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OPS/CEPIS/PUB/02.93
Original: espaol
MANUAL PARA
ANLISIS BSICOS DE
CALIDAD DEL AGUA DE BEBIDA
Lima, 2004
ii
DE
LA AUTORA
Ilustraciones
Marisol Zumaeta Aurazo
Ivn Moratillo Andrade
iii
Presentacin
Es de pblico conocimiento que las enfermedades de transmisin hdrica
(diarreas, parasitosis, disenteras) mantienen desde hace demasiado tiempo en Amrica
Latina y el Caribe tasas de morbimortalidad inaceptables en las sociedades modernas.
Existen tecnologas de tratamiento de agua que podran reducir a valores nfimos tales enfermedades y, de hecho, en los pases desarrollados esto es lo que ocurre.
En la Reunin Cumbre de Gobiernos, realizada en Santa Cruz de la Sierra en
1996, a partir de la declaracin denominada Iniciativa 47, los jefes de Estado de los
pases de la Regin de Amrica Latina y el Caribe solicitaron a la Organizacin Panamericana de la Salud/Organizacin Mundial de la Salud (OPS/OMS) el apoyo para que
los pases del rea pudieran hacer frente al problema de las enfermedades hdricas.
As, a partir de 1998, la OPS/OMS genera una serie de acciones, entre las
cuales destacan un Plan Regional de Mejoramiento de la Calidad del Agua y, a partir de
la actividad del rea de Calidad del Agua del Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente (CEPIS/OPS), la produccin de una serie de herramientas de gestin guas, manuales, metodologas, etc., que pretenden aportar las nuevas visiones y mtodos para dar batalla al problema de las aguas no seguras para la
salud.
Entre esas herramientas figuran las directrices para elaborar normas de calidad
del agua y guas para desarrollar programas de vigilancia y control de la calidad del agua
para consumo humano. En ese marco, la presente obra, Manual para anlisis bsicos de
calidad del agua de bebida, aporta la cuota necesaria en una de las reas fundamentales
relacionadas con todo programa de vigilancia y control.
El documento se concentra en la realizacin de anlisis en los niveles bsicos
dentro de los programas de monitoreo, que son los niveles que cualquier pas debera
aprobar para iniciar sus proyectos y acciones.
iv
El presente documento servir sin duda a los pases y a las instituciones relacionadas con el agua de bebida para mejorar su control y propender a una mejor calidad
del agua y a una mejor salud de la poblacin.
Se destaca y agradece el importante aporte en la redaccin de esta obra de la
Biloga Margarita Aurazo de Zumaeta, experta laboratorista y funcionaria del
CEPIS/OPS durante una larga y exitosa carrera, as como las sugerencias y aportes de
los siguientes funcionarios del Centro: Qum. Mara Luisa Esparza, Qum. Vilma Mori,
Biloga Carmen Vargas e Ing. Ricardo Rojas.
Ing. Felipe Solsona
Asesor Regional en Calidad del Agua
CEPIS/OPS
CONTENIDO
Presentacin ......................................................................................................................
iii
PRIMERA PARTE
PROGRAMAS DE VIGILANCIA DE LA
CALIDAD DEL AGUA DE NIVEL BSICO
Introduccin ....................................................................................................................
CAPTULO 1
EL NIVEL BSICO
1.
2.
3.
4.
5
6
7
8
9
9
CAPTULO 2
DETERMINACIN DE LOS PARMETROS DE NIVEL BSICO
1.
2.
3.
13
14
15
vi
4.
5.
6.
15
15
17
18
18
CAPTULO 3
ADMINISTRACIN DE UN LABORATORIO DE NIVEL BSICO
1.
2.
3.
4.
5.
21
22
23
24
24
24
CAPTULO 4
TOMA DE MUESTRAS
1.
2.
3.
27
29
29
31
33
34
SEGUNDA PARTE
PROCEDIMIENTOS ANALTICOS DE LOS
PARMETROS DE NIVEL BSICO
Introduccin .....................................................................................................................
37
CAPTULO 5
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
1.
39
2.
CONTENIDO
vii
39
40
41
41
42
43
44
50
51
52
52
53
54
54
55
57
59
61
64
64
65
65
65
66
66
70
70
70
70
71
72
72
74
75
75
75
75
77
77
viii
3.
82
82
83
84
84
84
85
86
87
88
88
89
89
91
92
93
93
93
94
94
95
96
96
96
97
98
99
CAPTULO 6
MEDICIONES DE CAMPO
1.
101
101
101
102
105
106
CONTENIDO
ix
1.3
Procedimiento analtico con equipos de campo para la determinacin de coliformes termotolerantes por la tcnica de filtro de membrana. Medicin de campo ....................................................................
1.4 Procedimiento analtico con equipos de campo para la determinacin de coliformes termotolerantes por la tcnica de NMP por
tubos mltiples. Medicin de campo ...................................................
1.5 Procedimiento analtico con equipos de campo para la determinacin de coliformes termotolerantes por la tcnica de presenciaausencia. Medicin de campo ...............................................................
Determinacin de parmetros fisicoqumicos bsicos. Cloro residual,
pH y turbiedad ....................................................................................................
2.1 Introduccin .............................................................................................
2.2 Mediciones de campo ............................................................................
2.2.1 Determinacin del cloro libre residual ....................................
2.2.2 Determinacin del pH ................................................................
2.2.3 Determinacin de la turbiedad .................................................
113
113
114
114
119
120
BIBLIOGRAFA................................................................................
123
2.
108
113
113
APNDICES
Apndice A. Preparacin de soluciones y medios de cultivo .................................
A.1 Agua de dilucin ..........................................................................
A.2 Caldo lauril triptosa o lauril sulfato de sodio .........................
A.3 Caldo verde brillante lactosa bilis 2% ......................................
A.4 Caldo EC ......................................................................................
A.5 Agar Endo LES ...........................................................................
A.6 Medio m-Endo ............................................................................
A.7 Medio m-FC (agar) .....................................................................
A.8 Agar m-7 horas FC .....................................................................
A.9 Medio presencia-ausencia ...........................................................
127
127
128
129
129
130
130
131
132
132
135
137
138
PRIMERA PARTE
PROGRAMAS DE VIGILANCIA DE LA
CALIDAD DEL AGUA DE NIVEL BSICO
INTRODUCCIN
En la primera parte de este manual se abordan aspectos generales de la vigilancia
de la calidad del agua a fin de introducir al lector en el tema y presentar la relacin entre
este y la transmisin de enfermedades hdricas. Asimismo, se brinda informacin sobre
el alcance de la vigilancia de nivel bsico y se detalla en qu casos es recomendable su
aplicacin.
CAPTULO 1
EL NIVEL BSICO
1.
campo abierto, las letrinas mal diseadas y la presencia de animales domsticos y silvestres
que actan como reservorios de agentes patgenos.
Una pequea parte de la poblacin rural cuenta con servicios de abastecimiento
y, en muchos casos, el servicio de agua es discontinuo. Por este motivo, los pobladores
la suelen almacenar en recipientes. La constante manipulacin de estos recipientes
incrementa las posibilidades de que el agua se vuelva a contaminar y, por consiguiente,
que aumente el riesgo de transmisin de enfermedades gastrointestinales.
