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Producción
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Fig. 2 n-butanol produccin con diferentes variantes de acetoacetyl-CoA-derivado del n-butanol pathways en
S. cerevisiae cepa CEN.PK113-5D. La
Ce Ce eutE eutE EceutE eutE concentraciones de n-butanol despus de 74 h de semi-anaerobios
fermentaciones en medio de SMD son mostradas. Barras de error representan la desviacin estndar de tres
repeticiones independientes. b La enzima respectivas combinaciones de n-butanol pathway vectores son
mostrados. Genes de Saccharomyces cerevisiae (SC), Clostridium acetobutylicum (Ca), la Escherichia coli
(EC), Euglena gracilis (EG), Streptomyces collinus (SCO), Streptomyces sp. CL190 (Ss) y Treponema denticola
(Td) se indica mediante prefijos en superndice
Tabla 1 Genes de Saccharomyces cerevisiae (SC), Clostridium acetobutylicum (Ca), la Escherichia coli (EC),
Euglena gracilis (EG), Streptomyces collinus (SCO), Streptomyces sp. CL190 (Ss) y Treponema denticola (Td)
se indican mediante preixes en superndice. El MET25 promotor est indicado como "PM25"; otros
promotores estn indicadas en ile adicional 2:
Tabla S1
r kanMX G418 resistencia, resistencia hygromycin hphNT12 nourseothricin natNT, resistencia, resistencia a
ampicilina
Fig. 3 n-butanol produccin con n-butanol pathway (pVS6) y sobreexpresin coaA bajo control del MET25
promotor (pVS5_4) en el CEN.
PK113-5D con la adicin de metionina. Cinco diferentes concentraciones de metionina se agregaron a SMD
medio: 0 mM (diamante), 0,125 mM (transversal), 0,25 mM (crculo), 0,5 mM (tringulo) y 2 mM (cuadrado).
Fig. 4 n-butanol produccin con n-butanol pathway (pVS6) y sobreexpresin coaA (pVS5_4) en el CEN.PK1135D con adicin de pantotenato.
Cinco diferentes concentraciones de pantotenato fueron aadidos a SMD medio: 0 M (cuadrado), 0,5 M
(tringulo), 5 M (crculo), 25 M (cruz), y 50 M (Diamond). Barras de error representan la desviacin
estndar de tres repeticiones independientes
Fig. 5 Comparacin de n-butanol con diferentes cepas de produccin. n-butanol concentraciones despus de
74 h de semi-anaerobios fermentaciones en SMDA267T/E568K medio son mostradas. En comparacin son las
fermentaciones del wildtype CEN.PK VSY113-5D0 (adh1-5), y VSY8 (adh1-5 SFA1 con adhE ) con el
plsmido SPV6 (n-butanol pathway), con o sin sobreexpresin coaA (pVS5_4) y la CEPA VSY10 (adh1-6 SFA1
gpd2, con n-butanol caminoUn267T/E568K forma genes de pVS6, coaA y adhE ), la ausencia o la presencia de ms de 25 M
pantotenato, en medio de SMD. Barras de error representan la desviacin estndar de tres repeticiones
independientes y un anlisis estadstico se muestra en el archivo adicional 2: Tabla S4
Conclusiones
En comparacin con sistemas bacterianos, n-butanol en S. cerevisiae a
travs de produccin heterloga de acetoacetyl-CoA-derivados pathways
es muy baja. l razn para esto no est totalmente comprendida.
Nuestros resultados confirman que varias razones contribuyen a la baja
eficiencia del n-butanol de produc- cin en la levadura. Por ingeniera
gradual de diversos aspectos de la produccin de n-butanol, podramos
aumentar gradualmente el n-butanol ttulos y rendimientos. Por
supuesto, un aspecto muy importante fue la composicin de la ruta
heterlogos.
Probando diferentes para las distintas reacciones de las isoenzimas,
podramos establecer una va funcional. n-butanol de pro- duccin se
increment posteriormente por la estabilidad de la expresin de los
genes heterlogos. Expresin de centromrica plas- MID era claramente
superior a la expresin de plsmidos multicopia (Tabla 2). Otros aspectos
importantes fueron la ele- vacin de acetaldehdo y niveles de NADH por
reduccin de la alcohol deshidrogenasa actividades y sntesis de glicerol.
Adems, la creciente disponibilidad de acetil-CoA por medio de una
forma mutante de acetaldehdo dehydroge acetilante- nase de E. coli
mejor an ms la produccin de n-butanol.
Sin embargo, nuestros resultados indican que los niveles de CoA libre
obviamente en S. cerevisiae estn limitando la produccin de n-butanol.
Por Aumento de la sntesis de la CoA a travs de la sobreexpresin de
pan-quinasa tothenate coaA de E. coli y alimentando pantoth- enate al
medio, n-butanol podra aumentar los niveles de produccin de hasta