.

ANALISIS ESPECIALES
Entre estas tcnicas se incluye algunos mtodos aplicables a la determinacin de la calidad
de los ingredientes y los productos terminados, con base en su contenido de
micronutrientes, tales como fibra digerible, minerales, vitaminas, actividad enzimtica, etc.;
as mismo, se presenta el mtodo ms ampliamente utilizado para la cuantificacin de xido
de cromo durante la evaluacin de la digestibilidad de las dietas.
4.1. Determinacin de Fibra por Detergente Acido.
Este mtodo permite tener una aproximacin del grado de digestibilidad de las fibras en el
alimento. La muestra es digerida por medio de cetil-trimetil-amonio en cido sulfrico y el
residuo es considerado como la fibra no digerible.
Reactivos
Solucin de detergente cido al 1 % p/v. A un litro de agua agregar poco a poco 56
ml de cido sulfrico concentrado, lleve la solucin a un volumen final de 2 1 con
agua y agregue 20g de Cetil-trimetil-amonio.
Antiespumante Dekalin (decahidronaftaleno).
Acetona.
Materiales y Equipo
Horno
Matraces erlenmayer de 500 ml.

Mantilla de calentamiento.
Condensador de dedo fro.
Crisoles de filtracin, porosidad 1.
Procedimiento
1. Muela la muestra en un molino de martillos para que pase la malla de 1 mm.
2. Tome una submuestra y squela durante la noche en un horno a 105C.
3. Enfre la muestra en un desecador.
4. Pese con aproximacin de miligramos un gramo de la muestra seca y colquela en
un matraz erlenmayer de 500 ml.
5. Adicione 100 ml de la solucin de detergente cido y 2 ml del antiespumante.
6. Coloque el matraz en la mantilla con el condensador instalado.
7. Lleve rpidamente a ebullicin (3 a 5 minutos) y contine el calentamiento por 2
horas.
8. Filtre el contenido del matraz por gravedad en un crisol previamente pesado.
9. Enjuague el matraz con agua destilada caliente y filtre.
10. Enjuague el contenido del crisol con 300 ml de agua destilada caliente. Use succin
dbil (por vaco).
11. Enjuague el residuo con acetona y seque.
12. Coloque el crisol en el horno a 105C durante 12 horas.
13. Enfre dentro de un desecador la muestra e inmediatamente despus determine el
peso.
Clculos
Contenido de Fibra (%) = 100 (W
2
/W
1
)
Donde
W
1
= Peso de muestra (g).
W
2
= Peso del residuo (g).

FIGURA 7
Determinacin del contenido de fibra por el mtodo de detergente cido.
4.2. Determinacin de Fibra por Detergente Neutro.
Este mtodo es til para la determinacin de fibras vegetales en alimentos. Aparentemente
tiene la capacidad de separar los componentes nutricionales solubles de aquellos que no son
totalmente aprovechables o que dependen de la fermentacin biolgica para su
aprovechamiento. El mtodo tiene limitaciones en su precisin cuando los valores de
protena son muy altos y los valores de fibra son bajos.
Reactivos
Solucin detergente neutra. Agregue a un litro de agua destilada 30 mg de sulfato
lauril sdico USP, 18.61 g de etilendiamino tetra acetato disdico dihidrogenado
dehidratado, 6.81 g de borato de sodio decahidrato y 4.56 g del reactivo fosfato
cido disdico anhidro. Agtese hasta disolver y mantenga el pH entre 6.9 y 7.1.
Amilasa (Sigma A 1278) 2g en 90ml H
2
O mas 10 ml de etilenglicol.
Acetona grado reactivo.
Sulfito de sodio anhdro. Se usa nicamente en anlisis de subproductos animales.
Materiales y Equipo
Equipo de reflujo. Cualquier equipo estndar adecuado para el anlisis de fibra.
Crisoles de filtracin en vidrio. Use crisoles de tipo alto, con porosidad gruesa y
placa de filtracin de 40mm de dimetro con capacidad para 40 50 ml de lquido.
Cuando los crisoles se obstruyen despus de un uso continuo se prepara una
solucin limpiadora de 20% KOH, 5% de Na
3
PO
4
y 0.5% de EDTA de sodio que se
hace pasar caliente en en sentidi opuesto a travs del crisol. Se debe de evitar el uso
continuo de la solucin pues tiende a erosionar el vidrio.