El tratamiento y la desinfeccin efectiva del agua de consumo humano mejoran
la calidad del agua. Pero en las reas rurales se presenta una serie de factores que dificultan
su ejecucin. Estos factores estn relacionados con aspectos polticos, econmicos,
sociales y culturales. Entre ellos estn la ubicacin geogrfica; las dificultades en las vas
de comunicacin; una limitada inversin en infraestructura sanitaria y programas de
desinfeccin, en personal de operacin y mantenimiento de los sistemas de servicios de
agua; los problemas de logstica; un marco institucional no definido y la falta de lderes
en las comunidades.
En las zonas rurales los factores mencionados tambin dificultan la aplicacin
eficiente de los programas de vigilancia y control de la calidad del agua de consumo
humano. Se requiere, entonces, identificar la forma de efectuar un monitoreo bsico de
la calidad del agua, lo que permitir tomar decisiones en forma oportuna y evitar la
transmisin de enfermedades hdricas.
2.
Los programas de vigilancia y control de la calidad del agua para consumo humano tienen como objetivo proteger la salud del consumidor aportando datos sobre dicha
calidad y alertas sobre la necesidad de aplicar medidas de control para evitar que el agua
sea portadora de agentes patgenos, sustancias qumicas txicas u otros elementos nocivos.
La implementacin de un programa de vigilancia y control de la calidad del agua
aporta un sinnmero de beneficios. Aparte del principal, que es la disminucin de la tasa
de enfermedades hidrotransmisibles, permite obtener informacin sobre la real situacin
del abastecimiento de agua, priorizar las inversiones y mejorar la calidad del servicio de
abastecimiento de agua.
Generalmente, la vigilancia de la calidad del agua es efectuada por las autoridades
de salud, que son responsables de evaluar el riesgo al que est expuesta la poblacin en
este terreno.
EL NIVEL BSICO
3.
3.1
Nmero de
muestras
Frecuencia de
muestreo
En planta de tratamiento y
fuentes de agua subterrnea:
anlisis fisicoqumicos*
Agua de origen
superficial: cada 2 aos
Agua de origen
subterrneo: cada 5 aos
En reservorios de servicio*:
pH
turbiedad
coliformes termotolerantes
Tres por ao
3
4
6
Anual
Anual
Anual
En red de distribucin*:
pH
turbiedad
coliformes termotolerantes
*
Poblacin
abastecida
< de 1.000
1.001 a 2.000
2.001 a 5.000
Si hay cloracin, se deben efectuar tantas determinaciones de cloro residual como sean posibles. En los
sistemas de abastecimiento se medir el cloro en la salida de la planta de tratamiento y en el grifo del
consumidor ms alejado de la planta (Solsona y Mndez, 2002).
EL NIVEL BSICO
3.2
salidas de manantiales;
salidas de pozos de agua.
Y en el caso de que la comunidad cuente con una planta de tratamiento:
salidas de las plantas de tratamiento;
salidas de componentes;
lneas de impulsin y aduccin;
red de distribucin;
en casos excepcionales, se har un muestreo de nivel intradomiciliario.
Inspeccin sanitaria
10
EL NIVEL BSICO
11
12
13
CAPTULO 2
DETERMINACIN DE LOS
PARMETROS DE NIVEL BSICO
1.
14
EL PERSONAL Y EL GRADO DE
CAPACITACIN REQUERIDOS
3.
15
4.1
Una estufa para esterilizacin y secado, con una temperatura de entre 170
y 180 C, con termostato y termmetro.
16
b)
Incubadoras
a)
b)
Destilador
Una balanza simple con pesas de hasta 500 gramos con una exactitud de 0,1
gramos o una balanza digital con igual exactitud.
Refrigeradora
Una refrigeradora para guardar los medios de cultivo preparados.
Equipo para filtracin
Una fuente de vaco; es decir, una bomba de vaco u otro dispositivo que produzca
una presin diferencial en el portafiltros.
Cristalera
5.
17
Frascos de muestreo
Matraces
Pipetas tipo Mohr de 1 y 10 mL con graduacin 1/10, volumtricas tipo clnico
y graduadas
Tubos de ensayo de vidrio borosilicato de 12 mm x 120 mm y de 16 mm x
150 mm
Tubos Durham
Placas de petri de vidrio o de plstico no txico de 48 mm de dimetro x 8,5
mm de altura
Probetas graduadas.
Otros
Membranas filtrantes de 47 mm de dimetro y con una porosidad de 0,45 m
Pinzas de acero inoxidable con extremidades redondeadas
Lupa
Esptulas de plstico
Pinzas de extremos redondeados para transportar las membranas de filtracin
Asas de inoculacin de platino, platino iridio o nquel y cromo con un aro de 3
mm de dimetro
Guantes para la manipulacin de material caliente
Lpices con tinta indeleble a prueba de agua
Mecheros de Bunsen
Caja trmica para el transporte de muestras
Hielo o gel refrigerante.
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS QUMICOS
18
6.
6.1
19
20
21
CAPTULO 3
ADMINISTRACIN DE UN
LABORATORIO DE NIVEL BSICO
1.
Las funciones del personal de los laboratorios perifricos y central deben estar
claramente definidas porque eso facilita el orden, el buen cumplimiento de actividades,
la capacitacin especfica segn las funciones y el deslinde de responsabilidades.
La red conformada por el laboratorio central y los laboratorios perifricos es
responsable de los siguientes aspectos:
Como mnimo, se requiere que los laboratorios estn dirigidos por un profesional
capacitado en los procedimientos analticos de los parmetros seleccionados para el
programa de vigilancia; que conozca las buenas prcticas de laboratorio, control de calidad
y aseguramiento de la calidad de las pruebas analticas. Se debe contar con un equipo de
tcnicos capacitados en procedimientos relacionados con el muestreo, anlisis (de
laboratorio y de campo) y reporte de resultados. Es indispensable que la red de laboratorios
tenga un eficiente y oportuno sistema de informacin de resultados al laboratorio regional
o al central, segn lo disponga la entidad responsable del programa de vigilancia.
22
Por otro lado, es conveniente que el laboratorio cuente con instalaciones que
permitan a los trabajadores laborar en un ambiente sin riesgos para la salud, amparados
por un programa de bioseguridad, y que todo el personal asuma el cumplimiento de las
buenas prcticas de laboratorio, tanto en el trabajo efectuado en el laboratorio como en
el campo.
1.1
Bajo ninguna circunstancia se pueden pipetear con la boca las muestras de agua,
los medios ni los reactivos.
No se deben consumir ni almacenar alimentos ni bebidas en el laboratorio.
No se deben llevar a la boca los lpices ni las etiquetas.
Las pipetas y varillas de vidrio rotas o astilladas deben ser reemplazadas
inmediatamente.
Dentro del laboratorio, se debe usar obligatoriamente mandil o delantal, que
debe estar correctamente abotonado.
El material contaminado debe ser esterilizado y los residuos de los medios de
cultivo, membranas, almohadillas (pads), etctera, se deben colocar, despus de
esterilizados, dentro de bolsas seguras, antes de ser eliminados.
