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UNIVERSIDSD DE SUCRE
FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA INGENIERA AGROINDUSTRIAL
BIOINGENIERA I
MAYO DE 2016
1. INTRODUCCIN
Fermentacin alcohlica es un proceso biolgico de fermentacin en ausencia de O 2
(oxigeno) originado por la actividad de algunos microorganismos, en este caso la
Sacaromices Cerevisiae. Por lo general los azucares; (como por ejemplo la glucosa, la
fructosa, la sacarosa, entre otros), son los que procesan los hidratos de carbono para obtener
como productos finales, alcohol en forma de etanol. El etanol resultante por lo general es
empleado en la elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, como el vino, la cerveza, la
sidra entre otras. Es importante mencionar que en la actualidad tambin se est empezando
a sintetizar el etanol mediante la fermentacin a nivel industrial a gran escala para ser
empleado como biocombustibles (Agudo Garcia, 2011).
El fin de la fermentacin biolgica es proporcionar energa anaerbica a los
microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno a partir de la glucosa. En
el proceso los microorganismos obtienen energa disociando las molculas de glucosa y
generan como desechos, el alcohol y el dixido de carbono. En el siguiente trabajo se
pretendi evaluar el efecto de los nutrientes en una fermentacin alcohlica, para ello se
aplicaran los balances de electrones y elementos al proceso de fermentacin, los modelos
de cintica en la fermentacin y se analizar el efecto del nutriente en el proceso de la
fermentacin.
2. OBJETIVOS
2.1.
Objetivo general:
2.1.1. Evaluar el efecto de los nutrientes (lactosa, fructosa y glucosa) en el
proceso de fermentacin alcohlica.
2.2.
Objetivos especficos:
2.2.1. Aplicar los balances de electrones y elementos al proceso de
fermentacin
2.2.2. Aplicar los modelos de cintica en la fermentacin.
2.2.3. Analizar el efecto del nutriente en la fermentacin.
3.1.
3. MATERIALES Y METODOS
Materiales:
Beakers.
Probetas graduadas.
3.2.
Balanza analtica.
Refractmetro.
Termmetro.
Reactivos: tiosulfato de sodio 0,1 N, almidn lquido, yoduro de potasio.
Fermentadores.
Trampa de gases.
Mtodos:
Resultados primarios:
Peso de
levadura (g)
Tipo de
nutriente
Peso del
azcar (g)
Volumen del
jugo (ml)
Volumen de agua
adicionada (ml)
Peso del
bagazo (g)
Lactosa
150
940
2060
179,02
Fructosa
150
660
2340
118,31
2,018
Glucosa
150
650
2350
13,67
R1BRIX
7,50
4,25
6,50
24,5
5,20
27,92
5,20
47,53
5,10
52,69
5,10
71,02
5,00
74,85
5,00
95,02
5,00
98,94
5,00
FERMENTADOR 1
R2BRIX
Datos para mtodo de Winnick
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0024
0,0020
1/100
7,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0025
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0040
0,0020
1/100
7,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0040
0,0020
1/100
5,20
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0040
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/100
5,20
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0040
0,0020
1/500
5,10
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/500
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0035
0,0020
1/500
5,10
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/500
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/600
5,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/600
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/600
5,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/600
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/700
5,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/700
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/700
5,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/700
Temperatura (C)
***
***
***
30,5
29,2
***
28,3
28,6
28,4
29,6
166,86
5,00
5,00
174,24
5,00
5,00
a (L)
0,0039
a (L)
0,0039
a (L)
0,0039
a (L)
0,0039
b (L)
0,0037
b (L)
0,0038
b (L)
0,0040
b (L)
0,0038
V(L)
0,0020
V(L)
0,0020
V(L)
0,0020
V(L)
0,0020
F
1/800
F
1/800
F
1/800
F
1/800
***
29,1
R1BRIX
5,30
4,03
5,50
22,86
3,50
28,36
3,10
48,03
2,00
53,73
1,60
70,53
74,93
94,83
1,10
5,5,
1,50
1,60
99,81
1,30
FERMENTADOR 2
R2BRIX
Datos para mtodo de Winnick
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0028
0,0020
1/100
5,40
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
