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Pruebas Inmunologicas - ELISA
Pruebas Inmunologicas - ELISA
Pruebas
Inmunolgicas
ENZIMOINMUNOANLISIS
(ELISA de Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay)
Pruebas Inmunolgicas
La serologa es la rama de la inmunologa que
estudia las interacciones antgeno-anticuerpo
para su aplicacin en el diagnostico clnico.
Hay seis tipos fundamentales de pruebas
serolgicas:
1. Reaccin de precipitacin
2. Aglutinacin
3. Fijacin del complemento
4. Inmunofluorescencia
5. Radioinmunoensayo
6. Enzimoinmunoanlisis (ELISA).
ENZIMOINMUNOANLISIS (Prueba
De ELISA)
Fue descrito en 1971 por los investigadores
suecos Eva Engvall y Peter Perlman, y en
la actualidad se designan con este nombre
a todos los inmunoensayos enzimticos
en fase heterognea.
Directo. Inmunohistoqumica
Indirecto
Sndwich
Competitivo
Inhibicin
Directo
Se utiliza especficamente para detectar un antgeno,
porque busca a una sustancia extraa.
En una prueba de ELISA directa la cual es considerada
la ms simple, el antgeno se adsorbe en una placa
de plstico, a continuacin un exceso de otra
protena (generalmente albmina de suero bovino)
se aade para bloquear todos los otros sitios de
unin. Mientras que una enzima est ligada a un
anticuerpo en una reaccin separada, el complejo
enzima-anticuerpo se aplica para adsorber al
antgeno.
Posteriormente el exceso de complejo enzimaanticuerpo se lava, quedando enzima anticuerpo
unido
a
antgeno.
Mediante la adicin del sustrato de la enzima se
detecta la enzima que ilustra la seal del antgeno.
S i s t e m a s
d e
E l i s a
Antgeno
*
Bloquead
or
100 l
Conjugad
o
Ab-E
Sustrato
enzimtic
o
* Principalmente se
busca Ag problema
+ Color + [AbAg]
E . l . i . s . a
Indirectos
Es utilizado para detectar los anticuerpos que el paciente ha creado
contra el antgeno
Consta de las siguientes etapas:
1. Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los
anticuerpos objeto de estudio. Lavado para eliminar los antgenos
fijados deficientemente o no fijados.
2. Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos
reaccionarn especficamente con los antgenos fijados al soporte.
Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan
reaccionado.
3. Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales
reaccionan con los anticuerpos especficos aadidos en el paso
anterior y que se encuentran fijados a los antgenos. Lavado para
eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
4. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la
enzima marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.
5. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.
S i s t e m a s
d e
E l i s a
Antgeno
Bloqueador
100 l
Anticuerp
o*
Conjugad
o
Ab-E
Sustrato
enzimtic
o
* Principalmente
cuando se busca Ab
problema
+ Color + [AbAg]
E . l . i . s . a
Sndwich
Es una variable menos comn, pero es altamente
eficiente en la deteccin de antgeno.
ELISA sndwich cuantifica antgenos entre dos capas
de anticuerpos (anticuerpo de captura y de
deteccin). El antgeno a medir debe contener al
menos dos eptopos antignicos capaces de unirse al
anticuerpo.
Se pueden utilizar tanto anticuerpos monoclonales
como policlonales. Los antecuerpos monoclonales
reconocen un eptopo nico que permite la deteccin
y cuantificacin final de las pequeas diferencias en
el antgeno, mientras que los policlonales a menudo
son utilizados como anticuerpo de captura.
Una de las ventajas de este tipo de prueba ELISA es
que la muestra no tiene que ser purificada antes de
Esquema de procedimiento:
1. Placa recubierta con anticuerpo de captura.
2. Se aade la muestra y cualquier antgeno
presente se une a la captura de anticuerpos.
3. Se aade anticuerpo de deteccin el cual se
une al antgeno.
4. Se aade el anticuerpo secundario ligado a
enzima y se une al anticuerpo de deteccin.
5. El sustrato es agregado , y es convertido a una
forma detectable por la enzima.