Durante los anlisis y manejo de materiales que despidan partculas al ambiente,
es necesario colocarse mascarillas, ya que las bacterias y partculas pueden ser
inhaladas a travs de los aerosoles producidos en las operaciones rutinarias.
2.
23
24
3.
La determinacin del costo del anlisis por muestra se efecta sobre la base de
las siguientes variables:
En el captulo 5, cuadro 5.1, se presenta una tabla con los costos aproximados
de los anlisis bacteriolgicos.
4.
SOSTENIBILIDAD ECONMICA DE UN
LABORATORIO DE NIVEL BSICO
PRODUCCIN Y MANEJO DE LA
INFORMACIN ANALTICA
25
deben mantener en el laboratorio por un tiempo razonable, que ser establecido por el
programa.
Antes de que los resultados sean emitidos por los laboratorios, deben ser revisados
y aprobados por las personas autorizadas. Asimismo, sern reportados con exactitud,
claridad, de manera objetiva, sin ambigedad y en forma oportuna, a fin de que la
autoridad responsable pueda tomar una accin inmediata.
La produccin y el manejo sistematizado de la informacin obtenida tanto en la
inspeccin sanitaria como en las pruebas analticas contribuirn al xito de un programa
de vigilancia de la calidad del agua de bebida.
26
27
CAPTULO 4
TOMA DE MUESTRAS
1.
TCNICAS DE MUESTREO
28
Cuadro 4.1
Datos bsicos de la etiqueta de muestreo
Nmero de muestra.
Punto de muestreo.
Localidad.
pH.
Temperatura.
Cloro residual (en el caso de agua potable).
Turbiedad.
Agua de una corriente de agua (ros), aguas con escaso o nulo movimiento
(reservorios, lagunas, lago) o agua de un depsito (tanque).
TOMA DE MUESTRAS
29
2.
3.
1.1
Para llenar el frasco con la muestra, se debe sostener el frasco por la parte
inferior y sumergirlo hasta una profundidad de aproximadamente 20 centmetros, con la boca del frasco ligeramente
hacia arriba. Si se trata de una corriente,
colocar la boca del frasco en sentido
contrario a la corriente del agua.
1.2
1.
30
2.
3.
4.
TOMA DE MUESTRAS
5.
31
1.3
32
2.
3.
4.
TOMA DE MUESTRAS
5.
33
Para las mediciones de pH, cloro residual y turbiedad, seleccionar otro frasco o
un vaso de muestreo y enjuagarlo tres veces consecutivas antes de tomar la muestra
definitiva. Efectuar el anlisis de pH, cloro residual y turbiedad.
2.
34
3.
Los frascos deben ser transportados o enviados en una caja resistente para evitar
roturas. Esta caja puede ser de plstico, madera o metal. La caja tendr suficiente espacio
para colocar las bolsas con la mezcla refrigerante que permitir que la muestra se conserve
a temperatura de refrigeracin.
En la cubierta de caja de transporte se debe colocar una etiqueta que, de manera
impresa o con tinta indeleble, muestre de un modo muy claro las inscripciones Frgil,
Muestras de agua, urgente y Este lado hacia arriba, as como la direccin del
laboratorio al que se enviarn las muestras. En otra etiqueta debe figurar el remitente.
En la parte interna de la caja tambin ir el formulario detallado con los datos de
la recoleccin de las muestras, su descripcin y el nombre de la persona que las recolect
y las envi. Si el programa de vigilancia lo solicita, las muestras irn acompaadas de la
cadena de custodia, que tiene por objetivo rastrear la muestra desde el momento del
muestreo hasta su entrega al laboratorio. En el apndice B se presenta un modelo de
cadena de custodia.
35
SEGUNDA PARTE
36
37
INTRODUCCIN
38
39
CAPTULO 5
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
1.
1.1
Introduccin
40
41
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
Cuadro 5.1
Nivel de facilidad, rapidez y costo de las diferentes tcnicas para la
determinacin del grupo coliformesa
Tcnica
a
b
Tipo
Determinacin
Fermentacin en
tubos mltiples
(tradicional)
2,5
Filtro de
membrana
(tradicional)
Cuantitativa
Coliformes totales
Coliformes
termotolerantes
2,5
Filtro de
Cuantitativa
membrana con
medio m-7 horas
Coliformes totales
Coliformes
termotolerantes
1.5
Presencia-ausencia
en medio
Coliformes totales
Coliformes
termotolerantes
2,5
Cualitativa
2.1
2.1.1 Introduccin
La tcnica de filtro de membrana se fundamenta en la filtracin de un volumen
determinado de muestra (100 mililitros o volmenes menores segn la densidad
bacteriana esperada) a travs de un filtro de membrana de 0,45 micrmetros de
42
Un autoclave.
Un horno de aire caliente o estufa para esterilizacin.
Un destilador de agua.
Un potencimetro o cinta de pH universal.
Una incubadora, con una temperatura de incubacin de 35 0,5 C, con
termostato y termmetro.
Un equipo de bao Mara, con una temperatura de reincubacin de 44,5
0,2 C, con termostato y termmetro.
Un sistema de filtracin (una bomba de vaco o aspirador manual, 2 frascos
erlenmeyer Kitazato de un litro, mangueras de conexin y portafiltros previamente
esterilizados).
10 frascos de muestreo de vidrio y boca ancha estril.
20 placas de petri de 48 milmetros x 8,5 milmetros esterilizadas, identificadas
con el nmero de la muestra, as como el volumen de muestra que va a ser
filtrado.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
43
44
2.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
3.
4.
Retirar la parte superior del portafiltros y, con una pinza previamente flameada al mechero y fra,
colocar un filtro de membrana
estril, con la cara cuadriculada
hacia arriba y en el centro de la
parte superior del portafiltros.
5.
45
46
6.
7.
8.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
9.
10.
Separar la parte superior del portafiltros y, con una pinza previamente flameada y fra, retirar la
membrana cuidando de que la
pinza toque apenas la parte perifrica, fuera del rea de filtracin.
Acoplar nuevamente la parte
superior del portafiltros a la parte
inferior.
47
48
11.
Teniendo cuidado de no contaminar el filtro de membrana, colocarlo cuidadosamente con la superficie cuadriculada hacia arriba,
sobre la almohadilla embebida en
el medio de cultivo o directamente
sobre el agar, si fuera el caso.
12.
13.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
14.
49
15.
La esterilizacin rpida de los portafiltros puede efectuarse mediante los siguientes procedimientos:
exponerlos a radiacin ultravioleta durante dos minutos o sumergirlos en agua hirviendo por no ms de
30 minutos. Controlar la esterilidad de cada portafiltro usado para cada serie de filtraciones. Para ello
es necesario efectuar la filtracin de una muestra de 100 mililitros de agua destilada estril, antes y
durante la filtracin de las muestras. Esto puede hacerse cada 10 muestras de agua de bebida procesadas
en un mismo portafiltro (o segn el nmero considerado en el programa de control de calidad).
50
16.