Procedimiento
1. Pese aproximadamente 1 g de muestra molida para pasar el tamiz de 1 mm y
depostela en un matraz de fondo redondo para iniciar el reflujo.
2. Agregue en orden 100 ml de detergente neutro a temperatura ambiente y 2 ml de
amilasa por muestra.
3. Caliente para que la solucin hierva en 5 a 10 minutos; en el momento de iniciar la
ebullicin reduzca la temperatura para evitar la formacin de espuma. Ajuste la
temperatura para que la solucin hierva suavemente y mantenga en reflujo por 60
minutos a partir del instante en que empieza a hervir.
4. Agite el matraz para suspender y decante la muestra en un crisol previamente
pesado y preparado para succin al vaco. Use poco vaco al principio
incrementndolo a medida que lo vaya requiriendo. Pase toda la muestra al crisol
utilizando un mnimo de agua caliente (80C) para el lavado del matraz. Elimine el
vaco, afloje con cuidado la capa de muestra en el fondo del crisol sin removerla y
agregue agua caliente, repitiendo el lavado varias veces. Finalmente lave dos veces
con acetona sin remover la muestra del filtro y seque con vaco.
5. Seque los crisoles a 105C durante 12 h y pselos en caliente (esta operacin no
debe durar ms de 30 seg). Si no se puede pesar de inmediato, enfre los crisoles en
un desecador que contenga como desecante pentxido de fsforo (P
2
O
5
).
6. El residuo de fibra recuperado se registra en trminos de paredes celulares.
7. Calcule el contenido celular (material soluble) substrayendo este valor de 100.
NOTA:
En el caso de granos y subproductos de molinos es posible que se forme un material
gelatinoso derivado de los almidones y la protena, el cual obstruye el filtro e impide el
lavado. Para mejorar la filtracin haga pasar aire en sentido inverso en el crisol. As mismo
al evite que la muestra se adhiera al fondo del matraz durante el inicio del calentamiento
hasta la ebullicin, calentando rpidamente con agitacin constante.
Clculos
a. Paredes celulares (%) en base seca o como se ofrece. 100(((peso del crisol +
paredes celulares) - (peso del crisol))/peso de la muestra.
b. El porciento del contenido celular se calcula substrayendo de 100 el % de paredes
celulares.
% contenido celular = 100 - % paredes celulares.
Van Soest, P.J. and R.H. Wine, 1967, J. Assoc. Official Anal. Chem., 50:50.

FIGURA 8
Determinacin del contendido de fibra por el mtodo de detergente neutro
4.3. Ceniza insoluble en Acido Clorhdrico
Este mtodo determina el contenido de substancias minerales insolubles en cido
clorhdrico contenidos en los alimentos; de acuerdo con el contenido mineral de la muestra
se aplica ya sea el mtodo A, para alimentos con alto contenido de materia orgnica, o el
mtodo B, recomendable para alimentos con un alto contenido de minerales, incluyndose
aquellos cuyo contenido de ceniza insoluble es mayor a 1 % al evaluarse previamente con
el mtodo A.
Reactivos
Solucin HCI 3N.
Solucin A de cido tricloroactico al 20%, 20 g en 100 ml.
Solucin B de cido tricloroactico al 1 %, 1 g en 100 ml.
Materiales y Equipo
Placa de calentamiento.
Mufla elctrica con termostato.
Crisoles de calcinacin: Platino o aleacin de platino y oro (10% Pt, 90% Au);
Rectangulares (60 40 25 mm) o circulares (6075 mm de dimetro con 20 25
mm de alto).
Mtodo A
Calcine la muestra siguiendo el mtodo de determinacin de ceniza. Transfiera el residuo a
un vaso de precipitado de 250 400 ml usando 75 ml de cido clorhdrico 3N y evapore a
sequedad, contine calentando durante una hora ms para deshidratar cualquier slice
presente. Enfre y agregue 75 ml de solucin de HCI 3N y caliente a ebullicin suavemente
por 15 minutos. Filtre la solucin en caliente a travs de un papel filtro libre de ceniza y
lave el residuo con agua caliente hasta que el filtrado deje de ser cido.
Seque el papel filtro conteniendo el residuo y calcine a 550700C en un crisol de platino
prepesado, enfre en un desecador y posteriormente pese.

FIGURA 9
Determinacin de ceniza insoluble en cido clorhdrico. Mtodo A.
