocitos reactivos se caracterizan por presentar un citoplasma basoflico


un ncleo con cromatina densa. En ocasiones el citoplasma puede contener
grnulos azurfilos. En psitcidos se han observado linfocitos reactivos con
vacuolizacin del citoplasma. [3, 7] La reactividad de estas clulas, al igual
que la linfocitosis, se relaciona con estimulacin antignica producida por
44 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

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diferentes agentes infecciosos, aunque algunos autores afirman que la


aparicin de esta reactividad en animales clnicamente sanos es comn [25].
Monocitos. Son las clulas ms grandes de la serie blanca encontradas en la
sangre aviar. Pueden ser redondos o ameboides, de ncleo redondo o
lobulado normalmente excntrico (figura 20). Su citoplasma es abundante, se
tie azul-grisceo, puede verse ligeramente opaco y puede presentar
vacuola y finos grnulos eosinoflicos. [7, 15]
La monocitosis en aves es un signo de infeccin crnica que puede
asociarse con agentes bacterianos y fngicos. [42]
Figura 20. Monocito de una guacamaya cariseca (Ara severa). (1000X,
coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Reptiles
Heterfilos. Al igual que en aves son las clulas equivalentes a los neutrfilo
de los mamferos. Son clulas redondeadas, de gran tamao, con citoplasma
plido que contiene grnulos fusiformes refringentes, generalmente. Estos
grnulos se tien de color naranja brillante y en una misma clula pueden
aparecer grnulos opacos y refringentes. El ncleo es ovalado o redondo, de
posicin excntrica y con un patrn de cromatina denso (figura 21). Algunas
especies de lagartos, como las iguanas o los dragones barbudos, tienen
heterfilos con el ncleo lobulado. El nmero de heterfilos en el leucograma
de reptiles sanos vara con la especie. [1, 8, 28]

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La heterofilia se asocia con enfermedades inflamatorias, especialmente


infecciosas o que supongan un dao tisular. [28] El aumento de heterfilos
puede asociarse con causas no inflamatorias como estrs, neoplasias y
leucemia hetroflica. Se han observado heterofilias por cambios estacionales
(valores mximos en verano y ms bajos durante la hibernacin) y como
respuesta a la migracin, en algunas especies como la tortuga Caretta
caretta. [37]
Al igual que en mamferos y aves, en los frotis sanguneos de reptiles pueden
observarse heterfilos inmaduros (normalmente mielocitos y metamielocitos)
y clulas con cambios txicos. Los heterfilos inmaduros tienen mayor grado
de basofilia del citoplasma, el ncleo no lobulado, menor nmero de grnulos
que las clulas maduras. Su presencia en el frotis sanguneo acompaada de
heterofilia es indicativa de una enfermedad inflamatoria. Si la cantidad de
heterfilos inmaduros constituye una desviacin a la izquierda, la heterofilia
se asocia una etiologa infecciosa bacteriana. [8, 28]
Figura 21. Heterfilo de una tortuga estuche (Kinosternon leucostomum). Se
puede apreciar el deterioro de la morfologa eritrocitaria por el contacto
prolongado con el anticoagulante (1000X, coloracin de Wright). Fotografa:
Copete-Sierra M.

La toxicidad en heterfilos se caracteriza por un aumento de basofilia


citoplasmtica; alteraciones en los grnulos como degranulacin parcial,
46 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348

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grnulos con tendencia a fusionarse o grnulos anmalos; vacuolizacin del


