Este Roles

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
ESTEROLES
Profesor
Alejandro Martnez Martnez
Facultad de Qumica Farmacutica
E-mail:
amart@muiscas.udea.edu.co
Medelln, Abril de 2002
Alejandro Martnez M., 2002
ESTEROLES
DISTRIBUCION Y ESTADO NATURAL

Los esteroles se encuentran ampliamente distribuidos en los reinos animal y
vegetal; y se les encuentra en forma libre (Tambin llamados agliconas
esteroides), como steres o como glicsidos. Todos contienen un ncleo
ciclopentanoperhidrofenantreno y presentan un grupo hidroxilo en el carbono 3. La
mayora de esteroles naturales poseen una cadena lateral de 8 a 10 tomos de
carbono y un enlace doble en el C-5 (Figura 1).
21
22
24
26
20
18
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25
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11
16
13
19
27
1
2
9
10
14
15
HO
5
4
Figura 1. Enumeracin de los tomos de carbono en la molcula de colesterol
En los animales superiores (Incluido el hombre) se encuentra principalmente el

colesterol, el cual es un constituyente importante de membranas y precursor de
sustancias fisiolgicamente importantes (Hormonas, Acidos biliares, Vitamina D,
etc.).
En las plantas superiores se encuentran principalmente los denominados
fitosteroles: b-Sitosterol, Campesterol y Estigmasterol (Figura 2). Un esterol menos
comn es el Fucosterol, el cual es el esteroide principal de muchas algas pardas y
tambin se le ha detectado en el coco (Cocus nucifera L.).
En los hongos y levaduras se encuentra principalmente el Ergosterol.

En cambio, los animales inferiores (Principalmente invertebrados marinos tales
como esponjas, estrellas, corales, etc.) y ciertas plantas filogenticamente poco
evolucionadas (P.ej. algunas Orchidaceae) contienen mezclas complejas de
esteroles con modificaciones estructurales variadas tales como ncleos sin el
carbono 4 (A-nor-esteroles), sin el carbono 19 (19-Nor-esteroles), con varias
insaturaciones; cadenas laterales con ms de 10 carbonos, con anillos
ciclopropano, con enlaces alnicos, etc. En la Figura 2 se presentan algunos
ejemplos.
Con base en la diversidad estructural observada para los esteroles terrestres y
marinos identificados hasta 1978,
y trabajando sobre consideraciones
biosintticas, es interesante resaltar que a travs de un programa de computador
denominado REACT Varkony y col. predijeron la existencia de 1778 esteroles
naturales1.
1. Varkony T.H., Smith D.H., Djerassi C., TETRAHEDRON 34, 841 (1978).
28
22
22
24
HO
Colesterol (R=H)
HO
Campesterol (R=Me)
Sitosterol (R=Et)
Estigmasterol (R=Et, insat. C-22)
HOCH2
Ergosterol (insat. C-22)

Fucosterol (insat. 24-28)
HO
C
HO
HO
Figura 2. Algunos ejemplos de esteroles naturales. Las cuatro estructuras

mostradas abajo corresponden a esteroles de origen marino
PROPIEDADES FISICAS
La gran mayora de esteroles conocidos son slidos cristalinos incoloros, solubles
en solventes orgnicos relativamente apolares (Cloroformo, Benceno, etc.),
menos solubles en alcoholes de bajo peso molecular, y que funden sin
descomponerse (En forma libre o esterificada). Presentan adems actividad ptica
debido a los carbonos asimtricos que poseen. Los esteroles se pueden
recristalizar en metanol caliente o en la mezcla metanol-tetrahidrofurano 10:1,
formando cristales en forma de agujas brillantes incoloras. Los que presentan
dobles enlaces conjugados son de color amarillento y tienden a descomponerse
por accin de la luz como por ejemplo los esteroles con insaturaciones en C-5 y
C-7, los cuales son susceptibles a la reaccin de oxidacin fotoqumica:
R
O2
HO
hv
HO
O
BIOGENESIS
Los esteroles se derivan biogenticamente de la AcetilCoA (Ruta del Acetato) va
mevalonato y escualeno. Los esteroles vegetales tienen como precursor inmediato
al cicloartenol2, mientras que los animales tienen al lanosterol (Figura 3). De una
forma anloga se originan los triterpenoides.
En la biognesis de los esteroles tambin estn implicados procesos tales como
hidrogenaciones y deshidrogenaciones C-C,
metilaciones (va Sadenosilmetionina), hidroxilaciones, etc.
Un hecho estructural notable es que la gran mayora de esteroles naturales tienen
sustituyentes alqulicos sobre los carbonos 4 y 24 fundamentalmente, y este
hecho es justificado por la misma biognesis.
El conocimiento de la biosntesis de esteroides ha contribuido al desarrollo de la
Quimotaxonoma vegetal, particularmente en el caso de las algas, y ha servido
para correlacionar la estructura de estas sustancias con aspectos evolutivos.
Para una revisin sobre el origen y la biosntesis de esteroles de esponjas
marinas puede consultarse el artculo de Djerassi y Silva 3. Para procedimientos
de sntesis qumica anlogos a la ciclizacin del escualeno consultar el trabajo de
Zoretic y col.4
HECHOS ESTRUCTURALES
Los esteroles naturales conocidos presentan las siguientes caractersticas
estructurales:
a. Los enlaces dobles en el ncleo se presentan principalmente en C-5, C-7, C-8 y
C-9.
b. Los enlaces dobles en la cadena lateral se presentan especialmente en C-22, y
con menor frecuencia en C-24 y C-25.
2 Phytochemistry 40 (6) 1585 (1995)
3. Djerassi C., Silva C.J., ACC. CHEM. RES. 24, 371 (1991).
4Zoretic, P. A. y col.; TETRAHEDRON LETT. 37 (44) 7909 (1996).
c. Adems de los grupos metilos 18, 19, 21, 26 y 27, es frecuente encontrar
grupos metilo en C-24, menos frecuente en el C-4.
d. La cadena lateral presenta grupos alquilo (metilo, etilo, isopropilo, propilo, etc.)
principalmente en C-24.
e. Algunos organismos poco evolucionados (invertebrados marinos, orqudeas,
etc.) presentan esteroles con modificaciones en la cadena lateral (anillos
ciclopropano, dobles enlaces alnicos, metilaciones en C-26 y C-27, ausencia del
C-25, etc.), y con ncleos modificados (ver Figura 2)5.
5Duque, C.; Martnez, A.; Peuela, G.; REV. COL. QUIM. 12(1) 51 (1983).
AcetilCoA
OPP
Farnesil-PP
[O]
Escualeno
HO
HO
Esteroles
vegetales
HO
Cicloartenol
Figura 3. Esquema biogentico para los esteroles vegetales
METODOS DE ANALISIS
a. EXTRACCION
El mtodo ms utilizado para la extraccin de esteroles libres y esterificados es el
de Bligh y Dyer. El tejido vegetal seco y molido se extrae a temperaturas menores
de 40C, con un volumen suficiente de una mezcla Cloroformo:Metanol 2:1. Toda
esta mezcla se filtra y al filtrado obtenido se le hace particin con un volumen
adecuado de agua. La fase clorofrmica contiene entonces todos los compuestos
liposolubles tales como esteroides, triglicridos, otros terpenoides, cidos grasos,
etc.
Cuando se sabe de antemano que la muestra contiene glicsidos esteroides, y se
desea estudiar sus respectivas agliconas, entonces el material vegetal se extrae
con alcohol o con una mezcla alcohol:agua, y el extracto obtenido se hidroliza con
HCl 2M.
Existe un procedimiento a escala industrial para la obtencin del colesterol de
mdula de bovinos6. As mismo se ha descrito un proceso de obtencin de los
fitosteroles a partir de la "cachaza" de la caa de azcar7.
b. METODOS DE SEPARACION Y PURIFICACION
Para la separacin y purificacin de esteroles a partir de extractos lipdicos, se
emplean con buenos resultados la Cromatografa en Columna y la Cromatografa
en Capa Fina (CCF), con slica gel y eluentes como mezclas de n-hexano-acetato
de etilo, y mezclas de ellos. Una mezcla recomendable es n-Hexano-Acetato de
etilo 4:1. Existen varias clases de reveladores incluido el de Liebermann-Burchard,
uno con cloruro de berberina y carbazol-cido sulfrico.
Sin embargo, no siempre estas tcnicas en forma aislada permiten la obtencin
de esteroles puros, sobretodo en el caso de mezclas de esteroles, por lo cual
deben complementarse con otras tcnicas de separacin y purificacin ms
eficientes como son: La CCF Argntica (placas de slica gel impregnadas con una
solucin de nitrato de plata al 10% en acetonitrilo), la Cromatografa Lquida de
Alta Eficiencia (CLAE o HPLC en ingls) y la Cromatografa de Gases (CG).
En la CCF Argntica, se impregna la slica con soluciones concentradas de Nitrato
de Plata en agua:alcohol; y como resultado los esteroles se separan sobre dicha
slica por retencin diferencial de acuerdo al nmero de enlaces dobles C=C que
contengan en su estructura (P.ej. el ergosterol con 3 enlaces dobles es ms
retenido que el colesterol, el cual solo posee un enlace doble). Esta es una
tcnica no solamente til para los esteroles sino tambin para los productos
naturales en general8.
6Padilla, A. y col.; REV. CUB. FARM. 8, 3-19 (1974).

