Rev Inst NaI CanceroI (Mex) 2000; 46 (4).

275
edigraphic.com
Attculo dc tctision
Vo|. 1, Nr. 1
0cluore-0|c|erore 2000
pp 275-280
Mtodos do dototton do a aotoss,
atatonos y mtatonos
rnesfo AIfaro Moreno,* CIaudIa Oarca CuIIar,* AIfonso uenas OonzIez*
,
**
* SubdIreccIn de InvesfIgacIn sIca, InsfIfufo NacIonaI de
CanceroIoga.
** eparfamenfo de OenfIca y JoxIcoIoga AmbIenfaI. InsfIfufo
de InvesfIgacIones IomdIcas.
INJIO\CCION
Ia muerfe ceIuIar es un fenmeno que puede ser re-
suIfado de mecanIsmos como Ia necrosIs y Ia apopfo-
sIs. Ia necrosIs es eI proceso de muerfe que se da
cuando una cIuIa presenfa un dano severo y pIerde,
enfre ofras cosas, Ia InfegrIdad de su membrana que
Ia IIeva a muerfe por IIsIs. n esfas cIrcunsfancIas se
IIbera eI confenIdo ceIuIar, Io que in cicc favorece Ia
aparIcIn de procesos InfIamaforIos. Ior ofra parfe, Ia
muerfe ceIuIar por apopfosIs es una muerfe fIsIoIgIca,
que se puede presenfar, ya sea porque eI organIsmo re-
AB8TEACT
8cnc cc//s bacc tc 6c c/ininatcJ in an crganisn tc kccp tbc bc-
nccstasis, tissuc rcncJc//ing cr cn6ricnary Jccc/cpncnt. Tbis
prcccss is kncan as prcgranncJ cc// Jcatb cr apcptcsis. Apcptc-
sis is a Jynanic prcccss in abicb a cascaJc cj cccnts appcar at
Jijjcrcnt tincs. Apcptcsis can 6c inJuccJ 6y caricus stinu/i,
sucb as DNA Janagc, cytckincs, /css cj cxtracc//u/ar natrix, ctc.
Apcptcsis Jctccticn bas 6cccnc ccry inpcrtant in canccr, sincc it
is bc/pju/ tc unJcrstanJ carcincgcncsis, nccbanisns cj cbcnc-
tbcrapy Jrugs, cca/uaticn cj trcatncnt rcspcnsc, ctc. |npcrtant-
/y, apcptcsis Jctccticn JcpcnJs cn tbc ncncnt tbc cc//s cr tissucs
arc stuJicJ. Tbc ncst ccnncn cccnts uscJ tc Jctcct apcptcsis in-
c/uJc tbc iJcntijicaticn cj DNA JcgraJaticn 6y gc/ c/cctrcpbcrc-
sis, cbangcs cn tbc cytcp/asnic ncn6ranc anJ acticaticn cj spc-
cijic prctcins.
Tbc ain cj tbis artic/c is tc Jcscri6c tbc nain tccbniqucs uscJ jcr
Jctccticn cj apcptcsis, anJ tbcir /initaticns. Tbc critcria Jcscri6cJ
in tbis papcr prctcnJ tc bc/p tc cbccsc tbc ncst ccnccnicnt nctbcJ
jcr apcptcsis Jctccticn.
Key norJs: Apcptcsis, tccbniqucs.
