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10correlacionheteronuclear PDF
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HETERONUCLEAR
Jos Adrian Gavn Sazatornil
Instituto Universitario de Bio-Orgnica IUBO Antonio Gonzlez
Departamento Qumica Orgnica, Universidad de La Laguna
Avda. Astrofsico F. Sanchez 2, 38296 La Laguna (Tenerife),
jgavin@ull.es
1. INTRODUCCION
Debido a la mayor dispersin en sus desplazamientos qumicos, los espectros de 13C y
N presentan en general una mejor dispersin que los correspondientes espectros de 1H. Este
hecho puede ser explotado a travs de la realizacin de experimentos 2D de correlacin
heteronuclear. Aunque en este captulo estudiaremos fundamentalmente la espectroscopia 2D
heteronuclear 1H-13C, podramos hacerla extensiva a correlaciones 1H-15N, 31P-13C y otros.
15
Existe una amplia variedad de mtodos, como los basados en eco de espn o en
transferencia de polarizacin, que permiten editar un espectro 1D del espn heteronuclear X, y
que suministran informacin sobre el nmero de H unidos al heterotomo (INEPT, DEPT).
Sin embargo estos mtodos no aportan evidencias directas, por ejemplo, de qu protones estn
unidos a cada carbono en una molcula.
El problema de la asignacin ha sido simplificado de manera importante gracias a la
espectroscopia de correlacin heteronuclear 2D, en la cual las dos coordenadas de cada
resonancia son los desplazamientos qumicos de un protn y del carbono enlazado
directamente a l (o a 2,3 enlaces).
Histricamente los primeros experimentos de correlacin heteronuclear que se
desarrollaron fueron los llamados de deteccin directa del heterotomo [1-4] y fue slo a
principios de los 80 cuando se empezaron a realizar los llamados de deteccin inversa [5-8]
que van a constituir el objeto de esta leccin.
156
Jos A. Gavin
2. SENSIBILIDAD
Como indicamos ms arriba, los mtodos originales para determinar las correlaciones
heteronucleares, estaban basados en la observacin del ncleo X ( ms pequea), mientras el
1
H era detectado indirectamente y apareca en la dimensin f1 del experimento 2D. Esta
aproximacin fue adoptada porque, las secuencias originales 2D eran derivadas de
experimentos anteriores, del tipo de transferencia de polarizacin, como el INEPT, que haban
sido diseados a su vez para aumentar la sensibilidad en la observacin de los ncleos de
ms baja. Adems, los primeros instrumentos de RMN de pulsos fueron diseados con este
modelo. Durante los ltimos aos, la aproximacin a la recogida de datos ha cambiado en el
sentido de que el ncleo de mayor valor de , frecuentemente 1H, es el observado, mientras X
es detectado indirectamente. Es lo que se conoce con el nombre de experimentos de
deteccin inversa. La motivacin de este cambio ha sido el aumento de sensibilidad
asociado a l.
La dependencia de la fuerza de una seal con su relacin giromagntica, , es bien
conocida y el concepto de transferencia de polarizacin fue introducido como un medio de
aumentar la sensibilidad. La expresin formal siguiente, para la relacin S/N de un
experimento 1D que implica ncleos con espn =1/2, cuantifica este hecho.
S/N N A T-1 B 0 3/2 exc obs 3/2 T*2 (ns)1/2
N es el nmero de molculas en el volumen de muestra analizada, A es un trmino que
representa la abundancia de los espines activos en RMN presentes en el experimento, T es la
temperatura, B0 es el campo magntico esttico, exc y obs representan las relaciones
giromagnticas de los espines inicialmente excitados y observados, respectivamente, T*2 es el
tiempo de relajacin transversal efectivo y ns el nmero total de escanes acumulados. De una
manera aproximada y para un experimento concreto: S/N exc obs 3/2
Cuando elegimos cmo llevar a cabo un experimento de correlacin heteronuclear,
podemos contemplar las siguientes opciones, ver figura 1, teniendo en cuenta cul sea el
ncleo excitado y cul el observado.
1
Sensibilidad relativa
t1
t2
H-31P
H-13C
H-15N
a)
b)
2.5
10
t1
t2
t2
c)
30
d)
10
32
300
t1
t2
H
X
Tradicional
t1
Inverso
157
158
Jos A. Gavin
H
X
t1
X
+1
1
H p=
0
-1
+1
p= 0
Desacoplar
-1
Figura 2. Secuencia HMQC y camino de transferencia de coherencia (CTC) asociado. El perodo =1/2JCH
provoca el desfase y reenfoque posterior del acoplamiento heteronuclear.
