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Analisis Intrumental 1
Analisis Intrumental 1
Presentado por:
GERMN ANTONIO ARBOLEDA MUOZ
ALEJANDRO BUSTAMANTE MURIEL
NATALIA MARCELA FERNNDEZ CRUZ
MARIA PAULA FIERRO CADENA
YERALDIN LUCIO IDROBO
Presentado a:
Mag. JULIE QUINTERO
Anlisis Instrumental
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
OBJETIVOS
INTRODUCCIN
MARCO CONCEPTUAL
1. ESPECTROFOTOMETRIA
1.1 FUNDAMENTO
1.2 EQUIPO: ESPECTROFOTMETRO
1.3 PRINCIPIO FISICO
1.4 RESULTADOS
1.5 APLICACIONES
1.6 APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
2. ESPECTROMETRA DE ULTRAVIOLETA-VISIBLE
2.1. FUNDAMENTO
2.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE UV-VISBLE
2.3. PRINCIPIO FISICO
2.3.1 Electrones , y
2.3.1.1 Transiciones *
2.3.1.2 Transiciones *
2.3.1.3 Transiciones * y *
2.4. RESULTADOS
2.5. APLICACIONES
2.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
3. ESPECTROMETRA DE INFRARROJO
3.1. FUNDAMENTO
3.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE ABSORCION EN EL INFRARROJO
3.3. PRINCIPIO FISICO
3.3.1 Fuente de Radiacin
3.3.2 Sistemas de seleccin de longitudes de onda
3.3.3 Compartimiento de la muestra
3.3.4 Detector
3.4. RESULTADOS
3.5. APLICACIONES
3.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
4. ESPECTROMETRIA DE MASAS
4.1. FUNDAMENTO
4.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE MASAS
4.2.1 Sistema de entrada de muestras
4.2.2 Cmara de Ionizacin
4.2.3 Acelerador
4.2.4 Analizadores
4.2.5 Detector
4.3. PRINCIPIO FISICO
4.4. RESULTADOS
5
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29
Anlisis Instrumental
5.
6.
7.
8.
9.
4.5. APLICACIONES
4.5.1 Aplicaciones cualitativas
4.5.2 Aplicaciones cuantitativas
4.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
ESPECTROMETRIA DE ABSORCIN ATMICA
5.1. FUNDAMENTO
5.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE ABSORCIN ATMICA
5.3. PRINCIPIO FISICO
5.4. RESULTADOS
5.5. APLICACIONES
5.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
PLASMA ACOPLADO POR INDUCCIN
6.1. FUNDAMENTO
6.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE EMISIN
6.3. PRINCIPIO FISICO
6.4. RESULTADOS
6.5. APLICACIONES
6.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR
7.1. FUNDAMENTO
7.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE RMN
7.3. PRINCIPIO FISICO
7.4. RESULTADOS
7.4.1 Espectros de lneas anchas
7.4.2 Espectros de alta resolucin
7.4.3 Espectros de 13C del adamantano cristalino
7.5. APLICACIONES
7.5.1 Identificacin de Compuestos
7.5.2 Anlisis cuantitativo de RMN
7.5.2.1 Anlisis cuantitativo de grupos funcionales
7.5.2.2 Anlisis elemental
7.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
8.1. FUNDAMENTO
8.1.1 Preparacin de placas de capa fina
8.1.2 Desarrollo cromatogrfico
8.2. EQUIPO: CROMATGRAFO EN CAPA FINA
8.3. PRINCIPIO FISICO
8.4. RESULTADOS
8.5. APLICACIONES
8.5.1 Deteccin cualitativa rpida deanalitos
8.5.2 Determinacin semicuantitativadeanalitos
8.5.3 Aislamiento y purificacin parcial deanalitos de una muestra
8.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCIN
9.1. FUNDAMENTO DE LA TECNICA
9.2. EQUIPO: CROMATGRAFO HPLC
9.3. PRINCIPIO FISICO
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Anlisis Instrumental
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Determinar los aspectos ms importantes y sobresalientes de algunos de los mtodos de anlisis
instrumental.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Analizar de forma clara y puntual, los aspectos ms relevantes de distintas tcnicas de anlisis
instrumental.
Interpretar diferencias y similitudes entre las tcnicas de anlisis instrumental.
Deducir las principales aplicaciones de las tcnicas al campo cientfico, en especial en el campo
agroindustrial.
Anlisis Instrumental
INTRODUCCIN
La obtencin de informacin tanto cuantitativa como cualitativa acerca de la composicin y
estructura de la materia, es una de las necesidades ms urgentes de Ingenieros y Cientficos
vinculados al campo de las ciencias exactas como la Qumica, Biologa o Fsica. Para esto han
sido creadas una serie de herramientas para suplir estos requerimientos. Estos instrumentos han
conseguido ser cada vez ms avanzados y proporcionar informacin mucho ms confiable,
adems de facilitar el trabajo para el analizador y brindar mayor credibilidad en sus resultados.
El desarrollo de estos mtodos instrumentales de anlisis ha venido de la mano de la revolucin
tecnolgica producida por el auge de grandes empresas tanto industriales como informticas,
que han permitido mejorar an mucho ms todas las tcnicas instrumentales. Aunque muchos
de los principios en los que se basan se conocan desde hacemucho tiempo, no se contaba con
la suficiente instrumentacin e informacin para desarrollarlas.
Estas tcnicas presentan grandes ventajas, muestra de ello es el campo de accin tan grande
que tienen, abarcando desde las Ciencias tanto Exactas como de la Salud, pasando por las
Ingenieras vinculadas al estudio de materia orgnica, llegando incluso hasta gran parte del
Campo Industrial, destacndose entre este la industria farmacutica y la de alimentos. Siendo
estudiantes de Ingeniera Agroindustrial, el conocimiento de estas herramientas se hace
necesario no solo como parte de la formacin sino adems como parte de la vida profesional,
donde se ve enfrentado a diversos problemas analticos, para los cuales se debe tener los
mejores criterios para desarrollarlos con satisfaccin.
Debido a que muchos analitos pueden ser determinados por diferentes tcnicas, para hacer de
su uso algo correcto y pertinente se requiere de la clara comprensin del principio bsico de
cada una de estas. Esto con el fin de tener el mejor criterio para hacer la eleccin del mtodo a
utilizar, teniendo en cuenta cual brinda la mayor exactitud y precisin, as como cual podra
brindar menos limitaciones para el anlisis.
Es por estas razones, que se ha realizado la presente investigacin, basndose principalmente
en bibliografa acerca de anlisis instrumental. Claro est que aunque no se pretende profundizar
los aspectos relacionados con cada tcnica, si es importante ser muy puntual en los aspectos
ms importantes de cada una teniendo en cuenta su fundamento y sus aplicaciones que pueda
tener para el campo cientfico en general y en especial en el campo agroindustrial, que nos
concierne.1
Autores
Anlisis Instrumental
MARCO CONCEPTUAL
Absorbancia: es la cantidad de intensidad de luz que absorbe una muestra
Absorcin: de la radiacin electromagntica es el proceso por el cual dicha radiacin es
captada por la materia. Cuando la absorcin se produce dentro del rango de la luz visible, recibe
el nombre de absorcin ptica. Esta radiacin, al ser absorbida, puede, bien ser reemitida o bien
transformarse en otro tipo de energa, como calor o energa elctrica.