IS\MN
uranfe eI proceso deI desarroIIo embrIonarIo de un organIsmo
o duranfe Ios procesos encamInados a manfener Ia homeosfasIs
de sfe, es necesarIo eIImInar cIuIas no deseadas. sfe proceso
se denomIna muerfe ceIuIar programada o apopfosIs. Ia apopfo-
sIs es un proceso en eI que aparecen muIfIpIes evenfos en dIfe-
renfes momenfos. sfo puede ser acfIvado por dIferenfes esfmu-
Ios, faIes como eI dano aI NA, cIfocInas, prdIda de Ia mafrIz
exfraceIuIar, efc. Ia defeccIn de apopfosIs ha adquIrIdo gran
ImporfancIa en eI rea deI cncer, ya que puede ser ufII para co-
nocer eI mecanIsmo de accIn de frmacos, mecanIsmos asocIa-
dos a Ia nafuraIeza de Ia enfermedad, efecfIvIdad de frafamIen-
fos, efc. ebIdo a que Ia apopfosIs es un proceso dInmIco, Ia
aparIcIn de Ios evenfos reIacIonados y su defeccIn van a depen-
der de muIfIpIes facfores. enfro de Ios procesos comunmenfe
ufIIIzados para defecfar apopfosIs esf Ia defeccIn de degrada-
cIn de NA, cambIos en Ia sImefra de Ia membrana ceIuIar y
acfIvacIn de profenas especfIcas.
I propsIfo de esfe arfcuIo es descrIbIr Ias prIncIpaIes fcnIcas
ufIIIzadas para Ia defeccIn de apopfosIs, as como sus IImIfacIo-
nes. Ios crIferIos descrIfos en eI presenfe frabajo prefenden ayu-
dar a eIegIr eI mfodo ms convenIenfe para defermInar Ia apop-
fosIs.
Palabras clave: ApopfosIs, mfodos.
quIere para su desarroIIo de Ia muerfe en parfIcuIar de
esa cIuIa, o bIen porque Ia cIuIa sufrI un dano Irre-
parabIe y Ia cIuIa muere en benefIcIo deI organIsmo.
n esfe caso, Ia cIuIa muere por Ia acfIvacIn de una
serIe de mecanIsmos que provocan que Ia cIuIa no
pIerda Ia InfegrIdad de su membrana, y sIo va a pre-
senfar prdIda de dIcha InfegrIdad hacIa eI fInaI deI
proceso.
1
sfo no se observa in cicc ya que Ias cIuIas
apopffIcas son eIImInadas por fagocIfosIs anfes de per-
der Ia InfegrIdad de Ia membrana.
2
ebIdo a que Ia
apopfosIs requIere de Ia acfIvacIn de genes para que se
IIeve a cabo esfe fIpo de muerfe ceIuIar, fambIn ha re-
cIbIdo eI nombre de muerfe ceIuIar programada.
3
Ia apopfosIs fue descrIfa por prImera vez duranfe
Ios anos ?0 y se bas en Ias caracfersfIcas morfoIgI-
cas que presenfan Ias cIuIas faIes como Ia organIza-
cIn de Ia membrana cIfopIasmfIca y condensacIn
de Ia cromafIna, enfre ofras. s duranfe Ios anos 80
276
Alfaro ME y cols. Mtodos de deteccin de la apoptosis, aplicaciones y limitaciones
edigraphic.com
que se descrIbe Ia parfIcIpacIn de Ia apopfosIs en
procesos pafoIgIcos y fIsIoIgIcos. uranfe Ios anos
90 se vueIve uno de Ios prIncIpaIes fpIcos de esfudIo
denfro de Ia bIoIoga (CuaJrc |).
n Ia acfuaIIdad se ha demosfrado que Ias aIfera-
cIones en Ia apopfosIs son un mecanIsmo fundamen-
faI para eI desarroIIo deI cncer, parfIcIpando desde
Ias efapas InIcIaIes de Ia carcInognesIs fransIcIn
de IesIones preneopIsIcas a Invasoras, en eI fen-
meno mefasfsIco y por supuesfo, en Ia respuesfa a
Ios frafamIenfos anfIneopIsIcos, IImese radIofera-
pIa o quImIoferapIa.