7Nava, D. A.; REV. CUB. FARM. 4, 27-35 (1970)
8 a) Williams, C. M., Mander, L. N., TETRAHEDRON 57, 425 (2001); b) Wilson, R., Sargent, J. R.,
J. CHROMATOG. A 905, 251-257 (2001).
La CLAE permite las mejores separaciones de mezclas esterlicas y se obtienen

ms rpidamente esteroles puros. Son muy utilizadas columnas de
Octadecilsilano (Fase Reversa) y eluentes tales como: Metanol, mezclas
Metanol:Agua, mezclas Acetonitrilo:Agua, etc. Adems, la integracin de la CLAE
con la Espectrometra de masas es una excelente tcnica porque a la vez que
separa mezclas de esteroles, permite obtener informacin estructural a partir de
los espectros de masas, inclusive es posible hacer diferenciacin entre epmeros
debido a su retencin diferencial 9. Adicionalmente, la combinacin de la CLAE
con espectrmetros UV (de longitud de onda variable o arreglo de diodos) e
infrarrojo con transformada de Fourier, permite la obtencin de los
correspondientes espectros UV e IR. La Figura muestra el cromatograma CLAE
de la fraccin de esteroles libres de la esponja marina Ircinia campana10.
La Cromatografa de Gases con fases estacionarias como OV-17 (1%, 3%, 5%),
SE-54, etc., con temperaturas de 250-280C, permite una buena separacin y
anlisis de mezclas esterlicas. Adems, si esta se acopla con un espectrmetro
de masas de impacto electrnico, se obtienen los respectivos espectros de
masas, los cuales facilitan la identificacin.
Una revisin completa sobre los mtodos generales de obtencin, purificacin e
identificacin de esteroles la hicieron Popov y colaboradores 11.
9. Ikekawa N., Fujimoto Y., Kadota S., Kikuchi T., J. CHROMATOG. 468, 91 (1989).
10 Martnez, A., Duque, C., Resultados sin publicar.
11Popov, S.; Carlson, R. M. K., Weggmann, A.; Djerassi, C.; STEROIDS 28, 699 (1976).
c. METODOS DE IDENTIFICACION
ENSAYO DE LIEBERMANN-BURCHARD
Los esteroles se pueden reconocer fcilmente en los anlisis fitoqumicos
preliminares de muestras vegetales y animales mediante el ensayo de
Liebermann-Burchard. En este ensayo, a una solucin clorofrmica de la muestra
que se analiza, se le agrega un volumen igual de anhdrido actico y una gota de
cido sulfrico concentrado (98%). Si hay esteroles, se producen coloraciones
verdes, violetas, rojas o azules.
Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada. Algunos
autores aseguran que la dan positiva solamente los esteroles que tengan en su
estructura grupos dieno conjugados reales o potenciales (por ejemplo en los D5-3hidroxiesteroides la deshidratacin genera un D3,5 dieno).
Existen otras pruebas de coloracin para el reconocimiento de esteroides, pero
son menos utilizadas debido al gran desarrollo de las tcnicas instrumentales.
Para estas pruebas puede consultarse el libro de Domnguez12.
ESPECTROSCOPIA INFRARROJO
Los espectros infrarrojo de la mayora de esteroles naturales son bastante simples
y similares a los de alcoholes alifticos saturados o insaturados. Generalmente se
observan: Una banda de tensin O-H alrededor de 3600 cm-1, bandas de tensin
de enlaces C-H saturados alrededor de 2960-2780 cm-1, bandas de tensin de
enlaces =C-H alrededor de 3125-3030 cm-1, bandas de flexin de enlaces
saturados C-H alrededor de 1440 y 1380 cm-1 y bandas de tensin de enlaces
C=C olefnicos alrededor de 1670 cm-1 (Generalmente es una banda dbil que a
veces no se observa). Existe una coleccin de espectros infrarrojo de esteroles.
Una aplicacin interesante de la espectroscopia infrarrojo es que permite
diferenciar por ejemplo entre los steres de esteroles y otros tipos de sustancias
como los triglicridos y los fosfolpidos13.
ESPECTROMETRIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR PROTONICA
Los espectros de resonancia magntica nuclear protnica de los esteroles deben
ser preferiblemente de alta resolucin (220, 360 MHz, etc.), debido al nmero y
clases de protones que contienen. En forma general se observan las seales de
protones metlicos en la regin de 0-1 ppm con constantes de acoplamiento de 67 Hz cuando tienen carbonos saturados vecinos. El protn ligado al carbono 3 se
observa a 360 MHz como un "heptete" alrededor de 3.53 ppm cuando el hidroxilo
est en posicin 3b, mientras que se observa como un "quintete" cuando el
hidroxilo est en posicin 3a.
12Domnguez, X. A.; "Mtodos de Investigacin Fitoqumica". Ed. Limusa, Mexico, 1979.