Adsorcin: La adsorcin de una sustancia es su acumulacin en una determinada superficie
interfacial entre dos fases. El resultado es la formacin de una pelcula lquida o gaseosa en la
superficie de un cuerpo slido o lquido.
Anisotropa: (opuesta de isotropa) es la propiedad general de la materia segn la cual
determinadas propiedades fsicas, tales como: elasticidad, temperatura, conductividad, velocidad
de propagacin de la luz, etc. varan segn la direccin en que son examinadas.
Atomizacin:Pulverizacin de lquidos
Calor de radiacin: Energa calorfica que se transmite por la radiacin de ondas
electromagnticas. Tambin llamado calor radiante.
Coeficiente de reparto:se define como la relacin de las concentraciones en equilibrio (ci) de
una sustancia disuelta en un sistema bifsico consistente en dos disolventes considerablemente
inmiscibles.
Desorcin: es el fenmeno por el que una sustancia est lanzada o a travs de una superficie.
Proceso es el contrario de absorcin (es decir, adsorcin y absorcin). Esto ocurre en un sistema
que est en el estado del equilibrio de la absorcin entre la fase a granel (lquido, es decir.
solucin del gas o del lquido) y una superficie adsorbente (slido o lmite que separa dos
lquidos).
Efectividad o selectividad de una columna cromatogrfica: Se dice que una columna es
efectiva cuando las especies a separar se eluyen a velocidades relativas suficientemente
diferentes (los picos estn suficientemente separados).
Eficacia de una columna cromatogrfica: Se dice que una columna es tanto ms eficaz
cuanto menos sea el ensanchamiento de los picos. La eficacia ser mayor cuanta ms pequea
sea la altura de plato y mayor sea el nmero de platos.
Elucin:Es un proceso en el cual los solutos son lavados a travs de una fase estacionaria por
el movimiento de una fase mvil.
Eluyente: Se trata de un disolvente que se usa para llevar los componentes de una mezcla a
travs de una fase estacionaria.
Anlisis Instrumental
Espectro:Es la imagen o registro grfico que presenta un sistema fsico al ser excitado y
posteriormente analizado
Espectro electromagntico:
electromagnticas.
distribucin
energtica
del
conjunto
de
las
ondas
Espn: se refiere a una propiedad fsica de las partculas subatmicas, por la cual toda partcula
elemental tiene un momento angular intrnseco de valor fijo.
Factor de retencin (k): tambin conocida como la relacin de capacidad, representa la
relacin de tiempo que el soluto pasa en la fase estacionaria con respecto al que pasa en la fase
mvil.
Fase mvil: consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra a
travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido
Flama: Se llama flama a la reaccin qumica de oxidacin violenta de una materia combustible,
con desprendimiento de llamas, calor, vapor de agua y dixido de carbono.}
Frecuencia:Es una magnitud que mide el nmero de repeticiones por unidad de tiempo de
cualquier fenmeno o suceso peridico.
Ionizacin: es el proceso qumico o fsico mediante el cual se producen iones, estos son tomos
o molculas cargadas elctricamente debido al exceso o falta de electrones respecto a un tomo
o molcula neutra.
Isoterma: Laisoterma es una curva que une los puntos, en un plano cartogrfico, que presentan
las mismas temperaturas en la unidad de tiempo considerada.
Istopos: diferentes tipos de tomos de un mismo elemento cuyos ncleos difieren en su nmero
de neutrones.
Ley de beer: La ley de Beer-Lambert relaciona la intensidad de luz entrante en un medio con la
intensidad saliente despus de que en dicho medio se produzca absorcin.
Longitud de onda: La longitud de una onda es la distancia que recorre la onda en el intervalo de
tiempo transcurrido entre dos mximos consecutivos. Por ejemplo, la distancia recorrida por la
luz azul (que viaja a 299.792.458 m/s) durante el tiempo transcurrido entre dos mximos
consecutivos de su campo elctrico (o magntico) es la longitud de onda de esa luz azul.
Momento magntico: El momento magntico de espn es una propiedad intrnseca o
fundamental de las partculas, como la masa o la carga elctrica. Este momento est relacionado
con el hecho de que las partculas elementales tienen momento angular intrnseco o espn, para
partculas cargadas eso lleva inevitablemente a que se comporten de modo similar a un pequeo
circuito con cargas en movimiento.
Mufla:Es una especie de horno, con el cual se alcanzan muy elevadas temperaturas. Se usa
generalmente para carbonizar completamente sustancias orgnicas
Anlisis Instrumental
Anlisis Instrumental
1. ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometra se refiere a los mtodos cuantitativos de anlisis qumico que utilizan la
luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos
espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como espectrofotometra de absorcin
visible (colorimetra), ultravioleta e infrarroja.
1.1 FUNDAMENTO
La espectrofotometra es una de las tcnicas ms utilizadas para la deteccin especfica de
molculas, y se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su aplicabilidad a molculas de
distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, lo cual indica la absorcin y emisin de
luz a travs de ellas en forma de miles de millones de molculas energticas llamadas fotones,
los cuales contienen una energa segn la teora de Planck.
Las molculas pueden absorber energa y almacenarla en forma de energa interna (calor) esto
permite que se inicien procesos fsico-qumicos tales como la fotosntesis en plantas. La
mecnica cuntica nos dice que la luz est compuesta como ya se mencion, por fotones; cada
uno de ellos contiene energa especial:
E foton hv hc
A hv( E )
A
E ( A ) E ( A)E foton
Como la mayora se conserva, la diferencia de energa entre el estado fundamental de la
molcula A y su estado excitado A debe ser exactamente igual a la energa del fotn. Es decir,
una molcula solo puede absorber fotones cuya energa hv sea igual a la energa de un estado
molecular excitado. Cada molcula tiene una serie de estados excitados discretos (bandas) que
dependen de su estructura electrnica y que la distinguen del resto de molculas. Como
consecuencia el espectro de absorcin, es decir la luz absorbida en funcin de la longitud de
onda, constituye una verdadera seal de identidad de cada sustancia o molcula. Por lo tanto se
tiene que la absorcin de luz incrementa la energa de una molcula, y que la emisin de luz
reduce su energa.
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Anlisis Instrumental
Selector de
longitud de onda
(monocromador)
Fuente
de luz
Po
P
Muestra
Detector de
luz
b
En la figura anterior se puede apreciar el principio de la medicin espectrofotomtrica. Cuando
una muestra absorbe luz, la potencia radiante del haz de luz disminuye. La potencia radiante P
(intensidad de la radiacin despus de pasar por un medio), se evala como energa por
segundo en una unidad de tiempo por unidad de rea del haz de luz.
La grafica muestra que la luz se hace pasar por un monocromador (un prisma, una rejilla de
difraccin o un filtro) para aislar una sola longitud de onda. Esta ultima de potencia radiante Po,
incide sobre una muestra de espesor b. La potencia radiante del haz emergente es P; la muestra
puede absorber una fraccin de la luz, de manera que PP0 .
La transmitancia T, se define como la fraccin de la luz incidente que sale de la muestra.
