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ManualdeprcticasdeParasitologaconnfasisenhelmintosparsitosdepecesdeagua
dulceyotrosanimalessilvestresdeMxico

GuillermoSalgadoMaldonado
InstitutodeBiologa,UNAM

ProyectoPE209106
Programadeapoyoaproyectosparalainnovacinymejoramientodelaenseanza,
PAPIME
DireccinGeneraldeAsuntosdelPersonalAcadmico,DGAPA,UNAM
20072009

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CONTENIDO
Introduccin:Loshelmintosylascaractersticasdelavidaparasitaria.
Grupostaxonmicosdehelmintos
Helmintosparsitosdepecesdeaguadulce,prcticadecampo
Tincinymontajedehelmintos
PhylumPlatyhelminthes:Introduccin
Tremtodos
Monogneos
Cstodos
Phylum Acanthocephala
Phylum Nematoda
Descripcindehelmintiasis,parmetrosbsicos
Ecologadeparsitos:distribucinagregadadelaspoblaciones
Ecologadecomunidades
Cuntasespeciesconstituyenlacomunidaddeparsitos?
Distribucindeabundanciadelasespecies
Dominancia.Rareza.
Diversidad.

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Introduccin
Elparasitismoeslaformadevidamsextendidaenelplaneta.Virtualmentetodo
servivotieneparsitos,tantolasplantascomolosanimales.Cadaespecietieneespeciesde
parsitosquesonespecialistasdeella,queslolaparasitanaella.Porejemplo,entrelos
parsitosespecialistasdelhombrecontamosaTaeniasolium,lasolitaria,yaEnterobius

vermicularis,eloxiuro.Delamismaformacadaespeciedeservivotienesuspropios
parsitos.Ademsdelosespecialistascadaespecieseveafectadatambinporespecies
generalistas,porejemplo,latriquina,Trichinellaspiralisademsdeparasitaralhombre
puedeencontrarseencerdos,perros,gatos,etc.
Sonparsitoslosvirus,muchasbacteriasyprotozoarios,perotambinalgunostipos
deartrpodos,anlidosymoluscos.Hayparsitosencadagrupo(phylum)deanimales.
Podemosdistinguirentremicroparsitosymacroparsitos:losmicroparsitoscomolos
virus,bacteriasyprotozoariossonpequeosypuedenmultiplicarsedirectayrpidamente
dentrodelapoblacindehospederos encambiolosmacroparsitos,helmintosy
artrpodos,sondemayortamaonosemultiplicandentrodelhospedero,supoblacin
incrementaporinmigracinnoporreproduccindirectadentrodecadahospedero
(Anderson,1993).
Losgusanosparsitosdeanimalesseconocen engeneralcomohelmintos.
Incluyendotresgrandesgruposlosplatelmintos,acantocfalosynemtodos(Cromptony
Joyner,1980WilliamsyJones,1994).Tresclasesdeplatelmintossonfrecuentesentrelos
parsitosdeanimalessilvestres,enparticularentrelospeces,lostremtodos,monogneos
yloscstodos.Losacantocfalossonpococonocidosinclusoentrelosbilogos,muypocas
especiesparasitanaanimalesdomsticosestoshelmintosconunaproboscisarmadade

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ganchosparasitanenanimalessilvestres.Losnemtodossonunodelosgruposbastante
conocidosporlasespeciesqueparasitanalhombreyanimalesdomsticoselnmerode
susespeciesenanimalessilvestresesaunmayor.

Laparasitologaesunreadeestudioeinvestigacin muydinmicaenel mundo

actual,muchasuniversidadesdelextranjerotienenplanesdeposgradoe investigacin
bsicayaplicadaenestarea.Losprofesionistas(graduadosy posgraduados)deestarea
delconocimientopodrndesarrollarseulteriormenteenlaacademia,laindustria,las
institucionesdesalud,medicinaveterinaria,acuicultura,entreotras.Todoestoimponeuna
demandarealdealumnosconunaslidapreparacinbsicaenParasitologa.
Unodelosproblemasaqueseenfrentaeldocenteennuestromedioesla
carenciadedatos,especimenes,prcticasydesarrollosdidcticosderivadosdel
estudiodelabiotadenuestropas.Loslibros,losmateriales,ylosejemplosenque
nosbasamosparalaenseanzaenparticularenlacarreradeBiologa,procedendel
extranjero.Sibien,enparasitologamdicayenparasitologaveterinariacontamos
conexcelentespublicacionesquehacenreferenciaanuestroentorno(porejemplo
Biagi,1982CruzLpez,1981QuirozRomero,1984FlisseryPrezTamayo,2006),
noesasencuantoaparasitologadeanimalessilvestres.Laparasitologade
animalessilvestresseenseaactualmentecondatos,ejemplosyorganismos
derivadosdeestudiosrealizadosenotraslatitudes,primordialmentedereas
templadascorrespondientesapasesdesarrollados(entrelostextosmsusados
estnporejemploBushetal.,2001Poulin,1998).Ladiversidadorgansmicayla
diferenciadecondicionesambientalesdenotanclaramentelanecesidaddeabordar

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estaproblemtica.Esoportunodesarrollarcaucesparatrasmitirelconocimiento
generadoennuestromedioenapoyoalaformacinderecursoshumanos.

Elobjetivogeneraldeestemanualdeprcticasestrasmitirlaexperienciagenerada
mediantelainvestigacindeparsitosmedianteladescripcindelosprocedimientosy
tcnicasqueaplicamosengeneralennuestrasinvestigaciones.Particularmentenos
referimosaloshelmintosparsitos,enespeciallosdepecesdeaguadulce,comoun
modelodetrabajo.

Bibliografa
Anderson,R.M.1993. Epidemiologypp.75116In:Cox,F. E.G.(Ed.)Modern
Parasitology.BlackwellScientificPublications.Londres.

Crompton,D.W.T.yJoyner,S.M.1980.ParasiticWorms.WykehamPublications,
Londres.207pp.

Williams,H.yA.Jones.1994.Parasiticwormsoffish.TaylorandFrancis,Londres,593
pp.

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Helmintosparsitosdepecesdeaguadulce,prcticadecampo
Introduccin
Objetivos
Materialesymtodos
Recoleccindehospederos
Examendehospederos
Fijacindehelmintos
Conservacindehelmintos
Bibliografa

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Helmintosparsitosdepecesdeaguadulce,prcticadecampo
Introduccin
Esposibledesarrollarestaprcticaexaminandopecesdecualquiercuerpodeagua
dulceaccesible,losresultadossiempreserninformativos.Elexamendetilapiasycarpas,
entantopecesintroducidos,y depecesdeacuarioocultivadospodraresultarenla
observacindepocosparsitosperodesdeluego,ayudarsiloquebuscamoses
determinarespeciesdehelmintosintroducidas.Contamoscondatosdelosparsitosde
pecesdelagos,Ptzcuaro,Mich.,Chapala,Jal.,Catemaco,Ver.yrospertenecientesalas
distintascuencashidrolgicas,Balsas,Lerma,Ayuquila(SierradeManantln,Jal),
Santiago,Pnuco,Papaloapan,GrijalvaUsumacinta(yotrosrosdelaLlanuraCosteradel
GolfodeMxico,haciaTabascoyCampeche)ydeloscenotesyotroscuerposdeaguade
laPennsuladeYucatn(verSalgadoMaldonado,2006Zootaxa
http://www.mapress.com/zootaxa/2006f/zt01324p357.pdfyreferenciasenesetrabajo).
TambinexistendatossobreloshelmintosparsitosdepecesdelosrosdeChiapas,delro
Papagayo,Guerrero,LaAntigua,Veracruz,ydelasdistintascuencasdelestadodeOaxaca
(www.ibiologia.unam.mxconsultarpginaSalgadoMaldonado,G.).Huelgadecirquelas
preguntasinicialesenunainvestigacincomostason1)qupecesexaminar?2)qu
helmintosparsitospodrencontrar?
Sibienesposiblequeparalaprcticasejuzguesuficientecomprarpeces(uotros
hospederos)alagentedelalocalidad,esnecesarioapuntarquealgunosparsitospodrn
perderse,yprimordialmentequenotendremoslacertezadelaprocedenciadelos
hospederos.Esteltimodatoessiemprevitalentodainvestigacinformal,lascondiciones

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localespuedenversereflejadasenelcontenidoparasitolgicodeunapoblacin
determinada.
Todoslosseresvivosestnparasitados,loraroesencontrarunorganismo,plantao
animalsinparsitos.Lospecescomolosanfibios,reptiles,avesymamferos,cuentanentre
susparsitosmsevidentesaloshelmintos.Cualquiertejidourganodeunpezes
susceptibledeestarparasitado. Loshelmintosseencuentran enpiel,aletas,cavidades
nasales,cavidadyarcosbranquiales,cloaca,bocayenlasescamasdelalnealateral,es
decir,podemosencontrarectoparsitosencualquierrganoexterno,tejidoocavidaddelos
peces.Delamismaforma,losendoparsitoshabitan enojos,cerebro,cavidadcelmicao
corporaldelpez,mesenterios,grasa,gnadas,riones,hgado,musculaturaparietal,sangre,
ydesdeluego,entodoeltractodigestivo,losciegosyelintestino.
Enestaprcticaseproponelarevisindepecesdeaguadulceparael
reconocimientoyrecoleccindehelmintosparsitos. Eldesarrollodelaprcticapermitir
identificarenvivolosdistintostiposdehelmintosyaplicarlosmtodosapropiadosparasu
fijacinypreservacin.

