Tema 6. ENZIMAS. Clasificacin.

Principios de la catlisis
enzimtica. Energa de activacin. Velocidad de reaccin y
equilibrio de reaccin. Cintica enzimtica: ecuacin de MichaelisMenten. Ecuacin de los dobles recprocos. Inhibicin enzimtica.
Tipos de inhibicin. Mecanismos de regulacin de la actividad
enzimtica: alosterismo, modificacin covalente, proenzimas.
Isoenzimas

BIOQUMICA-1 de Medicina
Dpto. Biologa Molecular
Jess Navas

ENZIMAS
Catalizadores de las reacciones biolgicas.
La mayora son protenas aunque hay molculas de RNA
con actividad cataltica (ribozimas)
Gran poder cataltico
Alto grado de especificidad
Actan en soluciones acuosas a 37C y pH neutro
Su actividad puede regularse
El 25% de los genes humanos codifican enzimas que
catalizan reacciones metablicas.
TEMA 6

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

TEMA 6

IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS

Cada paso de una va metablica est catalizado por un
enzima.
La medida de la actividad enzimtica en fluidos
biolgicos o tejidos es importante para el diagnstico de
muchas enfermedades.
Muchas frmacos son inhibidores de la actividad
enzimtica
Importancia en la industria de alimentacin y agricultura.
TEMA 6

TEMA 6

ENZIMAS: RESEA HISTORICA

TEMA 6

Primera descripcin (finales del siglo XVIII)

1850. Estudios de Pasteur
1897. Buchner
1926. Summer cristaliza la ureasa
Segunda mitad del siglo XX: se purifican y
caracterizan millares de enzimas, lo que ha
permitido conocer su mecanismo de accin.
6

Enzimas. Definiciones:
- Cofactor: necesario para la actividad enzimtica. Pueden ser iones
metlicos o una molcula orgnica, denominada coenzima. Si el
cofactor est unido fuertemente al enzima se denomina grupo
prosttico.
- Apoenzima: parte proteica del enzima (no activa)
- Holoenzima: apoenzima + cofactor
Nomenclatura de los enzimas:
SUSTRATO + TIPO DE REACCION + ASA
7

TEMA 6

Un tercio de los enzimas requieren algn in metlico para catalizar

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)33
TEMA 6

TEMA 6

Muchas vitaminas son cofactores o precursores

de cofactores de enzimas

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
TEMA 6

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CLASES DE ENZIMAS

11

TEMA 6

Los enzimas aceleran las reacciones

disminuyendo la energa de activacin

E + S = ES = E + P
( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
TEMA 6

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Los enzimas son estereoespecficas porque forman

varias interacciones entre aminocidos del centro
activo y los distintos grupos del sustrato

TEMA 6

(Bioqumica, Mathews and van Holde

McGraw-Hill, 1998)
13

El centro activo de los enzimas es complementario al estado

de transicin de la reaccin catalizada

Progreso de la reaccin
TEMA 6

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Encaje
inducido

Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa

(Hexoquinasa = ATP:glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 )

D-Glucosa
TEMA 6

TEMA 6

15
( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

16

Velocidad inicial

La Vmax se alcanza cuando todos los centros

activos estn ocupados con sustrato

1/2 Vmax

Vmax (S)

=Vo

Km + (S)
Km

Concentracin de sustrato [S]

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,
17
C.M. Saunders College Publishing. 1999.)

TEMA 6

Relacin entre Vo y [E]

Vo

[E]
TEMA 6

La velocidad inicial es funcin lineal de la concentracin de

enzima siempre que la concentracin de sustrato sea alta

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Ecuacin de Michaelis-Menten
Vo =

Vmax (S)
Km + (S)
K1

E+S

K2

ES

K-1

Km =

K2 + K-1
K1
19

TEMA 6

Velocidad inicial

La Vmax se alcanza cuando todos los centros

activos estn ocupados con sustrato

1/2 Vmax

Km

TEMA 6

Concentracin de sustrato [S]

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,

C.M. Saunders College Publishing. 1999.)
20

Calculo de Km y Vmax por la representacin de Lineweaver-Burk

TEMA 6

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,

C.M. Saunders College Publishing. 1999.)

21

Parmetros enzimticos
1. Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que la Vo es 1/2
Vmax. Es una medida de la afinidad del enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor
es la afinidad del enzima por S
2. Kcat (constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de molculas
de sustrato convertidas en producto por molcula de enzima y unidad de tiempo, en
condiciones de saturacin de sustrato.
3. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros activos
estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad)
4. Unidad de enzima = cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por
min = una forma comn de expresar la velocidad
5. Actividad especfica = unidades por mg de protena total de la preparacin
enzimtica. En el caso de enzimas en suero: unidades/L
TEMA 6

22

23
( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

TEMA 6

Inhibicin competitiva
+ Inhibidor
Unin del Inhibidor al centro
activo, compitiendo con S
Aumenta Km
No cambia Vmax

Sustrato

TEMA 6

Inhibidor
competitivo

(Adaptado de: Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Inhibicin no competitiva

+ Inhibidor

Unin del Inhibidor a un sitio

del enzima distinto del centro
activo: no compite con S
No cambia Km
Disminuye Vmax
Sustrato

Inhibidor
Sustrato
no competitivo

(Adaptado de: Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

TEMA 6

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Inhibicin acompetitiva
+ Inhibidor
Unin del Inhibidor a enzima-S,
estabilizando el complejo
enzima-S pero impidiendo la
formacin de producto:
Disminuye Km
Disminuye Vmax

Sustrato

TEMA 6

Inhibidor
acompetitivo

(Adaptado de: Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

26

Inhibidor
competitivo

Sustrato

Sustrato

Sustrato

Inhibidor
acompetitivo

Inhibidor
no competitivo

27
("Biochemistry" 5th ed. Berg, Tymoczko
and Stryer. Freeman and Co. 2002)

TEMA 6

INHIBICION COMPETITIVA

TEMA 6

INHIBICION NO COMPETITIVA

28

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

(Garret and Grisham)

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TEMA 6

MECANISMOS DE REGULACIN ENZIMTICA

Regulacin de la cantidad de enzima presente en las clulas
Inhibicin reversible por productos
Interaccin con moduladores (protenas u otros)
- Activacion/inhibicin alostrica
- El modulador alostrico se une a un sitio distinto del centro activo
- La unin del modulador es reversible e implica cambio conformacional
- Suelen ser enzimas multimricas
- Tienen cintica sigmoidea
- Modificacin covalente:
- fosforilacin
- ADP-ribosilacin
- metilacin
TEMA 6

Activacin proteoltica de pro-enzimas

30

Efectos alostricos de moduladores positivo y negativo

+ Modulador alostrico
positivo: favorece la forma R

El sustrato es
modulador positivo

+ Modulador alostrico
negativo: favorece la forma T

31
( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

TEMA 6

Activacin/inactivacin de enzimas por fosforilacin

Ejemplo: glucgeno fosforilasa

TEMA 6

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. 32

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

Una enzima puede tener varios mecanismos de regulacin

TEMA 6

33
("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,
C.M. Saunders College Publishing. 1999.)

Activacin de proenzimas por proteolisis

Auto-activacin
de quimotripsina
TEMA 6

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( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)