Las placas destinadas a la determinacin de coliformes termotolerantes en medio m-FC, agar m-FC
u otro medio de cultivo especfico
pueden ser incubadas de dos
formas: en una incubadora con
100% de humedad o colocando
las placas en una bolsa de plstico
con cierre hermtico y sumergindolas en bao Mara a 44,5
0,2 C durante 24 horas.
Con una aguja de siembra, picar cada una de las colonias seleccionadas, esterilizar
la aguja con fuego y enfriar antes de pasar a otra colonia.
Sembrar en caldo verde brillante bilis al 2% e incubar a 35 0,5 C durante
24-48 horas.
Coliformes fecales
Despus de la incubacin, seleccionar las placas con filtros de membrana que
presenten entre 20 y 60 colonias tpicas de coliformes termotolerantes.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
51
Con una aguja de siembra, picar cada una de las colonias seleccionadas, esterilizar
la aguja con fuego y enfriar antes de pasar a otra colonia.
Sembrar en caldo EC e incubar a 44,5 0,2 C durante 24 horas.
2.
3.
4.
El recuento final de bacterias del grupo coliforme se calcula a partir del nmero
de colonias tpicas que se desarrollan en el filtro de membrana y del volumen de
muestra filtrado, aplicando la siguiente formula general:
52
N. de colonias tpicas
Volumen filtrado de muestra (mL)
x 100
Casos especiales:
a)
b)
c)
2.2
2.2.1 Introduccin
En esta tcnica los resultados de la fermentacin en tubos mltiples se expresan
en trminos de Nmero Ms Probable (NMP) de microorganismos existentes. El
mtodo del NMP por tubos mltiples se fundamenta en un modelo de clculo de
probabilidades. De acuerdo con la alternativa de siembra elegida, se selecciona la tabla
de NMP correspondiente para obtener los recuentos de coliformes.
La tcnica de fermentacin en tubos mltiples es una alternativa para la
determinacin de coliformes totales y termotolerantes y se recomienda para el anlisis
de muestras de agua superficial que sirve como fuente de abastecimiento. Es muy til
en el caso de aguas superficiales con una alta densidad de partculas o coloreadas, que
no pueden ser fcilmente procesadas por la tcnica de filtracin con membrana. Tambin
se propone este mtodo para el anlisis de agua potable, para lo cual se recomienda la
siembra de una serie de 10 tubos con volmenes de 10 mililitros 5 tubos de
fermentacin con volmenes de 20 mililitros. Vanse los cuadros 5.2 y 5.3.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
53
54
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
55
2.
56
3.
4.
Despus de la inoculacin de
todos los volmenes de muestra,
agitar la gradilla con los tubos
inoculados. Hacerlo en forma
horizontal y evitando que el medio
sembrado llegue a la tapa de los
tubos.
Colocar la gradilla en la incubadora a 35 0,5 C durante 24
3 horas.
5.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
6.
57
58
8.
9.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
10.
59
60
Ordenar los frascos con las diluciones, manteniendo una secuencia decreciente
(de mayor a menor dilucin efectuada).
Agitar vigorosamente 25 veces el frasco con la ltima dilucin efectuada y, con
una pipeta estril de 10 5 mililitros, sembrar un mililitro de dicha dilucin en
cada uno de los tubos del caldo de cultivo seleccionado en concentracin simple,
correspondientes a la ltima dilucin efectuada.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
61
10
Mayor volumen de muestra inoculado
(referido a la dilucin inicial de la serie
seleccionada para el NMP)
62
Cuadro 5.2
ndice de NMP y lmites de confianza de 95% para varias
combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se siembran
5 porciones de 20 mL
N. de tubos que presentan
reaccin positiva a partir
de 5 tubos de 20 mL
ndice de NMP
de 100 mL
0
1
2
3
4
5
< 1,1
1,1
2,6
4,6
8,0
> 8,0
Superior
0
0,05
0,3
0,8
1,7
4,0
3,0
6,3
9,6
14,7
26,4
Infinito
Cuadro 5.3
ndice de NMP y lmites de confianza de 95% para
varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se
siembran 10 porciones de 10 mL
N. de tubos que presentan
reaccin positiva a partir
de 10 tubos de 10 mL
ndice de NMP
de 100 mL
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
< 1,1
1,1
2,2
3,6
5,1
6,9
9,2
12,0
16,1
23,0
> 23,0
Superior
0
0,03
0,26
0,69
1,3
2,1
3,1
4,3
5,9
8,1
13,5
3,0
5,9
8,1
10,6
13,4
16,8
21,1
27,1
36,8
59,5
Infinito
63
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
Cuadro 5.4
NMP y lmites de confianza de 95% cuando se usan diversas combinaciones
de resultados positivos de series de 10 mL, 1 mL y 0,1 mL en series de 5 tubos
N. de tubos con reaccin positiva
10 mL
0
0
0
0
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
1 mL
0
0
1
2
0
0
1
1
2
0
0
1
1
2
3
0
0
1
1
2
2
0
0
1
1
1
2
2
3
3
4
0
0
0
1
0,1 mL
ndice de NMP
de 100 mL
0
1
0
0
0
1
0
1
0
0
1
0
1
0
0
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
2
0
1
0
1
0
0
1
2
0
<2
2
2
4
2
4
4
6
6
4
7
7
9
9
12
8
11
11
1
14
17
13
17
17
21
26
22
26
27
33
34
23
30
40
30
Superior
1
1
1
1
1
1
2
2
1
2
2
3
3
5
3
4
4
6
6
7
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7
7
9
12
9
12
12
15
16
9
10
20
10
10
10
13
11
15
15
18
18
17
20
21
24
25
29
24
29
25
35
35
40
38
45
46
55
63
56
65
67
77
80
86
110
140
120
(sigue)
64
(continuacin)
1 mL
0,1 mL
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
1
1
2
2
2
3
3
3
3
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
1
2
0
1
2
0
1
2
3
0
1
2
3
4
0
1
2
3
4
5
ndice de NMP
de 100 mL
50
60
50
70
90
80
110
140
170
130
170
220
280
350
240
300
500
900
1.600
>1.600
Inferior
Superior
20
30
20
30
40
30
40
60
80
50
70
100
120
160
100
100
200
300
600
150
180
170
210
250
250
300
360
400
390
480
580
690
820
940
1.300
3.000
2.900
5.300
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
65
66
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
2.
Prueba presuntiva
3.
4.
67
68
5.
6.
Prueba confirmativa
La muestra positiva en la prueba
presuntiva debe ser sometida a la
prueba confirmativa.
7.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
8.
9.
10.
69
70
11.
2.3.5 Lectura
Proceder a la lectura considerando prueba confirmativa positiva para coliformes
totales en el caldo verde brillante lactosa bilis 2% y positivo para coliformes
termotolerantes en caldo EC a todos los tubos que presentan formacin de gas en el
tubo Durham. Registrar los resultados.