Objetivos
1. Aplicarlastcnicasgeneralesparaelexamendehospederos,(enestecasoparticular
poblacionessilvestresdepeces),paralabsquedadehelmintosparsitos.
2. Reconocerlosdistintostiposdehelmintosenvivo.
3. Aplicarlastcnicasdefijacinapropiadasparacadagrupodehelmintos,parasu
procesamientoyestudiomorfolgicoposterior.

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MaterialesyMtodos
Recoleccindehospederos.Elmuestreodepecesdependedelalocalidadylasespecies
queah habiten.Entrminosgenerales,podemosdirigirelmuestreoa unaespecie
determinadadepez,especiesdeunafamiliaobien,muestrear todaslasespeciesdepeces
deuncuerpodeaguadeterminado.Elconocimientodelascaractersticasyelhbitat
preferencialdelaespeciedepezguiarenlaseleccindelartedepesca algunasveceses
necesariomuestrearentodosycadaunodeloshbitatsprincipalesdeuncuerpodeagua,
porejemplo,elfondo,bajolasrocas,entrelavegetacin,entrelasracesdelosrboles,en
lacorrientedeunro,etc.etc.
Elequipodeelectropescaesdegranayudayfacilitalacapturademuchasespecies.
Enalgunoscuerposdeaguapequeospodemosusarredesdecuchara,enotraslocalidades
yparadistintasespeciesdepecesusamostrampas.Desdeluego,lasdiversasredes,como
atarrayas,chinchorrosytrasmayossonrecursosquenecesitamosusarendistintasocasiones
(Fig.1).Apoyarnosenlospescadoresdelalocalidadfacilitalacaptura.
Ancuandoexistanpescadorescomercialesenunalocalidad,esimportantehacerla
pescanosotrosmismosparaobtenerlospecesvivos,losdatosdelalocalidad,ydesde
luego,certificarsuprocedenciaexacta.Esimprescindiblegeoreferenciar(coordenadasy
unidadesUTM)cadalocalidaddemuestreo.Espertinenteanotarlascaractersticas
principalesquedescribenlalocalidad,tipodecuerpodeagua,vegetacin,tipodesustrato,
profundidad,entreotras.Paralosparasitlogossondatosimportanteslapresenciade
moluscos,caracolesybivalvos,ladensidad(asseaaproximada)delaspoblacionesde
pecesy lariquezadelascomunidadesictiolgicasenlalocalidadmuestreada.

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Cuntospecesdecadaespeciedeberemosrecolectar?Dependedelobjetivodel
muestreo.Cuantosmspecesexaminemosdeunaespecie,mejorreconoceremossus
parsitos,msoportunidadestendremosderecolectarmsespeciesdeparsitos,en
particularlasespeciesmenosfrecuentesenlapoblacin.Sinembargo,elexamen
parasitolgicoesunprocesotardado,ymuchasvecesdeberemosestableceruncompromiso
entrelodeseableyloposible.Unareglageneral estratardeexaminar30pecesadultosde
cadaespecie(porlocalidadyfechaopocademuestreo).Entrminosgenerales30esel
menortamaodeunamuestragrande.Hayprocedimientosadecuadosparaestimarlos
nmerosdepecesquedeberemosexaminarenconsideracinalapreguntaqueplanteemos
abordar,obien,paravalorarlabondaddenuestromuestreounavezhecho.Parael
propsitodeestaprcticaespertinenterecordarqueentremspecesdeunaespecie
examinemos,msespeciesdesusparsitosrecuperaremos.
Lospecesdebenllegarvivosallaboratorio.Esoportunorecordarquelapieldelpez
esmuydelicada,quedeberemosextremarcuidadoensumanejo.Esposibletrasportar
vivoslospecesenbolsasdeplsticogrueso,conaguadelmedio,aireandoconbombasde
baterasobienburbujeandooxgenoconuntanqueantesdecerraradecuadamentelabolsa
(Fig.2).Estasbolsaspuedentransportarseencubetasoen recipientesquepermitansu
manejoycuidado.Eltipodepeces,sutamaoynmero,ascomolatemperaturadelagua
sonaspectosquedeberemoscuidarmuchoparaeltransporteallaboratorio.Porejemplo,
losaterinopsidos(charales,pescadoblanco)sonmuysensiblesyresistenmuymalel
manejo,encambio,muchospoeclidosycclidossonmuy resistetesalmanejoyel
transporte.Losprocedimientosdetrasportedepecesvivossonusadoscomnmenteporlos

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acuicultores.Pornuestrapartehemostransportadoenbolsasycubetasadecuadamente
pecesvivosdesdeAcapulcoodesdeVeracruz,hastalaciudaddeMxico(4,6hs).
Enellaboratoriodondeseharelexamenhelmintolgico,lospecesdeben
mantenerseenlasmejorescondicionesposibles(Fig. 3).Esrecomendablequelospecesse
examineninmediatamenteoen elmenortiempoposibledespusdesucaptura.Porlo
generalenlaliteraturaespecializadaseanotaquelosexmeneshelmintolgicosserealizan
enlassiguientes24hsalacapturadeloshospederos. Elmantenimientoconjuntodepeces
dedistintasespecies,hacinamientoosobrepoblacinconexcesodeejemplares,su
disposicinencondicionesinapropiadas,oelmanejoexcesivo,conducenahospederos
estresados,locualpuedealterarloscontenidosparasitolgicosdelaspoblacionesbajo
estudio.
Examendehospederos.Antesdecualquierotroprocedimiento,esimportanteiniciarconel
examenparamonogneos.Sonloshelmintosquemsfcilmentesepierden,oque
podemosobviarenlarevisindelospeces. Sacrificaralpez(porpuncinenelcerebropor
ejemplo).InmediatamentecolocarloenunacajadePetri con (poca) aguadelmedio(del
lago,delrodedondeprocedalapesca)yprocederalexamenbajomicroscopio
estereoscpico(Fig.4).Durantetodoelprocedimientocuidardemantenerlahumedad
suficienteentodoelcuerpodelhospedero,mediantegoteofrecuentedeaguadelmedio.
Examinarlapiel,ylasuperficiegeneraldelcuerpo,observarcuidadosamenteambascaras
decadaaleta.Separar lasaletasplvicasypectoralescortndolasdesdesubase,loms
prximoalcuerpodelhospedero,colocarlasencajasdePetriconpocaaguadelmediopara
facilitarsuobservacin.Abrirlosoprculosyretirardelacavidadbranquiallasbranquias
completas.ColocarlasenunacajadePetriconaguadelmedioysepararcadaarco

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branquialindividulizndoloparasumejorobservacin. Revisarcadaarcocuidadosamente,
porambascaras,yentrelosfilamentosbranquiales,ayudndoseconagujasdediseccin
finasypinzasderelojero,todobajomicroscopioestereoscpico,encajasdePetri,conagua
delmedio.Conunpincelfino(00osimilar)revisarlosorificiosdelpez,lascavidades
nasales,cloaca,yelinteriordelabocaylacarainternadelosoprculos.Conayudade
pinzasdepuntaromaretirarunaseriecompletadeescamas,preferentementelasdelalnea
lateral,colocarlasenunportaobjetosconaguadelmedio,yexaminarlasalmiscroscopio
estereoscpico,porambascaras.EnlospecesdeaguadulcedeMxicoporlogenerallos
monogneossonmuypequeos,transparentes,pocoevidentessepararlosconayudade
pincelesyagujasdediseccinycolocarlosenportaobjetos,cajasdePetripequeaso
discosdeSyracusaapropiadosSIEMPRECONAGUADELMEDIO,parasuestudioen
vivoyfijacin.Losmonogneosdebenfijarseinmediatamente(verprocedimientosms
abajo).
Enlasescamas,lapiel,oenquistadasenlosfilamentosbranquialesesfrecuente
encontrarmetacercarias(formaslarvariasdetremtodos),algunasdelascualessonmuy
pequeas.Separarlasmetacercariasdelostejidosdelhospederoconpinzasdepuntafina,
colocarlasentreportaycubrobjetosoencajasdePetripequeas.Porlogeneralestas
metacercariasestnenquistadas,sacarlasdelquistemecnicamente,antesdeprocederala
fijacin.
Antesdeprocederalasiguienteetapadelexamenhelmintolgicotomarlosdatos
mersticosdelhospedero,longitudtotal,longitudpatrn,altura,peso,estosdatos
permitirncorrelacionarlashelmintiasisconlascaractersticasgeneralesdeloshospederos
(lospecessesexarnposteriormente,duranteladiseccindelosrganosinternos,por

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examendirectodelasgnadas).LaFig.muestraunahojadecampodelasqueusamosen
investigacinparaanotarlosdatosdelascolectas.