Mtodo B
Pese alrededor de 5 g de muestra con una aproximacin de 0.001 g y transfirala a un vaso
de precipitado de 250 400 ml. Adicione 25 ml de agua destilada y 25 ml de solucin de
cido clorhdrico 3N. Mezcle con cuidado y espere hasta que ya no se liberen gases.
Agregue otros 50 ml de cido clorhdrico y espere hasta que cese la liberacin de gases y
coloque el vaso en un bao mara a ebullicin durante 30 minutos, con el fin de hidrolizar
los almidones presentes. Filtre la solucin cuando todava este caliente con papel filtro libre
de cenizas, posteriormente lave el filtro con 50 ml de agua tibia hasta que el filtrado deje de
ser cido (ver nota). Coloque el papel filtro conteniendo el residuo en un crisol de platino
previamente pesado, seque y calcine la muestra a 550 700C. Transfiera las cenizas a un
vaso de precipitado usando 75 ml de cido clorhdrico 3N y contine el anlisis como en el
mtodo anterior a partir de la etapa en la que se calienta la muestra suavemente por 15
minutos.
NOTA:
Si se hace difcil filtrar, repita el anlisis reemplazando los 50 ml de cido clorhdrico 3N
con 50 ml de la solucin A de cido tricloroactico y enjuague el filtro con una solucin
tibia de la solucin B de cido tricloroactico.
Clculos
Calcule el peso de residuo y exprese el resultado como porciento (%) de la muestra.

FIGURA 10
Determinacin de ceniza insoluble en cido clorhdrico. Mtodo B.
4.4. Carbohidratos Totales Disponibles (Clegg-
Anthrone).
Este mtodo determina la cantidad de carbohidratos totales, basndose en su contenido de
almidones hidrolizables y azcares solubles.
Reactivos
Solucin de cido perclrico al 52 %. 279ml de cido perclorico (grado especfico
1.70) en 100 ml de agua destilada; deje enfriar antes de usar.
Solucin de cido sulfrico. 760ml de H
2
SO
4
(grado especfico 1.84) en 330ml de
agua destilada; deje enfriar antes de usar.
Reactivo Anthrone. Prepare suficiente reactivo Anthrone preparando una solucin
de cido sulfrico al 0.1 % con el fin de usarla el mismo da.
Solucin estndar de glucosa. Disuelva 100mg de glucosa en 100ml de agua.
Solucin estndar de glucosa diluida. Diluya 10ml del estndar de glucosa a 100 ml
de agua destilada (1ml = 0.1mg de glucosa).
Materiales y Equipo
Espectrofotmetro.
Papel filtro Wathman no. 542 o Schleicher y Schill no. 150.
Procedimiento
Extraccin:
1. Pese con aproximacin de 0.001g 1.0g de muestra seca 2.5g de muestra hmeda
conteniendo aproximadamente de 60 a 300 mg de carbohidratos totales disponibles.
2. Transfiera cuantitativamente a una probeta graduada de 100 ml con tapn.
3. Adicione 10 ml de agua y agite con una varilla de vidrio para dispersar la muestra.
4. Adicione 13 ml de la solucin de cido perclrico. Agite constantemente con la
varilla de vidrio durante 20 minutos.
5. Enjuague la varilla con agua destilada y lleve el volumen a 100 ml. Mezcle y filtre a
un matraz volumtrico de 250 ml.
6. Enjuague la probeta graduada con agua destilada y adicione al matraz volumtrico.
Afore el matraz con agua destilada y agite.
Determinacin:
1. Diluya 10 ml del extracto a 100 ml con agua destilada. Con una pipeta pase a un
tubo de ensaye 1 ml del filtrado diluido.
2. Tome con la pipeta dos muestras de 1 ml de agua destilada que servirn como
blancos por duplicado y coloque cada uno de ellos en un tubo de ensaye.
3. Tome dos blancos duplicados de 1 ml usando la solucin de glucosa diluida.
4. Agregue rpidamente a todos los tubos 5ml de reactivo de anthrone recin
preparado. Tape los tubos y mezcle vigorosamente. Colquelos en un bao mara y
caliente durante 12 minutos.
5. Enfre rpidamente a temperatura ambiente. Transfiera la solucin a celdas para
espectrofotmetro de 1 cm. El color verde es estable slo por 2 horas.