I papeI de Ia apopfosIs en Ias efapas InIcIaIes de
Ia carcInognesIs no esf perfecfamenfe cIaro. n aI-
gunas IesIones preInvasoras como Ias hIperpIasIas
afpIcas y carcInoma in situ de Ia gInduIa mamarIa,
IesIones premaIIgnas de esfmago y cavIdad oraI
4-6
se
ha observado un Incremenfo de Ia apopfosIs Io cuaI
parece confradecIr eI pensamIenfo sImpIIsfa de que
Ia fransIcIn a una IesIn Invasora necesarIamenfe
debe acompanarse de menor apopfosIs. Se conoce
que eI fenmeno de fransformacIn o maIIgnIzacIn
es un proceso InefIcIenfe en eI senfIdo de que para
que ocurra se necesIfa aIferacIones en genes que aI
mIsmo fIempo que aumenfen Ia proIIferacIn InhI-
ban Ia apopfosIs, de ofra manera, como se ha obser-
vado experImenfaImenfe, eI soIo aumenfo de Ia proII-
feracIn puede acompanarse de mayor apopfosIs.
?
I
Incremenfo de apopfosIs en Ias IesIones preInvasoras
por Io fanfo, puede Inferprefarse como un mecanIs-
mo de defensa deI organIsmo para eIImInar Ias cIu-
Ias con dano genfIco de un grado menor aI requerI-
do para fornarse maIIgnas. Ofra expIIcacIn sera
que eI grado de apopfosIs de Ias IesIones preneopIsI-
cas fuera especfIca de fejIdo. Ior ejempIo, en IesIo-
nes premaIIgnas de coIon
8
se observa mayor expre-
sIn deI gen anfIapopffIco bcI-2 y menos apopfosIs.
sfa varIabIIIdad en Ia defeccIn de apopfosIs IndIca
que nuesfro conocImIenfo deI papeI de Ia apopfosIs
en Ia carcInognesIs es aun IncompIefo, y que en par-
fe, Ia varIabIIIdad puede ser debIda a Ias fcnIcas ufI-
IIzadas para su defeccIn en Ios dIferenfes esfudIos.
I papeI de Ia apopfosIs en eI fenmeno mefasfsI-
co parece ser un poco ms evIdenfe. Como se mencIo-
n prevIamenfe, Ia prdIda deI confacfo con Ia ma-
frIx exfraceIuIar y Ia deprIvacIn de facfores de crecI-
mIenfo son dos esfmuIos apopffIcos pofenfes. s-
fos esfmuIos profegen aI organIsmo deI crecImIenfo
ceIuIar ms aII de Ios ImIfes Impuesfos. AcfuaI-
menfe se conoce que sI bIen eI enconfrar cIuIas ma-
IIgnas cIrcuIanfes es un fenmeno muy comun, no
fodas esfas cIuIas fIenen Ia capacIdad de esfabIecer-
se y crecer en ofros rganos o fejIdos dIsfanfes.
9
Iara IograrIo necesIfan adquIrIr aIferacIones genfI-
cas adIcIonaIes que suprIman Ia apopfosIs. sfo esf
demosfrado en varIos sIsfemas en donde Ia fransfec-
cIn de genes anfIapopffIcos como bcI-2
10
o dIsmI-
nucIn de Ia expresIn de genes preapopffIcos como
bak,
11
permIfen a Ias cIuIas maIIgnas poder sobrevI-
vIr en suspensIn y adquIrIr Ia capacIdad de formar
mefsfasIs.
JradIcIonaImenfe se haba consIderado que Ia
quImIoferapIa cIfofxIca y Ia radIoferapIa acfuaban
por producIr dano aI NA con Ia subsecuenfe faIIa
mIffIca y muerfe ceIuIar. SIn embargo, ahora se
sabe que Ias drogas cIfofxIcas y Ia radIacIn ufIII-
zan Ios mecanIsmos endgenos de apopfosIs para
InducIr su efecfo anfIfumoraI.
12
e hecho, Ia mayo-
ra de Ios experImenfos reaIIzados para IdenfIfIcar
Ios evenfos bIoqumIcos ImpIIcados en Ia apopfosIs
se han hecho ufIIIzando drogas quImIoferpIcas.