Exameninternodehospederos.Conunatijeradepuntarectaabrirlacavidadabdominaldel
hospedero,desdeelanohastalainterseccinbranquial.Retirareltractodigestivo
completo,desdelareginoral branquial,hastaelrecto,cortandocuidadosamentelos
extremos.ColocarloenunacajadePetridetamaoapropiado(9o15cmdedimetro)con
pocasolucinsalina0.7%Generalmente elaparatodigestivoquedaenvueltoenlos
mesenterios,untejidodelicadodecolornegroquelocontiene.YaenlacajadePetri ybajo
microscopioestereoscpico,extendereltractodigestivocuidadosamente,separndolos
mesenterios,elhgadoylostejidosgrasos.Lalimpiezadelexamenesimportantepara
determinarconprecisinelhbitatdecadaespeciedehelmintoqueencontremos.Es
recomendablesepararcadarganoytejidoencajasdePetriconsolucinsalina0.7%
duranteelexamen. Duranteestafasecuidarqueelrestodelcuerpodelhospederonose
seque, gotendocontinuamentesolucinsalina0.7%alinteriordelacavidadcorporal.
Examinarelinteriordelaparatodigestivodesgarrndolopocoapococonagujasde
diseccinbajomicroscopioestereoscpico. Hacialaluzintestinalpodrn encontrarse
helmintosadultos,tremtodos,cstodos,acantocfalosynemtodos.Conayudadepinceles
finoscolocarlosencajasdePetrichicas,consolucinsalina0.7%parasuobservaciny
fijacinposterior.Losacantocfalossefijanalamucosaintestinalintroduciendola
proboscisenlostejidos,parasepararlosdesgarrarcuidadosamentelostejidosintestinales
alrededordelaproboscis.Enlasparedesintestinalestambinpuedenencontrarse
metacercariasolarvasdenematodosenquistadas. Aislarlosdelostejidosdelhospedero,

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colocarlosencajasdePetriconsolucinsalinaysacarlosdelosquistesparaobservarlosen
vivoyfijarlosadecuadamente.
Losmesenterios,lostejidosgrasosyelhgado,primeramenteexaminarlosconel
microscopioestereoscpico,luegocomprimirlosentre2portaobjetosovidriosdetamao
adecuado(Fig.)(hacersquash)yobservarlosalmicroscopioestereoscpico.Pueden
encontrarsetambinmetacercariasylarvasdenemtodoslibresyenquistadas. Tambinse
encuentransobreelhgado,losmesenteriososobrelaparteexternadelapareddel
intestino,larvasdeacantocfalosenquistadas(cistacantos)ymetacstodos(larvasde
cstodos).Esprecisoretirarlasdelostejidosdelhospedero,sacarlasdelquisteycolocarlas
encajasdePetriparasufijacin posterior.
Examinarlacavidadcelmicaocavidadgeneraldelcuerpodelhospederobajoel
microscopioesteroscpico.Retirarloquequedadelosmesenterios,lasgnadas(noolvidar
sexarcadahospederoporexamendirectodelasgnadasenestepaso),lavejiganatatoriay
losriones.Examinartodosestos tejidosy rganosprimerosuperficialmenteydespuspor
compresinentre2vidriosoentreportaobjetos,comoenelpasoanterior.
Retirarambosojosdelpezyexaminarlos.Puedenencontrarsehelmintos
(generalmentemetacercarias)sobreelojo,sobreellenteoenelhumoracuosodelglbulo
ocularesimportanteprecisarelhbitatdondeseencuentrenlosparsitos.Retirarel
cerebro(Fig.)yexaminarloporcompresinentre2portaobjetos.
Conunbistur,cuchilloonavajaapropiadaobtenerfiletesdelamusculaturaparietal
delpez(Fig.)paraexaminarlostambinporcompresinentrevidrios.Puedenencontrarse
tambinmetacercariasolarvasdenemtodos.

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Fijacindehelmintos.
Tremtodosymetacercarias:fijarlosdirectamenteconformol4%caliente(casi a
ebullicin)(Fig.).Lasmetacercariasdeberndesenquistarseantesdeagregarelfijador.
Puedenconservarseenfrascosvialesen elmismoformolhastapor3meses dadoqueel
formolendurecelostejidosesrecomendablecambiarlosaalcoholetlico70% para
preservarlospormstiempo.Losvialesdebenseretiquetadosclaramenteconlosdatos
completosdelacolecta(sedescribemsabajo).
Cuandohayejemplaressuficientes,esrecomendablefijaralgunosespecmenesde
cadaespeciedetremtodo(ometacercarias)poraplanamientoligero(Fig.):haceruna
preparacinfrescaconcadaespcimen,colocndoloenunportaobjetosconunagotade
solucinsalina0.7%,cubrirelejemplarconun cubreobjetos.Estosejemplarespueden
fijarseconlquidodeBouin,AFAoformolal4%.Elfijadorseleccionadoseintroducepor
capilaridad(porunladodelcubreobjetos)entantoqueporelladocontrarioseabsorbela
solucinsalinacontrozospequeosdetoalladepapelabsorvente(Fig.). Losespecmenes
debenpermanecerenelmontajeentre12a24hs,paralocuallaspreparacionessecolocan
encajasdePetrigrandes,alfondodelacualseleagreganalgunasgotasdelfijadoryse
tapa, evitando quelaspreparacionessesequen.Transcurridaslas12o24hs,los
especmenessedesmontanusandopincelesfinos,paraconservarlosenfrascosviales
etiquetadosconlosdatoscompletosdelacolecta.
Lafijacinporaplanamientoligeropermiteobtenerpreparacionesmicroscpicas
quefacilitanelestudiomorfolgicodelosejemplares.Sinembargo,actualmentemuchas
revistasespecializadasnoadmitenparasupublicacindescripcionesdeespeciesconbase

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enespecmenesaplanados,argumentandoquelaproporcinnormaldelosrganossealtera
yquedeestaformalasmedicionesnosonprecisas.
Cstodosadultos:lostegumentosdemuchasespeciesdecstodosinician el procesode
descomposicininmediatamentecuandosonretiradosdelosrganosdelhospederopor
stoesimportanteprocederasufijacininmediatamentecuandoselesencuentra(an
antesdeconcluirlarevisincompletadelhospedero).Colocarlosejemplaresensolucin
salina0.7%enunvasodeprecipitadosde100ml,lavarlosrpidamenteenlasolucin
salinaydecantarlatotalidaddesolucinfijaralcstodovertiendodirectamentesobreel
ejemplar100mldeformol4%caliente(apuntodeebullicin).Elvolumendeformoles
importanteparaayudaraextenderelestrbilodecadaespcimen.
Metacstodos.Sonlosdistintostiposdelarvasdecestodosqueencontramosenlostejidos
yganosdelospeces,muchosdeellosmaduranenaves.Porlogeneralunavez
desenquistadossefijancomolostremtodos,directamenteconformolal4%caliente.Los
metacstodosGryporhynchidaepuedenfijarsetambinconpicratoamonio(verfijacinde
monogneos)parafacilitarelestudiodelrostelo.
Monogneos.Secuentanentreloshelmintosmsfrgilesypequeos,vivos deben
permanecersiempreenaguadelmedio.Esimportantefijarsuficientesejemplaresusando
variosmtodosparalograrunestudiomorfolgicocompleto. Esmuyprcticofijarlos
directamenteenfijadordealcoholisobutlico:colocardirectamenteelmonogneoenuna
gotadelfijadorenelcentrodelportaobjtos,cubrirelespecmenconuncubreobjetos.
Estaspreparacionessonpermanentes.
Puestoquelataxonomadelgruposebasaenelestudiodelaspartesduras
(esclerosadas),esposibleusarpicratoamoniocomofijador.Esteesunfijadorquedeshace

