Mtodos rpidos alternativos a la ISO

6579 para el anlisis de Salmonella

Alfredo Corujo Fernndez

Project Manager Food Safety
Nutreco Espaa

TEMAS

Mtodos rpidos: Consideraciones generales

Sistemas basados en pruebas ELISA:

ELFA

VIAS

DIFUSIN

Sistemas basados en, pH (movilidad)

Sistemas basados en separacin Inmunomagntica

Sistemas basados en Bacterifagos

Sistemas basados en Hibridacin

Sistemas basados en PCR

Sistema serotipado basado en microarrays

Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR

Tendencias futuras en la deteccin de patgenos: Biosensores

Mtodos Rpidos: Consideraciones generales

Se puede decir que mtodo rpido es aquel que es
ms rpido, sencillo o confiable que lo convencional.
Clasificacin en reas de acuerdo a lo que se busca:
Sistemas para facilitar la toma de muestras
Mtodos para ayudar al procesamiento de las muestras
Sistemas de cuantificacin microbiolgica
Mtodos para identificacin y cuantificacin de microorganismos
Sistemas especiales para anlisis de muestras de aguas, ambientales y
superficies
Sistemas de identificacin mediante mtodos moleculares
Mtodos inmunolgicos para deteccin y/o cuantificacin de microorganismos
Otros mtodos miscelneos

Mtodos Rpidos: Consideraciones generales

CARACTERISTICAS DE UN MTODO RPIDO IDEAL
Preciso
Rpido y productivo
Econmico
Aceptable
Realizacin simple
Entrenamiento
Reactivos comunes
Reputacin de la compaa
Buen servicio tcnico
Requerimientos de espacio y utilidad ptimos

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

Valores para el control negativo: OD 0.030

Valores para el control positivo: OD 0.900-1.700.
Se considera la muestra POSITIVA: OD 0,200.
Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

ASSURANCE GOLD SALMONELLA EIA
Resultados el da siguiente
Para alimentos procesados. Alimentos crudos
&
altamente
contaminados
necesitan
incubacin adicional de un da al otro.
Dos opciones para
resultados del test:

lectura

de

los

Los resultados pueden ser ledos visualmente

o por instrumentos con lectora de microplaca.

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

REVEAL (Neogen)

Reveal SE

Reveal

Reveal 2.0

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

Singlepath (Merck)

Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

VIP (Biocontrol)

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (ELFA)

Sistema VIDAS (Biomerieux)

Salmonella
Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales (Calzas,
Heces....)

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS VIA
Sistema TECRA (Biotrace)
Salmonella
Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales L+D

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN INMUNOCONCENTRACIN + ELISA (ELFA)

Sistema VIDAS (Biomerieux)

Salmonella
Matrices:
Ingredientes
Alimentos

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (difusin)

1-2 TEST (Biocontrol)

Salmonellas mviles
Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN, pH (MOVILIDAD)

OSRT (OXOID)
Salmonellas mviles
Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales
Cada test contiene 2 tubos :
Tubo A (Azul) contiene Rappaport- Vassiliadis modificado como medio selectivo,
y Lysine Iron Cystine Rojo neutro como medio indicador.
Tubo B (Rojo) contiene Lysine Deoxycholate modificado medio selectivo y
Brilliant Green modificado como medio indicador.
Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA

Sistema DYNAL BIOTECH

(Dynabeads)
Salmonella spp+
Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales L+D

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA

Sistema Pathatrix

Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales L+D
Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

CONFIRMACIN

VIDAS UP
SALMONELLA

Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras L+D

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

RapidCheck Select S.enteritidis (SDIX)

Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

RapidCheck confirmacin S.enteritidis (SDIX)

Confirmacin de cepas
S. enteritidis

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIN
HybriScan Salmonella (Sigma- Aldrich)

Muestras con OD% < 10 son consideradas negativas.

Muestras con OD% > 10 < 20 son consideradas dudosas.
Muestras con OD% 20 son consideradas positive.
Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIN
Lumiprobe 24 (EUROPROBE)

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIN
GeneQuence (NEOGEN)

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PCR

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN Real Time PCR (BAX System)

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN RT- PCR

MX3005P
(STRATAGENE)

LIGTHCYCLER
(ROCHE)
iQ-CHECK
ABI PRISM 7900HT

(BIORAD)

(APPLIED BIOSYSTEMS)

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PCR (Assurance GDS)

Sistema Multiplex (Biocontrol):

Matrices:
Ingredientes
Alimentos
Muestras ambientales
Combina concentracin de muestra y deteccin de DNA

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PCR (Led Active Blue)

Sistema Fotoactivacin ( ib-Applied science):

EMA:Ethidium bromide monoazide
PMA: propidium monoazide

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

SISTEMAS SEROTIPADO BASADO EN MICROARRAYS

PREMITEST SALMONELLA

AT READER

CHECK- POINTS

Agriculture R&D

Mtodos alternativos para la deteccin de Salmonella

Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR
Muestra positiva

REP-PCR

Identificacin cepas de Salmonella.

Indentificacin de fuentes de contaminacin ambiental
Agriculture R&D

Tendencias futuras en la deteccin de patgenos

SISTEMAS BASADOS EN BIOSENSORES
Staphylococcus aureus
Salmonella spp.
E. coli
Yersinia enterocolitica,
Bacillus cereus
Clostridium perfringens
Listeria monocytogenes
Shigella spp.

Oligonucleotidos especficos de virulencia

E.coli O157:H7 (hly A, eae A)
Salmonella spp (inv A, agf B)

Vibrio spp.
Campylobacter

Agriculture R&D

CONCLUSIONES

Existen diferentes mtodos alternativos ms rpidos que la ISO.

La eleccin del mtodo depender de la matriz a analizar.

El mtodo seleccionado debera estar validado para la matriz

problema.

Para matrices muy contaminadas se recomiendan protocolos de 48

horas.

Existen pocos mtodos alternativos para matrices procedentes de la

produccin primaria, se necesitan mtodos rpidos para este tipo de
muestras.

Las industrias procesadoras de alimentos deberan implementar

mtodos alternativos validados de cara a cumplir la legislacin futura
en cuanto al control de Salmonella en producto final.

MUCHAS GRACIAS

Agriculture R&D