Esta coherencia es, de hecho, una combinacin de coherencias de orden cero y orden
dos, como aparece representado en la ruta de transferencia de coherencia de la figura 2. As,
por ejemplo, 1Hp = +1 y 13Cp = +1 corresponde a una coherencia de orden dos (p=2),
mientras que 1Hp = +1 y 13Cp = -1 es una coherencia de orden cero (p=0). El punto
importante en este estadio es cmo evoluciona la coherencia durante el perodo t1. Ya que
contiene trminos de magnetizacin transversal de los dos ncleos, evolucionar bajo la
influencia de los desplazamientos qumicos de ambos (aunque un rasgo importante de la
159
coherencia mltiple cuntica es que no evoluciona bajo el acoplamiento activo, de tal forma
que no lo consideraremos en este punto). Lo que se requiere es que la frecuencia est
marcada solamente con el desplazamiento de 13C, ya que esto es lo que se quiere
caracterizar en la dimensin indirecta f1. Para eliminar el efecto del desplazamiento de protn
durante t1, se incorpora un eco de espn colocando una impulsin de 180 de 1H en el centro
de t1. De esta forma al final del perodo de evolucin los desplazamientos de 1H son
reenfocados y por tanto no tienen influencia en f1. La evolucin de los del 13C no se ve
afectada por dicha impulsin de 1H con lo que se mantiene el marcaje reseado. La
impulsin final de 13C convierte la coherencia mltiple-cuntica en magnetizacin observable
simple cuanto de protn que aparece de nuevo en antifase respecto a 1JCH. Cuando detectamos
la FID del protn es aconsejable aplicar un desacoplamiento de los espines de 13C para
eliminar la estructura fina del doblete de 1JCH, aumentando de esa forma la relacin
seal/ruido. Para evitar la cancelacin de los satlites de protn en antifase, se inserta un 2
perodo para reenfocar el acoplamiento 1H-13C, despus de lo cual se detecta la seal de 1H.
La deteccin convencional en cuadratura en f1 es implementada incrementando la fase de la
impulsin de 13C anterior a t1, de acuerdo con los mtodos States o TPPI para obtener un
espectro sensible a la fase. El resultado es un espectro bidimensional con los de protn
representado en f2, los de 13C en f1 y los picos cruzados indicando las conectividades a un
enlace. Aunque la secuencia HMQC (y HSQC) detecta nominalmente las correlaciones a un
enlace, en circunstancias excepcionales algunas de estas puede desaparecer y aparecer las
correlaciones a mayor distancia. Esto ocurre cuando la J implicada en ese caso est lejos del
valor asumido cuando se calcula , una situacin probable en alquinos donde las J a uno y dos
enlaces son inusualmente grandes. Un acoplamiento a dos enlaces (>50Hz) puede ser
suficiente para producir un pico de correlacin, y hay que tener cuidado para no confundirlo
con una correlacin a un enlace.