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laspartesblandas,peroconservalaspartesdurasdecadaespcimen.Cuandoseaplicaeste
mtododefijacinnosepretendeconservartodoelejemplar,slolasescleritas,yse
intentaquequedenextendidas,enunsoloplano,parafacilitarsuestudioymedicin
posterior.Elprocedimientoconsisteen hacerunapreparacinfrescaconcadaespcimena
fijaryejercerpresinenrgicamentesobreelportaobjetos(Fig.),conelpropsitode
extenderlasescleritas.Sellarelportaobjetosaplicandobarniztransparentedeuas(Fig.).
Losmonogneospuedensertransportadosencajasdepreparacionesparamicroscopio,y
estudiadosenestaspreparaciones,peroalos5o6mesesesnecesariopasarlosa
preparacionespermanentesmontadasenblsamodeCanad.
Fijarotrosmonogneosdelamismaespeciedirectamenteconformolal4%
caliente,obienporaplanamientoligero(comolostremtodos),locualposibilitartener
especmenescompletosparaestudiarlamorfologaylostejidosblandosdelgusano.
Acantocfalos. Todoespecmendeacantocfalodebetenerlaprobosciscompletamente
evertidaantesdefijarlo.Estosparsitosinvaginanlaproboscisalsermanipuladosdurante
ladiseccindelhospedero.Esnecesariocolocarlosenaguadestiladaenrefrigeracinpor8,
12ohasta24hsparalograrlaeversindelaproboscis.Luegopuedenfijarse
sumergindolosdirectamenteenalcoholetlico70%caliente,formolal4%calienteoAFA.
Tambinesrecomendablefijaralgunosespecmenesporaplanamientoligero(ver
tremtodos).
Nemtodos. Sefijanagregndolesdirectamenteformolal4%caliente.Algunos
nemtodosdepecessonbastantefrgilesyalmanipularlosensolucinsalinaduranteel
examendelhospedero,comienzanaromperseylosrganosinternossesalendelacavidad
corporaldelparsito por estoesrecomendablefijarlosinmediatamenteconformolsalino

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al4%caliente.Comotodoslosotroshelmintos,unavezfijadossecolocanenvialescon
alcoholdel70%oconelmismofijador,etiquetadosconlosdatoscompletosdelacolecta.

Conservacindehelmintos.Parasuestudiomorfolgicoydeterminacintaxonmica,los
platelmintosylosacantocfalosseprocesanparahacerpreparacionespermanentesparael
microscopiodeorganismostotales.Latincinyprocesamientodehelmintosdamejores
resultadossisehaceinmediatamentedespusdelarecoleccinyfijacin.Losespcimenes
puedenconservarseindefinidamenteenvialesconalcoholetlicoal70%.Losespcimenes
decadaespeciedehelmintoporcadahospederoyrganoseseparancolocndolosenviales
llenosconalcoholetlicoal70%.Cadavialseidentificaconunapequeaetiqueta(Fig.)
quesecolocadentrojuntoconlosparsitos.Losdatosseescribenconlpizotintachina
usandocartulinaresistente,incluyendoelnmeroytipodehelmintos,elhospedero
(nombrecientficoynmerodelhospederosiselehaasignadouno),elrganoenque
habitabanlosparsitos,lalocalidaddecolectadeloshospederos,lafechayelcolector.
Cadadatoessumamenteimportante,ydebeescribirsecorrectamenteconlamxima
legibilidad.

Cuestionario
1. Qucaractersticasmorfolgicaspermitenreconocerenvivoalostremtodos,
monogneos,cestodos,acantocfalosynemtodos?
2. Queslafijacin?Qucaractersticassondeseablesenun buenagentefijador?

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3. Comparalosmtodosdefijacindestaprcticaconlosqueseaplicanparala
fijacindeotrosorganismos,vegetalesyanimalesyparaotrosprocedimientos(por
ejemploparaestudioshistolgicos,oparaaspectosdebiologamolecular).

Bibliografa

LamotheArgumedo,R.1997. Manualdetcnicasparaprepararyestudiarlosparsitosde
animalessilvestres.AGTEditor,MxicoD.F.43pp.

SalgadoMaldonado,G.1979.ProcedimientosyTcnicasgeneralesempleadosenlos
estudioshelmintolgicos.DepartamentodePesca.Mxico,D.F.55 pp.

SalgadoMaldonado,G.2006. Checklistofhelminthparasitesoffreshwaterfishesfrom
Mexico.Zootaxa:1324:1357. http://www.mapress.com/zootaxa/2006f/zt01324p357.pdf
http://www.mapress.com/zootaxa/

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Fig.1 Recoleccindepeces,
equipodeelectropesca

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Fig.Recoleccindepecesconchinchorro

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Fig.3Trasladodepecesvivosal
laboratorioenbolsasdeplsticoaireadas

Fig.4.Loshospederosenel
laboratoriodebenmantenerse
encondicionesadecuadashasta
suexamenhelmintolgico.

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Fig.Mantenervivoslospecesenel
laboratorioesesencialparaun
buentrabajoparasitolgico;
permitemayoreficienciaenla
bsquedayrecoleccinde
helmintos,yposibilitamayor
tiempoparaexaminarlos.Almorir
lospeceslosectoparsitoscomo
losmonogneosvirtualmentese
dehacenyperdemosesta
informacin.

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Fig.Examendehospederos:iniciarsiempreconlasaletas,branquias,etc.yaquelos
monogneossonmuyfrgilesypuedenperdersefcilmente.Todoelexamendebe
llevarseacabobajomicroscopioestereoscpico,encajasdePetridetamaos
apropiadosyusandopocoaguadelmedioparalasuperficieexternaosolucinsalina
0.7%paralasvscerasyrganosinternos.Notarlaspinzasdepuntafina(derelojero),
lospincelesfinosylasagujasdediseccin.

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Fig.Elusodevidriosdetamaosapropiados
permiteaplanartejidosyrganos(musculatura,
riones,hgado,mesenterios,grasa,cerebro)de
loshospederosparasuobservacinpor
transparencia;losparsitospuedenrecuperarse
posteriormenteparasufijacinadecuada.

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Fig.Esimportantetenerunmtodoadecuadoparalacapturadelosdatosdecampo.En
nuestrolaboratorio,elusodehojasdecampoparacadahospederoqueexaminamosha
permitidohacereficienteestacapturadedatos,puestoquefacilitaelmanejodelosdatos
detodosloshospederosexaminadosenunacolecta,tantoenconjuntoyalavezcon
idependencia.Lashojasdecampocontienenenunciados(nombresdeloscampos,ode
losrganosytejidos)queguanlaactividadadesarrollar.Sirvenademscomo
recordatoriodeloque debemoshacerycomolistaparaverificarqueyahemoshecho
todolocorrespondientealexamendecadahospedero.

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Tincinymontajedehelmintos
Introduccin
Objetivos
Materialesymtodos
Fijacin
Deshidratacin
Aclaramiento
Montaje
Procedimientos:tcnicasdetincin
Hematoxilina
ParacarmndeMayer
BoraxCarmndeGrenacher
CarmncidodeMayer
TricrmicadeGomori
Apndice1
Hematoxilina
cidocarmnico
Anilinas
Mordentes
ApndiceII.Formulario
Bibliografa

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Tincinymontajedehelmintos
Introduccin
Enestaprcticaseprocesarnejemplaresdeplatelmintosyacantocfalospara
elaborarpreparacionestotalesparamicroscopio,permanentesymontadasenblsamode
Canad.Elestudiomorfolgicoyladeterminacintaxonmicadelosejemplaresse
desarrollaconestaspreparacionesquesedepositanenColeccionesBiolgicasestablecidas
yreconocidas,yconstituyenlareferencianecesariadeltrabajocientficodesarrollado.Los
nemtodosnosetien,losprocedimientosparasuestudioydeterminacintaxonmicano
implicanlatincinysedescribenporseparado.
Paraestudiarlosobjetosenelmicroscopioesnecesarioqueseandelgadosy
transparentesyaquelamayoradelasveceslosexaminamosusandoluztrasmitida,es
decir,elestudiodelaspreparacionessehaceportransparencia.
Laspartesqueconstituyenlasclulasyelmaterialintercelularporlogeneralson
incolorasytransparentes,porloquenosedistinguenunasdeotras.Esdifcilprecisarlos
contornosderganosyestructurasamenosquepresentendiferenciasapreciablesensus
ndicesderefraccin.Parasolucionarestadificultadteimoslosejemplaresaplicamos
colorantesparacontrastarentrelasdiferentespartesdeunespcimen.Loscolorantes
usadoscomoreactivosseempleanparadeterminarlapresenciadealgunassustancias
qumicasoparaevidenciarladistribucindealgunasestructuras,porejemplofibras
elsticasenhelmintologaaplicamoscolorantesparaelucidarlaanatomadeorganismos
pequeos.
Contrastarmeramenteunespcimenensconloquelerodeaseradepocautilidad,
yaqueloquepretendemosesestudiarlasestructurasinternas.Lasdiferentesestructurasy