13. Kisner H.J., Brown C.W., Kavarnos G.J., ANAL CHEM. 54, 1479 (1982).
En el caso de los esteroles con enlace doble entre los carbonos 5 y 6, el protn
del carbono 6 se observa como un "doblete" ancho alrededor de 5.35 ppm.
En el caso de esteroles con enlaces dobles en C-5 y C-7 (esteroles con ncleo
tipo ergosterol) los protones H-6 y H-7 se observan como multipletes en 5.4 y 5.5
ppm.
En general, los espectros RMN permiten asignaciones estereoqumicas a partir de
su anlisis detallado y por comparacin con los espectros de esteroles de
estructura completamente conocida.
En el caso de los derivados acetilados de esteroles, la presencia del grupo acetato
sobre el carbono 3, desplaza la seal del protn ligado al mismo carbono hasta
valores de 4.5 ppm, adems en el espectro aparece la seal del grupo metilo del
acetato alrededor de 1.8 ppm.
La regin de protones metlicos (0-1.2 ppm) es conocida para varios esteroles
naturales, y permite asignaciones estereoqumicas precisas de la cadena lateral.
ESPECTROMETRIA DE MASAS DE IMPACTO ELECTRONICO14
Los espectros de masas de impacto electrnico (70 eV) de los esteroles libres
proporcionan buena informacin estructural y existen mecanismos de
fragmentacin verificados experimentalmente con esteroles marcados con
istopos tales como deuterio.
Teniendo en cuenta que la mayora de esteroles naturales poseen 4 clases de
ncleos tetracclicos: D5-3-Hidroxiandrosteno, D0-3-Hidroxiandrostano, D7-3Hidroxiandrosteno,
D5,7-3-Hidroxiandrostadieno
y
D5,7,9(11)-3Hidroxiandrostatrieno (Figura 5), y que muchos de ellos tienen cadenas laterales
hidrocarbonadas saturadas o monoinsaturadas en los carbonos 22, 24 o 25;
pueden establecerse las siguientes caractersticas estructurales a partir de su
espectro de masas I.E.:
a) Los esteroles libres con ncleo D5-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral
saturada presentan en sus espectros de masas normalmente los fragmentos: M
(Ion molecular), M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, M-85, M-111, 273, 255, 231,
213 y 145. Adems, si contienen un grupo isopropilo terminal se observan
tambin los fragmentos M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados
acetilados muestran los fragmentos M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, 255 (M-AcOHR), 213 y 145. Los derivados Trimetilsililteres (TMS) muestran los fragmentos M,
M-TMSOH, M-TMSOH-15, 255 (M-TMSOH-R) y 145.
b) Los esteroles libres con ncleo D5-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral
hidrocarbonada (No oxigenada) insaturada presentan adems de los fragmentos
14a) Budzikiewicz et al., "Mass Spectrometry of Natural Products", Vol. II: Steroids; Holden-Day,
San Francisco, 1964. b) J. ORG. CHEM. 42 (4) 725 (1977). c) J. ORG. CHEM. 46 954 (1981). d) J.
AMER. CHEM. SOC. 102 (2) 807 (1980). e) REV. LATIN. QUIM. 15 (3) 107 (1984). f) PURE APPL.
CHEM. 50, 171 (1978). g) J. AMER. CHEM. SOC. 100, 7677 (1978). h) BULL. SOC. CHIM. BELG.
87 (7) 539 (1978). i) TETRAHEDRON 44 (5) 1359 (1982).
citados en (a), los fragmentos m/z=300, 271 (muy intenso), 253, 229 y 211, si son
monoinsaturados en el carbono 22. Si la insaturacin es en el carbono 24, se
observa adems el fragmento intenso m/z=314. Finalmente, si la insaturacin es
en el carbono 25, se observa adems el fragmento m/z: 328 intenso. Estos
fragmentos intensos de masa par se originan por rupturas tipo McLafferty.
c) Los esteroles libres con ncleo D0-3-Hidroxiandrostano y la cadena lateral
hidrocarbonada (No oxigenada) saturada presentan los fragmentos: M, M-Metilo,
M-Agua, M-Metilo-Agua, m/z: 233, 215 y 147, generalmente. Adems, como en el
caso de los anteriores, si poseen un grupo isopropilo terminal presentan los
fragmentos: M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados presentan
los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, 257 (M-AcOH-R), 215 y 147. Los
derivados TMS-teres muestran los iones M, M-TMSOH, M-TMSOH-15, 257, 215
y 147.
d) Los esteroles con ncleo D0-3-Hidroxiandrostano y la cadena lateral
hidrocarbonada (No oxigenada) monoinsaturada, presentan adems de los
fragmentos citados en (c), a los fragmentos: m/z: 302, 231, 211; si la insaturacin
es en el carbono 22. Si la insaturacin es sobre el carbono 24, se aprecia adems
el fragmento intenso m/z: 316. Y finalmente, si la insaturacin es sobre el carbono
25, se observa el fragmento intenso m/z: 330.
e) Los esteroles libres con ncleo D7-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral
hidrocarbonada (No oxigenada) saturada, presentan en sus espectros de masas
los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, 273, 255, 246, 231 y 213.
Adems, si tienen un grupo isopropilo terminal, a veces se observan los
fragmentos: M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados muestran
los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, M-AcOH-R y 213, por lo cual no es
posible diferenciarlos de los derivados acetilados de esteroles con ncleo D5-3Hidroxiandrosteno. Los derivados TMS muestran fragmentos de m/z iguales a los
descritos para los derivados TMS de esteroles D5.
h) Los esteroles con ncleo D7-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral
Hidrocarbonada (No oxigenada) monoinsaturada, presentan en sus espectros de
masas, adems de los fragmentos citados en (e), los siguientes fragmentos: m/z:
300, 271, 253, 229 y 211, si la insaturacin es sobre el carbono 22. Si la
insaturacin es sobre el carbono 24, se observa adems el fragmento intenso m/z:
314. Y finalmente, si la insaturacin es sobre el carbono 25, se observa adems el
fragmento intenso de masa m/z: 328.
i) Los esteroles con ncleo D5,7-3-Hidroxiandrostadieno y la cadena lateral
los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, 271, 253, 229, 211, 158,
143 y 12815. Adems, si tienen un grupo isopropilo terminal, a veces se observan

los fragmentos: M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Cuando la cadena lateral es
insaturada en lugar de m/z: 158 se observa m/z: 157. Los derivados acetilados
muestran los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, M-AcOH-R, 211, 158 (Si R
saturada), 157 (Si R insaturada), 143 y 128. Los derivados TMS-teres muestran
los iones M, M-TMSOH, M-TMSOH-15, 253, 211 y 143
j) Los esteroles con ncleo D5,7,9(11)-3-Hidroxiandrostatrieno y la cadena lateral
los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, 251, 209 y 141. Adems, si
tienen un grupo isopropilo terminal, a veces se observan los fragmentos: MIsopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados muestran los fragmentos:
M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, M-AcOH-R, 209 y 141.
Las Figuras 6. a, b, c y d, esquematizan las posibles fragmentaciones de esteroles
con
ncleos
D0-3-Hidroxiandrosteno,
D5-3-Hidroxiandrosteno,
D7-3Hidroxiandrostano y D5,7-3-Hidroxiandrostadieno, tanto en su forma libre como en
forma de derivados acetilados, metilados y teres TMS.
Existe adems un programa de computador para identificar varias clases de
esteroides naturales, el programa EMIE. Este programa sirve para el anlisis de
los datos de espectros de masas de impacto electrnico de esteroles con ncleos
. D5-3-Hidroxiandrosteno, D0-3-Hidroxiandrostano, D7-3-Hidroxiandrosteno, D5,7-3Hidroxiandrostadieno, con cadenas laterales hidrocarbonadas saturadas o
monoinsaturadas en C-22, C-24 y C-25, adems otros tipos de esteroides como
sapogeninas, espirosolanos, cardenlidos, steres metlicos de cidos grasos,
etc16. Con este programa es posible no solo identificar esteroles ya conocidos,
sino que adems puede ser til en la caracterizacin de esteroles como los
predichos con el programa REACT, que en 1978 calcul la existencia de hasta
1778 esteroles naturales, de los cuales hasta 1990 se haban aislado menos de
50017.
15Galli G., Maroni S., STEROIDS 10(3) 189 (1967).