P
Po
La absorbancia
se define como:
P
A log10 o logT
P
Cuando no se absorbe luz, P Po y entonces A 0 . Cuando se absorbe 90% de la luz,
10% de ella se transmite y P PO 10 . Con esto se tiene A 1 . Cuando solo se transmite el 1%
de la luz, A 2 .
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Anlisis Instrumental
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm
1.3 PRINCIPIO FISICO
El principio del Espectrofotmetro est basado en la Ley de Lambert-Beer, que relaciona la
intensidad de luz incidente y la de la luz transmitida, cuando es atravesada una longitud de onda
de un medio que absorbe. Si se registra la transmitancia cuando lo que realmente se desea es la
absorbancia, se puede utilizar la ecuacin de definicin anteriormente dada para convertir una en
otra y obtener la medida que se desea.
1.4 RESULTADOS
Generalmente los resultados obtenidos en graficas muestran unas respuestas dadas por la
longitud de onda del haz de luz vs la absorbancia (transmitancia deducible por formula), la cual
indica la relacin del medio (coeficiente de absorcin, ndice de refraccin, etc), esto conforme a
la ley de Beer, la cual dice que la absorbancia es proporcional a la concentracin del cromforo
absorbente y al espesor de la celda. Tambin se pueden encontrar respuestas con base en
graficas entre longitud de onda vs ndice de refraccin del medio las cuales hablan de cmo se
desviara o cambiara la longitud de onda respecto a tipo de material o medio por el cual se
desplace.
Curva de Calibracin: Con los datos de la parte recta de la curva de Ringbom se construye la
curva de calibracin Absorbancia (en la ordenada) vs. Concentracin (en laabscisa) previo ajuste
de los datos por mnimos cuadrados (que incluyen el punto 0.0, 0.0000) revisando que el
coeficiente de correlacin sea estadsticamente significativo. La grfica de la recta de calibracin
debe incluir los puntos experimentales. La recta ajustada tambin se conoce con el nombre de
curva de trabajo.
1.5 APLICACIONES
Para que un compuesto pueda ser analizado mediante espectrofotometra debe absorber luz, y
esta absorcin debe ser distinguible de otras absorciones de especies presentes en la muestra.
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
2. ESPECTROMETRIA DE ULTRAVIOLETA-VISIBLE
2.1 FUNDAMENTO DE LA TCNICA
La espectrometra de Ultravioleta Visible utiliza radiacin electromagntica (luz) de las regiones
visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico (160nm
- 780nm). La radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca
transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas.
Esta se basa en la medida de la transmitancia T o de la absorbancia A de disoluciones que se
encuentran en cubetas transparentes que tienen un camino ptico de b cm. Normalmente, la
concentracin c de un analito absorbente est relacionada linealmente con la absorbancia como
representa la ecuacin:
Esta ecuacin es una representacin matemtica de la Ley de Beer
Trmino y Smbolo*
Definicin
Nombre y smbolo alternativo
Potencia Radiante P, P0
Energa (en ergios) de la
Intensidad de la radiacin I, I0
radiacin que incide en el
detector, por cm2 y por
segundo
Absorbancia A
Densidad ptica D; extincin
E
Transmitancia T
Transmisin T
Camino ptico de la
radiacin b
Absortividada
Absortividad molar
---
l, d
Coeficiente de extincin k
Coeficiente de extincin molar
*Terminologa recomendada por la American ChemicalSociety (Anal. Chem., 1990, 62, 91)
Atenuacin de una radiacin con una potencia inicial P0 por una disolucin que contiene c moles
por litro de soluto absorbente y con un camino ptico de b cm P < P 0
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
2.3.1 Electrones , y
Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber radiacin electromagntica porque
todos contienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles de energa
superiores. A menor longitud de onda, mayor energa absorbida.
La energa para los distintos tipos de orbitales moleculares difiere significativamente. Las
transiciones electrnicas entre los distintos niveles de energa se pueden producir por absorcin
se radiacin. Son posibles cuatro tipos de transiciones: *, *, * y *.
2.3.1.1 Transiciones *
En este caso, un electrn de orbital sigma enlazante de una molcula se excita al
correspondiente orbital antienlazante mediante la absorcin de radiacin. La energa requerida
para esta transicin es grande. El metano, por ejemplo que solo contiene enlaces sencillos C-H y
que solo puede sufrir transiciones se este tipo, presenta un mximo de absorcin a 125nm.
2.3.1.2 Transiciones *
Los compuestos saturados que contienen pares de electrones no compartidos son capaces de
sufrir estas transiciones. Estas requieren menos energa que las anteriores y se pueden producir
por radiacin e la regin comprendida entre 150 y 250nm, apareciendo, la mayora de los picos
de absorcin, por debajo de 200nm.
2.3.1.3 Transiciones * y *
Esta es la ms usada en las aplicaciones de esta espectrometra porque la energa utilizada para
estos procesos produce picos de absorcin dentro de una regin espectral experimentalmente
accesible (200 a 700nm)
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
2.4 RESULTADOS
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Anlisis Instrumental
http://www.ehu.es/imacris/PIE06/web/IR.htm
3.2. EQUIPO: ESPECTRMETRO DE ABSORCIN EN EL INFRARROJO
Los equipos pueden clasificarse bsicamente en dos tipos: dispersivos y no dispersivos. Dentro
de los sistemas dispersivos que descomponen la luz policromtica que proviene de la fuente de
radiacin en longitudes de onda discretas. La radiacin entra en forma de haz estrecho y un
elemento dispersante, que puede ser un prisma o una red de difraccin, la descompone. Los
ms utilizados actualmente son ms baratos, proporcionan mejor separacin de longitudes de
onda y dispersan linealmente la radiacin.
El conjunto de sistemas no dispersivos es ms amplio debido a su mayor utilizacin actualmente.
Dispone de equipos con filtros adicionales, con filtros optoacsticos (AOTF) e instrumentos de
transformada de Fourier (FT), ambos con caractersticas bastante diferentes entre s. La
seleccin de longitudes de onda mediante filtros se realiza interponiendo materiales especficos
entre la muestra y la fuente de radiacin, permitiendo el paso de longitudes de onda selectivas.
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Anlisis Instrumental
Espectrmetro BRUKER IFS 66, es capaz de trabajar con una resolucin de hasta 1cm -1.
Dispone de una fuente de IR medio (tipo) con un rango de trabajo entre 9000-100 cm-1. La
utilizacin de un divisor de haz de KBr y un detector DLaTGS limita la obtencin de espectros de
calidad al rango 7000-400 cm-1, aunque existe la posibilidad de aumentar este rango hasta los
200cm-1 con la utilizacin de distintos divisores de haz.
3.3. PRINCIPIO FSICO
Debido a la baja intensidad de las bandas NIR, el nivel de exigencia de los espectrofotmetros
NIR, en trminos de nivel de ruido permisible y estabilidad instrumental, debe ser mayor que en
otros instrumentos, sobre todo si se pretende aplicar al anlisis cuantitativo. sta es una de las
causas de la tarda aparicin de los primeros espectrofotmetros NIR. El esquema bsico de un
instrumento NIR no difiere de cualquier espectrofotmetro. Sus componentes bsicos son: fuente
de radiacin, sistema de seleccin de longitud de onda, compartimiento de muestra y detector.