2.3.6 Presentacin de resultados
Expresar como
presencia (o ausencia) de coliformes totales /100 mL
presencia (o ausencia) de coliformes termotolerantes /100 mL
2.4
2.4.1 Introduccin
Esta prueba es un procedimiento simplificado para la determinacin simultnea
de enzimas de coliformes totales y E. coli en agua destinada al consumo humano. La
E. coli es un organismo indicador de contaminacin fecal y su determinacin reemplaza
a la de coliformes termotolerantes. La inclusin de un sustrato hidrolizable cromognico
(productor de color en presencia de enzimas de coliformes) y otro fluorognico
(productor de fluorescencia en presencia de enzimas de E. coli) permite la deteccin de
bacterias coliformes totales y de E. coli.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
71
72
orto-nitrofenil-B-D-galactopiranosido (ONPG) o
rojo de clorofenol-B-D-galactopiranosido (CPRG).
4-metilumbeliferil-B-D-glucoronido (MUG).
2.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
3.
4.
5.
73
74
6.
7.
2.4.5 Lectura
Dependiendo del sustrato usado para la prueba, la lectura se efecta como sigue:
1.
2.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
3.
75
Para determinar la presencia de E. coli, todos los tubos positivos para coliformes
totales se examinan para fluorescencia usando una lmpara de luz ultravioleta de
366 nanmetros de longitud de onda, contrastando con el comparador disponible
comercialmente. La presencia de fluorescencia es positiva para E. coli.
2.5
2.5.1 Introduccin
El procedimiento simplificado con agar m-7 horas para la determinacin de
coliformes termotolerantes es similar a la tcnica de filtro de membrana para coliformes
termotolerantes en medio m-FC o agar m-FC, pero permite obtener resultados en
siete horas, y la incubacin a una menor temperatura facilita la recuperacin de los
coliformes termotolerantes (41,5 0,2 C).
Est tcnica es aceptada por el Standard Methods for the Examination of Water
and Wastewater (American Public Health Association-American Water Works Association,
1999). Se propone como una alternativa para la determinacin rpida de coliformes
termotolerantes. Se puede aplicar para valorar la calidad de agua de bebida en situaciones
de emergencia. El procedimiento descrito a continuacin es una versin simplificada
de Rapid detection methods. Seven hour fecal coliform test (specialized) (American Public
Health Association-American Water Works Association, 1999).
76
Un destilador de agua.
Un potencimetro o cinta de pH universal.
Un equipo de bao Mara o incubadora estable a 41,5 0,2 C.
Un sistema de filtracin (una bomba de vaco o aspirador manual, 2 frascos
erlenmeyer Kitazato de un litro, mangueras de conexin y portafiltros previamente
esterilizados).
10 frascos de muestreo de vidrio y boca ancha estril.
10 placas de petri de 48 mm x 8,5 mm esterilizadas, identificadas con el nmero
de la muestra, as como el volumen de muestra que va a ser filtrado.
10 probetas graduadas de 100 mililitros y estriles, con la abertura recubierta con
papel aluminio (si los portafiltros no son graduados).
Pipetas estriles de 10 y un mililitro (si fuera necesario hacer diluciones de la
muestra, una por dilucin).
10 frascos de dilucin de 100 mililitros (si fuera necesario hacer diluciones en
alguna de las muestras, se debe aumentar una por dilucin).
Un frasco de boca ancha para colocar las pipetas que han sido utilizadas.
Una pinza sin dientes.
10 filtros de membrana estriles de 47 milmetros de dimetro y una porosidad
de 0,45 micrmetros.
Un mechero de Bunsen para mantener el ambiente asptico y efectuar la
desinfeccin de las pinzas utilizadas.
Una lupa o un microscopio estereoscopio segn las facilidades con que se cuente.
Una fuente de luz directa.
Material para la preparacin de medios de cultivo: esptulas, matraces, probetas,
etctera.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
77
78
2.
Retirar la parte superior del portafiltros y, con una pinza previamente flameada al mechero y enfriada,
colocar un filtro de membrana
estril, con la cara cuadriculada
hacia arriba, centrando sobre la
parte superior y central del portafiltro.
3.
4.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
5.
6.
7.
79
80
8.
9.
Separar la parte superior del portafiltros y, con una pinza previamente flameada, retirar el filtro de
membrana cuidando de que la
pinza toque apenas su parte perifrica, fuera del rea de filtracin.
Acoplar nuevamente la parte
superior del portafiltros a la parte
inferior.
10.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
11.
12.
13.
81
82
2.5.5 Lectura
1.
2.
3.
La esterilizacin rpida de los portafiltros puede efectuarse mediante los siguientes procedimientos:
exponerlos a radiacin ultravioleta durante dos minutos o sumergirlos en agua hirviendo por cinco
minutos. Es necesario controlar la esterilidad de cada portafiltros usado para una serie de filtraciones.
Para ello es necesario efectuar la filtracin de una muestra de 100 mililitros de agua de dilucin estril,
antes y durante la filtracin de las muestras; puede ser cada 10 muestras procesadas en un mismo
portafiltros o segn el nmero de muestras que indique el programa de control de calidad.
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
83
2.
3.
N. de colonias tpicas
x 100
Volumen filtrado de muestra (mL)
Casos especiales:
a)
b)
c)
3.
84
3.1
3.1.1 Introduccin
En la cloracin del agua se producen dos tipos de cloro residual, el libre y el
combinado. El cloro residual libre es un agente oxidante ms activo y de accin
bactericida ms lenta que el cloro residual combinado.
El mtodo de titulacin con DPD se fundamenta en que en ausencia del ion
yoduro, el cloro libre reacciona instantneamente con la N, N-dietil-1,4-fenilendiamina
(DPD) y forma un compuesto de color rojo, en un rango de pH de 6,2 a 6,5. Para
determinar el cloro residual total (cloro residual libre ms cloro residual combinado),
se aade el yoduro en exceso al inicio de la prueba.
El mtodo de titulacin con DPD es recomendable para concentraciones entre
0,03 mg/L y 5 mg/L de cloro total; si la concentracin es ms alta, la muestra debe ser
diluida.
El mtodo por titulacin con DPD est aceptado por el Standard Methods
(American Public Health Association-American Water Works Association, 1999). La
siguiente es una versin simplificada del Standard Methods y de los procedimientos
normalizados de operacin del laboratorio del CEPIS/OPS (2002b).
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
85
86
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
87
Aadir 100 mililitros de muestra o una porcin menor diluida (diluciones con
agua destilada hasta obtener un volumen de 100 mililitros, para asegurar que la
concentracin de cloro no exceda 5 mg/L) y mezclar la solucin.
Sobre una superficie blanca, agitar continuamente la solucin y titular rpidamente
con la solucin titulante FAS hasta que desaparezca el color rojo. Este es un
primer punto de equivalencia. Anotar el gasto total del titulante en mililitros
(= V1).
Aadir alrededor de un gramo de cristales de KI y mezclar para disolver.
Dejar la mezcla en reposo durante dos minutos.
Continuar la titulacin con el FAS hasta que el color rojo vuelva a desaparecer.
Este es el punto final de equivalencia. Anotar el gasto total del titulante en mililitros
(= Vt).