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rganosporlogeneral absorbendiferentescantidadesdelmismocolorante.Astambin,
diferentescolorantespuedenfijarsedemaneradistintaalmismorgano.Laafinidaddeun
rganootejidopordiversoscolorantespuedetenerrazonesqumicasofsicas:suafinidad
qumica,densidadypermeabilidad.Usamosloscolorantesparaobtenercontrastes
marcadosentrelosrganosyestructurasdeunejemplarypoderestudiarlosalmicroscopio.
Enmicroscoparealmenteseusanpocostintes.Conpocasexcepciones,los
colorantespuedenclasificarsecomocidosobsicos(Baker,1958).Unaclasificacin
precisaatenderasucomposicinqumica,loquequedafueradelosobjetivosdeestanota.
Ejemplosdecolorantesbsicossonelvioletademetilo,violetadegenciana,cristalvioleta,
azuldeanilina,azuldeNiloA,azuldetoluidina,ascomoelrojoneutroyelazulde
metilenoentreloscolorantescidostenemoselazuldemetilo,elverdebrillante,la
alizarina,laEosinaY,elcidocarmnico,ylahematoxilina.
Procesamosloshelmintostindolosconhematoxilinasoalgnpreparadodecido
carmnico.ElDr.RafaelLamotheArgumedorecomiendaelusodelaTricrmicade
Gomori.EstastcnicasfueronoriginalmentederivadasdelatcnicahistolgicaporelDr.
EduardoCaballeroyCaballero,quienfueunodelosfundadoresdelInstitutodeBiologa
delaUNAM(noviembrede1929),ellaboratoriodeHelmintologadeesteInstitutoseha
desarrolladodesdeeseentonces.AlumnadistinguidaycolaboradoradelDr.Eduardo
CaballerofuelaMaestraMargaritaBravoHollis,quientrabajtambinenelInstitutode
BiologaeimpartilamateriaTcnicasSelectasdeLaboratorioenlacarreradeBiologa
delaFacultaddeCiencias,UNAM.Mstarde,desdelos70selDr.RafaelLamothe
ArgumedosehahechocargodelLaboratorio,yaldebemoslaenseanzadelastcnicas
quedescribimosenesteapartado,yaplicamosenellaboratorio.

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Objetivos
Queelalumnoserelacioneconlosmtodosgeneralesdeprocesamientodemacroparsitos
parasuestudiomorfolgico,determinacintaxonmicayelaboracindematerialesde
referencia(vouchers)pormediodelaaplicacindetcnicasdetincinparaelaboracin
depreparacionestotalespermanentesdehelmintosparsitos.

Materialesymtodos
Lametafinaldeestaprcticaeslograrpreparacionesdeejemplarestotales(no
seccionados)teidasymontadasdemanerapermanenteenblsamodeCanad.Losmedios
resinososcomoelblsamodeCanaddandurabilidadamontajesdetejidosyorganismos
teidos,ademselblsamoproporcionamayortransparenciayaqueincrementaelndice
derefraccincuandoelespcimenestcompletamenteimpregnadoporestaresina.El
blsamonosemezclaconelaguaporestodeberemosdeshidratarcompletamenteel
espcimen,posteriormentereemplazarelagentedeshidratanteconalgnmaterialconel
cuallaresinasemezcle,esteeselaclarante.Entonceslospasosdelprocesamientoincluyen
despusdelafijacin,elteido,deshidratacin,aclaracinymontaje(Gray,1954).

Fijacin.Algunosfijadorescontraenelcitoplasmafuertemente,deformaque
dificultanlapenetracindelcoloranteylaapreciacindelacantidaddecolorantequeel
tejidohatomado.Elformolfavorecelaaccindeloscolorantesbsicosmsqueningn
otrofijador.Elalcoholetlicoyelcidoacticousadoscomofijadoresfacilitanlatincin
delasprotenasyelcitoplasmaconcolorantescidosobsicos,entantoqueelcido
pcricocoagulalasprotenasyfavoreceloscolorantescidos(Baker,1958).

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Cualquieraqueseaelmtododefijacinempleado(formol4%,Bouin,AFA),antes
deiniciarelprocesamientoesnecesariohaberlavadoyalosejemplareseliminandotodoel
fijador(varioscambiosdealcoholetlico70%),debenconservarseenalcoholetlico70%.

Deshidratacin.Paradeshidratarusamospreferentementeetanolparaestose
empleanlosalcoholesgradualesde30%,50%,70%y96%hastaalcoholetlicoabsoluto.
Losalcoholesgradualessepreparanapartirdealcoholetlicodel96%queesmsbarato
queelabsoluto.Elalcoholabsolutoeshigroscpicoesdecir,absorberpidamenteaguadel
airesehidratamuyfcilmente,porloqueesnecesariomantenerlotapadosiempre.La
acetonayelmetanoltambinpuedenusarseparadeshidratar,perosonmsvoltilesqueel
alcoholetlico.Nohayformaprcticadesabersiunespcimenestbiendeshidratado,slo
hastaintentaraclararlo(sinoestdeshidratadoseoscurecer).Ladeshidratacin
insuficienteeslacausamsfrecuentedemalaspreparaciones.Losejemplarestienenque
sermanipuladosconmuchocuidadoypermanecereltiempoadecuado(algunasvecesms
de12hs)enlosalcoholesde96%yabsoluto.Sinembargo,untiempoexcesivoenalcohol
absolutotornaquebradizosalosejemplares.Ladeshidratacinesunodelospasoscruciales
delprocesamiento,debehacersemuycuidadosamente,conmaterialesmuylimpios,y
alcoholespreparadosconexactitud,Pantin(1964)recomiendaqueelprocesosehagamuy
lentamente(de1a12horasparacadacambiodealcohol)paraasegurarunadeshidratacin
completa.Losalcoholesusadosnodebenregresarsealosfrascosdealcoholnuevos.

Aclaramiento.Elaclaranteesunasustanciamiscibleconelalcoholabsolutoycon
elblsamo.Seempleanaceitesesencialesqueimpartentransparenciaalosejemplaresdela
mismamaneraqueloharelblsamocuandosehayaimpregnadototalmenteenel
espcimen.Elterpineolesunaceitesintticoquetienelaventajadesermiscibleconel

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alcoholde96%,yporlotantoayudaralacompletadehidratacindelosejemplares.
Tambinseusaelaceiteesencialdeclavos,sinembargoesteaceitetornaquebradizosalos
ejemplares.OtroaclarantequeusamoseselsalicilatodeMetilo(Metilsalicilato).La
creosotadehaya,seushacetiempocomoaclarante,actualmentehadejadodeusarse
porqueestconsideradacomocarcingeno.Lacreosotaesunamezcladequmicosensu
mayorahidrocarburosaromticospolicclicosderivadosdelbenceno,queseoriginandela
quemadelamaderadehaya(Fagus),irritalapielylasmucosas.Tambinelxilolseusa
comoaclaranteparahelmintos,sinembargolosresultadossonmenossatisfactoriosque
cuandoseaplicaparacorteshistolgicosenparafinaporejemplo.Trataralosejemplares
conxilolpormsde15minutosloshacequebradizos.Engenerallosaclarantestiendena
absorberaguadelambiente,esnecesariomantenerlostapadosycambiarlos
peridicamentedesecharlosusadosdurantealgntiempoyqueyasehanhidratado.

Montaje. ElmediodemontajeporexcelenciaeselblsamodeCanad,unaresina
naturalqueseobtieneapartirdeAbiesbalsamica yquesediluyecomnmenteensolventes
comoelxilol,toluenoobenceno.Lostressolventessontxicos.Caractersticasdestacables
delblsamodeCanadsonsutransparencia,unndicederefraccinmuyprximoaldel
vidriodelosportaobjetosycubreobjetos(1.5)ysudurabilidad(hayregistrosde
preparacionesconmsde100aos,yenlaColeccinNacionaldeHelmintosdelInstituto
deBiologa,UNAMseconservanpreparacionesdemsde70).Existenresinassintticas
tilescomomediosdemontajeparamicroscopa,perosudurabilidadescuestionable
tratndosedeejemplaresdereferenciaquesedepositarnenunacoleccin,necesitamos
tratardeasegurarenlamedidadeloposiblelamslargapermanencia.Pantin(1964)
contradiceelrazonamientoanteriorcuandoargumentaquelacausaprincipaldela

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decoloracindelosespecimenesenpreparacionesconeltiempo,eselusodexilolyde
blsamodeCanad.Esteautorrecomienda(pg.48)paraprevenirladecoloracinde
ejemplares,evitarelusodexilolyblsamodeCanadconsideraquelacausadeesta
regresinenelmaterialprocesadoeslaimpurezadelxilolyelblsamoylaincompleta
remocindemordentes.