Ias evIdencIas sugIeren que en Ias efapas ms fem-
pranas deI cncer, a pesar de que ya exIsfen aIfera-
cIones en Ia apopfosIs, Ias cIuIas son ms sensIbIes
a Ios esfmuIos apopffIcos que en Ias IesIones ms
avanzadas.
13
sfo correIacIona con Io observado en
Ia cInIca en cuanfo a que Ios pacIenfes con menor
carga fumoraI muesfran mejor respuesfa a Ia quI-
mIo o radIoferapIa.
ebIdo a que Ia apopfosIs es un proceso dInmIco,
se presenfarn dIferenfes caracfersfIcas dependIendo
deI momenfo en eI que se encuenfre Ia cIuIa. sfo
permIfe dIsponer de dIferenfes marcadores de Ia
apopfosIs. Cabe consIderar que no fodos Ios marcado-
res esfn presenfes en fodas Ias cIuIas, nI fodos Ios
marcadores de apopfosIs son excIusIvos de esfe proce-
so. Ior esfo es Imporfanfe consIderar aIgunos aspec-
fos de Ia apopfosIs que ocurren fanfo in cicc, como in
citrc, faIes como eI momenfo en eI que aparece un
evenfo defermInado, Ia duracIn de Ios procesos reIa-
cIonados, as como eI proceso de eIImInacIn de Ia c-
IuIa apopffIca por fagocIfosIs. Ofro facfor Imporfanfe
es que a pesar de que se Induzca apopfosIs en cIuIas
que se encuenfran en Ia mIsma fase deI cIcIo ceIuIar,
eI proceso de muerfe no es sIncrnIco, por Io que Ia
busqueda de un marcador fanfo in cicc como in citrc
es represenfafIvo de un momenfo especfIco.
0uedro 1. Nrero Je puo||cac|ores re|ac|oraJas cor |a apoplos|s, se-
gr e| HeJ||re rasla erero Je| 2000.
0caJa # puo||cac|ores
1970s 31
1980s 220
1990s 29,188
Rev Inst NaI CanceroI (Mex) 2000; 46 (4).
277
edigraphic.com
\na de Ias caracfersfIcas que fIene Ia muerfe por
apopfosIs en un organIsmo, es que Ias cIuIas son fa-
gocIfadas para evIfar Ia presencIa de necrosIs secun-
darIa,
2
por Io que muchas veces se vueIve dIfcII de-
fecfar su presencIa de apopfosIs in cicc, a menos que
se busquen evenfos que ocurren aI InIcIo deI proceso
de muerfe ceIuIar, Ios cuaIes podran ser consIdera-
dos como marcadores fempranos.
MJOOS \JIIIZAOS IAIA IA JCCION
AIOIJOSIS
ebIdo a que Ia defInIcIn de apopfosIs fue creada
con base en parmefros morfoIgIcos consIderamos
que es eI prImer parmefro a ser revIsado.
1) CambIos morfoIgIcos presenfes en Ia muer-
fe ceIuIar por apopfosIs.
\na de Ias prImeras manIfesfacIones morfoI-
gIcas de Ia presencIa de muerfe ceIuIar por
apopfosIs es Ia prdIda de Ia unIn ceIuIar, as
como cambIos en Ia presencIa de esfrucfuras
especIaIIzadas, como Io son Ias mIcroveIIosI-
dades. AI mIsmo fIempo se observan cambIos
en Ia organIzacIn de Ia membrana cIfopIas-
mfIca y Ia aparIcIn de condensacIn de Ia
cromafIna. Conforme eI proceso avanza se
puede observar Ia aparIcIn de fragmenfacIn
nucIear. JambIn se presenfan cambIos en eI
refcuIo endopIsmIco, en donde se observan
fusIones con Ia membrana cIfopIasmfIca.