***
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/100
5,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/100
3,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/100
5
3,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/400
2,10
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/400
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/400
1,70
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0041
0,0020
1/400
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/500
1,20
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/500
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0044
0,0020
1/500
5,40
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0039
0,0020
1/500
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0043
0,0020
1/600
***
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0042
0,0020
1/600
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/600
1,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/600
***
a (L)
b (L)
V(L)
F
Temperatura (C)
29,00
30,70
30,20
30,9
29,5
31,40
28,4
28,5
28,6
32,0
27,70
166,79
***
***
***
0,0039
a (L)
0,0039
a (L)
***
a (L)
***
0,0042
b (L)
0,0042
b (L)
***
b (L)
***
0,0020
V(L)
0,0020
V(L)
***
V(L)
***
1/800
F
1/800
F
***
F
***
***
5,28
24,28
29,46
48,13
52,95
72,45
76,28
95,45
101,15
R1BRIX
6,00
6,00
4,10
3,80
2,10
2,10
1,60
2,00
1,50
1,40
1,80
169,05
FERMENTADOR 3
R2BRIX
Datos para mtodo de Winnick
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0027
0,0020
1/100
5,90
a (L)
b (L)
V(L)
F
***
***
***
***
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0037
0,0020
1/100
6,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0038
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0040
0,0020
1/100
4,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0040
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0039
0,0020
1/100
3,70
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,004
0,0020
1/100
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0038
0,0037
0,0020
1/400
2,00
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/400
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/500
2,20
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0038
0,0020
1/500
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0035
0,0020
1/600
1,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/600
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0035
0,0020
1/600
1,90
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/600
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/700
1,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0036
0,0020
1/700
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/700
1,50
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0037
0,0020
1/700
1,90
a (L)
b (L)
V(L)
F
0,0039
0,0035
0,0020
1/800
a (L)
b (L)
V(L)
F
Temperatura (C)
28,0
29,9
32,0
29,8
29,7
30,4
28,3
28,5
28,4
30,3
27,60
1,70
175,98
***
a (L)
0,0039
a (L)
***
1,80
***
b (L)
0,0035
b (L)
***
***
V(L)
0,0020
V(L)
***
***
F
1/800
F
***
28,6
Nutriente
Temperatura (C)
Grado Alcohlico
Lactosa
29,1
Fructosa
27,7
3,1
Glucosa
28,6
3,4
Fermentador 1
Promedio de
Brix
7,50
6,75
5,20
5,20
5,10
5,10
5,00
5,00
5,00
5,00
5,00
5,00
Temperatura (C)
**
**
**
30,5
29,2
**
28,3
28,6
28,4
29,6
**
29,1
Fermentador 2
Promedio de
Brix
5,35
5,50
3,50
3,05
2,05
1,65
1,15
5,45
1,50
1,55
1,30
***
Temperatura (C)
29
30,7
30,2
30,9
29,5
31,4
28,4
28,5
28,6
32
27,7
***
Tiempo (h)
0
5,28
24,28
29,46
48,13
52,95
72,45
76,28
95,45
101,15
169,05
175,98
Fermentador 3
Promedio de
Brix
5,95
6,00
4,05
3,75
2,05
2,15
1,55
1,95
1,50
1,45
1,85
1,75
Temperatura (C)
28
29,9
32
29,8
29,7
30,4
28,3
28,5
28,4
30,3
27,6
28,6
4.2.
Los Brix indican la cantidad de solidos (en gramos) presentes en una solucin. Para los 3
fermentadores se calcula la cantidad de sustrato o azcar con la siguiente expresin:
Gramos de sustr ato=
BrixV fermentador(ml)
V de la solucion en(ml )
de Sustrato
( gL )= VGramos
del fermentador en L
Dnde:
Volumen del fermentador = 3000 mL= 3 L
Volumen de la solucin= 100 mL
Para el fermentador 1:
t=0, Brix=7,5
Gramos de sustrato=
7,5 g3000 ml
=225 g
100 ml
( gL )= 2253 Lg =75 g/ L
Se procede de la misma manera para todos los promedios de Brix en cada fermentador. A
continuacin se muestran los datos obtenidos para cada fermentador.