citoplasma; y alteraciones nucleares (cariorrexis o cariolisis). [28] La
lobulacin nuclear, en especies de reptiles que normalmente no la poseen,
indica una inflamacin grave, caracterstica que se observa en tortugas del
gneroTestudo. [24]
Eosinfilos. Son clulas grandes, redondas, con citoplasma azul claro que
presenta grnulos esfricos eosinoflicos. En algunas especies estos
grnulos se observan de color magenta oscuro o azul. El ncleo tiene una
forma variable, desde redondo a ligeramente ovalado; en algunas especies
de lagartos puede ser bilobulado (figura 22). [8] El tamao de los Eosinfilos
vara con la especie: las serpientes tienen los eosinfilos ms grandes, y los
lagartos los ms pequeos. [26]
En algunas especies de reptiles es normal encontrar eosinofilia en animales
sanos durante la hibernacin; es relativamente normal encontrar un recuento
elevado en las tortugas del gnero Trachemys. [28] La eosinofilia puede
asociarse con infecciones parasitarias y la estimulacin del sistema inmune.
[8]
Basfilos. Son clulas pequeas, redondas con un contenido variable de
grnulos citoplasmticos metacromticos basoflicos que enmascaran con
frecuencia el ncleo, al igual que en los basfilos aviares (figura 23). Son de
tamao variable de acuerdo con la especie: los lagartos tienen basfilos
pequeos y los quelonios y cocodrilos tienen basfilos ms grandes. [8]
Figura 22. Eosinfilo de una pitn de la India (Python molurus) observan
grnulos esfricos de color rojo brillante. (1000X, coloracin de Wright).
Fotografa: Copete-Sierra M.

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Figura 23. Basfilo de de una tortuga estuche (Kinosternon leucostomum).


(1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Su funcin es probablemente similar a la de los basfilos de los mamferos.


Su concentracin en sangre perifrica vara entre especies: en la tortuga
acutica Pseudemys ruiventris es el tipo celular predominante en los
recuentos diferenciales leucocitarios. [22] La basofilia en reptiles ha sido
asociada con infecciones parasitarias y virales. [8]
Linfocitos. Son similares a los de aves y mamferos. Son redondos pero
pueden exhibir irregularidad en el citoplasma, por acmulos de eritrocitos a
su alrededor, al igual que los linfocitos aviares. Su citoplasma es escaso,
homogneo, generalmente carece de vacuolas y grnulos y se tie
moderado o dbilmente basoflico. El ncleo es redondo, de posicin central
o ligeramente excntrico, con un patrn de cromatina densa [8, 28].
La concentracin de linfocitos en sangre de reptiles es variable y puede
representar ms del 80% del recuento diferencial leucocitario. [39] Existen
diferencias en el recuento linfocitario asociadas con sexo: en algunas
especies las hembras pueden tener una concentracin de linfocitos
significativamente ms alta que los machos de la misma especie; cambios
estacionales: disminuye en invierno y es ms elevado en verano. La
linfocitosis es producida en procesos inflamatorios, infecciones parasitarias y
virales, cicatrizacin de heridas y trastornos linfoproliferativos. La reactividad
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se evidencia con un volumen citoplasmtico aumentado y un mayor grado de


basofilia citoplasmtica, y se asocia con una estimulacin del sistema inmune
por la presencia de antgenos sistmicos [43].
Monocitos. Al igual que en mamferos y aves son los leucocitos de mayor
tamao que se encuentran en la sangre perifrica. Pueden ser redondos o
ameboides, con un ncleo pleomrfico (redondo, ovalado o lobulado) y con
un patrn de cromatina menos denso que el de los linfocitos. El citoplasma
se tie azul-grisceo y puede contener vacuolas o grnulos eosinoflicos
(figura 24). [8]
Figura 24. Monocito de de una tortuga estuche (Kinosternon leucostomum).
(1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

La monocitosis est asociada con enfermedad inflamatoria, especialmente en


inflamacin granulomatosa. Con frecuencia, los monocitos en sangre
perifrica muestran actividad fagocitaria. La eritro y la leucofagocitosis por
parte de estas clulas pueden asociarse con anemia y la presencia de
enfermedades infecciosas. [17, 38]
Azurfilos. La identificacin y clasificacin de estas clulas han estado
rodeadas de confusin, ya que son consideradas del mismo tipo que los
monocitos por algunos autores, y de una poblacin aparte por otros como se
presentan en las serpientes. [28]
Los azurfilos son clulas mononucleares, que pueden ser redondas o de
forma irregular, ligeramente ms pequeas en tamao que los monocitos.
Son mononucleares y el ncleo es redondo, ovalado o irregular. El
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citoplasma es basoflico y ms oscuro que el del monocito, de color azul a lila


y presenta una pequea cantidad de grnulos azuroflicos mate, de varios
tamaos; el citoplasma puede presentar vacuolas y material fagocitado. [8,
19]
Se ha descrito azurofilia asociada con inflamacin e infecciones, incluyendo
las producidas por hemoparsitos. [27, 35]