Procedimientos:Tcnicasdetincin
Parallevaracabolastincionesobservalasfotografasquesepresentanenesta
prcticaysiguelasindicacionesquesedescribenenlastcnicas.Losespecimenesno
debendejarsealaire,nuncadebenpermanecerenseco.Nodejarlosfrascosconsoluciones
oespcimenesabiertosmsdeltiempoabsolutamentenecesario.Lahumedadambiental
puedecausarquelosespcimenesseopaquenylaspreparacionesquedenmalalmontarlas
enblsamo.CambialosfludossiempreusandopipetasPasteurlimpias.Losmejores
resultadosencuantoalatincindeespecimenesseobtienensobretindolosyluego
diferencindolos(decolorndolospocoapoco),hastaalcanzarelcolordeseado.La
preparacin dereactivosycolorantessedetallaenelApndiceII.
Engeneral,decimosquelastincionessonacuosasoalcohlicasconsiderandosiel
colorantehasidodiluhdoenaguaoenalcohol.Lahematoxilinacomoladescribimos
abajoesunatincinacuosa,y elparacarmndeMayeresunejemplodetincinalcohlica.

HematoxilinadeDelafieldodeEhrlich
1.Losespecimenesestarnenalcoholetlico70%lavadosyadelfijador

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2.Hidratarenalcoholesgraduales50%,30%(15minutosencadauno)hastaagua
destilada.
3.TeirenhematoxilinadeDelafieldodeEhrlich(eltiempodetincindependedelas
dimensionesdelparsito,sobretododesugrosor,ydelamadurezdelcolorante,los
colorantesquellevanmstiempodehabersidopreparadossedicequeestnmadurosy
tienmsrpidamente.Puedeprobarseconuntiempoinicialde30segundosa1minutoy
dareltiemponecesariodeacuerdoconlacoloracinqueelparsitovayatomando.
Algunasveceseltiempodetincinexcededelos30minutos)(Latincin puedehacerse
muylentamentesidiluimoselcolorante,1gotao2dehematoxilinaen30mldeagua
detilada,teirelejemplardurante24hsenestasolucin)
4.Lavarconaguadestiladaparaeliminarelexcesodecolorante
5.Diferenciarconaguaaciduladaal2%concidoclorhdrico,hastaqueelparsitotome
uncolorrosaplido
6.Lavarenaguadestiladadurante1o2minutosparaevitarquesigaactuandoelagua
acidulada
7.Virarelejemplaracolorazulplidoovioletaenaguadelallaveduranteunos3a5
minutos(paraacelerarelviradopuedeagregarsesolucinsobresaturadadecarbonatode
litioalaguadestilada)
8.Deshidratarlentamentedesdeaguadestilada,enalcoholesgradualesde30%,50%,70%,
96%almenos15minutosencadacambio.Recordarqueentremslentaseala
deshidratacintendremosmsprobabilidadesdeobtenermejoresresultados.
9.Completarladeshidratacinenalcoholetlicoabsoluto(100%)2cambiosde20a30
minutoscadacambio.Mantenerelalcoholabsolutotapado.

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10.Aclararenterpineol,aceitedeclavososalicilatodeMetilo
11.MontarconblsamodeCanad.

HematoxilinadeVanCleave
DenominamoshematoxilinadeVanCleaveaunamezcladehematoxilinadeDelafield
conhematoxilinadeEhrlichyalumbredepotasio(verformulario),estamezclaes
recomendadaporVanCleave(1953)paralatincindeacantocfaloselprocedimientode
tincinenestecasoeselmismoquesedescribianteriormente.

ParacarmndeMayer
1.Losespecimenesdebernestarenalcoholetlico70%lavadosyadelfijador
2.Alcoholetlico96%,2cambios,10minutoscadauno
3.TeirenparacarmndeMayer,porlogeneraleltiempovarade2a3hasta10a15
minutos
4.Lavarenalcoholetlico96%paraquitarelexcesodecolorante
5.Diferenciarenalcoholde96%aciduladoal2%concidoclorhdrico,hastaquelos
bordesdelcuerpoquedenmsplidosqueelrestoylosrganosinternosseanvisiblespor
transparencia.
6.Lavarenalcoholde96%paraevitarqueelcidoclorhdricosigadecolorandoel
ejemplar.
7.Deshidratar,2cambiosdealcoholde96%15minutoscadauno.
8.Alcoholetlicoabsoluto(100%),2cambiosde20minutoscadauno

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BoraxCarmndeGrenacher
(TincinrecomendadaporBullock,1969paraacantocfalos)
1.Losespecimenesdebernestarenalcoholetlico70%lavadosyadelfijador
2.ColocarlosespecimenesenboraxcarmindeGrenacherdurante7.5a8.5horas
3.pasadoestetiempoagregar1gotadecidoclorhdricoporcada5mldecolorantey
mezclarbigorosamente

CarmncidodeMayer
(Amin,1998recomiendaestatincinenespecialparaacantocfalos)(paraestatincinvan
Cleave,1953recomiendaprimerotratarlosejemplaresconsolucindefosfatotrisdico)
1.Losespecimenesdebernestarenalcoholetlico70%lavadosyadelfijador
2.Pincharlosacantocfalosconalfileresentomolgicosparafacilitarlapenetracindelos
fluidosalacavidaddelcuerpoylosrganosinternos.Losespecimenesdemayortamao
debenpincharsemsveces.Cuidardenopincharlosrganosreproductores.
3.TeirenCarmncidodeMayerdurantetodaunanoche
4.Diferenciarenalcoholde70%aciduladoal4%concidoclorhdrico,hastalograrcolor
rosaplido.Ladiferenciacinpuedellevarvariashoras,incluso2o3das(Amin,
comunicacinpersonal)
5.Lavarenalcohol75%variasveces(almenos3)hastaqueelespcimennodesprenda
mscolorante.
6.Deshidratarenalcoholesde85%y95%de12a24hs,2cambiosenelalcoholde95%.
7.Completarladeshidratacinenalcohol etlicoabsoluto(100%)apor12a24hs

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8.Aclararenmezclasgradualesdeterpineolyalcoholabsoluto(25%terpineol,75%
alcoholabsoluto50%terpineoly50%alcoholabsoluto75%terpineoly25%alcohol
absolutoterpineol100%)12a24hsencadamezcla.
9.ColocarlosejemplaresenunamezclamitaddeterpineolymitablsamodeCanad
10.MontarenblsamodeCanad

TricrmicadeGomori
1.Losespecimenesdebernestarenalcoholetlico70%lavadosyadelfijador(se
recomiendausarlquidodeBouincomofijador,yaqueactacomomordentedebelavarse
muybien,conalcohol70%hastaeliminartodorestodefijador)
2.Hidratarhastaaguadestilada,alcohol50%,25%15minutosencadauno
3.TeirenHematoxilinadeWeigertdurante10minutos
4.Lavarenaguacorrientepor10minutos
5.TeirentricrmicadeGomoripor10a15minutos
6.Diferenciarenaguaaciduladaal0.5%concidoactico(cidoacticoglacial0.5mlen
99.5mldeaguadestilada)
7.Deshidratarlentamente,aclararymontar.

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ApndiceI
Hematoxilina
Anhoyendacuandoelavancetecnolgicopermitelasntesisdemuchas
molculas,unodeloscolorantesmsusadosenbiologaeslahematoxilina(hematena)
(Titford,2005).Suimportanciasederivadelavariedaddeobjetosquepuedeteir,la
facilidadconquepuedemanejarse,suinsolubilidadenmediosneutrosalcohlicoso
acuososdespusdelatincin,ylaposibilidaddeobtenerunacoloracinoscurapermanente
enelblsamodeCanad.Lahematoxilinaesuncompuestoderivadodelamaderaoscura
deunaleguminosanativadeCentroAmrica,Haematoxyloncampechianum.LosMayasla
usabanparateiralgodn,yaprovechabantambinsuspropiedadesmedicinaleslos
EspaoleslatransportaronaEuropa,dondelostextilesseteanconcolorantesderivados
deplantasylqueneshastaeladvenimientodelasanilinas(1830s).Porestaraznlaplanta
fueintroducidadesdeYucatnalasislasdelCaribe,Brasil,IndiayMadagascar.Desdeel
puntodevistaqumicolahematoxilinaesunflavonoide,unafamiliadesustancias
ampliamentedistribuidaentrelasplantas.Cuandoseexponealairelahematoxilinase
oxidaahematenadecolorpardorojizo,quenodebeconfundirseconelpigmento
sanguneohematina.Lacoloracinqueimpartelahematoxilinaporssolanoesmuy
durable,peroelusodesalesdemetalespesadoscomomordentespermitemayor
permanencia:lassalesdehierrodancoloracionesgrisesaoscuras,lasdecromodantonos
azules,ylasdealuminioproporcionancoloresviolceos.Lahematoxilinaseusaen
microscopadesdeiniciosdelsigloXIX.