Sustrato
(g)
Fermentador 2
Sustrato
(g/L)
Fermentador 3
Tiempo
(h)
Sustrato
(g)
Sustrato
(g/L)
Tiempo
(h)
Sustrato
(g)
Sustrato
(g/L)
225
75
160,5
53,5
178,5
59,5
4,25
24,5
27,92
47,53
52,69
71,02
74,85
95,02
98,94
166,86
174,24
202,5
156
156
153
153
150
150
150
150
150
150
67,5
52
52
51
51
50
50
50
50
50
50
4,03
22,86
28,36
48,03
53,73
70,53
74,93
94,83
99,81
166,79
***
165
105
91,5
61,5
49,5
34,5
163,5
45
46,5
39
***
55
35
30,5
20,5
16,5
11,5
54,5
15
15,5
13
***
5,28
24,28
29,46
48,13
52,95
72,45
76,28
95,45
101,15
169,05
175,98
180
121,5
112,5
61,5
64,5
46,5
58,5
45
43,5
55,5
52,5
60
40,5
37,5
20,5
21,5
15,5
19,5
15
14,5
18,5
17,5
4.3.
Los grados alcohlicos nos permiten calcular la cantidad de alcohol presente en un proceso
fermentativo pero se les debe hacer una correccin de acuerdo a la temperatura debida a
que el hidrmetro esta calibrado a una temperatura de 20 C. La correccin de los grados
alcohlicos se obtiene a travs de la siguiente expresin.
Correccin=0,000025R(T 0T )
Donde
R: Lectura en el hidrmetro.
T0: Temperatura de referencia= 20C
T: Temperatura de la solucin.
Grados alcohlicos corre gidos =grados alcohlicos correccin
Para el fermentador 1:
Correccin=0,0000250(20 C29,1 C)
Correccin=0
Fermentador 2
Grados de alcohol corregidos
3,09
Fermentador 3
Grados de alcohol corregidos
3,39
Una vez obtenidos los grados alcohlicos corregidos se puede calcular la masa de alcohol
mediante la siguiente expresin:
Masa de alcohol=
masa
Peso molecular de etanol
Para el fermentador 1:
( mlg )0,8 =0 g
3000 ml 0
Masa de alcohol=
n finalesde lactosa=
100
0g
g
46,07
mol
=0 moles
0 moles
=0 mol / L
3L
Para el fermentador 2:
3000 ml 3,09
Masade alcohol=
100
g
0,8
ml
74,16 g
=24,72 g / L
3L
n finalesde fructosa =
24,72 g / L
=0,54 mol /L
46,07 g/mol
Para el fermentador 3:
3000 ml 3,39
Masa de alcohol=
n finalesde gl ucosa =
4.4.
g
0,8
ml
100
81,36 g
=27,12 g/ L
3L
27,12 g /L
=0,59 mol / L
46,07 g /mol
Una vez obtenidos los valores de los sustratos de cada fermentador se procede a calcular la
masa de sustrato consumido, el cual est dado por la siguiente relacin:
S consumido=S0 S f
n sustrato=
Sustrato consumido
Peso molecular del sustrato
Para el fermentador 2:
t=0
S 0=53,5 g/ L
S f =0 g/ L
g
g
S consumido =53,5 0 =53,5 g / L
L
L
g
L
n fructosa=
=0,29 mol/ L
g
180
mol
53,5
Para el fermentador 3:
t=0
S 0=59,5 g/ L
S f =0 g/ L
g 0g
S consumido =59,5 =59,5 g/ L
L L
n glucosa=
59,5 g / L
=0,33 moles
180 g /mol
4.5.
moles de producto(etanol)
moles de sustratoconsumido
Para el fermentador 1:
Y P=
YP
S
, donde:
Y P =0
S
Para el fermentador 2:
0,54 mol/ L
=1, 86
0,29 mol/ L
Para el fermentador 3:
Y P=
Y P=
S
0,59mol / L
=1,78
0,33mol / L
4.6.