3.1.2. Influencia del acoplamiento homonuclear de protn
Como se indica ms arriba, evolucionar con su desplazamiento qumico durante el
perodo que sigue al primer pulso. Sin embargo, se produce el reenfoque durante el segundo
perodo debido a la presencia de un eco de espn, lo que evita la aparicin de errores de fase
en la dimensin f2. Ms importante es la evolucin de la magnetizacin de protn en los dos
perodos sealados y de la coherencia mltiple cuntica heteronuclear durante t1, bajo la
influencia del acoplamiento H, H. Ya que dichos acoplamientos no son reenfocados por el eco
de espn, evolucionarn durante ambos perodos y potencialmente contribuirn a la presencia
de errores de fase no deseados en la dimensin protn. Sin embargo, es fijado de acuerdo
con 1JCH que es al menos un orden de magnitud mayor que JHH, de tal forma que en la prctica
el grado de evolucin debido al acoplamiento H, H es muy pequeo. En otras palabras es
demasiado pequea para que pueda producirse una evolucin significativa y los errores de
fase que puedan originarse son de poca importancia (como veremos ms adelante, no ocurre
lo mismo en los experimentos de correlacin heteronuclear a larga distancia, HMBC, donde
los valores de las constantes de acoplamiento 3JCH y 3JHH son parecidas). Por el contrario, la
coherencia mltiple cuntica evoluciona durante t1 bajo el acoplamiento pasivo JHH que no
es reenfocado lo que hace que la resonancia final de carbono se ve ensanchada por el
acoplamiento protn-protn a lo largo de f1. Esto puede parecer raro, pero es una
consecuencia del hecho que durante t1 evolucionan las coherencias de 1H y 13C; el eco de
espn elimina la evolucin con el desplazamiento qumico pero no con J. De hecho, debido a
la baja resolucin digital utilizada en la dimensin 13C, estos acoplamientos de protn
raramente se resuelven, pero contribuyen a un ensanchamiento no deseado de la resonancia a
160
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-Iy
2IxSz (1)
90 Sx
IxSz
-IxSy
(2)
st1Sz
-IxSy -IxSy cos s t1 + IxSx sen s t1 (3)
Sx
-IxSy cos s t1 + IxSx sen s t1 90
161
H
X
t1
X
Figura 3. Secuencia HMQC precedida del bloque BIRD
Desacoplar
El perodo del
bloque BIRD tiene
que ser optimizado
(minimizando
la
FID obtenida) y
suele
ser
de
alrededor de 1s.
= 1/2JCH
Para seleccionar esta ruta, la fase total inducida por los gradientes debe ser igual a
cero:
G1 (H + C) + G2 (- H + C) + G3 (-H) = 0
Teniendo en cuenta que la relacin (H / C) = 4 la ecuacin anterior queda
simplificada a: G1 x (5) + G2 x (-3) + G3 x (-4) = 0
Existen toda una serie de relaciones de gradientes que satisfacen esta expresin y
conducen a la seleccin de la seal deseada 2:2:1, 5:3:4, 3:5:0.
162
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Desacoplar
X
ello se adicionan dos ecos de
G
G
G
espn enmarcando el perodo t1.
P
La
seleccin de los dos caminos
Gz
N
se realiza invirtiendo el signo del
+1
ltimo gradiente y por ejemplo,
1
H p= 0
la seal de tipo-N es reenfocada
-1
con 2:2:-1 y la de tipo-P con
2:2:1.
1
+1
p= 0
P
Figura 5. Secuencia HMQC, con gradientes, sensible a la
fase, va el mtodo eco-antieco
-1
X
1
/2
/2
/2
163
/2
H
X
t1
X
Desacoplar
+1
1
H p=
0
-1
+1
p= 0
-1
-Iy
-Iy cos J + IxSz sen J
= 1/2J cos = 0 sen = 1
90 Iy
90 Sx
IxSz
IzSy (1)
st1Sz
IzSy IzSy cos s t1 IzSx sen s t1 (2)
Ix
Sx
90
90
164
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/2
/2
/2
/2
H
X
t1
Desacoplar
G1
G2
N
P
Gz
+1
1
H p=
0
-1
+1
p= 0
-1
Para
un
experimento
de
correlacin 1H-13C se utilizan
relaciones 4:1 y 4:-1 que
seleccionarn las coherencias
tipo N y P en escanes alternos.
De nuevo el primer gradiente se
aplica dentro de un eco de espn
para reenfocar la evolucin con
el desplazamiento qumico de X
durante la duracin del gradiente,
mientras que el segundo puede
ser aplicado durante el perodo de
reenfoque del retroINEPT. La
capacidad
para
suprimir
completamente las seales 1H12
C o 1H-14N produce espectros
con supresin casi total del ruido
t1
H
X
t1
1 = JCH
X
Desacoplar
Comienza con un experimento HSQC convencional, con una etapa INEPT que crea
coherencia en antifase y que est marcada con la frecuencia de X durante t1 (1). Si registramos
165
un HSQC con el modo SHR o TPPI, se adquiere alternativamente una seal modulada por un
seno o coseno en la dimensin t1. La finalidad de la secuencia es asegurar que ambos tipos de
modulacin sean observados simultneamente. Requerimos por tanto una ruta de
transferencia de coherencia que convierta IzSy e IzSx en los observables Ix y/o Iy. El primer
retroINEPT aplicado despus de t1 produce lo siguiente (2). La finalidad de la alternancia en
la fase del primer pulso de X del retroINEPT es clara. Normalmente detectaramos la seal de
Ix (2). Sin embargo, en el experimento PEP-HSQC aparcamos esta seal como Iz, y
convertimos el trmino IySx en coherencia en antifase, que es reenfocada posteriormente.