3.3.1 Fuente de radiacin
La fuente de radiacin ms utilizada es la lmpara halgena de filamento de tungsteno con
ventana de cuarzo, capaz de proporcionar un espectro continuo en la regin de 320-2500nm.
3.3.2 Sistemas de seleccin de longitudes de onda
Es el componente esencial que permite obtener la informacin espectral a cada longitud de
onda. El selector debe proporcionar un ancho de banda estrecho respecto al ancho de banda
que est midiendo y debe ser preciso y exacto para la longitud de onda analtica.
3.3.3 Compartimiento de muestra
Los instrumentos NIR permiten registrar el espectro tanto de muestras slidas, lquidas y
gaseosas. La ausencia de pretratamiento de muestra para el registro de su espectro, permite
disponer de gran cantidad de accesorios adaptables a cada situacin.
3.3.4 Detector
Es el dispositivo encargado de recibir la seal luminosa que proviene de la muestra y la
transforma en seal elctrica. Detectores habituales en espectroscopia en el infrarrojo prximo
son los construidos con semiconductores (como InGaAs, PbS, InSb, Si,). Hasta 1100nm el
semiconductor ms utilizado en los detectores es el Su, y en la regin entre 1100 y 2500nm el
material fotoconductivo ms utilizado es el PbS.
3.4. RESULTADOS
Como normalmente sucede en la escala se representa una escala lineal de nmero de onda de
unidades de cm-1. La mayora de los instrumentos modernos utilizan un microordenador con un
software verstil capaz de producir diversos formatos de seales de salida, tales como
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
4. ESPECTROMETRIA DE MASAS
4.1. FUNDAMENTO
La espectroscopia de masas es una tcnica basada en la posibilidad de separar especies
moleculares y atmicas segn su masa. Los espectros de masas se obtiene por conversin de
los componentes de una muestra en iones gaseosos que se mueven rpidamente y se separan
en funcin de su relacin masa-carga.
La espectrometra de masas atmicas es una herramienta muy verstil y til para identificar los
elementos presentes en una muestra y determinar las concentraciones de cada una de las
materias que la componen. Esta tcnica nos permite determinar prcticamente todos los
elementos del sistema peridico.
Esta tcnica ofrece numerosas ventajas frente a las tcnicas espectromtricas ya que:
Los lmites de deteccin que son, para muchos elementos, tres rdenes de magnitud
ms sensibles frente a los mtodos pticos.
No implica la absorcin o emisin de luz
Espectros notablemente ms sencillos, generalmente nicos y con frecuencia fcilmente
interpretables.
Capacidad para medir relaciones isotpicas atmicas.
Es una tcnica universal y especifica
Permite obtener informacin isotpica, estructural, energias de enlace, cintica,
fisicoqumica etc.
Es una tcnica rpida
En cambio, tambin tienen una serie de desventajas que no se pueden obviar como:
El coste del instrumento es de dos a tres veces el de los instrumentos pticos atmicos.
Es una tcnica destructiva, la muestra no se puede recuperar integra, al haber sufrido la
fragmentacin.
La deriva del instrumento puede ser del orden del 5 o 10%/hora.
Contiene unas determinadas interferencias.
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Anlisis Instrumental
www.espectrometria.com
4.2.1 Sistema de entrada de muestras
En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se convierten al estado
gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce lentamente en la cmara de ionizacin.
La finalidad del sistema de entrada es permitir la introduccin de una muestra representativa en
la fuente de iones con la mnima perdida de vaco.
4.2.2 Cmara de ionizacin
Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, tienen todas unas caractersticas
comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas transforman los componentes
de una muestra en iones. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos
(normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del analizador de masas
o sistema separador a travs del acelerador
4.2.3 Acelerador:
En el sistema acelerador las partculas ionizadas producidas por el impacto de los electrones son
obligados a atravesar una primera ranura aceleradora por una pequea diferencia de potencial.
Entre esta primera y una segunda ranura existe una diferencia de potencial muy elevada que
imprime a las partculas su velocidad final. Una tercera ranura acta como colimador del haz de
partculas
4.2.4 Analizadores
Para la separacin de iones con diferente relacin m/e se dispone de varios dispositivos. Lo ideal
es que el analizador fuera capaz de distinguir entre diferencias muy pequeas de masa.
Adems, los analizadores deberan de permitir el paso del nmero suficiente para producir
corrientes inicas fciles de medir.
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Anlisis Instrumental
4.2.5 Detector
Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual generalmente est
constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto producido por las partculas cargadas
emite electrones. Estos electrones son acelerados hacia un dinodo el cual emite varios
electrones ms al recibir el impacto de cada electrn.
28
Anlisis Instrumental
conectado el aparato recoge las distintas seales y las reproduce en forma de espectrograma,
formato de fcil interpretacin.
4.4. RESULTADOS
El espectro de masas se presenta habitualmente como un grfico de barras, en la que cada una
de ellas corresponde a un in. La informacin proporcionada incluye la relacin m/z y la
intensidad relativa de cada seal. A la ms intensa, denominada pico base, se le asigna el valor
100. Como la mayor parte de los iones formados tiene carga unidad, las relaciones m/z se
correspondes con sus masas. El in molecular es el in que resulta tras la prdida de un electrn
por parte de la molcula. Como consecuencia del bombardeo electrnico en la cmara de
ionizacin, las molculas se rompen en una serie de fragmentos, siempre que una misma
molcula se rompa en las mismas condiciones nos dar el mismo tipo y nmero de fragmentos y
constituyen la fragmentacin patrn. Gracias a esto se pueden determinar que es la muestra por
comparacin y por otra parte, la intensidad relativa de los distintos picos, permite deducir la
proporcin en que cada componente se encuentra en la muestra.
El pico del espectrograma que aparece con valor ms elevado de m/e corresponde a la molcula
ionizada sin fragmentar y recibe el nombre de masa patrn. Esta masa patrn nos permite
determinar con rapidez y precisin la masa molecular, siempre que se opere con una tensin de
ionizacin no excesivamente elevada, la cual producira la fragmentacin total de la molcula El
pico mayor del espectrograma de masa se llama pico base. Normalmente la altura de este pico
se toma como valor cien. Las intensidades de los dems picos se expresan en porcentajes de la
intensidad del pico base.
Aspecto clsico de un espectrograma de masas, en el que se sealan su pico base y su in
molecular ms importante. La tabla situada a la derecha nos indica la concentracin y la relacin
m/z de cada uno de los elementos presentes en el analito
http://mural.uv.es/caloan/
29
Anlisis Instrumental
4.5. APLICACIONES
4.5.1 Aplicaciones cualitativas
Determinacin del peso molecular de todas las sustancias que pueden volatilizarse por
la posicin del pico correspondiente a la masa patrn.
Anlisis de sangre: gracias ala rapidez del mtodo, se puede emplear incluso como
control durante un proceso quirrgico. As se puede determinar a gran velocidad las
concentraciones hemticas de monxido y dixido de carbono, oxgeno, nitrgeno,
gases anestsicos (como el NO).
30
Anlisis Instrumental
Estudiar la abundancia de istopos: Esta fue la finalidad con la que fue creada la tcnica
y en la actualidad se usa para anlisis por dilucin de istopos, estudios con trazadores
isotrpicos 5, estudiar la edad de las muestras por su proporcin de istopos con la
ventaja frente a los radiactivos que se pueden medir los istopos no radiactivos.