Como el
ahora se puede calcular el producto de manera acumulativa para cada tiempo, es decir:
Y P=
S
P f P o
S oS f
Pf =Y p( S oS f ) + Po
S
Donde
Po=0 ,
Para el fermentador 2:
t=4,03h
g
g
53,5 55
L
L
Pf =1,86
=0,0155 mol /L
g
180
mol
Pf =0,0155
mol
g
46,07
=0 g/ L
L
mol
t=22,86h
g
g
53,5 35
L
L
mol
Pf =1,86
=0,19
g
L
180
L
Pf =0,19
mol
g
46,07
=8,79 g /L
L
mol
Fermentador 2
Sustrato consumido
Producto (mol/L)
(mol/L)
0,29
0
0,10
0,19
0,13
0,24
0,18
0,34
0,21
0,38
0,23
0,43
0,21
0,40
0,21
0,39
0,23
0,42
Producto (g/L)
0
8,79
10,93
15,69
17,59
19,96
18,30
18,06
19,25
Para el fermentador 3:
t=5,28h
g
g
59,5 60
L
L
mol
Pf =1,78
=0,004
g
L
180
mol
Pf =0,0045
mol
g
46,07
=0 g/ L
L
mol
t=24,28h
g
g
59,5 40
L
L
Pf =1,78
=0,188 mol/ L
g
180
L
Pf =0,188
mol
g
46,07
=8,64 g/ L
L
mol
4.7.
Fermentador 3
Sustrato consumido
Producto (mol/L)
(mol/L)
0,33
0
0,11
0,18
0,12
0,22
0,22
0,39
0,21
0,38
0,24
0,44
0,22
0,40
0,25
0,44
0,25
0,45
0,23
0,41
0,23
0,42
Producto (g/L)
0
8,64
10,01
17,74
17,29
20,02
18,20
20,24
20,47
18,65
19,11
Como se tienen los moles de sustrato y producto (a y d respectivamente) se puede hallar los
moles de biomasa con la ayuda de la ecuacin de crecimiento.
La ecuacin de crecimiento es, cuando el sustrato es fructosa y glucosa es:
Ecuacin (1)
H: 12a + 3b = 1,82c + 6d + 2f
Ecuacin (2)
O: 6a = 0,58c + d+2e + f
Ecuacin (3)
N: b = 0,16c
Ecuacin (4)
Para facilitar los clculos se hacen varas operaciones sustitucin y eliminacin a partir de
las cuatro ecuaciones del balance de elementos:
Sumar ecuacin (3) con la ecuacin (1) multiplicada por -2, para eliminar e:
Ecuacin (3):
6a = 0,58c + d+2e + f
Ecuacin (5):
Ahora, la ecuacin (2) sumada con la ecuacin (5) multiplicada por -2, para eliminar f:
Ecuacin (2):
12a + 3b = 1,82c + 6d + 2f
Ecuacin (6):
Ahora, la ecuacin (6) sumada con la ecuacin (4) multiplicada por -3, para eliminar b:
Ecuacin (6):
Ecuacin (4)* (-3):
Ecuacin (7):
24 a12 d
4,18
Para el fermentador 2:
t = 22,86h
d = 0,19 mol/L
a = 0,1 mol/L
Entonces:
mol
mol
240,1
( 120,19
(
)
L
L )
mol
c=
=0,041
4,18
Biomasa
Fermentador 2
Biomasa (mol/L)
0,041
0,051
0,074
0,083
0,094
0,086
0,085
0,090
Biomasa (g/L)
1,047
1,301
1,867
2,093
2,376
2,178
2,150
2,292
Para el fermentador 3:
t = 24,28h
d = 0,19 mol/L
a = 0,11 mol/L
Entonces:
mol
mol
240,11
( 120,19
(
)
L
L )
mol
c=
=0,067
4,18
Biomasa
Tiempo (h)
24,28
29,46
48,13
52,95
72,45
76,28
95,45
101,15
169,05
175,98
Biomasa (g/L)
1,689
1,956
3,468
3,379
3,912
3,556
3,957
4,001
3,645
3,734
Tiempo (h)
22,86
28,36
48,03
53,73
70,53
94,83
99,81
166,79
Fermentador 2
Sustrato (g/L)
35
30,5
20,5
16,5
11,5
15
15,5
13
Producto (g/L)
8,79
10,93
15,69
17,59
19,96
18,30
18,06
19,25
Biomasa (g/L)
1,047
1,301
1,867
2,093
2,376
2,178
2,150
2,292
Tiempo (h)
24,28
29,46
48,13
52,95
72,45
76,28
95,45
101,15
Fermentador 3
Sustrato (g/L)
40,5
37,5
20,5
21,5
15,5
19,5
15
14,5
Producto (g/L)
8,64
10,01
17,74
17,29
20,02
18,20
20,24
20,47
Biomasa (g/L)
1,689
1,956
3,468
3,379
3,912
3,556
3,957
4,001
Glucosa
Glucosa
169,05
175,98
18,5
17,5
18,65
19,11
3,645
3,734
4.8.