3
Iara defermInar esfos cambIos en Ia cIuIa
apopffIca se pueden ufIIIzar fanfo Ia mIcros-
copIa de Iuz (campo cIaro, fIuorescencIa), como
Ia mIcroscopIa eIecfrnIca. Ior medIo de Ia mI-
croscopIa de Iuz se pueden aprecIar cambIos en
Ia organIzacIn ceIuIar, faIes como Ia conden-
sacIn de Ia cromafIna o Ia aparIcIn de cuer-
pos apopffIcos, que son fragmenfos ceIuIares
que se desprenden duranfe eI proceso de muer-
fe. Iara aprecIar aIferacIones ceIuIares como
cambIos en mIcroveIIosIdades, as como aIfera-
cIones mIfocondrIaIes o deI refcuIo endopIs-
mIco es necesarIo recurrIr a Ia mIcroscopIa
eIecfrnIca.
Se debe de fener cuIdado con Ia busqueda de
Ios cambIos morfoIgIcos, ya que in cicc mu-
chas veces no es posIbIe defecfar aIgunas de
esfas aIferacIones, ya que Ias cIuIas son eII-
mInadas por fagocIfosIs, por Io que no sIem-
pre va a ser posIbIe defecfarIas.
2) efeccIn de degradacIn deI NA.
\no de Ios procesos que se asocIan generaI-
menfe con Ia apopfosIs es Ia degradacIn de
NA de forma especfIca enfre nucIeosomas.
s sabIdo que duranfe eI proceso de muerfe
ceIuIar por apopfosIs se presenfa Ia snfesIs de
endonucIeasas que corfan eI NA a nIveI In-
fernucIeosomaI, IIberando nucIeosomas Ios
cuaIes se sabe que confIenen aIrededor de 200
pares de bases. AI reaIIzar un corrImIenfo
eIecfroforfIco de exfracfos de NA de cIuIas
apopffIcas es posIbIe observar Ia aparIcIn de
un pafrn caracfersfIco de NA en escaIera,
mejor conocIdo como Iadder de NA, eI cuaI
confIene fragmenfos dIscrefos, muIfIpIos deI
famano de un nucIeosoma que recuerdan Ia
Imagen de Ios peIdanos de una escaIera.
1
xIsfen dIversos mfodos para defecfar Ia degra-
dacIn deI NA asocIada a Ia apopfosIs. I mfodo
ms comunmenfe ufIIIzado es Ia exfraccIn de NA
con fenoI/cIoroformo y su precIpIfacIn con efanoI.
14
sfe mfodo presenfa eI InconvenIenfe de que Ios
fragmenfos pequenos pueden perderse duranfe Ias
exfraccIones, por esfo se han desarroIIado mfodos
en Ios que se eIImInan Ios pasos de exfraccIn y en
Ios que IIsados ceIuIares son dIgerIdos con INAsas y
profeInasa K para despus reaIIzar eI corrImIenfo
eIecfroforfIco.
15
sfe mfodo se reaIIza en mucho
menor fIempo, y eIImIna eI probIema de Ias exfrac-
cIones orgnIcas. Ofro mfodo propuesfo para no
perder Ios fragmenfos pequenos, e IncIuso enrIque-
cer su confenIdo es eI descrIfo por anIeI y coIabora-
dores,
16
en eI que ufIIIzan acarreadores mIneraIes a
Ios que se adsorben Ios fragmenfos de NA. sfos
acarreadores permIfen separar eI NA de Ia muesfra
y posferIormenfe se recupera aI NA deI acarreador
en voIumenes pequenos, por Io que Ias concenfracIo-
nes de NA obfenIdas son adecuadas para reaIIzar
anIIsIs eIecfroforfIcos.
uranfe aIgun fIempo se consIder Ia aparIcIn de
esfa degradacIn de NA como eI marcador prIncIpaI
de Ia apopfosIs, pero con eI fIempo se ha demosfrado
que no fodas Ias cIuIas que mueren por apopfosIs van
a presenfar esfe fIpo de degradacIn deI NA. Hoy en
da se sIgue ufIIIzando esfe fIpo de anIIsIs para defer-
mInar Ia apopfosIs, aunque aIgunas consIderacIones
deben ser fomadas en cuenfa para su anIIsIs:
a) Ia aparIcIn deI pafrn en escaIera de NA es
un proceso fardo por Io que no sIempre se pue-
de defecfar in cicc.
