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Cofepris Validacion Metodos Analiticos
Cofepris Validacion Metodos Analiticos
Rev. No.: 0
3.3 BLANCO DE MUESTRA: Son matrices que no contienen el analito de inters (placebo).
Son difciles de obtener pero son necesarios para estimar las interferencias que pudieran
encontrarse durante el anlisis de las muestras de prueba.
3.4 CRITERIOS DE ACEPTACIN: Parmetros bajo los cuales el resultado de una prueba
ser considerado aceptable.
3.5 CURVA DE CALIBRACIN: Es la representacin grfica de la seal medida como una
funcin de cantidad del analito.
3.6 INCERTIDUMBRE: Estimacin que caracteriza el intervalo de valores, dentro de los
cuales se encuentra el valor convencionalmente verdadero de la magnitud medida.
3.7 INTERVALO DE TRABAJO: Intervalo comprendido entre las concentraciones superior e
inferior (incluyendo dichas concentraciones) y para las que se ha demostrado que el
analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperacin y
linealidad.
3.8 INTERVALO LINEAL: Es la capacidad de un mtodo analtico para dar resultados que
son directamente proporcionales a la concentracin del analito dentro de un intervalo
dado.
3.9 LMITE DE CUANTIFICACIN: Es la concentracin ms baja a la cual el analito puede
cuantificarse con una precisin y veracidad aceptables bajo las condiciones
experimentales establecidas.
3.10 LMITE DE DETECCIN: Es la concentracin ms baja a la cual puede detectarse el
analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales
establecidas.
3.11 MATRIZ O PLACEBO: Muestra que contiene todos los componentes de un producto a
excepcin del analito.
3.12 MTODO NORMALIZADO: Proceso de medicin robusto donde pequeas variaciones
en el procedimiento no deben producir de forma imprevista grandes variaciones en los
resultados.
3.13 MTODO NO NORMALIZADO: Mtodo alternativo que demuestra o estima el mismo
analito tal cual se mide utilizando el mtodo normalizado.
3.14 MUESTRA ADICIONADA O FORTIFICADA: Porcin representativa del material a
evaluar, a la que se le adicionan cantidades conocidas del analito de inters.
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3.26 VALIDACIN PARCIAL (confirmacin del mtodo): Evidencia objetiva para demostrar
que al aplicar un mtodo normalizado, se cumple con las especificaciones del mismo y
se cuenta con la competencia tcnica para realizarlo adecuadamente tomando en
consideracin sus propias instalaciones, equipo y personal.
4.
DOCUMENTOS APLICABLES
1. AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary
Supplements and Botanicals. December 2002.
2. CENAM. Gua para estimar la incertidumbre de la medicin. Abril 2004.
3. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean la tcnica de medicin de conductividad electroltica. Abril 2008.
4. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean las tcnicas de Espectrofotometra de Absorcin Atmica y de Emisin y Atmica con
Plasma Acoplado Inductivamente. Abril 2008.
5. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean las tcnicas de Cromatografa de Gases (GC) y Cromatografa de Lquidos de Alta
Resolucin (HPLC). Abril 2008.
6. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean la tcnica de Gravimetra de Masa. Abril 2008.
7. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean la tcnica de medicin de pH. Abril 2008.
8. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean la tcnica de Titulacin volumtrica. Abril 2008.
9. CENAM-EMA. Gua tcnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analticas que
emplean la tcnica de Espectrofotometra de Ultravioleta-Visible. Abril 2008.
10. Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos. Gua de Validacin de Mtodos
Analticos. Edicin 2002.
11. Directiva 96/23/CE en cuanto al funcionamiento de los mtodos analticos y la interpretacin de
los resultados. Agosto 2002.
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Rev. No.: 0
DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
5.1
CRITERIO No. 1
Clasificar el mtodo como Normalizado o no Normalizado conforme a lo siguiente:
5.1.1
Rev. No.: 0
13.
14.
15.
16.
17.
5.1.2
Codex Alimentarius
Food and Drug Administration (FDA)
Food and Agriculture Organization (FAO)
European Commission (CE)
United States Department of Agriculture (USDA)
5.2
CRITERIO No. 2
Considerar los siguientes parmetros de desempeo de acuerdo al tipo de mtodo.