16 Http//:huitoto.udea.edu.co/~farmacogfit
17 Varkony, T. H., y col., TETRAHEDRON 34, 841 (1978).
R
CH2
[M-CH3]+
-CH3
X=H
XO
HO
M+.
m/z 233
-XOH
-H2O
R
-R
X=Ac
[M-AcOH-41]+
-CH3
M-XOH
m/z 257
[M-XOH-15]+
m/z 302 si
insat. en C-22
X=H
-CH3
m/z 316 si
insat. en C-24
X=H
m/z 215
m/z 147
m/z 330 si
insat. en C-25
X=H
Figura 6.a. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de

esteroles con el ncleo D0-androstano (X = H, Ac, Me, TMS)
R
[M-CH3]+
-CH3
X=H
X=H
[M-85]+
[M-111]+
-R
XO
HO
M+.
m/z 273
-XOH
-H2O
R
-R
X=Ac
[M-AcOH-41]+
-CH3
M-XOH
m/z 255
[M-XOH-15]+
m/z 300 si
insat. en C-22
X=H
-CH3
m/z 314 si
insat. en C-24
X=H
m/z 213
m/z 145
m/z 328 si
insat. en C-25
X=H
Figura 6.b. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de

esteroles con el ncleo D5-androsteno (X = H, Ac, Me, TMS)
[M-CH3]+
-CH3
X=H
XO
HO
M+.
m/z 246
-XOH
R
-R
X=Ac
[M-AcOH-41]+
-CH3
M-XOH
m/z 255
[M-XOH-15]+
m/z 300 si
insat. en C-22
X=H
-CH3
m/z 314 si
insat. en C-24
X=H
m/z 213
m/z 145
m/z 328 si
insat. en C-25
X=H
Figura 6.c. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de

esteroles con el ncleo D7-androsteno (X = H, Ac, Me, TMS)
[M-CH3]+
-CH3
X=H
-R
XO
HO
M+.
m/z 271
-XOH
-H2O
R
-R
X=Ac
[M-AcOH-41]+
-CH3
m/z 253
M-XOH
R
[M-XOH-15]+
m/z 158
-CH3
-CH3
m/z 211
m/z 143
m/z 128
Figura 6.d. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de

esteroles con el ncleo D5,7-androstadieno (X = H, Ac, Me, TMS)
En el caso de esteroles dihidroxilados, sus espectros de masas muestran

fragmentos que incluyen las prdidas de dos molculas de agua, en general se
observan M (generalmente muy dbil), M-agua, M-Me-H2O, M-2H2O, M-2H2OMe, M-R-H2O, M-R-2H2O, M-R-D-H2O, M-R-D-2H2O, etc18.
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA
Debido a que la mayora de esteroles naturales contienen grupos funcionales tales
como enlaces dobles C=C y el grupo hidroxilo, sus espectros ultravioleta en
metanol (200-360 nm) nicamente muestran un mximo de absorcin alrededor
de 205 nm, debido a transiciones p-p* del enlace doble aislado. Sin embargo, para
esteroles con grupos dienos conjugados como por ejemplo el ergosterol, estos s
absorben intensamente en la regin citada y la posicin de los mximos de
absorcin se puede predecir con las reglas de Woodward-Fieser para dienos
conjugados. Por ejemplo, los esteroles con ncleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno
presentan mximos de absorcin alrededor de 240, 270, 280 y 290 nm (Figura 7),
mientras que los esteroles con ncleo D5,7,9(11)-3-hidroxiandrostatrieno
presentan mximos de absorcin alrededor de 310, 325 y 340 nm19.
Los esteroides con el cromforo D4-3-oxa muestran un mximo caracterstico
alrededor de 240 nm.
Absorbancia
0
200
240
280
320
360
Longitud de onda (nm)
Figura 7. Espectro UV del ergosterol en metanol
18Notaro, G. y col.; J. NAT. PROD. 55 (11) 1588-1594 (1992).

19. Djerassi C, Romo J., Rosenkranz G., J. ORG. CHEM. 16, 754 (1951).
ESPECTROMETRIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR DE CARBONO13

El gran desarrollo de la Espectrometra de Resonancia Magntica Nuclear de
carbono-13 en los ltimos aos, ha hecho que esta tcnica desplace a otras en la
elucidacin estructural de esteroides. Es muy fcil reconocer en estos espectros
las seales caractersticas de esteroles como por ejemplo, la seal del carbono 3
aparece alrededor de 72 ppm en esteroles con ncleos D5- y D7-3hidroxiandrosteno20. Adems, los esteroles con ncleo D5-3-hidroxiandrosteno
presentan las seales de los carbonos 5 y 6 en 141 y 122 ppm aproximadamente,
la seal del metilo 18 a 12 ppm, y la del metilo 19 a 20 ppm. Los esteroles con
ncleo D7-3- hidroxiandrosteno muestran las seales de los carbonos 7 y 8 a 130
y 140 ppm, y las seales de los metilos 18 y 19 alrededor de 12 ppm
aproximadamente. La tabla 4 21 resume los desplazamientos qumicos
aproximados para varios tipos de carbonos caractersticos de los esteroides
naturales:
Tabla 4. Rangos de desplazamiento qumico en RMN-13C para varios tipos de
carbonos caractersticos de esteroides naturales
Tipo de carbono
Desplazamiento qumico (ppm)
CH3 sat.
12-24
CH2 sat.
20-41
CH sat.
35-57
C sat.
27-43
C-OH sat.
65-91
C=C olefnico
119-172
C=O
177-220
C-F
88-102
Adicionalmente, es posible hacer la diferenciacin entre epmeros gracias a