278
Alfaro ME y cols. Mtodos de deteccin de la apoptosis, aplicaciones y limitaciones
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b) AIgunas esfIrpes ceIuIares no presenfan esfe fIpo
de degradacIn de NA y en parfIcuIar es dIfcII
de enconfrar en cIuIas epIfeIIaIes y murInas.
c) ebIdo a que se frabaja con exfracfos de NA
es posIbIe perder Ios fragmenfos pequenos, por
Io que hay que exfremar precaucIones en eI ma-
nejo de Ias muesfras.
Ofro mfodo que se ha ufIIIzado para medIr Ia de-
gradacIn InfernucIeosomaI es Ia defeccIn de Ias
profenas presenfes en Ios nucIeosomas (hIsfonas),
en pIacas de 96 pozos medIanfe un anfIcuerpo aco-
pIado con un enzIma que genera una reaccIn coIorI-
da, conocIdo como ensayo de IISA.
1?
esaforfuna-
damenfe en esfe mfodo se cuanfIfIca Ia presencIa de
nucIeosomas en eI sobrenadanfe de cuIfIvos ceIuIa-
res, por Io que puede exIsfIr Ia IncerfIdumbre deI orI-
gen de dIchos nucIeosomas, ya que una cIuIa necr-
fIca fambIn puede IIberar NA y nucIeosomas aI
medIo aI presenfarse Ia IIsIs ceIuIar.
Ior ofra parfe, eI proceso de degradacIn de NA
no necesarIamenfe va a presenfar eI pafrn de degra-
dacIn a nIveI InfernucIeosomaI, pero es posIbIe defec-
far degradacIones ms fempranas por medIo deI mfo-
do de eIecfroforesIs de puIso-campo. Ior medIo de esfe
mfodo es posIbIe defecfar fragmenfos grandes de
NA que pueden IIegar hasfa 10 megapares de ba-
ses.
18
Se sabe que Ia fragmenfacIn de NA en Ia
apopfosIs a nIveI InfernucIeosomaI, va precedIda por
Ia aparIcIn de fragmenfos grandes de NA que pue-
den Ir de Ios 50 a Ios 300 kIIopares de bases, por Io que
eI mfodo de eIecfroforesIs de puIso-campo permIfe
defermInar Ia presencIa de esfa fragmenfacIn.
19
3) efeccIn de degradacIn de NA en cIuIas
IndIvIduaIes por medIo de marcaje deI NA.
ebIdo a que Ia degradacIn deI NA es una
de Ias caracfersfIcas ms Imporfanfes de Ia
apopfosIs, se han desarroIIado dIferenfes m-
fodos que permIfen anaIIzar IndIvIduaImenfe
cada cIuIa, en busca de esfa degradacIn.
\no de Ios mfodos ms ufIIIzados es eI de
marcaje de NA de hebra sencIIIa por medIo
de una fransferasa fermInaI
20
que adIcIona
nucIefIdos marcados aI NA en exfremos 3`
IIbres. Ichos nucIefIdos pueden esfar mar-
cados con fIuorescencIa, o bIen se pueden de-
fecfar por mfodos de InmunohIsfoqumIca.
sfe mfodo se conoce como mfodo de J\-
NI (transjcrasc-ncJiatcJ JUTF nick cnJ-
/a6c/ing) y se puede ufIIIzar fanfo para Ia de-
feccIn por medIo de cIfomefra de fIujo,
como por mIcroscopIa. sfa fcnIca permIfe
defermInar Ia presencIa de fragmenfacIn de
NA en cIuIas IndIvIduaIes, por Io que es
posIbIe conocer Ia proporcIn de cIuIas que
esfn murIendo por apopfosIs en un defermI-
nado momenfo. Ior ofra parfe, duranfe Ia ne-
crosIs fambIn se presenfa degradacIn de
NA aunque sfa no presenfa eI pafrn de de-
gradacIn InfernucIeosomaI presenfe en Ia
apopfosIs, pero esfo no es posIbIe de dIsfIn-
guIr por esfe mfodo,
21
por Io que se sugIere
que se compIemenfe con ofra fcnIca, como
puede ser Ia evaIuacIn morfoIgIca.
