CRECIMIENTO

Reproduccin bacteriana
Fisin binaria

Las bacterias generalmente se reproducen por fisin

binaria.
Una clula se divide en dos despus de desarrollar una pared
transversa.
Generalmente es asexual aunque en algunas especies puede ser
precedida de conjugacin.

Crecimiento
Se define como un incremento ordenado de los principales

constituyentes de un organismo.
Involucra sntesis de estructuras celulares, cidos nucleicos,
protenas y otros componentes celulares a partir de nutrientes.
Todos los seres vivos toman nutrientes y excretan productos de
desecho.

Crecimiento en Lote
En un sistema cerrado:
a)El crecimiento est determinado por un equilibrio dinmico
entre la velocidad de crecimiento y la velocidad de muerte
b)El crecimiento depende de la composicin del medio de cultivo,
principalmente de un sustrato limitante, de las condiciones
ambientales y del inculo inicial

FASES DE LA CURVA DE CRECIMIENTO EN LOTE

Fases de crecimiento.
I. Fase lag

Es un perodo de adaptacin, cuando un cultivo de microorganismos

es llevado de un ambiente a otro.
Los microorganismos sufren una reorganizacin tanto en su
velocidad de crecimiento como en sus constituyentes
macromoleculares.
Durante esta etapa la masa celular puede cambiar sin cambiar el
nmero de clulas.

Fases de crecimiento.
II. Fase de aceleracin del crecimiento

Fases del crecimiento

III. Fase exponencial

Es un perodo de balance o de estado estacionario en el crecimiento,

durante el cual la velocidad especfica de crecimiento es constante.
La composicin qumica del medio de cultivo esta cambiando debido
a que los nutrientes se estn consumiendo y productos
metablicos son producidos.

Fases del crecimiento

IV. Fase de desaceleracin

La velocidad de crecimiento disminuye y los

microorganismos dejan de reproducirse empezando a entrar
a la fase estacionaria

Fases de crecimiento.
V. Fase estacionaria

Los nutrientes se agotan y los productos txicos se

acumulan.
La masa total puede permanecer constante pero el nmero
de clulas puede descender.
La tasa de crecimiento es igual a la tasa de muerte.

Fases de crecimiento.
VI. Fase de declinacin o muerte

La tasa de muerte es mayor que la tasa de crecimiento.

Los nutrientes se agotan y se acumulan productos txicos

Tiempo de generacin o duplicacin

Una

clula
crece
progresivamente y se
divide en dos clulas
iguales.

n=1

n=2

El tiempo requerido para

que la clula se divida (o

para que la poblacin de
un organismo se duplique
en nmero) se conoce
como tiempo de generacin
o duplicacin.

n=3

n=4

2n
En donde n = al nmero de generaciones

Clculo del nmero de generaciones

En donde:

n
t0
t
g

= Nmero de generaciones
= Tiempo inicial de incubacin
= Tiempo final de incubacin
= Tiempo de duplicacin (o generacin)

Clculo del tiempo de generacin

g=

ln (N N0)

t t0

En donde:
g .-Tiempo de generacin
N0.- Nmero de microorganismos inicial
N.- Nmero de microorganismos final
t0.- Tiempo Inicial
t.- Tiempo final

La velocidad especfica de crecimiento es obtenida a

partir de la pendiente de una grfica de lnX vs tiempo

Velocidad de Crecimiento...
Bajo condiciones exponenciales se describe:

dX/dt=X
dN/dt= n N

(1)
(2)

donde:
X = Concentracin de m.o. en g/l
N = Concentracin de m.o. en clulas/l
t = Tiempo
= Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (masa)
n = Velocidad especfica de crecimiento en h-1 (nmero)

Velocidad de Crecimiento...
dX/x=dt
Xt=X0et

(3)
Xt es la concentracin final de microorganismos en g/l en tiempo (t)
X0 es la concentracin inicial de microorganismos en g/l
e es la base de logaritmo natural
Si la velocidad especfica de crecimiento es constante
lnXt=lnX0+ t
(4)
La ec. 4 puede ser resuelta para el caso en el cual Dt=td el tiempo
requerido para X2=2X1
td=ln2/ =0.693/
(5)
si td es igual al tiempo de generacin, entonces:

Que significa la constante ?