S (g/L) Vs t (h)
60
40
Sustrato (g/L)
20
0
0 20 40 60 80 100120140160180
Tiempo (h)
P g/L) Vs t (h)
15
10
Producto (g/L)
5
0
0 20 40 60 80 100120140160180
Tiempo (h)
X (g/L) Vs t (h)
15
10
Biomasa (g/L)
5
0
0 20 40 60 80 100120140160180
Tiempo (h)
S (g/L) Vs t(h)
80
60
Sustrato (g/L) 40
20
0
0
50
100
Tiempo (h)
150
200
P (g/L) Vs t(h)
12
10
8
Producto (g/L)
6
4
2
0
0
50
100
150
200
Tiempo (h)
X (g/L) Vs t (h)
12
10
8
Biomasa (g/L)
6
4
2
0
0
50
100
Tiempo (h)
150
200
S,X,P Vs t
60
40
Sustrato
(g/L)
Producto
(g/L)
Sustrato (S) y Biomasa (X)
20
0
0
4
3
Biomasa (g/L)
2 Producto (P)
1
0
50 100 150 200
Tiempo (h)
S,X,P vs t
80
60
3
2Biomasa (g/L)
20
Sustrato (g/L)
Producto (g/L)
Biomasa (g/L)
Tiempo (h)
4.9.
4.10.
2.500
2.000
30
1.500
x (g/L)Biomasa (g/L)
1.000
S (g/L)
Sustrato (g/L) 20
10
0
0
0.500
50
100
150
Tiempo (h)
0.000
200
5.000
40
4.000
30
S (g/L)
Sustrato (g/L)
20
3.000
X (g/L)
Biomasa (g/L)
2.000
10
0
0
1.000
50
100
150
0.000
200
Tiempo (h)
Donde
S
Ks+ S
sustrato limitante,
max
S es la concentracin de
Ks
es la
constante de Monod.
Para estimar los parmetros de crecimiento
max
Ks
Ks
1
1
=
+
max S max
Se debe obtener la variacin de la velocidad especfica de crecimiento en funcin de la
variacin de la concentracin de sustrato, en el periodo exponencial de crecimiento del
microorganismo, puesto aqu es insignificante la muerte con respecto al crecimiento del
mismo (McNeil & Harvey, 2008).
Se evala que:
d Xv
=r X = X v
dt
As:
rX
=
Xv
Para calcular
d X v X f X o
=
dt
t f t o
Para el fermentador 2:
Sustrato
(g/L)
Producto
(g/L)
Biomasa
(g/L)
22,86
35
8,79
1,047
28,36
30,5
10,93
1,301
48,03
20,5
15,69
1,867
53,73
16,5
17,59
2,093
70,53
11,5
19,96
2,376
94,83
15
18,3
2,178
99,81
15,5
18,06
2,15
166,79
13
19,25
2,292
X (g/L) Vs t (h)
10
Biomasa (g/L)
Biomasa (g/L)
1
0
Se puede observar en la grfica que en los primeros cinco tiempos se da la fase exponencial
de vida del microorganismo. Se toman esas datos para calcular la velocidad especifica de
crecimiento ( r X ) en funcin de la variacin de la concentracin de sustrato ( X v ). A
continuacin se muestran los valores calculados de
r X , y otros parmetros de
linealizacin.