Ofra fcnIca ampIIamenfe ufIIIzada es Ia defer-
mInacIn deI cIcIo ceIuIar por cIfomefra de fIu-
jo. sfe ensayo se basa en Ia defeccIn deI confe-
nIdo de NA en Ia cIuIa. AI haber degradacIn
deI NA se van a enconfrar cIuIas que presen-
fan un menor confenIdo de NA, Io cuaI apare-
ce en eI hIsfograma de Ia cIfomefra por abajo de
Ia regIn en Ia que se encuenfran Ias cIuIas an-
fes de Ia repIIcacIn deI NA (O0-O1), por Io
que podran esfar en apopfosIs.
22
Ofro mfodo que ha sIdo desarroIIado para Ia
defeccIn IndIvIduaI de cIuIas apopffIcas es
eI de Ia defeccIn de cadenas sencIIIas de
NA por mfodos de InmunohIsfoqumIca, eI
cuaI parece fener una sensIbIIIdad sImIIar aI
ensayo de J\NI.
23
4) efeccIn de Ia acfIvacIn de caspasas.
Ia defermInacIn de Ia acfIvacIn de Ias mo-
IcuIas que dIsparan eI proceso de apopfosIs
ha adquIrIdo gran ImporfancIa en Ia defec-
cIn de apopfosIs. JaI es eI caso de Ias caspa-
sas, que son una serIe de cIsfeIn-profeasas que
se encuenfran en forma de zImgeno en fodas
Ias cIuIas.
24
Ia acfIvacIn de Ia caspasa 3 se
ufIIIza como marcador femprano de Ia apopfo-
sIs.
25
sfe fIpo de marcadores es de gran Im-
porfancIa, ya que Ia defeccIn de apopfosIs in
cicc por mfodos que defecfan Ia degrada-
cIn de NA, no sIempre es exIfosa, ya que
esfas cIuIas pueden ser removIdas anfes de
que dIcha degradacIn se presenfe. Ia defer-
mInacIn de Ia acfIvacIn de Ia caspasa-3
presenfa Ia gran venfaja de que es un evenfo
que fIene una aIfa correIacIn con Ia Induc-
cIn de apopfosIs, por Io que no exIsfe Ia In-
cerfIdumbre presenfe en ofros marcadores
en Ios que su presencIa o ausencIa no son de-
fermInanfes en eI proceso de muerfe ceIuIar
programada.
Rev Inst NaI CanceroI (Mex) 2000; 46 (4).
279
edigraphic.com
5) vaIuacIn de Ia sImefra de Ia membrana ce-
IuIar.