diferencias en sus desplazamientos qumicos 22.
Recientemente, Hanke y Kubo aclararon las asignaciones de los d en RMN-13C
del colesterol, utilizando secuencias de pulsos DEPT e INEPT.
20 Nota: Rehman y col. reportan que si el desplazamiento qumico del C-3 es alrededor de 77 ppm,
este es un indicio de un esterol con un carbohidrato ligado a travs del C-3. (Rehnan, A-U. y col.,
PHYTOCHEMISTRY 45 (8) 1721 (1997).
21Kalinowski, H-O.; Berger, S.; Braun, S.; "Carbon-13 NMR Spectroscopy", John Wiley & sons,
Chichester-New York-Brisbane, 1984, pp. 434.
22. Wright J.L.C., McInnes A.G., Shimizu S., Smith D.G., Walter J.A., Idler D., Khalil W., CAN. J.
CHEM. 56, 1898-1903 (1978)
Por otro lado, el desarrollo de la RMN Bidimensional permite hacer una asignacin
ms fcil de las seales y por ende de la estructura. Para un ejemplo de la
utilizacin de las tcnicas RMN-Bidimensionales en la elucidacin estructural de
esteroles puede consultarse el artculo de Prakash y col., en el cual inclusive se
hace la asignacin estereoqumica trans de los anillos A/B de un esteroide de un
alga roja, utilizando el espectro COSY H-H Rango Largo(i.e. Acoplamientos a
larga distancia: acoplamientos "W")23.
Otro ejemplo interesante es la aplicacin de la tcnica bidimensional NOE
(comnmente llamada NOESY) en el anlisis conformacional de esteroides 4-en3-ona24.
Existen colecciones de espectros RMN-13C de esteroles25, e inclusive hay
programas de computador para la simulacin de dichos espectros, por ejemplo el
programa Chemwind versin 3.1., el cual trabaja bajo ambiente Windows .
Tambin existen reportes sobre el espectro RMN de 17O para el colesterol y otros
esteroides26.
DIFRACTOMETRIA DE RAYOS-X
Aunque el notable desarrollo de las tcnicas de RMN ha ayudado mucho en la
asignacin estereoqumica de los esteroles, ms recientemente, y gracias a la
ayuda del computador, actualmente es posible la asignacin espacial completa de
los esteroles por difractometra de Rayos-X. Un ejemplo de esto es la asignacin
estereoqumica y espacial hecha para el numersterol-A aislado del coral Sinularia
numerosa27.
CORRELACIONES ENTRE ROTACION OPTICA Y ESTRUCTURA28
Se han hecho estudios donde se correlaciona la rotacin especfica de soluciones
de esteroles con sus caractersticas estructurales. La Tabla 5 muestra estas
correlaciones.
23. Prakash O., et al. J. NAT. PROD. 52(4) 686 (1989).

24. Desai U.R., Trivedi G.K., J. ORG. CHEM. 56, 4625 (1991).
25. Akihisa T., Matsumoto T., ABURA KAGAKU 36, 301-320 (1987).
26Smith, L. L., y col.; STEROIDS 58 (6) 260-267 (1993).
27. J. NAT. PROD. 55(2) (1992).
28Robinson, T.; "The Organic Constituents of Higher Plants", Cordus Press, North Amherst MASS,
1983.
Tabla 5. Correlaciones entre la rotacin especfica y las caractersticas

estructurales del esteroide
ROTACION
TIPO ESTRUCTURAL
EJEMPLO
ESPECIFICA
[a]D20
Menor de -90
Enlaces dobles conjugados Ergosterol (-135)
en el anillo B
-70 a -50
Enlaces dobles C5-C6 y Estigmasterol (-55.6)
C22-C23
-45 a -30
Enlace doble C5-C6
Colesterol (-39.5)
-25 a +10
Enlace doble C7-C8 y Asterosterol
posiblemente C22-C23
+10 a +30
Ncleo saturado
Colestanol (+20)
+40 a +50
Enlace doble C8-C9 y Zimosterol
posiblemente en la cadena
lateral
NOMENCLATURA IUPAC DE 3-HIDROXIESTEROIDES

Aunque a la mayora de esteroles conocidos se les conoce por sus nombres
vulgares (P.ej. colesterol, estigmasterol, - sitosterol, brassicasterol, coprosterol,
etc.) la IUPAC tiene una forma ms sistemtica para llamar a todas estas clases
de sustancias. Para ello, considera a la mayora de esteroles relacionados con la
estructura del colestano (Figura 5).
El nombre IUPAC consta de cuatro partes:
-el esqueleto bsico
-la posicin de las insaturaciones
-la posicin del grupo hidroxilo
-la estereoqumica
Por ejemplo veamos el nombre IUPAC del colesterol:
El esqueleto bsico es el del colestano entonces: COLESTTiene un enlace doble sobre el carbono 5, entonces: 5-nTiene un grupo hidroxilo sobre el carbono 3, entonces: 3-OL
Y por lo tanto el nombre correcto es:
Colest-5-n-3-ol
Cuando el esterol posee ms de un enlace doble se escribe COLESTA en vez de
COLEST.
Cuando posee 2, 3, 4, etc. enlaces dobles se dice: DIEN, TRIEN, TETRAEN, etc.
Cuando posee 2, 3, 4, etc. grupos hidroxilos se dice: DIOL, TRIOL, TETRAOL,
etc.
Cuando posee sustituyentes29, estos se nombran como prefijo del esqueleto

bsico, p.ej. 24-METILCOLEST, 24- ETILCOLEST, etc.
Veamos ahora cul es el nombre IUPAC para el ergosterol:
24-METILCOLESTA-5,7,22-TRIEN-3-OL
Los sufijos dependen del grupo ms oxidado, p. ej. el carbonilo es un sufijo
preferible frente a un grupo hidroxilo.
Los esteroles que posean un anillo contrado, por ejemplo algunos esteroles
marinos en los cuales el anillo A es de 5 carbonos, se les denomina noresteroles, por ejemplo: A-Norcolesterol. Los que poseen un anillo expandido se
les denomina homo-esteroles. Los esteroles con un enlace roto o ausente en
alguno de los anillos se los denomina seco-esteroles.
Sin embargo, hasta ahora no se ha incluido en el nombre IUPAC algo tan
importante como es la estereoqumica. Para lograr esto, basta con aadir luego
del nmero correspondiente las letras R, S, E, Z, a , segn se trate de
epmeros R o S, ismeros E o Z o configuraciones a , respectivamente.
Generalmente, los esteroles naturales poseen la configuracin 3-hidroxi, siendo
pocas las excepciones. Cuando no se conoce la estereoqumica del C-24 se
utiliza la letra griega x.
Veamos por ejemplo, cul ser el nombre IUPAC para el estigmasterol tal como
aparece su estructura en la Figura 2:
(24S)-24-ETILCOLEST-7,22E-DIEN-3b-OL
Y si no se conociera la estereoqumica en C-24 se llamara:
24x-ETILCOLEST-7,22E-DIEN-3b-OL
ACTIVIDAD FISIOLOGICA, SINTESIS Y DEGRADACION MICROBIOLOGICA

