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Procesamiento de Espectros de NMR Por MestreC
Procesamiento de Espectros de NMR Por MestreC
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Gua bsica para principiantes
Introduccin
El procesamiento Off-line de los datos de los experimentos RMN es la tendencia actual en
el mundo porque ofrece varias ventajas. Primero el computador que controla el equipo
puede dedicarse a su labor principal el registro de espectros, lo que contribuye a un mayor
nmero de muestras procesadas por unidad de tiempo evitando prdidas de tiempo en
procesamiento de datos o por bloqueo del sistema; adicionalmente el Qumico o la persona
que analiza los espectros cuenta con una serie de herramientas que le proporciona el
Software que facilita considerablemente su tarea disponiendo del tiempo que requiera,
ampliaciones, etc.
Vale la pena aclarar que para procesar los espectros con cualquier Software debemos tener
algunos conocimientos bsicos de la tcnica de Resonancia Magntica Nuclear. Esta gua
solo pretende poner al alcance de los usuarios los procedimientos elementales para el
procesamiento de las FIDs utilizando el programa MestRe-C versin 3.4.0, un software
gratuito desarrollado por la Universidad Santiago de Compostela para el tratamiento de los
datos obtenidos por los equipos de RMN.
Para obtener informacin detallada de las capacidades del programa, recomendamos leer la
gua que acompaa el Software al igual que los archivos de ayuda.
Zero Filling
Apodization
Transformada de Fourier
Correccin de Fase
Calibracin
Peak Picking
Integracin
El primer paso es abrir el archivo que contiene los archivos con los datos adquiridos por
el equipo. Para hacerlo, buscamos File/Import (Ctrl + I) o presionamos el botn de la
esquina superior izquierda.
A continuacin aparecer el dilogo de bsqueda tpico de
las aplicaciones bajo Windows, en l buscaremos el
archivo que contiene la FID. Si sus datos estn en un CD
la ruta sera D:\Nombre\nmero\fid. En donde D:\ es el
nombre de la unidad que contiene los datos, en su caso
puede ser otra letra; Nombre es el nombre de la carpeta
que contiene los datos de todos los experimentos y puede
ser el mismo nombre del usuario o el nombre de la muestra. nmero es el nombre de
la carpeta que contiene el experimento (existirn tantas carpetas numeradas como
experimentos hayan sido realizados a la muestra). Por ejemplo la carpeta nmero 1
puede contener los datos del espectro RMN1H, la carpeta 2 los datos del espectro
RMN13C y as sucesivamente.
Las carpetas que contienen datos de experimentos unidimensionales se diferencian
porque en su interior se encuentra un archivo denominado fid; para determinar el tipo de
Una FID (Free Induction Decay) es la suma de todas las seales resonantes emitidas por
el ncleo activo en el dominio del tiempo despus de ser excitado por el pulso de
radiofrecuencia; pero las seales de radio son seales continuas por lo que el equipo
durante la adquisicin realiza una conversin anlogo a digital utilizando un nmero
La resolucin digital no tiene nada que ver con la resolucin del espectro, esta depende del equipo, del
tiempo de adquisicin y otros parmetros experimentales.
como mximo valor 16, si introducimos un valor mayor, el programa ajusta este valor
automticamente a 16.
Basis points: (Puntos base) Corresponde al nmero de buenos puntos experimentales
que van a ser tenidos en cuenta dentro del clculo, debe ser al menos 2 o 3 veces mayor
que el nmero de coeficientes. El programa ajusta este valor automticamente.
Debemos tener en cuenta que el tiempo requerido para este proceso depende del valor de
Cm (Coefficients); es comn bloquear los computadores cuando en este parmetro se
introducen valores mayores a 8; un valor adecuado para la mayora de los espectros es 4.
estn
El paso final es oprimir el botn Apply along t1 tras lo cual observaremos el espectro,
aunque con un aspecto extrao porque se encuentra desfasado.
La correccin de fase es el proceso en el cual se mezclan las partes real e imaginaria del
espectro para que el espectro tome la forma convencional. La correccin esta compuesta
por 2 componentes; una correccin de orden cero (0) independiente de la frecuencia y
una correccin de primer orden (1) dependiente de la frecuencia. El procedimiento en
s consiste en multiplicar cada punto espectral n por el nmero complejo ei(0+(n-j)1/N).
de
fase
manual,
este
Ahora debemos ajustar los valores para la correccin de orden cero y la correccin de
primer orden. Podemos hacerlo con los controles que aparecen debajo de cada uno de los
relojes o de una forma ms rpida simplemente haciendo clic con el botn izquierdo
dentro del interior del cuadro de dilogo, mantener oprimido el botn y arrastrar el
mouse con lo que ajustaremos el valor para la correccin de orden cero.