Ofro evenfo femprano presenfe en Ia apopfo-
sIs es Ia prdIda de Ia sImefra de Ia membra-
na cIfopIasmfIca. s bIen sabIdo que Ia apop-
fosIs es un proceso de muerfe en eI que Ia In-
fegrIdad de Ia membrana se manfIene, Io cuaI
sIgnIfIca que Ia caracfersfIca de ser semIper-
meabIe esf presenfe, sIn embargo se presen-
fan cambIos en su sImefra. JaI es eI caso de
Ia dIsfrIbucIn de Ia fosfafIdII serIna, Ia cuaI
es una moIcuIa que se encuenfra orIenfada
hacIa eI InferIor de Ia cIuIa,
26
y cuando una
cIuIa enfra en eI proceso de muerfe por apop-
fosIs, uno de Ios evenfos fempranos es Ia ex-
posIcIn de fosfafIdII serIna hacIa eI exferIor
de Ia membrana ceIuIar. ebIdo a esfe cambIo
en Ia sImefra se han desarroIIado mfodos
que permIfen defecfar Ia presencIa de fosfafI-
dII serIna en eI exferIor de Ia membrana ceIu-
Iar, aI agregar anexIna V Ia cuaI es una moI-
cuIa que no es capaz de dIfundIr a fravs de Ia
membrana, y que fIene una aIfa afInIdad por
Ia fosfafIdII serIna, por Io que aqueIIas cIuIas
que se encuenfran marcadas con anexIna V,
sern aqueIIas que se encuenfran en apopfo-
sIs. Ia defeccIn de anexIna V se puede acom-
panar de una fIncIn con yoduro de propIdIo,
Io cuaI nos permIfe saber sI Ia InfegrIdad de Ia
membrana se ha perdIdo. sfo permIfe cono-
cer sI Ia cIuIa se encuenfra en una efapa fem-
prana de Ia muerfe ceIuIar, o sI se encuenfra
en una efapa farda en Ia cuaI ya se encuenfra
presenfe Ia necrosIs secundarIa. sfa fcnIca
requIere de Ia ufIIIzacIn de cIuIas nfegras,
por Io que su uso se recomIenda para esfudIos
in citrc, aunque fambIn puede ser ufIIIzada
en anIIsIs de apopfosIs en muesfras obfenI-
das para anIIsIs cIfoIgIcos, o bIen para de-
fecfar apopfosIs en sangre.
2?
Como se puede ver, Ia defermInacIn de apop-
fosIs esf reIacIonada con dIversos parmefros,
y es necesarIo consIderar dIferenfes aspecfos
para eIegIr eI mfodo que se va a ufIIIzar (Cua-
Jrc ||). Ior esfo es recomendabIe que se anaII-
ce Ia bIbIIografa reIacIonada, ya que se corre eI
rIesgo de ufIIIzar un marcador Inadecuado
para Ia pobIacIn que se desea evaIuar. SIn em-
bargo, Ios mfodos que resuIfan ms confIabIes
para Ia defeccIn de apopfosIs son Ia defermI-
nacIn de aIferacIones morfoIgIcas, eI ensayo
de J\NI, as como Ia defeccIn de cambIos
en Ia sImefra de Ia membrana ceIuIar y Ia acfI-
vacIn de Ias caspasas.
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HloJo 0elecc|r N|ve| Horerlo
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E|eclrolores|s Je 0NA 2} 0egraJac|r |rlerruc|eosora| Poo|ac|r ce|u|ar TarJio
E|eclrolores|s Je 0NA Je Fragrerlos Je 50 ]/o 300 Kpo Poo|ac|r ce|u|ar Terpraro
pu|so-carpo 2}
E|l3A para ruc|eosoras 3} 0egraJac|r |rlerruc|eosoras Poo|ac|r ce|u|ar TarJio
TuNE| 1 ] 1} Harcaje lerr|ra| Je 0NA C|u|a |rJ|v|Jua| Terpraro ] larJio
0elecc|r Je p|o|Jia 1} Corler|Jo ce|u|ar Je 0NA C|u|a |rJ|v|Jua| TarJio
0elecc|r Je 0NA Je caJera 0elecc|r Je JegraJac|r Je 0NA C|u|a |rJ|v|Jua| Terpraro ] larJio
serc|||a 1}
0elecc|r Je |a expos|c|r Caro|os er |a s|relria Je |a rerorara C|u|a |rJ|v|Jua| Terpraro
Je loslal|J|| ser|ra 1 ] 1}
1} H|croscop|a pl|ca o e|eclrr|ca
2} E|eclrolores|s
3} Ersa]o |rruroerz|ral|co o E|l3A
1} C|lorelria Je l|ujo
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Dirccci6n para ccrrcspcnJcncia.
Krnesto AlIaro Moreno
SuddIreccIn de InvesfIgacIn sIca
InsfIfufo NacIonaI de CanceroIoga
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