Tabla 18: Parmetros para la linealizacin de las ecuaciones de Lineweaver-Burk,
Langmuir y Eadie-Hofstee para el modelo de Monod para el fermentador 2.
Tiemp
o (h)
Sustrat
o (g/L)
Biomasa
(g/L)
22,86
35
1,047
28,36
30,5
1,301
48,03
20,5
1,867
53,73
16,5
2,093
70,53
94,83
99,81
166,79
11,5
15
15,5
13
2,376
2,178
2,15
2,292
rX
0,0325784
7
0,0312179
7
0,0226222
2
0,0020681
3
0,03111601
0,0239953
7
0,0121168
8
0,0009881
2
1/
32,137792
7
41,674709
6
82,529469
5
1012,0270
6
1/
0,0285714
3
0,0327868
9
0,0487804
9
0,0606060
6
Vs
/S
1124,8227
4
1271,0786
4
1691,8541
3
16698,446
5
1
S .
max
0,0008890
3
0,0007867
3
0,0005910
7
5,9886E-05
Ks
1 Ks 1
1
=
+
max S max
Lineweaver-Burk
1500
1000
1/
500
1/s
f(x) = 27112.99x - 865.26
R = 0.7
Linear (1/s)
0
0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07
1/S
Se puede observar que el valor del intercepto (-865,26) da negativo, por lo tanto esta
linealizacin no sirve para hallar max y por ende tampoco el K s .
Se procede a usar otro mtodo de linealizacin, el mtodo de Langmuir para hallar los
parmetros del modelo de Monod.
K
S
1
=
S+ s
max
max
La grafica
S Vs
Ks .
Grafica 13: Linealizacin de Langmuir para el fermentador 2.
max
y el intercepto
Langmuir
20000
15000
S/u
S/ 10000
5000
0
15
20
25
30
35
Linear (S/u)
40
Vs
max
=K s + max
S
Grafica 13: Linealizacin de Eadie-Hofstee para el fermentador 2.
Eadie-Hofstee
0.04
0.03
f(x) = 34.44x - 0
R = 0.92
0.02
Linear ()
0.01
0
0
/S
De forma general se puede decir que ninguno de los 3 mtodos de linealizacin antes
desarrollados no son tiles para determinar parmetros max y K s del modelo de
Monod, por lo tanto no se puede determinar la cintica de crecimiento microbiano.
Para el fermentador 3:
24,28
Sustrato
(g/L)
40,5
Producto
(g/L)
8,64
Biomasa
(g/L)
1,689
29,46
37,5
10,01
1,956
48,13
20,5
17,74
3,468
52,95
21,5
17,29
3,379
72,45
15,5
20,02
3,912
76,28
19,5
18,2
3,556
95,45
15
20,24
3,957
101,15
14,5
20,47
4,001
169,05
18,5
18,65
3,645
175,98
17,5
19,11
3,734
Tiempo (h)
X (g/L) Vs t (h)
10
Biomasa (g/L)
Biomasa (g/L)
1
0
Se puede evidenciar en la grfica que en los primeros seis tiempos se da la fase exponencial
de vida del microorganismo. Se toman esas datos para calcular la velocidad especifica de
crecimiento ( r X ) en funcin de la variacin de la concentracin de sustrato ( X v ). A
continuacin se muestran los valores calculados de
r X , y otros parmetros de
linealizacin.
Tabla 20: Parmetros para la linealizacin de las ecuaciones de Lineweaver-Burk,
Langmuir y Eadie-Hofstee para el modelo de Monod para el fermentador 3.