Parmetro
Mtodos normalizados
Fisicoqumicos
Fsicos
Cuantitativos
Cualitativos
Mtodos no
normalizados
Fisicoqumicos
Intervalo lineal y de
trabajo
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Recuperacin
Sesgo
Repetibilidad
Reproducibilidad
Incertidumbre
Sensibilidad
Selectividad
Robustez
Nota: Los parmetros de desempeo a considerar para los mtodos fisicoqumicos depender del tipo de prueba
de que se trate.
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5.3
CRITERIO No. 3
Clasificar el mtodo por tipo de prueba
Tipo de prueba
Metodologa
Espectrofotometra UV-Visible
Turbiedad
Espectrofotomtrica Absorcin Atmica (AA),
Plasma Inductivamente Acoplado (ICP)
Cromatogrfica
Potenciomtrica
Volumtrica
Gravimtrica
Fsica
(cuantitativa)
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Tipo de prueba
Metodologa
Fsica
(cualitativa)
CRITERIO No. 4
Establecer los parmetros finales de desempeo con base al tipo de prueba:
Espectrofotomtrica
Cromatogrfica
Potenciomtrica
Volumtrica
Gravimtrica
Fsica
Tipo de prueba
SI
SI
SI
SI
SI
NO
Lmite de deteccin
SIa
SIa
NO
NO
NO
SIb
Lmite de cuantificacin
SIa
SIa
SIa
SIa
SIa
NO
Recuperacin
SI
SI
NO
SI
SI
NO
Sesgo
SI
SI
SI
SI
SI
NO
Repetibilidad
SI
SI
SI
SI
SI
SIc
Reproducibilidad
SI
SI
SI
SI
SI
SIc
Incertidumbre
SI
SI
SI
SI
SI
SIc
Sensibilidad
SId
SId
SId,e
SIe
SId
NO
Selectividad
SId
SId
SId,e
SI
SI
SIb
Robustez
SId
SId
SId
SId
SId
SId
Parmetro de
desempeo
Nota: Solo para mtodos gravimtricos y volumtricos la selectividad se sustenta con los resultados de linealidad,
recuperacin, repetibilidad y reproducibilidad, si estos cumplen con los criterios de aceptacin establecidos
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5.5
CRITERIO No. 5
Seleccionar el tipo de matriz a evaluar conforme a:
1. La ms solicitada.
2. La ms compleja.
3. Para mtodos generales que apliquen a diferentes matrices; FEUM, Residuos orgnicos,
metales contaminantes, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa por grupo
(alimentos, principio activo, tipo de presentacin, entre otros)
a. Alimentos: lcteos, crnicos, productos de la pesca agua, cereales, frutas,
vegetales, productos de panificacin, miel, productos de confitera, especias,
entre otros.
b. Medicamentos: cpsula, gragea, tableta, suspensin, jarabe, ungento, colirio,
espuma, gel, supositorio, parche, jalea, ovulo, entre otros.
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5.6
CRITERIO No. 6
Evaluar los parmetros de desempeo correspondientes como se detalla en las siguientes tablas:
Parmetro
Muestras
Repeticiones
Calcular/determinar
Observaciones
a) Utilizar niveles establecidos en la
curva de calibracin utilizar la tabla
gua contenida en el anexo A.
Intervalo lineal
Intervalo de
trabajo
Rev. No.: 0
Parmetro
Lmite de
deteccin
(pruebas
cualitativas)
Muestras
Repeticiones
Calcular/determinar
Observaciones
a)
Lmites de
deteccin y
cuantificacin
Recuperacin y
sesgo
b)
LD =
3.3 * sbo
m
LC =
10 * sbo
m
a)
Calcular
la
concentracin
recuperada para cada nivel de
concentracin adicionado.
b) Para el sesgo, efectuar la resta
aritmtica de la concentracin aadida
menos la concentracin recuperada.
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Parmetro
Muestras
Repetibilidad
Repeticiones
Calcular/determinar
Observaciones
b) Calcular el % de recuperacin de
los 6 resultados para cada nivel
c) Calcular la media (x), desviacin
estndar (sr) y el coeficiente de
variacin (CVr) de los % de
recuperacin obtenidos para cada
nivel adicionado.