El aspecto del espectro va cambiando, de tal forma que podremos observar lo que est
ocurriendo y detenernos cuando todas las seales son simtricas y se encuentran en la
posicin correcta. Por el mismo procedimiento, pero utilizando el botn derecho del
mouse podemos cambiar el valor para la correccin de fase de primer orden.
Para cada t, obtenemos el valor de la operacin calculando el rea bajo el producto entre la
funcin f y una versin circunvolucionada de g, desplazada por t unidades hacia la derecha en
el eje de lambda.
seal de referencia damos clic en OK con lo cual todos los desplazamientos de las
seales restantes sern calculados en base a esta seal de referencia.
Dentro de MestRe-C tenemos disponibles una serie de controles que nos permiten
manipular grficamente el espectro. Es decir aumentar o decrecer la intensidad de las
seales, ampliar una regin determinada, cambiar las unidades de los ejes, desplazarse
sobre el espectro, etc. Es conveniente revisar primero estas funciones y familiarizarnos
con ellas antes de efectuar los procedimientos finales del procesamiento. Podemos
acceder fcilmente a estas funciones a travs de los botones de la barra de herramientas.
Al colocar el mouse sobre los mismos aparece una descripcin de la funcin que realiza,
ninguno de ellos es complicado de manejar por lo que los describiremos detalladamente.
MestRe-C posee un comando automtico para la integracin de los espectros pero que
recomendamos no utilizarlo, porque solo funciona bien en espectros muy limpios y bien
resueltos adems porque el procedimiento manual es interactivo y muy sencillo.
Como sabemos los valores de las
integrales son valores relativos, el
programa toma coma referencia el
valor del rea de la primera seal
que
integremos
le
asigna
otras
seales
por
el
mismo
trabajar
con
las
integrales.
All
Podemos acceder a otras opciones relacionadas con el formato a travs del men
Options.
Hasta aqu hemos procesado el espectro a lo largo de la coordenada de tiempo t2, ahora
volvemos a seleccionar la opcin Fourier Transform... y repetimos el procedimiento
anterior; es decir cambiamos Size a un valor mayor, dejamos lo dems como est y
damos clic en el botn Apply along t1. Terminada la transformada de Fourier ya
podremos visualizar el espectro.
La correccin de fase solo necesitaremos utilizarla en aquellos espectros sensibles a fase
(NOESY, ROESY, etc.) y lo observaremos fcilmente, porque al aplicar la transformada
de Fourier el espectro tendr un aspecto muy similar al siguiente:
de
espectros
incrementar
el
nmero
de
Increase
Intensity...
Decrease
calibrar
este
espectro
simplemente
del mouse nos ubicamos en el centro del cross point que queremos referenciar y
soltamos. En el cuadro de dilogo que aparece introducimos los nuevos valores para las
seales tomados de los espectros unidimensionales.
Ahora aunque se observa que el cross point que hemos utilizado para la calibracin se ha
desplazado a los nuevos valores, los espectros unidimensionales an aparecen
desplazados. Para que estos se ubiquen en la posicin correcta debemos repetir el
procedimiento con el que instalamos los espectros unidimensionales, tras lo cual
observaremos el espectro correctamente.
Observaciones adicionales
Al copiar los espectros como metafiles se producen algunos cambios el formato,
pero que si los manejamos convenientemente, podemos pegar los espectros como
imgenes directamente en Microsoft Word u otro programa.
Al copiar los espectros como mapas de bits, se copia tal cual lo observamos en la
pantalla incluido el color, por lo que se recomienda crear nuevos estilos que no
atenten contra la tinta de color de las impresoras antes de utilizar este mtodo
para exportar grficas.
El mejor mtodo par incluir los espectros en trabajos, tesis, etc. Consiste en
imprimir primero las pginas en el editor de texto (Microsoft Word u otro) con la
paginacin, marcos etc. y luego en las hojas formateadas imprimir los espectros.
No es conveniente utilizar el comando deshacer, porque no funciona para
muchas de las opciones, especialmente en las de manipulacin grfica y casi
siempre deshace operaciones matemticas como la transformada, el fasado o la
correccin de lnea base.
Recordar el programa es una distribucin gratuita hasta la versin 3.4; la nueva
versin 3.5 es un demo que aunque funciona ligeramente mejor expira tras 90
das de uso, por lo que no le podemos pedir que funcione completamente bien.