Las aplicaciones son tan numerosas y abarcan tantos campos que resulta complicado citarlas
todas, a continuacin veremos las ms caractersticas:
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
http://www.google.com.co/images?hl=es&q=espectrometria%20de%20absorcion%20atomica&u
m=1&ie=UTF-8&source=og&sa=N&tab=wi&biw=1024&bih=575
Es un mtodo instrumental que est basado en la atomizacin del analito en matriz lquida y que
utiliza comnmente un nebulizador pre-quemador (o cmara de nebulizacin) para crear una
niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una llama con una longitud de
trayecto ms larga. La niebla atmica es desolvatada y expuesta a una energa a una
determinada longitud de onda emitida ya sea por una Lmpara de Ctodo hueco construida con
el mismo analito a determinar o una Lmpara de Descarga de Electrones (EDL). Normalmente
las curvas de calibracin no cumplen la Ley de Beer-Lambert en su estricto rigor.
La temperatura de la llama es lo bastante baja para que la llama de por s no excite los tomos
de la muestra de su estado fundamental. El nebulizador y la llama se usan para desolvatar y
atomizar la muestra, pero la excitacin de los tomos del analito es hecha por el uso de
lmparas que brillan a travs de la llama a diversas longitudes de onda para cada tipo de analito.
En AA la cantidad de luz absorbida despus de pasar a travs de la llama determina la cantidad
de analito existente en la muestra. Hoy da se utiliza frecuentemente una mufla de grafito (u
horno de grafito) para calentar la muestra a fin de desolvatarla y atomizarla, aumentando la
sensibilidad.
El mtodo del horno de grafito puede tambin analizar algunas muestras slidas o semislidas.
Debido a su buena sensibilidad y selectividad, sigue siendo un mtodo de anlisis comnmente
usado para ciertos elementos traza en muestras acuosas (y otros lquidos). Otro mtodo
alternativo de atomizacin es el Generador de Hidruros.
5.3 PRINCIPIO FISICO
Los electrones de los tomos en el atomizador pueden ser promovidos a orbitales ms altos por
un instante mediante la absorcin de una cantidad de energa (es decir, luz de una determinada
longitud de onda). Esta cantidad de energa (o longitud de onda) se refiere especficamente a
una transicin de electrones en un elemento particular, y en general, cada longitud de onda
corresponde a un solo elemento.
34
Anlisis Instrumental
5.5 APLICACIONES
La absorcin atmica es una tcnica capaz de detectar y determinar cuantitativamente la
mayora de los elementos qumicos, por lo que sus campos de aplicacin son variados. Este
mtodo se puede aplicar para la determinacin de ciertos metales tales como: antimonio,
cadmio, calcio, cesio, cromo, cobalto, oro, plomo, nquel, entre otros. Se emplea en anlisis de
agua, de suelos, bioqumica, toxicologa, medicina, industria farmacutica, alimenticia,
petroqumica, etc.
El instrumental empleado en estos anlisis es un Espectrmetro de Absorcin Atmica. Este
equipo generalmente est compuesto por una lmpara del tipo ctodo hueco, un quemador o
mechero, compuesto a su vez por un nebulizador de la muestra, y dispositivos seleccin de
longitudes de onda (monocromador tipo rejilla de difraccin), transduccin y amplificacin (tubo
fotomultiplicador) y lectura de la seal.
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Anlisis Instrumental
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6.4 RESULTADOS
Un plasma caracterstico tiene un ncleo no transparente, blanco brillante y muy intenso, que
termina en una cola en forma de llama. El ncleo, que se extiende algunos milmetros por
encima del tubo consiste en una emisin continua a la que se superpone el espectro atmico del
argn. El origen de la emisin continua proviene aparentemente de la recombinacin de los
electrones con el argn y otros iones. En la zona situada entre 10 y 30 mm por encima del
ncleo, la emisin continua se desvanece y el plasma es pticamente transparente. Las
observaciones espectrales por lo general se hacen a una altura de 15 a 20 mm por encima de la
boina de induccin.
En esta zona de radiacin de fondo est claramente libre de las lneas del argn y resulta
adecuada para el anlisis. La mayora de las lneas ms sensibles de los analitos en esta zona
del plasma provienen de iones tales como Ca+, Ca+2, Cd+, Cr+2 y Mn+2
Las curvas de calibrado en ICP, consisten la mayora de las veces en una representacin grfica
de la intensidad de corriente o de la tensin de salida del detector en funcin de la concentracin
del analito. Con frecuencia las curvas de calibrado son lineales, sin embargo se encuentran
desviaciones de la linealidad cuando se cubren intervalos grandes de concentracin
Dado que los espectros de ICP para muchos elementos son muy ricos en lneas, se producen
interferencias espectrales debido a solapamiento de lneas. Evitar este error requiere conocer
todos los componentes que previsiblemente estn presentes en la muestra. Es de destacar que
para niveles de diez partes por billn o menos se pueden detectar ms elementos mediante
excitacin con plasma que con otros mtodos de emisin o absorcin.
Curva de calibracin con una fuente de plasma acoplado inductivamenteSKOOG 4ED PAG 285
40
Anlisis Instrumental
6.5 APLICACIONES
Las fuentes de plasma presentan algunas ventajas con respecto a los mtodos de llama y electro
trmicos. Entre estas se encuentra la menor interferencia entre elementos, que es una
consecuencia directa de sus temperaturas ms elevadas. Tambin se pueden obtener buenos
espectros para la mayora de los elementos con unas mismas condiciones de excitacin; en
consecuencia es posible registrara simultneamente los espectros para decenas de elementos.
Esta propiedad tiene especial importancia en el anlisis multielemental de muestras muy
pequeas. Otra ventaja de esta tcnica, es que permite la determinacin de bajas
concentraciones de elementos que tienden a formar compuestos refractarios (esto es,
compuestos que son muy resistentes a la descomposicin trmica o por tratamientos rigurosos)
tales como boro, fosforo, tungsteno, uranio, circonio y niobio. Por otra parte las fuentes de
plasma permiten la determinacin de no metales como cloro, bromo, yodo y azufre.
El ICP se puede usar para el anlisis cuantitativo en las siguientes reas:
Materiales naturales como rocas, minerales, tierra, aire sedimentado, agua, tejidos de planta y
animales, en las reas de geoqumica, mineraloga, agricultura forestacin, cra de animales,
ecologa qumica, ciencias ambientales, industrias alimenticias, distribucin y purificacin de
agua, para identificar Sulfuro, Boro, Fsforo, Titanio, y Zirconio, que no se pueden identificar por
el mtodo AAS.
En las Matrices Ambientales, las cuales pueden contener bajas concentraciones y pocos
elementos interferentes, han presentado dificultades histricas al determinar anlisis de
muestras. El ICP - MS fue desarrollado en 1980 y ha sido utilizado de manera exponencial en el
medio ambiental gracias a su alta sensibilidad y a sus capacidades multielemental. El ICP ofrece
la posibilidad de determinar de manera simple y directa algunos de los elementos de la tierra,
como el boro, el fsforo, y el molibdeno, a niveles no accesibles usando otros mtodos. .
