Ejercicio resuelto

Ejercicio 2. TRABAJO DIRIGIDO N 3 (Fisicoqumica II, Curso 2009-2010 , Grupo B)

La hidrlisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina y
N-glutaril-L-fenilalanina, est catalizada por la enzima -quimotripsina. En unas
determinadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinticos obtenidos han sido los
siguientes:
[GPNA] / 10-4 M
v / mmol L-1 min-1

2.50
2.11

5.00
3.73

10.0
5.90

15.0
7.10

a) Asumiendo una cintica de tipo Michaelis-Menten, calclense grficamente los valores

de Vmax y KM .
b) Determine el valor del n de recambio (k2) sabiendo que la concentracin de enzima
empleada fue de 4.00. 10-6 M.
______________________________________________________________________________

La ecuacin de Michalis-Menten es:

v=

V max $ [S]
K M + [S]

Tomando inversos en ambos miembros se obtiene la linealizacin de Lineweaver-Burk:

1
v

1
V max

KM
V max

1
$ [S]

que tiene la forma de una lnea recta:

y = o.o. + pendiente $ x
de manera que representando 1/v frente a 1/[S] podremos obtener Vmax y KM.

a) Para ello hacemos la siguiente tabla auxiliar:

1
[S]

/10 3 M 1

( 1v )/(mmol 1 L min)

4.00

2.00

1.00

0.667

0.455

0.263

0.169

0.141

A continuacin representamos estos datos en papel milimetrado:

Hoja de problemas n 1 (continuacin )

Como:

o.o. = 0.0800 mmol 1 L min u V 1 = 0.0800 mmol 1 L min

max
u V max = 12.5 mmol/L
min
Como:

K
pendiente = 0.095 $ 10 3 mmol 1 L min M u V M = 0.095 $ 10 3 mmol 1 L min M
max
u K M = 0.095 $ 10 3 mmol 1 L min M $ 12.5 mmol/L = 1.19 $ 10 3 M
min

b) Recordando la definicin de k2 y sustituyendo, nos quedara:

mmol/L 10 3 mol
V max 12.5 min $ 1 mmol
k 2 = [E] =
= 3.1 $ 10 3 min 1
4.00 $ 10 6 mol/L
0
k 2 = 3.1 $ 10 3 min 1 $ 1min = 52 s 1
60 s
(este nmero de recambio significara que 1 molcula de enzima es capaz de
hidrolizar 52 molculas de sustrato por segundo)