Np x V p
Vt
Donde:
N
Np
Vp
Vt
=
=
=
=
Calcular el contenido de las diferentes formas del cloro residual con la frmula
siguiente:
V x N x 35,450
C =
Vm
88
N =
Vm =
Vt
Cloro libre
V1
Cloro combinado
3.2
V
(mL)
Vt - V1
3.2.1 Introduccin
En el mtodo colorimtrico con ortotolidina-arsenito (OTA), el cloro libre residual reacciona directamente con la ortotolidina y forma un compuesto de color amarillo.
La lectura se efecta comparando la intensidad del color amarillo producida en la
reaccin con una escala de estndares. La intensidad del color amarillo que desarrolla el
compuesto es proporcional a la concentracin de cloro.
Con esta tcnica se obtienen valores del cloro total, el cloro libre, el cloro
combinado y tambin de las interferencias por color.
La siguiente es una versin simplificada del mtodo de la medicin de cloro
residual con ortotolidina-arsenito publicada en el Standard Methods (American Public
Health Association-American Water Works Association, 1960), de la publicada por
Romero (1999) y de Procedimientos simplificados para el examen de aguas (OPS, 1978).
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
89
90
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
91
Cuadro 5.6
Estndares o patrones permanentes de color de cloro residual
Solucin diluida de
cromato-dicromato (mL)
Equivalente de cloro
(mg/L)
00
01
02
05
07
10
15
20
25
30
35
40
45
50
60
70
80
90
100
00,0
0,01
0,02
0,05
0,07
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
0,45
0,50
0,60
0,70
0,80
0,90
1,00
92
C B2
A B1
Cloro combinado
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
3.3
93
3.3.1 Introduccin
Los valores de pH miden la intensidad de la acidez y la alcalinidad del agua. La
escala del pH de las aguas naturales est entre 6,0 y 8,5. Si un agua tiene pH 7, est en el
punto medio de la escala y se considera que tiene un pH neutro. El valor del pH tiene
importancia en los procesos de tratamiento como la cloracin, la coagulacin, el
ablandamiento y el control de la corrosin.
El mtodo electromtrico se fundamenta en la determinacin de la actividad de
los iones hidrgeno por medio de una medicin potenciomtrica.
Es conveniente que la medicin del pH se efecte en el campo. De este modo, se
evita la alteracin de muestra. Si las muestras tienen que ser transportadas a un laboratorio,
sern colectadas en frascos de vidrio o de polietileno rigurosamente lavados. Se
recomienda analizar la muestra inmediatamente despus de su recoleccin. De lo
contrario, se la debe conservar a 4 C por un tiempo mximo de dos horas.
El mtodo electromtrico est aceptado por el Standard Methods (American
Public Health Association-American Water Works Association, 1999). La siguiente es
una versin simplificada del procedimiento del Standard Methods y de los
procedimientos normalizados de operacin del laboratorio del CEPIS/OPS (2002a).
94
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
95
Anlisis de la muestra
Potencimetro de laboratorio
96
3.4
3.4.1 Introduccin
La turbiedad del agua se origina en la presencia de partculas insolubles de arcilla,
limo, materia mineral, partculas orgnicas de diferente origen, plancton y otros organismos
microscpicos que impiden el paso de la luz a travs del agua. Una turbiedad mayor de
5 UNT es perceptible para el consumidor y proporciona una gua para la produccin
de agua aceptable para el consumo humano.
Es conveniente que la medicin de la turbiedad se efecte en el campo. Si no es
posible, se debe tomar la muestra y analizarla antes de transcurrido un lapso de 24
horas. De este modo, se evita la alteracin de las partculas suspendidas.
El mtodo nefelomtrico se fundamenta en la comparacin entre la intensidad
de la luz dispersada por una muestra de agua y la de una suspensin patrn de polmero
formazina. Este procedimiento se recomienda como un mtodo de laboratorio dirigido
a determinar la turbiedad en el agua para consumo humano y a analizar muestras de
agua sin sedimentos que se depositen rpidamente. El mtodo nefelomtrico est
aceptado por el Standard Methods (American Public Health Association-American Water
Works Association, 1999). La siguiente es una versin simplificada del procedimiento
del Standard Methods y de los procedimientos normalizados de operacin del
laboratorio del CEPIS/OPS (2002c).
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
97
98
Suspensiones intermedias
Diluir la suspensin patrn primaria de 4.000 UNT con agua de dilucin.
Preparar las suspensiones intermedias antes de usarlas, no guardarlas
preparadas.
Segn las caractersticas del agua que se est analizando, para la determinacin
de la turbiedad se pueden preparar las siguientes diluciones:
Suspensin patrn de 400 UNT. Con una alcuota de 10 mililitros de la
suspensin patrn primaria de formazina, colocar en una fiola de 100
mililitros y aforar con agua de dilucin.
Suspensin patrn de 40 UNT. Con una alcuota de 10 mililitros de la
suspensin patrn primaria de formazina de 400 UNT, colocar en una
fiola de 100 mililitros y aforar con agua de dilucin.
Suspensin patrn de 4 UNT. Con una alcuota de 10 mililitros de la
suspensin patrn primaria de formazina de 40 UNT, colocar en una
fiola de 100 mililitros y aforar con agua de dilucin.
99
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO
Y
Precisin
0 a 1,0
1 a 10
10 a 40
40 a 100
100 a 400
400 a 1.000
Mayor de 1.000
0,05
0,1
1
5
10
50
100
100
101
CAPTULO 6
MEDICIONES DE CAMPO
1.
DETERMINACIN DE INDICADORES DE
CALIDAD SANITARIA DEL AGUA:
COLIFORMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES
1.1
Introduccin
1.2
Mediciones de campo
102
MEDICIONES DE CAMPO
103
para el anlisis de coliformes por la tcnica de filtracin con membrana consta de las
siguientes partes (OMS, 1988):
104
Otros materiales
Medios de cultivo
Los medios de cultivo pueden ser preparados en el laboratorio central o en los
laboratorios perifricos a fin de garantizar su calidad y esterilidad. Por otro lado, el
mercado ofrece medios de cultivo listos para usar que se distribuyen en forma de
ampollas y viales, son de fcil manipulacin, permiten ahorrar tiempo y optimizan el
anlisis. En el mercado se pueden encontrar ampollas de caldo Endo para coliformes
totales, caldo m-FC y caldo m-coliBlue de 24 horas. Este ltimo medio detecta
simultneamente coliformes totales y E. coli por medio de la tcnica de sustrato definido.
En un laboratorio se pueden preparar frascos pequeos o ampollas en condiciones de
MEDICIONES DE CAMPO
105
esterilidad con los caldos antes mencionados o con caldo m-lauril sulfato, m-enriquecido
Teepol, entre otros.
106
Una fuente de energa que puede ser una batera de automvil o una batera
porttil (c).
Una gradilla para la incubacin en tubos (d).
Lmpara UV porttil para la deteccin de E. coli, si se usa el mtodo de sustrato
definido.
Materiales
Tubos de prueba con tapa rosca, adaptables a la gradilla y al equipo de bao
Mara.
Frascos con agua de dilucin (vase la frmula en el apndice A).
Pipetas estriles.
Mechero de alcohol.