8. Lea la absorvancia a 630 nm contra el blanco.
Clculos
Carbohidratos totales disponibles (% de glucosa) = (25 b)/(a W)
Donde
W = Peso en g de la muestra.
a = Absorvancia del estndar diluido
1
.
b = Absorvancia de la muestra diluida.
1
El grfico es una lnea recta n el rango de 0 0.15 mg de glucosa (manual) 0.0 1.5 mg
de glucosa (automtico).
Clegg, K.M. (1956). J.Sci. Food Agric. 7, 40.

FIGURA 11
Determinacin de carbohidratos totales disponibles en alimentos.
4.5. Nitrgeno Proteico y No Proteico
Esta tcnica permite reconocer la porcin de nitrgeno de origen proteico y no proteico de
los materiales analizados. Puede aplicarse a todo tipo de materiales.
Reactivos
Acetato de cobre monohidratado en solucin al 3 % p/v.
Sulfato de aluminio y potasio (2 H
2
O) en solucin al 10% p/v.
Antiespumante de silicona.
Materiales y Equipo
Matraces kjeldhal de 800 ml.
Embudos buchner de 12 cm de dimetro.
Matraces kitazato.
Papel filtro Whatman no. 541 Schleicher y Schill no. 1505, de 18 cm.
Procedimiento
Pese 2 g de muestra con ms de 25% de protena cruda, lg para rangos de 25 50% de
protena y 0.5g para materiales con ms de 50% de protena cruda. Transfierala a un matraz
kjeldahl y agregue aproximadamente 50 ml de agua destilada, unos pocos grnulos de
antiebullente y una o dos gotas del antiespumante.
Caliente a ebullicin durante 30 minutos (teniendo cuidado de que no se seque). Cuando la
muestra est todava caliente agregue 2 ml de la solucin de sulfato de aluminio y potasio,
mezcle perfectamente y caliente a ebullicin, adicione 50 ml de la solucin de acetato de
cobre mezclando perfectamente bien y deje enfriar. Filtre usando vaco. Lave el matraz y el
precipitado con 50 ml de agua destilada fra.
Para evaluar el nitrgeno proteico analice el residuo por medio de la marcha de nitrgeno
total de kjeldahl. El nitrgeno no proteico se analiza por medio de la misma tcnica a partir
del lquido filtrado. Los resultados respectivos de los slidos y lquidos por medio de
kjeldahl ofrecern directamente los datos de nitrgeno proteico (NP) y no proteico (NNP)
respectivamente.

FIGURA 12
Determinacin del contenido de nitrgeno proteico y no proteico en alimentos.
4.6. Determinacin de Protenas por el Mtodo de Lowry.
El mtodo ms preciso para la determinacin de concentraciones proteicas es
probablemente el mtodo de hidrlisis cida. La mayor parte de los otros mtodos son
sensibles a la composicin de aminocidos de las protenas y no pueden ser obtenidas
concentraciones absolutas. El procedimiento de Lowry no es la excepcin, pero es
sensiblemente constante de protena a protena, lo cual ha hecho que sea ampliamente
usado y que las determinaciones sean una alternativa completamente aceptable con un rigor
absoluto en todas las determinaciones en casi todas las circunstancias en donde se
involucren mezclas de protenas o extractos crudos.
Reactivos
Reactivo de formacin compleja. Preprese inmediatamente antes de usarse,
mezclando las soluciones A, B y C en proporcin 100:1:1 respectivamente.
Solucin A: 2% (P/V) Na
2
CO
3
en agua destilada.
Solucin B: 1% (P/V) CuSO
4
.5H
2
O en agua destilada.
Solucin C: 2% (P/V) Tartrato de Sodio y Potasio en agua destilada.
Solucin de Hidrxido de sodio 2N.
Reactivo de Foln (disponible comercialmente): sese en concentracin 21N.
Estndares: Use una solucin madre de protena estndar (por ejem. fraccin V de
albmina de suero bovino) conteniendo 4 mg/ml de protena en agua destilada,
almacenada a -20C. Prepare los estndares diluyendo la solucin madre con agua
destilada tal como se indica en la siguiente tabla:
PREPARACION DE ESTANDARES DE PROTEINA
Solucin madre (l) 0 1.25 2.50 6.25 12.50 25.00 62.50 125.0 250.0
Agua (l) 500 499 498 494 488 475 438 475 250
Concentracin de protena (g/ml) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000
Procedimiento
1. A 0.1 ml de muestra o sol. estndar, adicinele 0.1 ml de sol. NaOH 2N. Caliente a
100C durante 10 min a bao mara hirviendo para hidrolizar la muestra.