Finalmente colocamos la seal Iz en el plano transversal mediante el pulso de 90 de protn
del 2 retroINEPT (3).
Ix
JIzSz
Iy
Sx
st1Sz
Iz
90
90
90
IzSy
IzSy cos s t1 +
IzSx sen s t1 (1)
Ix
mx
JIzSz
IzSy
90
90
S
m IySz
Ix
(2)
90 Ix
90 S m x
JIzSz
IySx IySz
IzSx
90 Iy
Sy
JIzSz
Ix
Ix
90
Iz
m Iz 90
m Iy
(3)
90 Iy
90 Sy
JIzSz
90 Ix
IySx
-IySz Ix
Ix
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IS
0.707
1
1.414
1.20
1.06
Tabla 1. Incrementos tericos obtenidos en
multiplicidad de los carbonos
I2S
I3S
1
1.414
2.12
2
3
1.414
2.12
1/2J
2
2.54
1/4J
1.92
2.65
1/6J
una serie de experimentos HSQC con gradientes, en funcin de la
Eco de espn X
No evolucin X
Evolucin JXX
No evolucin JHX
Evolucin JHH
Eco de espn H
Evolucin X
Evolucin JXX
No evolucin JXH
Evolucin JHH
167
El editado puede ser fcilmente introducido en la secuencia HSQC [14, 31, 32],
mediante la simple adicin de un eco de espn (- 180 (1H,X) -) despus de t1. Durante
dicho perodo slo evoluciona el acoplamiento heteronuclear, de la misma manera que en la
secuencia 1D J-modulado. Por tanto, fijando = 1/2J obtenemos un espectro de correlacin
donde las respuestas de CH2 aparecen invertidas respecto a las de CH y CH3. En una reciente
aproximacin [33] de Parella, el eco de espn aparece concatenado con el t1 variable. Un
problema potencial en este tipo de aproximacin es la cancelacin de seales de correlacin
superpuestas y que presentan fases opuestas en regiones del espectro muy apiadas. Existen
tambin secuencias alternativas basadas en el editado mediante filtracin mltiple-cuntica
produciendo espectros que contienen slo correlaciones de CH, CH2 CH3 eliminando el
problema de la cancelacin [34,35].
3.4.2. HSQC-TOCSY, HSQC-NOESY
Cuando se analizan molculas que presentan espectros de protn muy solapados, los
experimentos de correlacin homonuclear pueden mostrar espectros que siguen presentando
mucho solapamiento para una buena interpretacin. En tales casos, se puede aprovechar la
dispersin, potencialmente mayor, de los desplazamientos qumicos del heterotomo como un
medio para separar las correlaciones protn-protn. Adems, en los casos donde es completo
el solapamiento de las seales de 1H, las correlaciones a un enlace 1H-X no permiten
identificar sin ambigedad el heterotomo y una aproximacin para resolver este problema
consiste en transferir la informacin sobre la correlacin heteronuclear, a los protones
vecinos. As, si adicionamos un perodo de mezcla de un spin-lock del TOCSY despus de la
secuencia HMQC/HSQC e inmediatamente antes de la deteccin, la transferencia de
magnetizacin que haba vuelto al protn se reparte con otros protones va TOCSY [36,37].
Modificaciones posteriores de la secuencia HSQC-TOCSY que incorporan la metodologa
PEP as como la utilizacin de gradientes han sido descritas [38,39].
Las
correlaciones
directas
pueden ser diferenciadas de las
indirectas (generadas por el
TOCSY) incluyendo un bloque
de editado justo antes de la
adquisicin;
adems
la
multiplicidad de los picos
directos puede ser codificada
[33] (ver figura 10).
Otro experimento interesante es
el HSQC-NOESY [40] a partir
del cual pueden observarse
NOEs
entre
protones
qumicamente equivalentes o
Figura 10. Espectros 2D HSQC-TOCSY con PEP de estricnina en accidentalmente solapados, lo
CDCl3 : A) espectro convencional B) con editado de respuestas directas que lo convierte en una
C) con editado de multiplicidad D) doble editado; picos herramienta til para el estudio
positivos(negro) negativos(vaco)
de molculas simtricas.