Medios de cultivo
Los medios de cultivo pueden prepararse en el laboratorio central o en los
laboratorios perifricos a fin de garantizar su calidad y esterilidad. Se los prepara de
acuerdo con las instrucciones del productor y en cada tubo se colocar un vial (tubo
Durham) invertido. Por otro lado, el mercado ofrece medios de cultivo listos para usar
es decir, esterilizados. Estos son tubos o ampollas. Son de fcil manipulacin,
permiten ahorrar tiempo y optimizan el anlisis. En el mercado se pueden encontrar
tubos con medios listos para usar: caldo lauril triptosa para la prueba presuntiva de
coliformes, caldo verde brillante bilis 2% para la prueba confirmativa de coliformes
totales y caldo EC para coliformes termotolerantes.
MEDICIONES DE CAMPO
107
Una fuente de energa que puede ser una batera de automvil o una batera
porttil (c).
Una gradilla para la incubacin de los frascos (d).
Lmpara UV porttil para la deteccin de E. coli, si se usa el mtodo de sustrato
definido (e).
Materiales
Medios de cultivo
Los medios de cultivo pueden ser preparados en un laboratorio regional a fin de
garantizar su calidad y esterilidad. Sern preparados de acuerdo con las instrucciones
108
del productor. Por otro lado, el mercado ofrece medios de cultivo listos para usar que
se distribuyen en frascos, son de fcil manipulacin, permiten ahorrar tiempo y optimizan
el anlisis. En el mercado se pueden encontrar frascos con medios listos para usar,
como medio P-A para el anlisis cualitativo presuntivo de coliformes totales. Para la
prueba confirmativa de coliformes totales, tubos con caldo verde brillante bilis 2%, y
para coliformes termotolerantes, caldo EC.
1.3
MEDICIONES DE CAMPO
3.
4.
5.
109
110
6.
Con el fin de controlar la esterilidad del equipo y del medio de cultivo, el resultado de esta placa debe
ser negativo. Verter en el embudo
100 mililitros de agua destilada
estril.
Filtrar el agua destilada, aplicar
vaco con una bombilla de mano
o con una jeringa especial.
Evitar que se seque la membrana.
Seguir todo el procedimiento
como si se tratara de una muestra
(pasos del 8 al 13).
7.
8.
MEDICIONES DE CAMPO
9.
Separar la parte superior del portafiltros y, con una pinza previamente flameada en sus extremos,
retirar la membrana cuidando de
que la pinza toque apenas la parte
perifrica, fuera del rea de filtracin.
10.
11.
111
112
12.
13.
Lectura
MEDICIONES DE CAMPO
1.4
113
1.5
2.
2.1
Introduccin
114
En las zonas rurales, donde no es fcil acceder a un laboratorio, con mayor razn
se recomienda su determinacin en el campo. La tecnologa ofrece un sinnmero de modelos de instrumentos para esta medicin. Lo importante es seleccionar un modelo que se
ajuste al rango esperado y que el tcnico cuente con los accesorios necesarios para su
calibracin. Tambin se requiere un mantenimiento continuo de los instrumentos de campo.
2.2
Mediciones de campo
Procedimiento de la tcnica del comparador visual para la medicin del cloro libre residual
1.
MEDICIONES DE CAMPO
2.
3.
4.
115
116
5.
6.
7.
Manteniendo el comparador de
frente a la luz natural, gire el disco
hasta que el color de b sea el mismo que el de a. Lea en c el valor
de cloro libre residual en mg/L.
MEDICIONES DE CAMPO
117
Presentacin de resultados
Los resultados de cloro libre residual se expresan en mg/L.
Mtodo colorimtrico con ortotolidina (OT)
En los ltimos aos, se ha recomendado el mtodo de la DPD antes que el de la
OT, por considerarse que este ltimo compuesto es cancergeno. Este argumento no
parece muy consistente, ya que, por un lado, muchos de los compuestos orgnicos que
se utilizan en los laboratorios tienen un efecto carcinognico potencial igual o mayor
que el de la OT y no por ello dejan de utilizarse. Por otro lado, en todo el mundo y sin
restricciones, en ferreteras o supermercados se vende la ortotolidina para analizar el
cloro residual en piscinas de natacin. Esto ltimo lo hace especialmente importante
por la economa de uso y por la facilidad de su obtencin.
El mtodo a nivel de campo provee informacin rpida y econmica sobre la
presencia de cloro residual, pero no es tan preciso como la tcnica de laboratorio
conocida como ortotolidina-arsenito (OTA), la que permite distinguir entre cloro libre,
combinado, y discrimina entre la presencia de cloro y las interferencias. El mtodo
colorimtrico con ortotolidina es til para la determinacin del cloro residual total.
Para la determinacin de cloro residual con instrumentos de campo por el mtodo
de la OT, es posible seguir un procedimiento similar al mtodo colorimtrico de campo
con DPD, antes descrito, para lo cual se requiere el reactivo de OT y un comparador de
cloro con una escala de colores que se ajusta a la reaccin del cloro residual con la OT.
Por otro lado, en el campo tambin se puede realizar la prueba de OT con tubos
Nessler, mtodo que representa un bajo costo.
El cloro residual reacciona directamente con la ortotolidina y forma un
compuesto de color amarillo (OPS, 1978). En el mtodo colorimtrico con OT la
intensidad del color del indicador se compara en forma visual con una escala de estndares
o patrones de color (que figuran en el cuadro 5.6). La intensidad del color que desarrolla
el compuesto es proporcional a la concentracin del cloro.
118
Procedimiento del mtodo colorimtrico de campo con ortotolidina usando tubos Nessler
(OPS, 1978)
Presentacin de resultados
Los resultados de cloro residual se expresan en mg/L.
MEDICIONES DE CAMPO
119
120
MEDICIONES DE CAMPO
121
2.
Presentacin de resultados
Los resultados se expresan en UNT.
122
123
BIBLIOGRAFA
Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (1997). Manual para la certificacin de laboratorios de anlisis de agua potable. Criterios y procedimientos para el
aseguramiento de la calidad. Cuarta edicin. Cincinnati, Ohio.
Allen, M. (1996). La importancia para la salud pblica de los indicadores bacterianos que
se encuentran en el agua potable. Reunin Regional sobre la Calidad del Agua Potable.
Lima, CEPIS.
American Public Health Association-American Water Works Association (1999). Standard
124
Vol. 3. Control de la calidad del agua potable en sistemas de abastecimiento para pequeas
comunidades. Publicacin Cientfica 508. Washington D. C., OPS.
125
APNDICES
126
127
APNDICE A
Preparacin de soluciones y medios de cultivo
A.1
Agua de dilucin
Frmula:
128
uso del laboratorio en frascos con tapa rosca. Esterilizar por autoclavado a 121 C
durante 15 minutos. Rotular y almacenar en refrigeracin.
Antes de utilizar la solucin stock A, se deber verificar la ausencia de cualquier
contaminacin microbiana (turbiedad, presencia de material en suspensin). En caso
afirmativo, la solucin deber descartarse.
APNDICE A
A.3
129
Frmula
Peptona ........................................................................................
10,0 g
Lactosa .........................................................................................
10,0 g
Oxgall ...........................................................................................