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cidocarmnico
Elcidocarmnicoesuncolorantemuyempleadoenmicroscopa,entreotras
razonesporquepuedeemplearsedirectamentecomouncolorantebsico,oconun
mordentecomocolorantecido,puedeusarsetambindirectamentecomocolorantecidoy
yaenlostejidoscambiarseabsicoespermanenteenblsamodeCanadytiemuybien
laspreparacionestotalesdehelmintos.
Elcidocarmnicoeselnicocolorantedeorigenanimalqueseempleaen
microscopa,seobtienedecccidos,cochinillasDactylopiuscacti(Coccuscati)cuyas
hembrascarecendealasysealimentandeunnopalnativodeCentroAmrica,Nopalea

coccinellifera .Elcidocarmnicoseextraedeloscuerposdesecadosdelashembras,en
ellasconstituyecasiun10%desupesoseco.Puedenobservarsecorpsculosrojosdel
pigmentoenloslbulosdeloscuerposgrasosdelashembrasapesardequeelmacho
tambintieneestoscuerposgrasosnoproduceenellostantoscorpsculosdelcolorante.El
carmnesunaformacrudadelcidocarmnico,seextraetambindelascochinillas,pero
contienetansloun56%decidocarmnicomezcladoconotrassustanciasorgnicas.El
carmntienelaventajadeserconsiderablementemsbaratoqueelcidocarmnico,pero
lasimpurezaslotornancasiinsolubleenaguadestilada.Puedeemplearsetambinenlas
tincionesparamicroscopa.HaciafinesdelSigloXIX,P.Mayerprodujodiferentesmezclas
colorantesusandocidocamnicoypopularizsuusoenmicroscopa.

Anilinas

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LaTricrmicadeGomoriesunatcnicadetincinquesebasaenelusodelCromotropo
2R,uncolorantesintticocido.Genricamentealoscolorantessintticosselesdenomina
anilinas.

Mordentes
Loscolorantesdisueltosenaguaoenunamezcladeaguayalcoholseadhieren
directamenteaciertosconstituyentesdelostejidos.Algunoscolorantesparticularessin
embargotienenmtodosalternativosdeadhesinqueinvolucranlapresenciadeotra
sustanciaentreelcoloranteensyelsolvente,ycuandoestasustanciasepresentael
comportamientodelcoloranteesuntantodistinto.Estassustanciasintermediariasentre
colorantesytejidosseconocencomomordentes.Porlogenerallassalesdeciertosmetales
seusancomomordentes:lossulfatosdehierro,aluminioycromo(comolosalumbresde
potasio,deamonio,dehierroyeldecromo).Unmordentereaccionaqumicamenteconel
coloranteformandounalaca.Algunaslacaspenetranmsalostejidosquelospropios
colorantesquelasoriginan.Estoscomplejostejido/mordente/colorante,soninsolublesen
todoslosfluidosneutrosqueseusangeneralmenteenmicroscopa,deformaquela
coloracinsubsecuenteconotroscolorantessefacilitayladeshidratacinpudellevarsea
cabogradualmente.Ejemplosdecolorantesqueseusanconmordentessonlahematoxilina
deEhrlichyelcarmalumdeMayer.

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ApndiceII
Formulario
HematoxilinadeDelafield
Puedenprepararsedistintostiposdehematoxilina,dependiendodelmordente,delmtodo
deoxigenacin,elpH,etc.LahematoxilinadeDelafieldsepreparaconalumbre,similara
ladeHarris,requieredemaduraralmenosunpardesemanas(sinembargolaoxigenacin
delpigmentopuedeacelerarseparasuusoinmediato,verNeild,1934).
Hematoxilina(cristales)

4g

Alcohol95%

25ml

Solucinsaturadadealumbredeamonio

400ml

HematoxilinadeVanCleave(VanCleave,1953)
HematoxilinadeDelafield

1ml

HematoxilinadeEhrlich

1ml

Aguadestilada

100ml

Alumbredepotasio

6g

Disolvercompletamenteelalumbredepotasioenelaguadestilada,agregarlas
hematoxilinas.

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TricrmicadeGomori
Estatcnicadetincincombinaunahematoxilinaconunamezcladecolorantes
incluyendocromotropo2Ryverdebrillanteoverderpidoyazuldeanilina.Seutilizapor
logeneralparaidentificarpormicroscopapticaeltejidoconectivoenmuestrasdetejidos.
Permiteladiferenciacinentrefibrasdecolgenaydemsculoliso posibilitala
identificacindefibrasdecolgenaentejidohepticoyrenal,seutilizaparademostrarel
incrementoenladeposicindelcolgenoasociadosconlasustitucindetejidofuncional
portejidocicatricial.Haymuchasvariantesdeestatcnica(Ellis,2008).
Principiosdeaccin:uncolorantegeneral(plasmastain,Cromotropo2R)se
combinaconuntintequecolorealasfibrasdetejidoconjuntivo(verderpido[FastGreen
FCF],verdebrillante[lightgreen],oazuldeanilina),enunasolucindecido
fosfotngsticoalacualselehaagregadounasolucindecidoactico.Elcido
fosfotngsticofavorecelacoloracinrojadelmsculoyelcitoplasma.Eliontungstatolo
tomaespecficamentelacolgena,yelcolorantedelasfibrasdetejidoconjuntivose
adhiereaestecomplejocoloreandolacolgenaenverdeoenazuldependiendodel
colorantedecontrastequesehayaempleado.Puedeusarsecualquierfijador,sinembargo
serecomiendaampliamentefijarlosespecimenesenlquidodeBouin sisevaateirconla
tricrmicadeGomori,yaqueelBouinactacomomordentealbajarelpH,intensificando
lasreaccionesquedanloscolores.
Interpretacindelatincin:
Citoplasma,fibrasmusculares,queratina rojo
Fibrina rosa

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Colgenaverde
Ncleos azulonegro

ParalatricrmicadeGomoriseempleanlossiguientescolorantes:
HematoxilinafrricadeWeigert
SolucinA
Hematoxilina 10g
Alcohol95% 1000ml
SolucinB
Aguadestilada 475ml
cidoclorhdricoconcentrado5ml
Clorurofrrico,solucin29% 20ml

Solucinparateir:
MezclarpartesigualesdelassolucionesAyB

TricrmicadeGomori
Cromotropo2R 0.6g
FastgreenFCF,Lightgreeoanilinablue0.3g
cidofosfotngstico 0.8g
cidoacticoglacial 1ml
Aguadestilada100ml

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Disolvercadareactivoporseparadoenalcuotasde25mldeaguadestilada,luegomezclar
lascuatrosoluciones.Dejarreposarduranteunanoche,yfiltrar.Lamezclaesdecolor
prpura.Puedeconservarseatemperaturaambiente,perodebeprotegersedelaluz.Esta
solucinsedeterioraconeltiempo,porlotantoserecomiendaprepararpocoyusarlalo
msfrescaposible.Inclusoserecomiendaprepararlasemanalmente.

ParalatricrmicadeGomori,Ellis(2008)recomiendaprimeroteirlosncleosconazul
decelestinapreparadadelasiguientemanera:
AzuldeCelestina0.5g
Sulfatofrricodeamonioal5%(alumbredehierro) 100ml
SepreparaaadiendoelazuldeCelestinaalsulfatofrricodeamonioehirviendopor3
minutos,dejarenfriaryluegofiltrar.Conservarlasolucinrefrigerada.

PuedeusarsetambinlahematoxilinadeHarrisenlugardelahematoxilinafrrica
deWeigertsiguiendolosmismosprocedimientosdescritos.

Bibliografa

Pgina46de 56

Amin,O.M.1998.Acanthocephala.MarineFloraandFaunaoftheUnitedStatesNOAA
TechnicalReportNMFS135,USdepartmentofCommerce.27pp.

Baker,J.R.1958(3a reimpresin1970).Principlesofbiologicalmicrotechnique.Astudy
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Bullock,W.L.1969.MorphologicalfeaturesastoolsandaspitfallsinAcanthocephalan
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PhylumPlatyhelminthes
Introduccin

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Phylum Platyhelminthes
Introduccin
Losplatelmintosconstituyenun Phylumdeorganismosgrandeydiverso,algunos
deellossondevidalibre,perolamayorasonectooendoparsitosdevertebradose
invertebrados.Presentansimetrbilateral.Elcuerpoesaplanadodorsoventralmentey
slido,carecendecavidadcorporal(celoma).Nosonsegmentados,aunqueloscstodos
presentanelcuerpoconstitudoporprogltideos.Algunosgruposdeplatelmintospresentan
unaparatodigestivoincompleto,entantoqueloscstodoscarecenporcompletoderganos
digestivos.Carecendesistemascirculatorio,esquelticoyderganosdeintercambio
gaseoso.Presentanunsistemaexcretorprotonefridial,constitutdoporclulasenflama.En
generalsonhermafroditas,conciclosdevidacomplejos,sibienlosmonogneostienen
ciclodevidadirecto.
Laclasificacindel Phylumincluyevariasclases,delascualeslostremtodos
(Trematoda),losmonogneos(Monogenea)yloscstodos(Eucestoda)sonfrecuentes
comoparsitosdeanimalessilvestres,enparticulardepeces.