DE ESTEROLES
Aunque a los esteroles naturales no se les conocen actividades biolgicas
especficas fuera de las funciones biolgicas citadas al principio, se ha reportado
la accin antipirtica en conejos del 24-Etilcolesta-7,22-dien-3-ol (asterosterol)
presente en el ajenjo Artemisia absinthium, Compositae; y se han reportado
29En orden de prioridad: alquilos>haluros>nitro, pero los dos ltimos no se encuentran presentes
en esteroles de origen natural. En el caso de los esteroles sintticos que poseen heterotomos
conformando alguno de los anillos, se los nombra con los prefijos aza, tia u oxa, segn si el
heterotomo involucrado es N, S u O, respectivamente.
esteroles citotxicos, especialmente esteroles oxigenados en la cadena lateral

como los siguientes aislados de un alga roja 30, otros polihidroxiesteroides de
corales blandos presentan accin citotxica 31. Menos estudiados son los
esteroides dimricos y oligomricos, pero algunos son interesantes como las
cefalostatinas, ya que son altamente citotxicas y por lo tanto son agentes
antitumorales potenciales32.
OOH
OH
HO
HO
OH
OOH
HO
HO
Figura 8. Algunos ejemplos de esteroles oxigenados en la cadena lateral

identificados en algas rojas
En el caso de esteroles con el ncleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno como el
ergosterol, estos son convertidos en vitamina D la cual desempea un papel
importante en el metabolismo de minerales como el calcio y fsforo, y esta puede
ser convertida en otros anlogos hidroxilados que son activos contra la psoriasis y
cncer de tipo epitelial33. Algunos esteroles con grupos funcionales perxido y
epxido, como loas aislados del micelio del hongo Cordyceps sinensis, presentan
actividad antitumoral34.
Pero hasta ahora la mayor importancia de los esteroles naturales es para la
industria farmacutica, en especial la dedicada a la produccin de medicamentos
esteroides. La Figura 9 esquematiza el proceso de conversin mediante
reacciones de sntesis qumica y procesos de fermentacin, del estigmasterol en
medicamentos fluorocorticoides, la figura 10 muestra el proceso de conversin de
30Sheu, J-H. et al.; J. NAT. PROD. 59, 23-26 (1996).

31 Koljak, R. y col., TETRAHEDRON 54, 179 (1998).
32Li, Y., Dias, J.R., CHEM. REV. 97, 283 (1997).
33Zhu, G-D.; Okamura, W.H.; CHEM. REV. 95 (6) 1877 (1995).
34 Bok, J. W., y col., PHYTOCHEMISTRY 51, 891-898 (1999).
sitosterol y colesterol en esteroides acetilnicos y la figura 11 esquematiza el

proceso de hormonas esteroides a partir de los esteroles de la caa de azcar35.
CHO
2 etapas
HO
Estigmasterol
O
HO
F
OAc
O
OH
R
HO
9 etapas
O
O
9-fluorocorticoides
Figura 9. Esquema del proceso de conversin qumica y microbiolgica de

estigmasterol en fluorocorticoides
R
O
2 etapas
F
HO
R=H, colesterol
R=Et, sitosterol
Androstenodiona
2 etapas
OH
OH
COOH
etc.
O
Etisterona
Figura 10. Esquema del proceso qumico y microbiolgico para la conversin de
colesterol y sitosterol en medicamentos esteroides
35Nava, D. A.; REV. CUB. FARM. 4, 27-35 (1970).
O
HO
Bagazo de la
caa de azcar
Arthrobacter sp.
Aspergillus
ochraeus
Figura 11. Esquema del proceso de obtencin de 11-oxiesteroides a partir de los

esteroles de la caa de azcar
Es interesante tambin anotar que el lanosterol presente en la lana de ovejas
puede ser convertido en 14 a-metilprogesterona36.
La conversin de la funcionalidad 5-en-3-ol tan caracterstica de esteroles con el
ncleo tipo colesterol, en la funcionalidad 5-en-3-ona puede hacerse mediante la
denominada reaccin de Oxidacin de Oppenauer 37, o en algunos casos por
oxidacin con KMnO4 y CuSO4 , obtenindose adems esteroides bioactivos 6hidroxilados38.
Otra conversin sinttica importante es la siguiente 39 :
O
O
36Pettit, G. R.; J. NAT. PROD. 59 (8) 812-821 (1996).

37. Sica D., Zollo F., TETRAHEDRON LETT. (9) 837 (1978).
38 Parish, E. J., J. ORG. CHEM. 61, 5665-6 (1996).
39 Kobayashi, M. y col., STEROIDS 40(6) 673 (1982).
PROBLEMAS
1) REV. LATINOAMER. QUIM. 10(4) 171 (1979)
La balsamina (Momordica charantia, Fam. Cucurbitaceae) es una planta utilizada
en decoccin para el tratamiento de la diabetes, del extracto clorofrmico de sus
hojas se aisl una sustancia cuyo espectro de masas de impacto electrnico
mostr entre otros los siguientes fragmentos m/z: 414, 399, 300, 271, 255, 246,
212(100%). Determine la estructura ms probable para esta sustancia y describa
su biognesis a partir de la AcetilCoA.
2) REV. LATINOAMER.QUIM. 13(1) 27 (1982)
Del extracto ter de petrleo de las hojas de Haplopapus ciliatus (Fam.
Compositae) se aisl una sustancia blanca cristalina que da positivo el ensayo de
Liebermann-Burchard, tiene P.F. 160-162C y tiene las siguientes caractersticas
espectrales:
Espectro UV en etanol: Mx.=207 nm
Espectro infrarrojo en KBr: 3400, 2970, 2870, 1450, 1380, 1370, 1140, 970, 850,
830 cm-1, etc.
Espectro de masas I.E.: 412 (22%), 397(7), 369(7), 300(14), 299(8), 285(5),
273(24), 272(27), 271(100), 257(8), 256(7), 255(32), 253(8), 247(5), 246(14),
231(11), 229(14), 215(7), 213(15), etc.
Espectro de Resonancia Magntica Nuclear Protnica, en CDCl 3, 100 MHz:
5.10 ppm, m, 2H, etc.
A esta sustancia se le denomin a-spinasterol. Cul es su estructura ?. Cul ser
su nombre IUPAC ? Describa su biognesis a partir del cido mevalnico.
3. REV.LATINOAMER. QUIM. 16(1) 16 (1985)
Del extracto ter de petrleo de las partes areas de Ruta montana (Fam.
Rutaceae) se aisl por mtodos cromatogrficos una sustancia blanca cristalina
P.F. 141-143C con las siguientes caractersticas espectrales:
Espectro infrarrojo: 3500, 2900, 1480, 1400, 1070, 970 cm-1, etc.
Espectro RMN-1H (CDCl3, 100MHz):
5.32 ppm (m, 1H), 3.52 (m, 1H), 1.00 (s, 3H), 0.68 (s, 3H), 0.919 (d, 3H), 0.885 (t,
3H), 0.835 (d, 3H), 0.813 (d, 3H).
Espectro RMN-13C (CDCl3):
140.84, 121.66, 71.81 ppm, etc.
Espectro de masas I.E.:
414 (25%), 399(32.5), 383(14.7), 329(15.6), 315(23.3), 289(23.3), 273(25.4),