Tiemp
o (h)
Sustrat
o (g/L)
Biomasa
(g/L)
24,28
40,5
1,689
29,46
37,5
1,956
48,13
20,5
3,468
52,95
21,5
3,379
72,45
15,5
3,912
76,28
19,5
3,556
95,45
101,15
169,05
175,98
15
14,5
18,5
17,5
3,957
4,001
3,645
3,734
rX
0,0745911
9
0,0605789
7
0,0182565
8
0,0030721
2
0,0020563
1
0,0003793
2
0,0001432
8
325,50758
9
486,30737
9
2636,3099
1
6979,2288
1
2,7005E-05
37030
0,0002345
7
4263,1092
1
0,0075868
0,0019565
2
0,0178930
4
1/
1/
0,0246913
6
0,0266666
7
0,0487804
9
0,0465116
3
0,0645161
3
0,0512820
5
Vs
/S
13183,057
3
18236,526
7
54044,353
2
150053,41
9
7,58549E-05
5,4835E-05
1,85033E-05
6,66429E-06
573965
1,74227E-06
83130,629
7
1,20293E-05
1
S .
max
Ks
Lineweaver-Burk
40000
30000
1/ 20000
10000
1/s
f(x) = 696914.96x - 21863.95
Linear (1/s)
R = 0.57
0
0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07
1/S
Se puede observar que el valor del intercepto (-21864) da negativo, por lo tanto esta
linealizacin no sirve para hallar max y por ende tampoco el K s .
Ks
S
1
=
S+
max
max
se obtiene la grfica
Langmuir
800000
600000
S/u
S/ 400000
Linear (S/u)
200000
0
10 15 20 25 30 35 40 45
S
Vs
( =K S + )
s
max
se obtiene la grafica
Eadie-Hofstee
0
0
f(x) = 0.02x + 0
R = 0.99
/S
Linear (/S)
0
0
0
/S
Al observar el valor de la pendiente es positivo (0,0235), indica que este mtodo no es til
para hallar dichos parmetros del modelo de Monod.
Finalmente, se puede decir que ninguno de los mtodos de linealizacin es til para calcular
max y K s del modelo de Monod, de tal manera que no se puede
los parmetros
llevar a cabo la cintica de crecimiento microbiano.
5. DISCUSIN DE RESULTADOS
El alcohol se puede producir por rutas qumicas y por rutas biotecnolgicas. Mediante esta
ltima se hace uso de la capacidad de los microorganismos para la produccin de etanol
sobre sustratos baratos y disponibles (Carrin, Molina, & Pieros , 2008). Los procesos que
se llevan a cabo en un bio-reactor mediante los cuales se transforman los sustratos de un
medio de cultivo (materias primas) en metabolitos y/o en biomasa (productos) empleando
para este fin microorganismos, clulas o enzimas (Cassanello, 2013).
La fermentacin alcohlica constituye un mtodo efectivo para la produccin de etanol
empleando el sustrato adecuado para que el microorganismo se alimente. Una de las
ventajas de la fermentacin alcohlica es que se puede emplear diferentes sustratos para la
produccin de etanol, estos dependern de la naturaleza del microorganismo usado para tal
fin.
La levadura saccharomyces cerevisiae ha sido tradicionalmente usada para la produccin de
etanol, es una levadura glucoflica, puesto que prefiere la glucosa a la fructosa, es el
principal microorganismo usado para la produccin de etanol teniendo como preferencia
sustratos simples y complejos (Lallemand, 2012).
Uno de los biorreactores ms usados para fermentacin alcohlica es el reactor tipo batch,
una vez que se carga, el proceso ocurre sin ingreso de sustrato ni salida de productos. Aqu
se da la produccin de biomasa o de un producto asociado a crecimiento (metabolito
primario). Por su parte el crecimiento de microorganismos en batch se refiere a que las
clulas se cultivan en un recipiente con una concentracin inicial, sin que esta se vea
afectada por nutrientes adicionales o el lavado, por lo cual el volumen permanece
constante. El proceso finaliza cuando todo el sustrato es consumido por la biomasa. Estos
tipos de reactores operan con una baja concentracin celular, sobretodo en el instante inicial
donde los microorganismos permanecen en fase latente (Cassanello, 2013).