El ICP - AES ha sido grandemente utilizado desde 1970 por su anlisis mltiple simultneo de
muestras provenientes del rea biolgica y del medio ambiente, despus de la disolucin. Su
excelente sensibilidad y su amplio rango de trabajo para demasiados elementos, as mismo en
conjunto con su interferencia de bajo nivel, lo hacen al mtodo ICP - AES un mtodo ideal. El
muestreo va lser en conjunto con el ICP, hacen una forma de burlar los procedimientos de
disolucin necesarios de muestras slidas antes de determinar los elementos.
6.6 APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
Las fuentes de plasma son ricas en lneas de emisin caractersticas, lo que hace que sean
tiles para el anlisis elemental tanto cualitativo como cuantitativo. Esta se utiliza principalmente
para el anlisis cuantitativo y cualitativo de muestras que estn disueltas o en suspensin en
disolventes acuosos u orgnicos tales como gelatinas, salmueras, aceites, encurtidos,
emulsiones y dems que son aplicables bsicamente en la industria alimentaria, en la
preparacin y conservacin de productos alimentarios de origen animal y vegetal.
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Anlisis Instrumental
www.wikipedia.com
Un espectrmetro de RMN consta de las siguientes partes fundamentales:
1. Un imn que genere un campo magntico estable, el cual puede ser de una intensidad
variable, definiendo la frecuencia de resonancia de cada ncleo. Generalmente se
identifica cada espectrmetro por la frecuencia de resonancia del protn.
2. Una sonda, que se sita dentro del imn, en la que se introduce la muestra y que consta
de las bobinas responsables de emitir y recibir las radiofrecuencias (RF). El nmero de
bobinas y su disposicin determinan el tipo y las aplicaciones de cada sonda.
3. Una consola en la que se generan los pulsos de RF y se controla el resto de la parte
electrnica del espectrmetro
4. Un ordenador que sirve de interfaz con el espectrmetro y con el que se analiza toda la
informacin obtenida.
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
7.4. RESULTADOS
Existen varios tipos de espectros de RMN, en funcin de la clase de instrumento utilizado, del
tipo de ncleo implicado, del estado fsico de la muestra, del entorno del ncleo en el analito y
del uso que se vaya a hacer de los datos. Sin embargo, la mayora de los espectros de RMN se
pueden clasificar como de lnea ancha o bien de alta resolucin.
7.4.1 Espectros de lneas anchas
Los espectros de lneas anchas son aquellos en los que la anchura de banda de la fuente de
lneas es suficientemente grande como para enmascarar la estructura fina debida al entorno
qumico. Los espectros de lneas anchas son tiles para la determinacin cuantitativa de
isotopos y para estudiar el entorno qumico de las especies absorbentes. Los espectros de lneas
anchas se obtienen por lo general en campos magnticos relativamente bajos.
45
Anlisis Instrumental
7.5. APLICACIONES
Puede utilizarse, entre otras cosas, para estudiar mezclas de analitos, para comprender efectos
dinmicos como el cambio en la temperatura y los mecanismos de reaccin, y es una
herramienta de valor incalculable para la comprensin de la estructura y funcin de las protenas
y los cidos nuclecos. Este tipo de espectrometra se puede aplicar a una amplia variedad de
muestras, tanto en solucin como en estado slido.
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
Figura 28-12
(a) cmara de desarrollo de flujo ascendente.
(b) cmara de desarrollo de flujo horizontal:
49
Anlisis Instrumental
Se ponen muestras en los dos extremos de la placa y el desarrollo es hacia el centro, con lo que
se duplica el nmero de ensayos posibles.
Figura 28-13
Cromatografa bidimensional (slica gel) de
algunos aminocidos. Disolvente A:
tolueno/2-cloroetanol/piridina. Disolvente B:
cloroformo /alcohol benclico/cido actico.
Aminocidos (1) cido asprtico, (2) cido
glutmico, (3) serina, (4) -alanina, (5)
glicina; (6) alanina, (7) metionina, (8) valina,
(9)
isoleucina
(10)
cistena.
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Anlisis Instrumental
http://www.laseqa.org/instal_cromacf.html
8.3. PRINCIPIO FISICO
Una de las ventajas de la cromatografa en capa fina es que no requiere un gran dispositivo
instrumental.
51
Anlisis Instrumental
Vista frontal de una placa de TLC en el momento de inicio de la cromatografa (a), durante el
desarrollo (b) y al final de la misma (c).
El punto donde se deposita la muestra se denomina origen. A continuacin, la placa se pone en
contacto con la fase mvil dentro de un recipiente cerrado. La fase mvil ha de contactar con la
placa por debajo del punto donde se deposit la muestra. La fase mvil asciende por capilaridad
por la placa y cuando llega al origen arrastra la muestra. Los diferentes analitos de la muestra
tendrn diferentes afinidades por la fase estacionaria. Los analitos ms afines a la fase
estacionaria sern ms retenidos y avanzarn ms despacio que los analitos menos afines, que
se movern ms rpidamente. Al final del proceso, los componentes de la muestra se habrn
separado sobre la base de las diferencias de afinidad por la fase estacionaria.
Tambin existe la TLC descendente. Bsicamente se opera de manera similar, pero en este
caso la placa con la fase estacionaria se coloca entre dos soportes con un ngulo de unos 45.
La parte superior de la placa est en contacto con el papel filtro sumergido en un depsito de
fase mvil. El disolvente pasa por capilaridad a la placa y baja a travs de de ella por gravedad.
Anlisis Instrumental
Para anlisis cualitativos de las posiciones de los analitos tras una separacin de TLC se utiliza
el parmetro denominado factor de retencin o . El se calcula como:
53
Anlisis Instrumental
54
Anlisis Instrumental
Una aproximacin que mejora la cuantificacin consiste en cortar con una cuchilla la porcin de
gel de slice donde se halla el analito. Tras ello, la superficie cortada se trata con disolvente para
liberar el compuesto y la mezcla se centrfuga para eliminar el gel de slice. De sta manera se
obtendr el analito en disolucin separado de la slice. Sobre sta preparacin se puede medir
con ms precisin fluorescencia, absorbancia o cualquier otra propiedad. De cualquier modo, la
precisin y la reproducibilidad de la cuantificacin continan condicionada por la aplicacin de la
muestra.
8.5.3 Aislamiento y purificacin parcial de analitos o familias de analitos de una muestra
La TLC se puede utilizar para fraccionar la muestra y separa un analito (o familia de analitos) de
una matriz compleja. Para ello, se procede de manera idntica a lo descrito en el prrafo
anterior. Para asegurar la extraccin del componente que queremos extraer es muy importante la
seleccin de la zona del gel sobre la que se acta. No podemos hacer revelados que destruyan o
modifiquen el analito, por lo que la visualizacin de sustancias fluorescentes con una lmpara de
luz UV ser una tcnica apropiada de deteccin. En caso de no disponer de una tcnica de
identificacin de la zona de inters, se dividir la placa en varias zonas y el tratamiento se
aplicar a cada una de ellas.
8.6. APLICACIONES AGROINDUSTRIALES
Algunas de las aplicaciones que tiene la cromatografa de capa fina en alimentos son la
determinacin de sulfonamidas en hgado y msculo de bovinos, ovinos, equinos, porcinos y
aves por cromatografa capa fina-densitometra, se establece con el fin de asegurar a los
consumidores el suministro de alimentos que no rebasen los lmites mximos permisibles de este
tipo de productos.