Reproducibilidad
Tres niveles diferentes de
(Precisin
concentracin (niveles inferior,
intermedia)
b) Calcular el % de recuperacin de
los 6 resultados para cada nivel
c) Combinar estos resultados con los
datos obtenidos en la estimacin de la
repetibilidad y calcular la media (x),
desviacin estndar (sR) y el
coeficiente de variacin (CVR) de los
% de recobro para cada nivel.
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Parmetro
Muestras
Blancos de muestra (placebos)
o muestras adicionadas.
Sensibilidad
Selectividad
Blancos de muestra o
muestras adicionadas con
cantidades conocidas de
interferencias, productos de
degradacin o impurezas
Repeticiones
Por duplicado
Calcular/determinar
Observaciones
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Parmetro
Muestras
Repeticiones
Calcular/determinar
Observaciones
Robustez
Concentracin equivalente al
nivel medio estimado en el
intervalo de trabajo
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Parmetro
Muestras
Repeticiones
Observaciones
Calcular/determinar
a) Especificar el mensurando.
b) Identificar
incertidumbre
Incertidumbre
No aplica
Utilizar la informacin
obtenida en el proceso
de validacin.
las
fuentes
de
la
incertidumbre
Nota 1. Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito en la muestra, la adicin debe ser llevada a cabo en las primeras etapas.
Nota 2. Para la determinacin de: intervalo lineal y de trabajo, lmites de deteccin y cuantificacin, recuperacin, sesgo, repetibilidad y sensibilidad se debe aplicar el mtodo
de ensayo especfico por un mismo analista (el de ms experiencia en el anlisis) bajo las mismas condiciones.
Nota 3. Para mtodos fsicos cuantitativos la repetibilidad y reproducibilidad se calculan en base a la lectura directa.
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5.7
CRITERIO No. 7
Criterios de aceptacin
Parmetro
Criterio de aceptacin
a) Comportamiento lineal en la grfica de concentracin vs respuesta analtica.
Intervalo lineal
b) Datos aleatorios en el grfico de residuales
a) Pendiente: valor cercano a 1
Intervalo de trabajo
Lmite de cuantificacin
prctico
Lmite de cuantificacin
estimado
Lmite de deteccin
Recuperacin
Repetibilidad
Reproducibilidad
Robustez
5.8
b ) Coeficiente de correlacin:
r 0.98 para cuantificacin de residuos e impurezas
r 0.99 para cuantificacin de contenido e ingrediente activo
Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo
Menor o igual al nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo
Los establecidos en la referencia original del mtodo. Si no se dispone de estos
datos utilizar como gua las tablas contenidas en el anexo B.
Si sDi < sR el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el
mtodo es robusto.
CRITERIO No. 8
Rev. No.: 0
6. Reactivos
7. Muestras
8. Desarrollo experimental
9. Resultados
10. Anlisis estadstico
11. Criterios de aceptacin
5.9
CRITERIO No. 9
6. Reactivos
7. Muestras
8. Mtodo de ensayo
9. Desarrollo experimental
10. Resultados
11. Anlisis de resultados
12. Conclusin
13. Bibliografa
14. Anexos
Nota: El informe de resultados debe incluir firmas de quien elabor, revis y aprob.
ANEXOS
Anexo A. Gua para considerar los niveles del intervalo lineal
Determinacin
Intervalo recomendado
Criterio de aceptacin
90-108%
92-105%
95-102%
98-101%
Criterio de aceptacin
50-120%
60-120%
70-120%
70-110%
85-110%
Criterio de aceptacin
98-102%
98-102 %
97-103 %
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Repetibilidad ( r)
Reproducibilidad (R )
CVr 3%
CVr 2%
CVr 1.5 %
CVr 1%
CVR 6%
CVR 4%
CVR 3 %
CVR 2%
Repetibilidad ( r)
Reproducibilidad (R )
CVr 35%
CVr 30%
CVr 20%
CVr 15%
CVr 10 %
CVR 53%
CVR 45%
CVR 32%
CVR 23%
CVR 16%
Repetibilidad
CVr 2 %
CVr 2 %
CVr 3 %
20 / 20
Reproducibilidad
CVR 2 %
CVR 2 %
CVR 3 %