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169
170
Jos A. Gavin
JCH. En estos casos la adicin de un esquema de purga mejora dicha supresin [52]. En
estudios de rutina se pueden suprimir dichos filtros y aceptar la presencia de restos de
acoplamiento a 1 enlace.
Sin lugar a dudas, el problema principal asociado con la secuencia HMBC consiste en
la eliminacin de las seales padre 1H-12C, que pueden llegar a enmascarar los satlites de los
acoplamientos a larga distancia. La introduccin de PFG [15,53] ha revolucionado la
aplicabilidad del HMBC, ya que se consigue una perfecta supresin de las seales padre, con
una reduccin muy grande del ruido t1 asociado a ellas.
X
1
1
H
X
t1
G1
G2
G3
Gz
Figura 13. Secuencia HMBC con low pass filter en modo magnitud
171
Quizs la modificacin ms creativa del HMBC ha sido el experimento ACCORDHMBC desarrollado por Berger [57] que utiliza el principio del acorden [58] para
muestrear un amplio rango de constantes de acoplamiento heteronucleares a larga distancia en
un nico experimento. Este experimento usa el principio del acorden reemplazando el
perodo esttico 2 durante el cual evolucionaba el acoplamiento nJCH, por un perodo que va
disminuyendo sistemticamente. Este perodo acorden permite muestrear un rango de
potenciales acoplamientos a larga distancia, ya que su duracin vara entre max y min,
mientras que la duracin del correspondiente tiempo de evolucin t1 es aumentada. En
principio, el experimento ACCORD-HMBC resuelve el problema de la optimizacin del
perodo 2. Sin embargo, un inconveniente que aparece usando este principio es la
modulacin del acoplamiento homonuclear en f1 (ver figura 17c).
3
t1
Desacoplar
X
Filtro
Delay
Low Pass variable
G1
G3
Delay
Filtro
variable Low Pass
G5
G4
G6
G8
Gz
G7
G2
Figura 15. Secuencia ACCORD-HMBC
H
X
D/2
D/2
2
t1
dv
Desacoplar
X
Filtro J Tiempo constante
Low Pass Delay variable
G1
G4
G6
G7
Gz
G2
G3
G5
Delay
simtrico
G8
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Tambin han aparecido una serie de experimentos como el GSQMBC (Gradientenhanced-Single-Quantum-Multiple-Bond-Correlation) [61] y una modificacin de ste
conocida como HSQMBC (Heteronuclear-Single-Quantum-Multiple-Bond-Correlation) [62]
que no slo tienen la misma sensibilidad que el HMBC, sino que adems permiten una
medida fcil de las J heteronucleares a larga distancia. Estos experimentos reducen el efecto
no deseado del acoplamiento homonuclear mediante el uso de la secuencia HSQC como
bloque fundamental. La transferencia inicial INEPT permite crear magnetizacin simple
cuanto en X, lo que elimina la evolucin del acoplamiento homonuclear durante t1.
El experimento puede incorporar un trim pulse antes del 2 pulso de 1H y adems un filtro
zz en el retroINEPT con lo que se elimina la magnetizacin no deseada (que genera
contribuciones dispersivas en la forma de lnea) antes de transferir la magnetizacin al protn
para su deteccin despus de la aplicacin del correspondiente gradiente de descodificacin.
5.
173
ESPECTROSCOPIA 15N
La baja abundancia natural del 15N (0.37%) unida a su tambin baja relacin
magnetogrica (N), aproximadamente el 10% de H, lo convierten en un ncleo difcil para
trabajar en espectroscopia de rutina. El desarrollo de los mtodos de deteccin inversa ha
aumentado grandemente sus posibilidades como se pone de manifiesto en el creciente nmero
de trabajos aparecidos en los ltimos aos [63-66].
BIBLIOGRAFIA
General
- F.J.M. van den Ven Multidimensional NMR in liquids. Basic principles and experimental methods Ed.