2. Deje enfriar a temperatura ambiente y agrguele 1 ml del reactivo de formacin de
complejo recin preparado y deje reposar a temperatura ambiente por 10 min.
3. Adicione 0.1 ml de reactivo de Foln, agite con un mezclador de vrtice y deje
reposar a temperatura ambiente durante 3060 min (no exceda este tiempo).
4. Lea la absorvancia a 750 nm si la concentracin de la protena fuera menor a 500
g/ml, 550 nm si fuese entre 100 y 2000 g/ml.
5. Trace una curva estndar de absorvancia como funcin de concentracin inicial de
protena y sela para determinar el contenido de protena en la muestra.
NOTA
a. Si la muestra se encuentra como precipitado, disulvalo en NaOH 2N e hidrolice
como en el paso 1. Use alcuotas de 0.2 ml del hidrolizado para el paso 2.
b. Todas las clulas u otras muestras complejas pueden requerir un pretratamiento
como el descrito por Burton (1984) para DNA.
c. Mezcle rpidamente en cuanto el reactivo de Foln sea adicionado; esto es
importante para obtener una adecuada reproductibilidad.
d. Se requiere un grupo de estndares para cada ensayo, preferentemente por triplicado
o duplicado.

FIGURA 13
Determinacin de protena en alimentos por el mtodo de Lowry
4.7. Determinacin de Urea
Este mtodo permite cuantificar el contenido de urea en ingredientes alimenticios.
Reactivos
Carbn activado
Solucin Carrez I: disuelva 21.9 g de acetato de zinc dehidratado en agua, agregue 3
ml de cido actico glacial y diluya a 100 ml con agua destilada.
Solucin Carrez II: disuelva 10.6 g de ferrocanuro de potasio en 100 ml de agua
destilada.
Acido clorhdrico 0.02N.
Solucin de acetato de sodio: disuelva 136 g de acetato de sodio trihidratado en
1000 ml de agua.
Solucin de 4-dimetilaminobenzaldehdo: disuelva 1.6 g de 4-
dimetilaminozenzaldehdo (4-DMAB) en 100 ml de etanol al 96% y adicione 10 ml
de cido clorhdrico (d=1.18 g/ml).
Solucin estndar de urea: disuelva 0.1 g de urea en 100 ml de agua.
Materiales y Equipo
Agitador rotatorio
Espectrofotmetro con celdas de 10 mm.
Procedimiento
Pese aproximadamente 2 g de muestra con una precisin de 0.001 g, o una cantidad que se
espera contenga de 50 a 200 mg de urea y colquela en un matraz volumtrico de 500 ml.
Agregue 150 ml de cido clorhdrico 0.02N, agite por 30 min y adicione 10 ml de la
solucin de acetato de sodio y mezcle. Agregue 1 g de carbn activado, agite perfectamente
bien y deje reposar la mezcla por 15 min. Adicione 5 ml de la solucin Carrez I, seguido
por 5 ml de la solucin Carrez II, mezclando perfectamente bien entre las adiciones. Afore
con agua destilada y mezcle bien. Filtre una parte con un papel filtro seco en un vaso de
precipitado de 250 ml limpio y seco.
Determinacin
Transfiera 10 ml del filtrado a un tubo de ensaye con tapn esmerilado, adicione 10 ml de
la solucin 4-DMAB, mezcle y deje reposar por 15 min. Mida la absorvancia de la solucin
a 435 nm en una celda de 10 mm, contra una solucin de referencia preparada con los
reactivos.
Curva de Calibracin
Diluya 5, 10, 20, 30 y 40 ml de solucin de urea a 100 ml de agua. Transfiera 10 ml de cada
solucin a tubos de ensaye con tapn esmerilado y adicione 10 ml de la solucin 4-DMAB
a cada uno. Mezcle y deje reposar por 15 minutos, mida la absorvancia como se seal
anteriormente contra una solucin de referencia preparada con 10 ml de solucin 4-DMAB
y 10 ml de agua, haga una grfica relacionando las absorvancias con la cantidad de urea
presente.
Expresin de Resultados
Determine la cantidad de urea en la muestra por referencia con la curva de calibracin
elaborada. Exprese los resultados como por ciento de la muestra.
% Urea 0.4665 = % N urea.