255(27.6), 231(21.5), 213(40.6), 173(21.9), 43(100), etc.
Determine la estructura de esta sustancia, asgnele el respectivo nombre IUPAC y
describa su biognesis a partir del cido mevalnico.
Esta sustancia dar positivo o negativo el ensayo de Liebermann-Burchard ?
Explique.
4) PHYTOCHEMISTRY 22(2) 475 (1983)
El Epibrassicasterol presenta los siguientes datos espectrales:
Espectro de masas I.E.:
398(50%), 380(71), 355(5), 337(10), 300(28), 271(29), 255(50), 213(15), 69(100),
etc.
Espectro RMN-1H de su derivado acetato (CDCl3, 220 MHz):
0.690 ppm, s, 3H
0.815 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz
0.833 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz
0.906 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz
1.003 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz
1.016 ppm, s, 3H
2.031 ppm, s, 3H
4.5-4.7 ppm, m, 1H
5.16-5.19 ppm, m, 2H
5.38 ppm, m, 1H
Determine la estructura ms probable para el epibrassicasterol.
Cul ser el correspondiente nombre IUPAC ?
Asigne todas las seales del espectro RMN-1H.
5) PHYTOCHEMISTRY 20(10) 2397 (1981)
Determine la estructura ms probable para una sustancia con las siguientes
caractersticas:
Espectro RMN-1H (CDCl3, 360 MHz):
0.646 ppm, s, 3H
0.823 ppm, s, 3H
0.907 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz
0.808 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz
0.828 ppm, d, 3H, J=7 Hz
0.851 ppm, t, 3H, J=7.4 Hz
0.947 ppm, d, 3H, J=6.4 Hz
Espectro de masas I.E. de alta resolucin:
430.4123 (100%), 415(23), 412(7), 397(11), 290(15), 249(9), 248(50), 247(49),

231(13), 230(20), 229(44), etc.
6) Determine la estructura ms probable para una sustancia animal cuyo espectro
de masas de impacto electrnico muestra entre otros los siguientes fragmentos:
m/z (%IR): 386(81), 371(43), 368(56), 355(54), 301(51), 275(93), 273(22),
255(26), 247(20), 231(33), 213(60), 81(100), etc.
7) De la esponja marina Agelas conifera (Fam. Agelasidae) se aisl el asterosterol
el cual es una sustancia blanca cristalina soluble en cloroformo, que cristaliza en
agujas blancas desde metanol y cuyo espectro de masas de impacto electrnico
muestra entre otros los siguientes fragmentos:
m/z (%IR): 398(35), 383(12), 300(11), 285(4), 273(34), 271(100), 255(53),
246(30), 231(10), 229(16), 213(15), 211(2), etc.
Determine la estructura del asterosterol, describa su biognesis a partir del cido
mevalnico y determnele el respectivo nombre IUPAC.
8) Determine la estructura ms probable para una sustancia detectada en un
invertebrado marino cuyo espectro de masas de impacto electrnico muestra
entre otros los siguientes fragmentos:
m/z (%IR): 416(42), 401(11), 233(52), 215(45), 43(100), etc.
Cul ser su nombre de acuerdo con la nomenclatura IUPAC ?
9) BULL.SOC.CHIM.BELG. 87(7) 539-43 (1978) Strongylosterol
De la esponja marina Strongylophora durissima, clase Demospongiae:
P.F. 112-112.5C
[a]D = -43 (c= 0.39, Diclorometano)
Espectro Infrarrojo (KBr):
3480, 1650, 890 cm-1
Espectro RMN-1H, 100 Mhz, CDCl3:
0.66 d, s, 3H
0.78 d, t, 3H, j= 7 Hz
0.90 d, d, 3H, j= 6 Hz
1.00 d, s, 3H
1.02 d, t, 3H, j= 7 Hz
3.45 d, m, 1H
4.71 d, m, 2H
5.33 d, m, 1H
Espectro RMN-13C:
d: 153.9, 140.9, 121.7, 107.9, 71.8, 56.9, 56.1, 50.3, 49.1, 42.4, 39.9, 37.4, 36.6,
36.1, 33.9, 32.0, 31.7, 30.3, 28.1, 26.6, 25.5, 24.3, 21.2, 19.4, 18.9, 12.3, 11.9
ppm
Espectro de masas IE:
m/z (%IR): 426(100), 412(8), 411(13), 409(4), 408(11), 394(7), 393(18), 341(4),
329(7), 328(24), 315(14), 314(40), 313(9), 310(7), 300(17), 299(44), 296(6),
295(7), 281(13), 273(13), 272(24), 271(48), 258(20), 255(19), 253(11), 231(20),
213(34).
10) A. Martnez, Tesis de Doctor en Ciencias, Departamento de Qumica,
Universidad Nacional, Santaf de Bogot, 1996.
De la esponja Ircinia campana se aisl una mezcla de esteroles con las siguientes
caractersticas espectrales:
EMIE m/z (% I.R.): 396 (73%), 363 (100), 337 (38), 271 (10), 253 (28), 211 (23),
157 (25), 143 (35), 69 (45). RMN-1H (400 MHz, CDCl3): 0.630 (s, 3H), 0.840 (d,
6H, J=7.81 Hz), 0.935 (d, 3H, J=7.81 Hz), 0.945 (s, 3H), 1.030 (d, 3H, J=6.84 Hz),
3.647 (m, 1H), 5.171 (m, 1H), 5.182 (m, 1H), 5.394 (m, 1H). EMIE (derivado
acetilado) m/z: 438 (9%), 378 (100), 363 (37), 337 (7), 253 (33), 211 (12), 157
(35), 143 (26), 109 (16), 43 (35). UV mx (metanol): 260h, 270, 282, 294 nm.
EMIE m/z (% I.R.): 396 (63%), 363 (100), 337 (38), 271 (12), 251 (13), 211 (22),
157 (20), 143 (45), 69 (33), 55 (42). RMN-1H (400 MHz, CDCl3): 0.625 (s, 3H),
0.975 (d, 3H, J=6.35 Hz), 0.947 (s, 3H), 1.027 (d, 3H, J=6.83 Hz), 1.032 (d, 3H,
J=6.84 Hz), 3.65 (m, 1H), 4.662 (m, 1H), 4.664 (m, 1H), 5.4 (m, 1H). UV mx
(metanol): 260h, 269, 280, 292 nm.
EMIE m/z (% I.R.): 400 (100%), 385 (38), 382 (48), 367 (30), 315 (45), 289 (55),
273 (32), 255 (28), 231 (10), 213 (18), 145 (38), 107 (35), 55 (42), 43 (50). EMIE
(derivado acetilado) m/z: 442 (21%), 382 (100), 367 (26), 281 (16), 255 (21), 207
(28), 147 (42), 145 (33), 133 (28), 43 (88).
EMIE m/z (% I.R.): 410 (63%), 377 (100), 351 (30), 271 (8), 253 (28), 211 (23),
143 (25), 83 (38), 55 (39). RMN-1H (500 MHz, CDCl3): 0.638 (s, 3H), 0.811 (t, 3H,
J=7.34 Hz), 0.849 (d, 3H, J=6.42 Hz), 0.855 (d, 3H, J=6.42 Hz), 0.950 (s, 3H),
1.051 (d, 3H, J=6.42 Hz), 3.6 (m, 1H), 5.041 (dd, 1H, J=14.66 y 8.71 Hz), 5.163
(dd, 1H, J=15.12 y 6.41 Hz), 5.389 (m, 1H), 5.576 (m, 1H). EMIE (derivado
acetilado) m/z: 452 (7%), 392 (100), 377 (31), 349 (5), 253 (31), 211 (12), 157
(36), 143 (24), 43 (31). UVmx (metanol): 260h, 270, 282, 294 nm.
11) (Desmosterol) J. NAT. PROD. 59 (1) 23-26 (1996).