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Tremtodos
Introduccin
Desarrollo
Bibliografa

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Tremtodos
Introduccin
Algunosautoresserefierenalostremtodoscomodigeneosocomotremtodos
digenticos.Lamayoradelostremtodosadultos sonendoparsitosyseencuentranen
todaslasclasesdevertebrados.Unadelascaractersticasmsdistintivasdeestaclasede
platelmintosesquepresentanunpardeventosas,laanterioreslaventosaoralenelcentro
delacualseencuentralaboca,yunaventosaventraloacetbulo.Algunasespeciesno
presentanestaconstitucin entantoqueotraspuedenpresentarventosasaccesoriasenla
parteanterior.Latalladelostremtodosque parasitan animalessilvestresesmuyvariable,
deunospocosmilmetroshastaalgunoscentmetros.Lapareddelcuerpodelostremtodos
esuntegumentosincicial,unacapavivaquepuedeestarcubiertaporespinasotubrculoso
algunasotrasestructurasaccesorias.
Existeun cerebroprimitivoenlaparteanteriordelcuerpo,apartirdelcualse
extiendencordonesnerviososlongitudinalespareadosqueseinterconectanpormediode
comisuraslaterales.El sistemanerviosoperifricoinervaeltegumentoylascapas
musculares,elaparatodigestivoyelreproductor. Losrganossensorialesexternos
incluyenmecanoreceptores,quimiorreceptoresyosmoreceptores.
Losrganosysistemasinternosquedanembebidosenelparnquima.Elaparato
digestivoseabreenlabocasituadaporlogeneralenlaparteanteriordelcuerpo,enel
centrodelaventosaoral.Lamayoradelasespeciespresentanunafaringemuscular
conspcua,quesecontinaconelesfagoqueporlogeneraldalugaradosciegosquese
extiendenlateralmenteypuedenllegarhastaelextremoposteriordelcuerpo.Enalgunas
especiesestosciegospuedensercortos,oramificarse,obien,enotrasespeciespueden

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unirseenlaparteposteriorformandounasa,incluso,abrindoseenunano.Comovemosla
variabilidadmorfolgicadelostremtodosesmuygrande,comoentodoslosgrupos.
Elsistemaexcretoresprotonefrial,lasclulasenflamaexhibenpatronesde
disposicinespecficos,ysimtricosenelorganismoslaobservacindeestasclulases
mssencillaconejemplaresvivos.Losconductosexcretoresdesembocanaunavescula
excretorasituadahaciaelextremoposteriordelcuerpoyquepuededescribirsecomoen
formadeI,deYodeVlaobservacindeestavesculaesmsaccesibleconejemplaresen
vivo,peromuchasvecessepuedeobservarenlosejemplaresyaprocesadosen
preparacionespermanentes.
Sibienlosesquistosomtidossonunisexuales,haymachosyhembrasporseparado,
lamayoradelosgruposdetremtodossonhermafroditas,conrganosreproductivos
masculinosyfemeninosenelmismoindividuo.Ladisposicindelosrganosyestructuras
reproductorasesmuyvariable,ladescripcinquehacemosacontinuacinesgeneral,
puedeemplearsecomounaguaenlaobservacindeejemplares.
Porlogeneralsepresentaunpardetestculosdetamaosimilar,deloscualessale
elespermaporlosvasoseferentes,quesefusionan originandoelvasodeferenteo
espermaducto. Enalgunosgruposelespermaductodesembocaenunavesculaseminal.La
porcinterminaldelsistemamasculinoporlogeneralexhibeunsacodelcirroconuncirro
(papilapeneal)protusible.Estesacoseabredirectamenteenelgonoporo,situadosobrela
superficieventraldelanimal,obienformandounatriogenital.
Lafecundacinporlogeneralescruzada.Elcirrotransfiereelespermahaciael
gonoporodeotroorganismoparaqueviajeporlosconductosgenitalesfemeninoshaciael
repectculoseminaldondesealmacena.Losvulosseproducenenelovarioysedesplazan

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poreloviducto.Amedidaquepasanporelreceptculoseminalsonfecundados.Elcigoto
diploidecontinahaciaelootipo,queestrodeadoporlaglnduladeMehlis.Elootipo
tambinrecibeladesembocaduradelreservoriodevitelo.Lasglndulasvitelgenas
generalmenteseencuentrandistribudaslongitudinalmentehacialasmrgenesdelcuerpo,
aunqueenalgunasespeciespuedenconstituirmasascompactas.Lasvitelgenasaportanel
viteloparaeldesarrolloembrionario,ytambinproducensustanciasquevanaformarel
cascarndelhuevo.LasenzimasquesegeneranenlaglnduladeMehlisendurecenel
cascarnamedidaqueloshuevospasandelootipoaltero.Elembrincontinasu
desarrolloeneltero,deformaquecuandosalendelcuerpodeladultoenrealidadson
embrionescontenidosenelcascarndelhuevo.

Desarrolloyciclodevida.Eldesarrolloembrionariodentrodelcascarndelhuevodalugar
aunaprimeraformalarvaria,elmiracidio,queenalgunasespeciesyaestcompletamente
formadocuandoelhuevoespuesto.Enotrasespecieselhuevorequierehabersalidopara
completarsudesarrollo.
Todoslostremtodostienenunmolusco,gastrpodoobivalvo,comoprimer
hospederointermediario.Lamayoradelasespeciesdetremtodosponenhuevosdelos
cualeseclosionael miracidioquepenetraalcaracolhospederointermediario.Algunas
especiesdepositanhuevosquesoningeridosporelmolusco,ydentrodesteeclosionael
miracidio.Losmiracidiossonlarvasciliadas,librenadadoras.
Dentrodelmoluscoeldesarrollocontinapormediodeunprocesoasexualmuy
especializadoconocidocomopoliembriona,medianteelcualselogramsdeunindividuo
porcadacigotoendesarrollo.Losmiracidiosdesprendensusciliosyseestablecenen

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sitiosespecficosdelcaracolsegnlaespeciedeparsito,ysetransformanenesporocistos.
Losesporocistossonsacosgerminalesquecontienenclulassomticasyclulasde
desarrollo.Apartirdelasclulassomticastienelugarlaformacindeunasegunda
generacindeesporocistos.Obien,elesporocistodalugaraotroestadiodedesarrollo
llamadoredia.Lasrediastambinsonsacosquecontienenclulassomticasyclulas
germinalessinembargoyaposeenlaventosaoral,labocaylafaringe,ascomoun
sistemadigestivoprimitivo.Lasclulassomticasdelasrediaspuedendarlugarauna
segundageneracinderedias(rediashijas)obiendarorigenaotroestadiodedesarrollo,
lascercarias.Estascercariasenlamayoradelasespeciesemergendelcaracolprimer
hospederointermediarioynadanlibrementebuscandoalsiguientehospedero.Lascercarias
sonmuyparecidasyaalosadultos,perocarecenderganosreproductoresdesarrollados,y
ademspresentanunacola.Enmuchasespecies,lascercariaspenetranaotrohospedero
intermediario(elsegundohospederointermediario),endondesetransformanen
metacercarias,queporlogeneralpermanecenenquistadas.Lasmetacercariascasisonya
adultosinmaduros.Cuandosoningeridosporelhospederodefinitivoapropiado,se
transformanenadultosreproductivos.

Objetivo
Queelalumnoreconozcalascaractersticasmorfolgicasdistintivasdelos
tremtodos.

Desarrollo

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Estudiomorfolgicodetremtodosadultos:

CrassicutiscichlasomaeManter,1936parsitodecclidosnativos(mojarras),parasitael
intestinodevariasespeciesdeCichlasoma enloscuerposdeCentroamrica,desdela
cuencadelroPnucoporlavertientedelGolfodeMxico,ylacuencadelroPapagayo
porlavertientedelOcanoPacfico,hastaNicaraguayPanam(SalgadoMaldonado,
2008).

Estudiomorfolgicodelarvasdetremtodos(metacercarias):

Posthodiplostomumminimum(MacCallum,1921)parsitodemesenterios,musculatura,
hgado,cavidaddelcuerpo,ojos,riones,grasa,degrancantidaddepecesdedistintas
familias,ampliamentedistribuidoenMxico.Losadultosparasitanavesictifagascomo
garzas.

Clinostomumcomplanatum(Rudolphi,1814)parasitaenlaboca,cavidadbranquial,
branquias,oprculos,aletas,msculo,mesenterios,musculatura,cavidaddelcuerpo,de
grancantidaddepecesdedistintasfamilias,ampliamentedistribuidoenMxico.Los
adultosparasitanavesictifagascomogarzasycormoranes.

Bibliografa
Bush,A.O.,J.C.Fernndez,G.W.Esch,yJ.R.Seed.2001. Parasitism,thediversityand
ecologyofanimalparasites.CambridgeUniversityPress.CambridgeUK.566pp.