Es la velocidad especfica de crecimiento en un sustrato dado, y
significa la afinidad del microorganismo por el sustrato
Que indica la Ecuacin de Monod?

Explica la velocidad de crecimiento en funcin del sustrato

limitante
Que significa la constante max ?

Distribucin de los tiempos mximos de

duplicacin para diferentes microorganismos

Tasas de crecimiento de algunos microorganismos

bajo condiciones ptimas

Efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO

MICROBIANO
1.Determinacin de la masa celular o biomasa
1.1 Mtodos directos:
Peso seco
Peso hmedo
Volumen hmedo

1.2 Mtodos indirectos:

Determinacin de Nitrgeno total

Espectrofotometra
Radiacin IR

ESPECTROFOTOMETRA

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO

MICROBIANO
2. Determinacin del Nmero de microorganismos
2.1 Mtodos Directos
Cuenta total microscpica (Cmara de Neubauer, de
Petroff)
Cuenta viable (Vaciado en placa, Extensin con varilla de
vidrio, Cuenta en tubo de Hungate, Tincin con azul de
tripano)
Medicin lineal o radial

2.2 Mtodos Indirectos

Nmero ms Probable (NMP)
Turbidimetra
Nefelometra

CUENTA DIRECTA DE CLULAS EN LA CMARA DE NEUBAUER

Diluciones para cuenta viable

Cuenta viable

Recuento de anaerobios por la

tcnica de Hungate

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR NEFELOMETRA

Solucin de BaCl2 al 1.0%
ml

Solucin de H2SO4 al 1.0%

ml

0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0

9.9
9.8
9.7
9.6
9.5
9.4
9.3
9.2
9.1
9.0

Escala de
UFC
Mc. Farland Millones/ml
4.0
3.7
3.5
3.4
3.3
3.2
3.15
3.10
3.04
3.00

300
600
900
1,200
1,500
1,800
2,100
2,400
2,700
3,000

Nefelmetro de Mc Farland
Consiste en varios tubos de vidrio hermticamente cerrados que contienen BaCl2 al 1% +
cantidades crecientes de H2SO4 al 1%; por lo tanto, en cada tubo se origina un
precipitado de BaSO4, origen de la turbidez, la cual se relaciona con un nmero de
clulas/ mL.

Inconveniente: es un mtodo poco preciso, que slo se emplea cuando no hace falta
exactitud. Ha sido desplazado por los mtodos espectrofotomtricos.

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO

MICROBIANO
3. Determinacin de metabolitos asociados a crecimiento
3.1 Mtodos Directos
Componentes de Pared celular
Protenas
cidos nucleicos
3.2 Mtodos Indirectos
Produccin de cidos orgnicos
Produccin de alcoholes y glcidos
Produccin de CO2

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR

CUANTIFICACIN DE PROTENAS
Por ejemplo:
Mtodo de Lowry
Mtodo de Bradford

DETERMINACIN DEL CRECIMIENTO POR

CUANTIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS
Extraccin del ADN en cada tiempo de muestreo.
Determinacin de la pureza del ADN por el clculo de la

relacin de absorbancia a 260 nm y 280nm (A260/ A280).

Valores obtenidos entre 1.8 y 2.0, indican que las muestras no
contienen residuos proteicos ni fenol.
La concentracin del ADN extrado se determina por medio
de la siguiente frmula:
D.O.260 = 1 contiene 50 g de ADN de doble cadena por
mililitro(Ausubel et al., 1995)

MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO

MICROBIANO

4. Determinacin de la utilizacin de algn nutriente

4.1 Mtodos Indirectos
Oxgeno
Azcares
CO2
cidos grasos

Crecimiento en contnuo
A diferencia del crecimiento por
lote, es un sistema abierto:
a)
b)
c)

Hay administracin constante de

medio de cultivo
Por lo tanto el sustrato no es
limitante,
Depende de la tasa de dilucin