Trombograma
En animales silvestres y no convencionales el trombograma consiste en el
anlisis cuantitativo (recuento) y cualitativo (morfologa) de las plaquetas en
mamferos, y de los trombocitos en aves y reptiles. El recuento puede
realizarse de forma manual en hemacitmetro (recuento directo), o en el
frotis sanguneo (recuento indirecto) como recuento estimado. [4, 40]
El recuento de plaquetas y trombocitos define los conceptos de
trombocitopenia y trombocitosis. Trombocitopenia se refiere a la disminucin
de estas clulas y est asociada en la mayora de especies a un aumento del
consumo o destruccin. [9] Pueden producirse falsas disminuciones en los
recuentos por agregacin plaquetaria in vitro.
La trombocitosis define el aumento en la cantidad de plaquetas o trombocitos
y est asociada con anemia ferropnica, enfermedades inflamatorias,
neoplasias e infecciones bacterianas. [7, 8, 9]

Mamferos
Las plaquetas son los fragmentos citoplasmticos de los megacariocitos,
clulas que se encuentran en la mdula sea, no poseen ncleo y presentan
granulacin (figura 25). Tienden a ser redondas pero pueden variar en forma
y tamao. [19] Normalmente son ms pequeas que los eritrocitos pero
pueden aparecer mucho ms grandes. A estas clulas de mayor tamao se
les denomina macroplaquetas, son producto de una liberacin de formas
inmaduras hacia la circulacin y, en algunas especies, regeneracin
plaquetaria. [9]

Aves
Los trombocitos aviares son clulas pequeas, redondas u ovaladas. Poseen
un ncleo que puede ser redondo u ovalado, y presenta un patrn de
cromatina denso. El citoplasma es incoloro o se tie de un gris plido y
contiene grnulos eosinfilicos (figura 26). Su identificacin y recuento se
dificulta ya que tienden a agregarse. Los trombocitos se forman a partir de un
precursor mononuclear en mdula sea. [7]
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EVALUACIN HEMATOLGICA EN FAUNA SILVESTRE Y NO CONVENCIONAL

Figura 25. Plaquetas de un puma (Puma concolor). (1000X, coloracin de


Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Figura 26. Trombocitos de un periquito cascabelito (Forpus conspicillatus).


(1000X, coloracin de Wright). Fotografa: Copete-Sierra M.

Reptiles
En reptiles los trombocitos son clulas pequeas, elpticas o fusiformes, con
un ncleo ovalado y central. El citoplasma es casi transparente, hecho
importante que lo que permite diferenciarlos de los linfocitos pequeos. [8,
28]
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Protenas plasmticas
La estimacin de la concentracin de protenas plasmticas se realiza
mediante refractometra y es un parmetro de gran utilidad, ya que refleja el
estado de hidratacin de una animal al correlacionarse con el hematocrito.
Se debe tener en cuenta que condiciones del plasma como la lipemia y la
hemlisis interfieren en la lectura resultando, generalmente, en una falsa
elevacin de este analito (8, 23). [29, 40]
A la vez que se determine la concentracin de protenas se debe observar el
aspecto y color del plasma.

Mamferos
El plasma en mamferos puede ser incoloro o ligeramente amarillo. Una
coloracin amarilla intensa puede indicar ictericia, lo que sugiere
hiperbilirrubinemia. La lipemia produce un plasma blanco, opaco o de
aspecto lechoso; se asocia con dislipidemias o muestras tomadas en estado
postprandial. Una coloracin de rosado a rojo indica hemlisis, que puede ser
inducida durante el proceso de recoleccin o por hemlisis intravascular. [41]

Aves
En aves el plasma normalmente es incoloro, aunque puede ser amarillo e
inclusive anaranjado, debido a carotenos de la dieta; esto puede observarse
en aves granvoras. El color verde en el plasma aviar sugiere biliverdinemia,
indicador de falla heptica o renal. [8] Pueden observarse lipemia y hemlisis
asociadas a las mismas causas que en mamferos.

Reptiles
El plasma en reptiles debe ser incoloro o ligeramente amarillo. Sin embargo,
se puede observar un plasma de amarillo a anaranjado por pigmentos en la
dieta de reptiles hervboros, o verde a amarillento en las serpientes. [6]

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