12) Rohmer, M. y col; STEROIDS 35 (2) 219 (1980).
13) (4-Metilestanol) Alam, M. y col.; STEROIDS 38 (4) 375 (1981).
14) (Glaucasterol, Figuras espectros), Kobayashi, M. y col.; STEROIDS 40 (6) 665
(1982).
15) (D5,7,23-24-etilesterol) Zielinski, J. y col.; STEROIDS 40 (4) 403 (1982).

(Esterol glicsido) Rehnan, A-U. y col., PHYTOCHEMISTRY 45 (8) 1721 (1997).
16) Proponer la estructura ms probable para los esteroles cuyos espectros se

presentan a continuacin:
a) Espectro RMN-1H (400 MHz, CDCl3):
Espectro de RMN-13C (100 MHz, CDCl3):
Espectro de masas (70 eV):
b) Espectro de masas (70 eV):
Espectro de RMN-1H (400 MHz, CDCl3):
SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS 16a Y 16b

Problema 16a
El espectro de masas muestra el ion molecular en m/z 384 consistente con la
frmula molecular C27H44O. Tambin pueden observarse los iones m/z 369
(prdida de un grupo metilo), 366 (prdida de una molcula de agua) y 351
(prdida de un grupo metilo y una molcula de agua), caractersticos de esteroles.
Los iones m/z 271 (prdida de la cadena lateral), 253 (prdida de la cadena lateral
y una molcula de agua), 253 (prdida de la cadena lateral y una molcula de
agua) y 211 (fisin del anillo D menos agua), indican claramente la presencia de
dos insaturaciones en el ncleo, y los iones m/z 158 (fisin entre anillos B y C),
143 (158 menos un grupo metilo) y 128 (158 menos dos grupos metilo) hacen
evidente que las insaturaciones estn en el C-5 y en el C-7 (ver Figura 6.d). La
diferencia entre el ion molecular y el ion m/z 271 (prdida de la cadena lateral)
indica que la cadena lateral de este esterol es saturada con la frmula C 8H17.
Todo este anlisis lleva a la conclusin de que este compuesto es un esterol con
ncleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral saturada de ocho
tomos de carbono.
El espectro de RMN-1H confirma el ncleo D5,7-3b-hidroxiandrostadieno por las
seales multiplete en 5.4 y 5.6 ppm integrando cada una para un protn,
correspondientes a los protones olefnicos H-6 y H-7, un multiplete (7 seales) en
3.65 ppm correspondiente al protn H-3a y dos singletes en 0.62 y 0.95 ppm,
correspondientes a los metilos H-18 y H-19. Las seales de los CH 3-26 y CH3-27
se observan como dobletes en 0.85 y 0.86 ppm, y los protones del CH3-21 se
observan como un doblete en 0.9 ppm. Estos datos corresponden a un esterol con
el ncleo
D5,7-3b-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral con un grupo isopropilo
terminal. La configuracin 3-hidroxi la confirma la multiplicidad de la seal del H3, la cual corresponde a un multiplete extendido 42 Hz originado por
acoplamientos de los protones axiales de H-3a con H-2 y H-4, y a los
acoplamientos entre H-3a y los protones ecuatoriales H-2 y H-4, mientras que la
configuracin 3a-hidroxi genera un 'quintete' extendido 28 Hz, originado por
acoplamientos protnicos axial-ecuatorial y ecuatorial-ecuatorial de H-3b con H-2 y
H-4. El espectro de RMN-13C muestra 27 seales entre las cuales cuatro
corresponden a los carbonos olefnicos C-5 (139.73 ppm), C-6 (119.57 ppm), C-7
(116.21 ppm), C-8 (141.47 ppm) y una al carbono hidroxilado C-3 (70.44 ppm),
confirmando la existencia de un esterol con ncleo D5,7-3b-hidroxiandrostadieno,
las dems seales corresponden a d 38.34 (C-1), 31.96 (C-2), 40.74 (C-4), 46.20
(C-9), 36.97 (C-10), 21.08 (C-11), 39.14 (C-12), 42.90 (C-13), 54.47 (C-14), 23.00
(C-15), 28.08 (C-16), 55.84 (C-17), 11.80 (C-18), 16.27 (C-19), 36.10 (C-20),
18.83 (C-21), 36.11 (C-22), 23.84 (C-23), 39.47 (C-24), 27.99 (C-25), 22.54 (C-26)
y 22.85 (C-27).
Con este anlisis se llega a la conclusin de que este esterol es el colesta-5,7din-3b-ol (comnmente llamado 7-dehidrocolesterol).
HO
Problema 16b
El espectro de masas muestra el ion molecular m/z: 410 consistente con la
frmula C29H46O. Tambin se observa el fragmento m/z 377 (M-metilo-agua)
caracterstico de esteroles. Los iones m/z 271 (M-cadena lateral), 253 (271-agua)
y 211 (fisin del anillo D y prdida de una molcula de agua) indican claramente la
presencia de dos insaturaciones en el ncleo y los iones m/z 128, 143 y 158
hacen evidente que estas insaturaciones estn en el C-5 y el C-7. La diferencia
entre el ion molecular y el ion m/z 271 (M-cadena lateral) indica que la cadena
lateral de este componente es monoinsaturada con una frmula C10H19. Todo
este anlisis lleva a la conclusin de que este es un esterol con un ncleo D5,7-3bhidroxiandrostadieno con una cadena lateral monoinsaturada.
El espectro de RMN-1H muestra las seales d 0.638 (s, CH3-18), 0.950 (s, CH319), 3.6 (m, H-3), 5.389 (m, H-6), 5.576 (m, H-7). Las seales d5.046 (dd, J=15.6 y
8.7 Hz) y 5.181 (dd, J=15.1 y 6.4 Hz) corresponden a los protones H-22 y H-23
con geometra E. La seal 0.811 (t, J=7.3 Hz) es la del grupo CH 3-29 que est
ligado a un grupo metileno. Este anlisis permiti asignar la estructura del (22E,24
x)-24-Etilcolesta-5,7,22E-trin-3-ol para esta sustancia.
HO
17) (3-epi-chondrillasterol, 24-metil-24-etilcolesta-7,22-din-3-ol, RMN, IR,

Mimusops elengi, Sapotceas) Jahan, N., y col., FITOTERAPIA LXVII (1) 91
(1996)

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UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

Medelln, Abril de 2002

Alejandro Martnez M., 2002

DISTRIBUCION Y ESTADO NATURAL

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Alejandro Martnez M., 2002

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12Domnguez, X. A.; "Mtodos de Investigacin Fitoqumica". Ed. Limusa, Mexico, 1979.

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Alejandro Martnez M., 2002

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Alejandro Martnez M., 2002

Figura 6.d. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de

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18Notaro, G. y col.; J. NAT. PROD. 55 (11) 1588-1594 (1992).

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ESPECTROMETRIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR DE CARBONO13

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36Pettit, G. R.; J. NAT. PROD. 59 (8) 812-821 (1996).

Alejandro Martnez M., 2002

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414 (25%), 399(32.5), 383(14.7), 329(15.6), 315(23.3), 289(23.3), 273(25.4),

Alejandro Martnez M., 2002

430.4123 (100%), 415(23), 412(7), 397(11), 290(15), 249(9), 248(50), 247(49),