Al ser la lactosa la principal fuente de carbono, parecera que solamente pudiera emplearse
microorganismos capaces de utilizar este disacrido, sin embargo, este nutriente no
constituye mucho nitrgeno inorgnico que pueda ser utilizado por los microorganismos, en
este caso por la levadura; por otra parte el contenido de protenas es relativamente alto,
debido a ello es un excelente medio para microorganismos que requieren aminocidos y
son capaces de hidrolizar protenas cosa que la levadura es incapaz de hacer. Una posible
solucin a este inconveniente son algunos estudios que han demostrado que para utilizar un
cultivo de S. cerevisiae para la produccin de alcohol en un proceso fermentativo es
necesario realizar la hidrolisis de la lactosa para as poder obtener una mejor produccin de
alcohol, mas sin embargo esta produccin va ser menos eficientes a comparacin con las de
los sustratos de glucosa y fructosa. (S. M. Carrion, 2010).
En el caso de la concentracin de alcohol, el mximo rendimiento fue para los nutrientes
fructosa y glucosa, pues se obtuvo al tiempo de 60 horas, manteniendo este ltimo el
rendimiento por mayor tiempo.
El incremento de la biomasa en ambos casos empez a entrar a una fase exponencial a
partir de las 25 horas, destacandose la fructosa por obtener una mayor concentracin de
biomasa durante la fermentacin. La biomasa se estabiliz para la fructosa a las 60 horas y
en la glucosa a las 100 horas, de all en adelante la biomasa se estabiliz, debido a que se
lleg a la fase estacionaria de crecimiento celular.
El rendimiento en las dos fermentaciones de producto/sustrato ( Y P / S ) fue mayor para la
fructosa con 0.47 a comparacin con la glucosa que fue de 0.45, haciendo un anlisis
comparativo con el rendimiento terico que es de 0.511 g de etanol por 1 g de fructosa o
glucosa (Lallemand, 2012) se puede decir que el proceso de fermentacin para la
produccin de alcohol a partir de estos sustratos se considera un rendimiento aceptable de
un 91.97% para la fructosa y de un 88.06% para la glucosa.
En el consumo de sustrato con respecto al tiempo, para la fructosa se comienza a estabilizar
a las 60 horas con 12 g/L aproximadamente y para la glucosa se estabiliza a las 100 horas
con 15 g/L en los fermentadores 2 y 3.
En cuanto a la cintica se puede decir que ninguno de los 3 mtodos de linealizacin
desarrollados, mtodo de Lineweaver-Burk, Langmuir y Eadie-Hofstee, son tiles para
determinar parmetros max y K s del modelo de Monod, por lo tanto no se puede
determinar la cintica de crecimiento microbiano, una de las razones posibles para que el
no se pueda determinar la cintica de crecimiento es que hubieron errores experimentales al
momento de determinar los Brix y por ende la concentracin de sustrato.
6. CONCLUSIONES
Al momento de utilizar estos nutrientes para la produccin de alcohol, podemos decir
que el mejor sustrato para la obtencin de este producto es la fructosa (fermentador 2)
Y
(
P/S=1,86)
ya que obtuvo mejor rendimiento producto/sustrato
y una mayor
concentracin de biomasa final con glucosa como sustrato (X=3,734 g/L en un tiempo
de 175,98 h) durante la fermentacin, destacando a la glucosa por mantener la
concentracin durante mucho ms tiempo, as pues la glucosas y fructosa son buenos
nutrientes para la produccin de alcohol en un proceso de fermentacin; ms sin
embargo la lactosa no es un buen sustrato para emplearlo para la produccin de etanol
debido a que no constituye mucho nitrgeno inorgnico y el contenido de nutriente es
muy alto, una buena opcin sera hidrolizar la lactosa en glucosa y galactosa para poder
utilizar este disacrido.
7. CUESTONARIO
7.1.
(Alejandra, 2009)
Metabolismo de la fructosa:
(Michael, 2015)
7.2.
Ac. Pirvico
Carboxilasa
Acetaldehido
+H2
Alcohol etilico
7.3.
El grado mximo de etanol que se puede obtener en una fermentacin esta entre los 3.5 y
los 15 grados (Javier, 2003).
8. Bibliografa
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