Ciertas funciones se realizan con el fin de tener en cuenta que el consumo de alimentos
contaminados de origen animal implica diversos riesgos para la salud humana que dependen de
la presencia de los residuos nocivos, que entre los beneficios que reporta el hecho de aplicar las
pruebas que permiten la deteccin de este tipo de residuos, se encuentra el de participar con
mayor confianza en el comercio internacional de alimentos, contando de esta forma con las
bases suficientes para certificar la inocuidad de los productos alimenticios crnicos, tanto
importados como exportados.
Una de las aplicaciones de la cromatografa de capa fina al campo textil es en el campo de los
colorantes, en los cuales se logran separaciones insospechadas y en tiempos de 15-30 minutos,
pero su utilidad no se cie a la separacin de colorantes sino tambin a productos auxiliares de
todo tipo, hidrolizados de fibras naturales del tipo de Mohair, Lana, etc. productos naturales
extrados de la lana (lanolina, colesterol, lanosterol), fungicidas bactericidas, blanqueadores
pticos, etc.
55
Anlisis Instrumental
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Anlisis Instrumental
Anlisis Instrumental
analitopolar es retenido por la fase estacionaria polar. La adsorcin aumenta con la polaridad del
analito y la interaccin entre analito y fase estacionaria. Esto incrementa el tiempo de elucin. La
fuerza de interaccin depende no solo de los grupos funcionales, sino tambin de factores
estricos e ismeros estructurales. El uso de disolventes polares disminuye el tiempo de
retencin, mientras que disolventes hidrfobos aumentan el tiempo de retencin. Algunos solutos
polares interaccionan con la fase estacionaria y desactivan la columna.
9.3.2 Cromatografa de fase inversa
Este tipo de HPLC es el ms comn. En esta tcnica se usa una fase estacionaria no polar y una
fase mvil moderadamente polar. La fase estacionaria tpica es silicio tratado con RMe 2SiCl,
donde R es una cadena lineal con un grupo alcalino.La adicin de disolventes polares
incrementa el tiempo de retencin y aadir disolventes hidrofbicos lo disminuyen. El tiempo de
retencin es mayor para molculas no polares. El principio bsico de este mtodo est basado
en las interacciones del disolvente polar, el analito no polar y la fase estacionaria no polar.
Las caractersticas del analito son importantes para sus propiedades de retencin. Las molculas
muy grandes pueden causar que la interaccin no sea completa. El tiempo de retencin aumenta
con el rea hidrofobicidad, que es inversamente proporcional al tamao del soluto. Los
componentes ramificados eluyen ms rpido porque el rea total esta disminuida.
Hay otros modificadores de la fase mvil que afectan a la retencin del analito. Aadir sales
inorgnicas causa incremento lineal en la tensin superficial de soluciones acuosas,
incrementando el tiempo de retencin.
El pH tambin es importante porque modifica la hidrofobia del analito. Por eso se suele usar un
buffer como fosfato sdico para controlar el pH. Un cido orgnico como cido frmico o cido
trifluoracetico. Sirven para muchas cosas, controlan el pH, neutralizan cualquier carga residual
del silicato en la fase estacionaria y acta como formador de pares inicos para neutralizar la
carga del analito. Los efectos varan pero aumentan la calidad de la cromatografa.
9.3.3 Cromatografa de exclusin por tamao
Tambin conocida como cromatografa de gel permeante o cromatografa de gel filtrante. Separa
las partculas en funcin del tamao. Es una cromatografa de baja resolucin y sirve para
determinar estructuras terciarias y cuaternarias de protenas y es la tcnica comn para
averiguar el peso molecular de polmeros sintticos y naturales.
9.3.4 Cromatografa de intercambio inico
La retencin est basada en la atraccin entre iones del soluto y la carga complementaria de la
fase estacionaria. Si los iones del soluto y la fase estacionaria tienen la misma carga, son
excluidos.Los intercambiadores de iones favorecen la unin de iones de mayor carga y radio
inferior. Un incremento en el contra-in (con respecto a los grupos funcionales de resinas)
reduce el tiempo de retencin. Un incremento del pH reduce el tiempo de retencin en el
intercambio catinico, pero bajar el pH reduce la retencin en intercambio aninico.
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Anlisis Instrumental
Cromatogramas de una misma muestra, obtenidos con partculas de slice, de (a)10m y (b)5m
de dimetro. (Tomado de R.E. Mayors, J. Chromatogr. Sci., 11,88 (1973))
9.5 APLICACIONES
Es incuestionable que la cromatografa de lquidos de alta resolucin es la tcnica de separacin
ms ampliamente utilizado con unas ventas anuales de equipos de HPLC que se aproximan a la
cifra del billn de dlares. Las razones de la popularidad de esta tcnica son su sensibilidad, su
fcil adaptacin a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separacin de
especies no voltiles o termolbiles y, sobre todo, su gran aplicabilidad a sustancias que son de
primordial inters en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general.
Algunos ejemplos de esos materiales incluyen los aminocidos, protenas, cidos nucleicos,
hidrocarburos, carbohidratos, drogas, terpenoides, plaguicidas, antibiticos esteroides, especies
organometlicas y una cierta variedad de sustancias inorgnicas.
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http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatografia_de_gases
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Anlisis de Cationes (Li+, Na+, NH4+, K+, Mg2+, Ca2+) en matrices acuosas.
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Anlisis Instrumental
Anlisis de Aniones (F-, Cl-, NO22-, Br-, NO33-, PO43-, SO42-) en matrices acuosas.
Anlisis Instrumental
En general, las resinas de intercambio inico operan en columnas, para as favorecer el proceso
de intercambio, parecido a la destilacin o la destilacin en bandejas. la reaccin de intercambio
se desplaza en el lecho de resina.
Al producirse el intercambio inico, la capacidad de resina comienza a decrecer debido a que
posee una capacidad limitada para la remocin de iones de las soluciones y muestras analizadas
y debido a esto, en un momento dado habr cedido la mayora de sus iones de sustitucin y se
producir un cierto pase de iones no deseados en el agua producida y se dice que esta resina
est agotada o saturada de los iones que ha atrapado. Por este motivo, cuando se disea una
columna de intercambio inico, se establece a priori la concentracin mxima admisible de iones
indeseables en la salida del proceso. Cuando se llega a la concentracin pre establecido se
debe proceder a regenerar la resina, para reutilizarla en un nuevo ciclo.
El tiempo de elusin (dato conocido), o tiempo que tarda un ion en pasar a travs de la columna,
vara para cada especie, lo cual implica que saldrn de la columna en momentos diferentes. En
el extremo de la columna hay un sensor que mide la conductividad provocado por los iones que
van saliendo, lo que est relacionado directamente a la concentracin de cada especie.
Finalmente, los datos son entregados en un grfico tiempo v/s voltaje, en donde la concentracin
de iones en un momento determinado est representada por la altura y la anchura de los picos
del grfico, y puede ser correlacionada con la concentracin de una especie en particular en la
solucin de muestra.
