Determinacin de Mesofilos

Materiales:
2 tubos de ensayo con tapas
1 matraz
2 pipetas de 1ml y 5ml
1 propipeta
1 esptula
1 balanza
1 botella de vidrio
1 probeta de 100ml
Agua destilada
Reactivos:
Agar Plate Count
Peptona
Mtodo:
La preparacin de la muestra se realiz segn la metodologa de la
Direccin General de Salud Ambiental (DIGESA). Se homogeneizaron
10gr de la muestra en 90ml en una solucin de agua peptona, se
procede a realizar las diluciones en dos tubos de ensayo en 9ml de la
preparacin de la muestra y se marc a cada una de las diluciones
10 -1, 10-2 y 10-3.
Siembra:
A partir de la serie de diluciones se deposita con una pipeta esteril
1ml placas Petri por duplicado. Seguidamente se vaco el AGAR PLATE
COUNT entre seis placas Petri esterilizada. Homogenizar la mezcla
cuidadosamente con movimientos circulares para obtener colonias
dispersas.
Por ultimo debemos incubar las placas Petri invertida a 37 C por 24 a
48 h. Despus de la incubacin, contar todas las colonias
desarrolladas en las placas seleccionadas.

Determinacin de Escherichia Coli

Materiales:
20 tubos de ensayo con tapas
1 matraz
1 botella de vidrio
2 placas Petri
1 propipeta
9 pipetas de 5ml y 1ml
1 balanza
1 esptula
1 haz de siembra
18 tubitos dulkan
1 probeta de 100ml
Reactivos:
Agua destilada

Caldo lauril sulfato

Caldo de escherichia coli
Peptona
La preparacin de la muestra se realiz segn la metodologa de la
Direccin General de Salud Ambiental (DIGESA).Se homogeneizaron
10gr de la muestra en 90ml en una solucin de agua peptona, se
procede realizar las diluciones en dos tubos de ensayo estril en 9ml
de la preparacin de la muestra y de ah se marc a cada una de las
diluciones 10-1, 10-2 y 10-3.
Siembra
Determinacin del Nmero Ms Probable (NMP)
1) Prueba presuntiva: Siembra en tubos
Se prepararon 3 bateras con las diluciones 10 -1,10-2 y 10-3 en cada
tubo se deposit 1ml de la muestra, despus debemos colocar en
cada tubo ensayo un tubito durham invertido para determinar las
heterobacterias y seguidamente se vaco CALDO LAURIL SULFATO
10ml en cada tubo de ensayo. Por ultimo incubar a 37 C por 24 a 48
h. Luego de este periodo de tiempo se agit suavemente cada tubo y
se observ la aparicin de gas y turbiedad.
2) Prueba confirmativa:
Se prepararon 3 bateras con las diluciones 10 -1,10-2 y 10-3en cada
tubo de ensayo se deposito1ml de la muestra, despus debemos
colocar en cada tubo ensayo un tubito durham invertido para
determinar las heterobacterias y seguidamente se vaco caldo E.coli
10ml en cada tubo de ensayo, por ultimo incubar por un periodo de
44.5c por 24-48h.Despus se procede realizar las pruebas
bioqumicas que son por INVIC, TSI Y LIA.
3) Prueba determinativa: Siembra por estras de tubos
positivos en agar EMB
De los tubos positivos obtenidos en la prueba confirmativa, se lleg
realizar el preparado del AGAR EMB y seguidamente se vaca entre
dos placas Petri esterilizada y cada una se divide en 4 partes (para
cada tubo) y se realiz el mtodo de siembras por estras y se
utiliza el haz de siembra, por ultimo debe incubar 37c por un periodo
24-48h.

Determinacin Staphylococcus
Materiales:
2 tubos de ensayo con tapas
1 matraz
1 botella de vidrio
1 probeta de 100ml
6 placas Petri
1 propipeta
1 esptula

1 esptula de Drigalski
6 pipetas de 5ml y 1ml
1 balanza
Reactivos:
Agua destilada
Peptona
Agar baird parker
Yema de huevo
Teluriko de Potasio
Mtodo
La preparacin de la muestra se realiz segn la metodologa de la
Direccin General de Salud Ambiental (DIGESA). Se homogeneizaron
10gr de la muestra en 90ml en una solucin de agua peptona, se
procede realizar las diluciones en dos tubos de ensayo estril en 9ml
de la preparacin de la muestra y de ah se marc a cada una de las
diluciones 10-1, 10-2 y 10-3.
Siembra
Donde se prepara el AGAR BAIRD PARKER de ah se incorporar 3ml de
la yema de huevo con telurito potasio y despus se llev a esterilizar
el agar por un periodo 15 minutos en una jarra elctrica. Se dej
enfriar hasta 45-50C para vaciar el agar entre las 6 placas Petri
esterilizadas. . Despus se deposita 1ml de cada dilucin en placas
Petri estriles y de ah difunda la muestra con suavidad sobre el agar
utilizando la esptula Drigalski.
Se rotula las placas, se voltean y se empaquetan rotuladas parar
diferenciar la dilucin y finalmente se llev a incubar a 37C por 24
-48horas.

Determinacin Salmonella

Determinacin Hongos y Levaduras

Materiales:
2 tubos de ensayo con tapas
1 matraz
1 botella de vidrio
6 placas Petri
6 pipetas 5ml y 1ml
1 propipeta
1 esptula
1 esptula Drigalski
1 probeta 100ml
1 balanza
Reactivos:
Agua destilada
Peptona
Agar Sabouraud
Mtodo
La preparacin de la muestra se realiz segn la metodologa de la
Direccin General de Salud Ambiental (DIGESA). Se homogeneizaron
10gr de la muestra en 90ml en una solucin de agua peptona, se
procede realizar las diluciones en dos tubos de ensayo estril de la
preparacin de la muestra y de ah se marc a cada una de las
diluciones 10-1, 10-2 y 10-3. De la solucin obtenida del tubo 1 tomar
un mililitro y transferirlo al segundo tubo, del segundo tubo tomar 1ml
y eliminarlo al lavadero. Donde se prepara el AGAR Sabouraud se
llev a esterilizar el agar por un periodo 15 minutos en una jarra

elctrica y dejar enfriar el agar, seguidamente se vaca el agar entre

las 6 placas Petri esterilizadas previamente rotuladas de las diluciones
realizadas. Seguidamente se deposita 1ml de cada dilucin en placas
Petri estriles y de ah difunda la muestra con suavidad sobre el agar
utilizando la esptula Drigalski.
Por ultimo incubar a 25 C por 3-5 das para la obtencin de hongos y
levaduras.