John Wiley & Sons, New York, (1995)
- J. Cavanagh, W.J. Fairbrother, A.G. Palmer III, N.J. Skelton, Protein NMR spectroscopy. Principles and
practice Ed. Academic Press, San Diego, (1996)
- T.D.W. Claridge, High resolution NMR techniques in Organic Chemistry Ed. Elsevier, Oxford (1999)
- S. Braun, H.O. Kalinowski, S. Berger, 150 and more basic NMR experiments. A practical course Ed. John
Wiley & Sons and Verlag Chemie, Weinheim, (1998)
- S. Berger, S. Braun, H.O. Kalinowski, NMR spectroscopy of the non-metallic elements Ed. John Wiley &
Sons, Chichester (1997)
Especfica
1. A.A. Maudsley, R.R. Ernst, Chem. Phys. Lett. 50, 368 (1977)
2. A.A. Maudsley, L. Mller, R.R. Ernst, J. Magn. Reson. 28, 463 (1977)
3. G. Bodenhausen, R. Freeman, J. Magn. Reson. 28, 471 (1977)
4. A. Bax, G.A. Morris, J. Magn. Reson. 42, 501 (1981)
5. L. Mller, R.R. Ernst, Mol. Phys. 38, 963 (1979)
6. L. Mller, J. Am. Chem. Soc. 101, 4481 (1979)
7. G. Bodenhausen, D.J. Ruben, Chem. Phys. Lett. 69, 185 (1980)
8. A. Bax, R.H. Griffey, B.L. Hawkins, J. Magn. Reson. 55, 301 (1983)
9. A. Bax, S. Subramanian, J. Magn. Reson. 67, 565 (1986)
10. R.E. Hurd, B.K. John, J. Magn. Reson. 91, 648 (1991)
11. J.R. Garbow, D.P. Weitekamp, A. Pines, Chem. Phys. Lett. 93, 504 (1982)
12. T. Parella, Magn. Reson. Chem. 36, 467 (1998)
13. J. Ruiz-Cabello, G.W. Vuister, C.T.W. Moonen, P. Van Gelderen, J.S. Cohen, P.C.M. van Zilj, J. Magn.
Reson. 100, 282 (1992)
14. G.W. Vuister, J. Ruiz-Cabello, P.C.M. van Zilj, J. Magn. Reson. 100, 215 (1992)
15. W. Wilker, D. Leibfritz, R. Kerssebaum, W. Bermel, Magn. Reson. Chem. 31, 287 (1993)
16. J.R. Tolman, J. Chung, J.H. Prestegaard, J. Magn. Reson. 98, 462 (1992)
17. A.L. Davis, J. Keeler, E.D. Laue, D. Moskau, J. Magn. Reson. 98, 207 (1992)
18. J. Boyd, N. Soffe, B. John, D. Plant, R. Hard, J. Magn. Reson. 98, 660 (1992)
19. A.G. Palmer III, J. Cavanagh, P.E. Wright, M. Rance, J. Magn. Reson. 93, 151 (1991)
20. J. Cavanagh, A.G. Palmer III, P.E. Wright, M. Rance, J. Magn. Reson. 91, 429 (1991)
21. J. Cavanagh, M. Rance, Annu. Rep. NMR Spectrosc. 27, 1 (1993)
22. L.E. Kay, P. Keifer, T. Saarinen, J. Am. Chem. Soc. 114, 10663 (1992)
23. G. Kontaxis, J. Stonehouse, E.D. Laue, J. Keeler, J. Magn. Reson. A 111, 70 (1994)
24. J.A. Gavn, J.L. Pons, M.A. Delsuc, J. Magn. Reson. A 112, 64 (1996)
25. J. Schleuser, M.G. Schwendinger, M. Sattler, P. Schmidt, O. Schedletzky, S.J. Glaser, O.W. Sorensen, C.
Griesinger, J. Biomol. NMR 4, 301 (1994)
26. M. Sattler, J. Schleuser, O. Schedletzky, S.J. Glaser, C. Griesinger, N.C. Nirelsen, O.W. Sorensen, J. Magn.
Reson. A 119, 171 (1996)
27. J. Santoro, G.C. King, J. Magn. Reson. 97, 202 (1992)
28. F.J.M. van den Ven, M.E.P. Philippens, J. Magn. Reson. 97, 637 (1992)
29. G.W. Vuister, A. Bax, J. Magn. Reson. 98, 428 (1992)
30. H. Kessler, P. Schmeider, M. Kurz, J. Magn. Reson. 85, 400 (1989)
31. S.I. Tate, Y. Masui, F. Inagaki, J. Magn. Reson. 94, 625 (1991)
174
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.
65.
66.
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