20,0 g
Verde brillante ............................................................................ 0,0133 g
Agua destilada ............................................................................ 1.000 mL
Caldo EC
Frmula
Triptosa o tripticasa ...................................................................
20,0 g
Lactosa .........................................................................................
5,0 g
Mezcla de sales biliares o sales biliares N. 3 ........................
1,5 g
Fosfato de hidrgeno dipotasio (K2HPO4) ..........................
4,0 g
Fosfato dihidrgeno potasio (KH2PO4) ...............................
1,5 g
Cloruro de sodio (NaCl) .........................................................
5,0 g
Agua destilada ............................................................................ 1.000 mL
130
A.5
Frmula
Extracto de levadura .................................................................
1,2 g
Casitona o tripticasa ..................................................................
3,7 g
Tiopeptona o tiotona ................................................................
3,7 g
Triptosa ........................................................................................
7,5 g
Lactosa .........................................................................................
9,4 g
Fosfato de hidrgeno dipotasio (K2HPO4) ..........................
3,3 g
1,0 g
Fosfato dihidrgeno potasio (KH2PO4) ...............................
Cloruro de sodio (NaCl) .........................................................
3,7 g
Desoxicolato de sodio ..............................................................
0,1 g
Lauril sulfato se sodio ...............................................................
0,05 g
Sulfito de sodio (Na2SO3) .......................................................
1,6 g
Fucsina bsica .............................................................................
0,8 g
Agar ..............................................................................................
15,0 g
Agua destilada ............................................................................ 1.000 mL
Etanol 95% .................................................................................
20 mL
Frmula
Triptosa o polipeptona .............................................................
Tiopeptona o tiotona ................................................................
Casitona o tripticasa ..................................................................
Extracto de levadura .................................................................
Lactosa .........................................................................................
Fosfato de hidrgeno dipotasio (K2HPO4) ..........................
Fosfato dihidrgeno potasio (KH2PO4) ...............................
10,0 g
5,0 g
5,0 g
1,5 g
12,5 g
4,375 g
1,375 g
APNDICE A
131
Frmula
Triptosa o biosate ......................................................................
10,00 g
Proteosa peptona n. 3 o polipeptona ..................................
5,0 g
Extracto de levadura .................................................................
3,0 g
Cloruro de sodio (NaCl) .........................................................
5,0 g
Lactosa .........................................................................................
12,5 g
Sales biliares n. 3 o mezcla de sales biliares .........................
1,5 g
Azul anilina ..................................................................................
0,1 g
Agar ..............................................................................................
15,0 g
Agua destilada ............................................................................ 1.000 mL
132
el medio sin cido roslico, ya que bsicamente evita interferencias debidas al crecimiento
de fondo, que normalmente se pueden presentar en cursos de agua producto de lluvia
luego de un periodo largo de sequa.) Calentar hasta casi llegar a la ebullicin, retirar
rpidamente del calor y enfriar a aproximadamente 45 C. (No esterilizar al autoclave.)
Distribuir entre 5 y 7 mililitros en las placas de petri de 50 x 12 milmetros estriles. Si se
utiliza el caldo m-FC, preparar de la manera descrita arriba (omitiendo el agar) y dispensar
por lo menos 2 mililitros sobre las almohadillas en las placas de petri estriles. El pH
final del medio es de 7,4. Conservar el medio preparado a 2-10 C hasta por 2 semanas.
La solucin de cido roslico se mantiene en la oscuridad entre 2 y 10 C y se
debe eliminar a las dos semanas o antes si el color rojo oscuro cambia a pardo sucio.
A.8
Frmula
Proteosa peptona n. 3 polipeptona ..................................
5,0 g
Extracto de levadura .................................................................
3,0 g
Lactosa .........................................................................................
10,0 g
d-Manitol .....................................................................................
5,0 g
Cloruro de sodio (NaCl) .........................................................
5,0 g
Lauril sulfato de sodio ..............................................................
0,2 g
Desoxicolato de sodio ..............................................................
0,1 g
Prpura de bromocresol ..........................................................
0,35 g
Rojo fenol ...................................................................................
0,3 g
Agar ..............................................................................................
15,0 g
Agua destilada ............................................................................ 1.000 mL
Medio presencia-ausencia
13,0 g
17,5 g
APNDICE A
133
134
135
APNDICE B
Formularios de toma de muestras
136
137
APNDICE B
B.1
Cadena de custodia
N. de encuesta
Puntos de muestreo
Fecha
Hora
Tipo de muestra
N. de
envase
Fecha y hora
Punto de
cadena de
custodia
Entregado por:
Recibido por:
Nombres y firma
Nombres y firma
Entregado al
laboratorio por:
Fecha y hora
Recibido en
laboratorio por:
Nombres y firma
Anlisis
requerido
Fecha y hora
Nombres y firma
Nota: este formato es una propuesta para ser usada en el caso de que se requiera enviar la muestra a un
laboratorio para su anlisis.
138
Ubicacin _____________________
Localidad _____________________
Provincia ______________________
2.
Muestras
2.1
Red de distribucin
Vivienda
Cdigo ____________________________
Distrito ____________________________
Departamento _______________________
Nmero de muestraa
Hora de Cloro
muestreo residual pH/turbiedad Coliformes
1
2
3
4
5
6
a Anlisis realizado por el laboratorio perifrico.
2.2
Componentes
N.o
Tipoa
Hora de
muestra
Cloro
residual
Nmero de muestrab
pH/turbiedad Coliformes
1
2
3
a
b
Fecha: ____________________________
Muestreador: ______________________
Firma: _________________________
Fuente: Rojas, R. (2002). Elementos de vigilancia y control. Gua para la vigilancia y control de la calidad del
agua para consumo humano. Lima, CEPIS/OPS.
Nota: este formato es una propuesta para la toma de muestras en un programa de nivel bsico en lugares
que cuenten con planta de tratamiento y sistema de distribucin de agua. A continuacin se presenta una
gua para llenar el mencionado formato.
APNDICE B
139
2.
Muestras
2.1
2.2
Red de distribucin
Para cada una de las viviendas, se llenarn los recuadros correspondientes
con los datos solicitados: direccin de la vivienda y nombre del entrevistado.
Hora de muestreo.
Cloro residual: Se anotar la concentracin del cloro residual encontrado
en el agua de la vivienda evaluada.
Nmero de muestras: En el casillero se anotar el nmero de la muestra y
del frasco que la contiene y que ser enviado al laboratorio perifrico para
su anlisis.
Componentes
Tipo: Colocar en el recuadro el nombre de la estructura en la que se ha
tomado la muestra de agua: captacin, cmara reductora de presin,
etctera.
Hora de muestreo: Indicar la hora de toma de la muestra.
Cloro residual: Se anotar la concentracin del cloro residual encontrado
en el agua del componente evaluado.
Nmero de muestra: En el casillero se anotar el nmero de la muestra y
del frasco que la contiene y que ser enviado al laboratorio perifrico o al
laboratorio central para su anlisis, si fuera el caso.
Fuente: Rojas, R. 2002. Elementos de vigilancia y control. Gua para la vigilancia y control de la calidad del
agua para consumo humano. Lima, CEPIS/OPS.