67
Anlisis Instrumental
11.4 RESULTADOS
En estos grficos se visualizan los datos de salida tpica de una cromatografa de iones:
Esta cromatografa de iones muestra datos de un anlisis de cationes de aguas glaciales. Cada
pico representa la concentracin de cada catin. Las concentraciones de iones pueden ser
calculadas usando el rea bajo cada pico, donde un rea ms grande tiene correlacin con una
concentracin ms alta de una especie de ion particular. La mayora de las mquinas de
cromatografa inica proporcionan el software que calcula esta rea, luego los usuarios pueden
convertirla a partes por milln (ppm) u otra cantidad.
11.4.1 Preparacin de la muestra
Muestras lquidas: antes del anlisis el lquido de muestra debe ser filtrado para eliminar los
sedimentos y otras partculas, as como para limitar las posibilidades de alteracin microbiana.
Las muestras acuosas deben ser recolectadas con una jeringa estril o con una botella la cual
debe ser enjuagada tres veces con la muestra de agua y luego ser filtrada a travs de un filtro de
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Anlisis Instrumental
0.45um (o menos). El frasco de coleccin, de la misma manera debe ser enjuagado tres veces
con el lquido filtrado antes de llenarlo con la muestra. Las muestras deben ser almacenadas el
fro hasta que ellas puedan ser procesadas. La muestra mnima requerida para el anlisis es
aproximadamente 5mL, sin lmites mximos.
Muestras slidas y lquidos orgnicos: Muestras slidas se pueden extraer con agua o cido
(cationes) para eliminar los iones de la superficie. Muestras lquidas tambin deben ser filtrada y
almacenada en fro hasta el anlisis se puede realizar. El mnimo de la muestra necesaria para
una slida muestra es de aproximadamente 2-3cm en el caso de los slidos, sin lmites
mximos.
11.4.2 Costos
Un estudio de aniones, visto en la pgina del SERNAGEOMIN, cuesta alrededor de 0,65 UF. El
costo de la mquina, por otro lado puede estar alrededor de US$ 40.000, para los equipos ms
bsicos, pero un equipo de ltima generacin puede costar ms de US$ 100.000
11.5 APLICACIONES
11.5.1 Desionizacion: (Aguas desionizadas o desmineralizadas)
La desionizacin supone la eliminacin de sustancias disueltas cargadas elctricamente
(ionizadas) sujetndolas a lugares cargados positiva o negativamente en una resina al pasar el
agua a travs de una columna rellena con esta resina. Este proceso se llamaintercambioinicoy
se puede usar de diferentes maneras para producir agua desionizada de diferentes
calidades.Las impurezas inicas del agua pueden eliminarse haciendo circular el lquido a travs
de una resina intercambiadora de aniones en la forma OH y de una resina intercambiadora de
cationes en la forma H . Supngase por ejemplo que se encuentra Cu( NO3 )2 en la solucin. La
resina intercambiadora de cationes fija Cu 2 y lo sustituye por 2H . La resina in intercambio
anionico fija NO3 y lo sustituye por OH . El eluato es agua pura o desionizada.
intercambiodelionporH
Cu 2
2 H
puraH 2O
intercambiodelionporOH
2 NO32
2OH
69
Anlisis Instrumental
Las muestras (soluciones) se hacen pasar a presin por una columna cromatogrfica. All los
iones son adsorbidos por los componentes de la columna (resina). Luego se agrega un lquido
de extraccin inica, conocido como eluente, el cual al traspasar la columna hace que los iones
absorbidos comiencen a separarse de sta.
11.6.1 Tratamiento de aguas duras
Esta tcnica se aplica para eliminar la dureza de las aguas tanto domesticas como industriales
para el posterior tratamiento por escaldado de alimentos vegetales y preparacin de productos
en conservas.
11.6.1.1 Principio:
Ciertos compuestos tienen la propiedad de fijar los iones alcalinotrreos (Ca, Mg, etc.)
sustituyndolos por iones de sodio. Anteriormente se les daba el nombre de zeolicos.
Cuando se hace pasar en agua por lecho de estos intercambiadores de iones de sodio, las sales
alcalinotrreas que contiene esta agua se transforma en sales de sodio. El lecho permutante se
hace cada vez ms activo a medida que el contenido en calcio y magnesio del intercambiador
aumenta. En estas instancias, ablandado cierto volumen hay que proceder a una regeneracin
ya mencionada anteriormente que se efecta por el paso de una solucin de cloruro de sodio a
travs del lecho de intercambio. Despus del tratamiento, la resina generada recupera su
actividad inicial y el ciclo puede volver a repetirse cclicamente.
Actualmente, la resinas de intercambio inico ms empleadas son las resinas orgnicas de
sntesis, del tipo poliestireno y divinilbencenosulfonado. Estas resinas, destinadas para el
ablandamiento del agua son llamadas catinicas fuertes, y se presentan en granos de pequeo
dimetro y en el mercado existen diversas marcas y composicin.
11.6.1.2 Funcionamiento
Actualmente los ablandadores se construyen de Polister Reforzado de Fibra de Vidrio (PRFV).
Con recubrimiento interno de polietileno, resistente a la corrosin por el cloruro de sodio y a la
presin. Y en su interior contienen el lecho de resina.Los dispositivos de control varan, para
asegurar y verificar la secuencia de trabajo, es decir, ablandamiento, contra-lavado
regeneracin, lavado final, etc. sea por control manual, automtico o semiautomtico. Llevan
tambin un recipiente (tanque salero), en el cual se disuelve la solucin concentrada de cloruro
de sodio necesaria para la regeneracin.
Las distintas etapas del proceso de ablandamiento son:
1. Durante una primera fase, el agua atraviesa el lecho de resina, donde pierde sus iones
de calcio y magnesio, sustituyndolos por iones de sodio.
2. Cuando la resina est saturada, se favorece su desbloqueo por una corriente de agua a
fin de facilitar la regeneracin.
3. En esta tercera etapa, se hace pasar lentamente la salmuera a travs del lecho de
resinas, se obtiene una solucin salina de sales de calcio y magnesio, y la resina se
encuentra nuevamente cargada de sodio.
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Anlisis Instrumental
Las partculas cargadas negativamente se unen a la matriz solida positivamente y son retenidas.
Mientras tanto, las partculas con carga positiva son rechazadas de la matriz y son
eluyndose.Para regenerar la matriz, se eluyen las partculas retenidas haciendo circular una
solucin salina.
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Anlisis Instrumental
CONCLUSIONES
Las diferentes tcnicas instrumentales que existen en la actualidad, permiten disponer de una
gama amplia de opciones para afrontar de manera integral un problema analtico en la
agroindustria.
Las tcnicas cromatogrficas individualmente, no son capaces de suministrar una identificacin
inequvoca de un compuesto particular y la confirmacin por tcnicas especficas como la
espectrometra de masas es a menudo obligatoria.
Las tcnicas cromatogrficas tanto en fase gaseosa como lquida, solas, combinadas, o
acopladas con otros equipos, son las ms utilizadas para la identificacin y cuantificacin de
compuestos aromticos de la atmsfera.
Las tcnicas espectromtricas tienen gran aplicabilidad en la determinacin de compuestos
orgnicos e inorgnicos, y son las ms utilizadas entre todas las tcnicas de anlisis cuantitativo.
Los mtodos de anlisis instrumental, hacen parte fundamental de mltiples operaciones
unitarias en el campo agroindustrial.
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Anlisis Instrumental
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Interamericana, Madrid, 2001
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