S i s t e m a s
d e
E l i s a
Anticuerpo de
sensibilizacin
Bloqueado
r
100 l
Antgeno
*
Conjugad
o
Ab-E
Sustrato
enzimtic
o
* Principalmente
cuando se busca Ag
problema
+ Color + [AbAg]
E . l . i . s . a
Competitivo
Consta de las siguientes etapas:
1.- Fijacinalsoporteinsolubledeanticuerpos
especficos del agente patgeno a detectar. Lavado
para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o
no fijados.
2.- Adicin en concentracin conocida de una mezcla
de antgenos del anticuerpo utilizado en el paso
anterior, marcados con una enzima y antgenos
desconocidos objeto de estudio.
3.- Paralelamente, aadir nicamente antgenos del
anticuerpo usado en el paso anterior, marcados con
una enzima. Lavar para eliminar los antgenos que no
hayan reaccionado.
4.- Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de
actuar la enzima marcadora. Se puede parar la
reaccin si se desea.
S i s t e m a s
d e
E l i s a
Ab
estandar
Bloquead
or
100 l
Conjugad
o
Ag-E
Antgeno
*
problem
Sustrato
a
enzimtic
o
* Principalmente
cuando se busca Ag
problema
E . l . i . s . a
S i s t e m a s
d e
E l i s a
(+
)
Bloquead
or
Ag
problema*
de la
muestra
Ab
estandar
100 l
(+
)
()
Muestra
Problem
a
()
Conjugad
o
Ab-E
Sustrato
enzimtico
* Principalmente
cuando se busca Ag
problema
E . l . i . s . a
Importancia
Son utilizadas en el diagnostico medico,
industria de alimentos y el estudio y control del
medio ambiente.
En estudios serolgicos, hematolgicos,
endocrinolgicos, oncolgicos, en trasplantes,
medicina forense y antropologa.
Con propsitos mdicos se han aplicado en la
determinacin de hormonas y protenas
plasmticas, antgenos tumorales, drogas, Ag y
Ac de microorganismos (parsitos, hongos
bacterias, virus).
Los resultados aportan elementos diagnsticos,
informacin de una enfermedad y coadyuvan en
la planificacin del tratamiento.
Aplicaciones
Prueba de embarazo
Diagnstico de hepatitis vricas
Infecciones por el virus del herpes
simplex y virus de rubola
Infecciones por retrovirus
Patologa animal
Enfermedades producidas por parsitos
Babesias y tripanosomas
Toxocara canis
Toxoplasmosis
Triquinosis
Enfermedades producidas por
Micoplasmas
Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis
Brucelas
Enterotoxinas Vibrio cholerae
Estreptococos
Salmonelas
Enfermedades producidas por virus
Enfermedad de Aujeszky
Enfermedad de Newcstle
Fiebre aftosa
Leucemia felina
Otras aplicaciones
Hormonas
Gonadotropina corinica
Progesterona
Testosterona
Hormonas tiroideas
Cuantificacin de
inmunoglobulinas
IgG
IgE
IgA
Inmunopatologa
Anticuerpos anti-DNA
Factor reumatoide
Inmunocomplejos circulantes
Patologa vegetal
Enfermedades producidas
por virus
En frutales
PPV
CLSV
TRSV
En ctricos
CTV
En patata
PLRV
PVY
PVX
PVA
TRV
En
En
En
En
En
En
cereales
guisante
lpulo
soja
ornamentales
plantas hortcolas
Enfermedades producidas
por bacterias
Enfermedades producidas
por Micoplasmas
Enfermedades producidas
por hongos
Bibliografa
Tortora et al; Introduccin a la Microbiologa; 9na edicin;
Editorial Medica Panamericana; Argentina, 2007, Pp.:544
John L. Ingraham. Introduccin a la Microbiologa; Volumen 2.
Editorial Reverte S.A. . Madrid, Espaa. Pp.:448, 449 y 457
Cibergrafa
http://cnia.inta.gov.ar/helminto/pub%2
0triquinosis/ELISAtrichinella.pdf
http://www.elisa-antibody.com