NOTA:
Si la muestra est muy coloreada, la cantidad de carbn activado deber ser incrementada
arriba de 5 g. La solucin final despus del filtrado deber ser incolora.

FIGURA 14
Determinacin del contenido de urea en ingredientes alimenticios.
4.8. Acido Urico.
A travs de este mtodo es posible determinar el contenido de cido rico y sus sales tanto
en gallinaza como en alimentos e ingredientes que los constituyen.
Reactivos
Solucin de hidrxido de sodio. Disuelva 50 g de NaOH en 50 ml de agua, mezcle
bien y almacene la solucin en un envase de plstico.
Solucin neutra de formaldehido.
a. Verifique la concentracin de la solucin disponible, para lo cual mezcle 30 ml de
sta con 50ml de solucin de NaOH IN y 25ml de solucin de Perxido de
hidrgeno (20 volmenes). Caliente en bao de vapor hasta que no haya ms
efervescencia. Enfre y titule con NaCl IN usando indicador de fenoftalena. Realice
una titulacin de blanco usando 3 ml de agua en lugar del formaldehdo y calcule la
concentracin como sigue:
1ml de la solucin de NaOH IN = 0.0300 g de formaldehdo.
Conc. de formaldehdo (g/100 ml) = ((B-T) ((0.0300 100)/3)
Donde
B = Titulacin del blanco.
T = Titulacin de la muestra.
b. Prepare una solucin neutra que contenga 17.5g de formaldehdo con 250ml de
agua y 500ml de etanol. Ajuste el pH a 7.0 con una solucin de NaOH 0.1N. Diluya
a 1000ml con agua, mezcle y ajuste nuevamente el pH de ser necesario.
Solucin buffer de succinato. Disuelva con calentamiento 29.5g de cido succnico
en 750ml de agua y 20ml de la solucin de NaOH. Deje enfriar y adicione una
cantidad adecuada de solucin de formol que contenga 17.5g de formaldehdo,
mezcle bien y ajuste el pH a 6.0 con la solucin de NaOH. Diluya a 1000ml con
agua destilada, mezcle y ajuste el pH si es necesario.
Solucin de tiosulfato de sodio. Disuelva 25g de Na
2
S
2
O3.5H
2
O en 1000ml de agua
destilada.
Solucin de lactato de plata. Disuelva con calentamiento 3g de lactato de plata en
50ml de agua destilada y 1ml de cido lctico. Diluya a 100ml con agua, filtre y
almacene en un frasco obscuro. No lo exponga a la luz directa.
Solucin de magnesio amoniacal. Disuelva 8.75g de MgSO
4
.7H
2
O y 17.5g de
NH
4
CL en 50ml de agua. Agregue 30ml de NH
4
OH (d = 0.88g/ml), mezcle bien y
diluya a 100ml con agua.
Reactivo de Benedict y Hitchcock. Mezcle 35ml de solucin de lactato de plata con
15ml de solucin de magnesio amoniacal. Adicione 50ml de hidrxido de amonio
(d = 0.88 g/ml) mzclese bien. Preprese inmediatamente antes de usarse.
Solucin estndar de cido rico. Pese 250mg de cido rico con una precisin de
0.1mg y transfiralo a un matraz de fondo redondo acoplado a un condensador de
reflujo. Adicione 100ml de la solucin de formaldehdo etlico y caliente a reflujo
en un bao de vapor por 30min agitando frecuentemente. Enfre y transfiera a un
matraz volumtrico de 250ml, lavando el matraz redondo con sol. de formaldehdo
etlico, afore con esta solucin y mezcle. 1 ml contiene 1 mg de cido rico.
Eter de petrleo, punto de ebullicin 40 60C.
Materiales y Equipo
Epectrofotmetro con celdas de cuarzo de 10 mm.
Tubos de cristal para percolacin, con aproximadamente 240 mm de longitud, 18
mm de dimetro interno, y en la parte inferior aproximadamente 120mm de longitud
y 8 mm de dimetro interno.
Extraccin del cido rico:
1. De la gallinaza: Pese con una aproximacin de 0.001 g cerca de 0.4g de gallinaza
seca y colquela en un matraz de fondo redondo de 150ml. Adicione 60ml de
solucin neutra de formaldehdo, conecte a un condensador de reflujo y caliente en
bao de vapor por una hora. Enfre y filtre a travs de un crisol (Porosidad 4) a un
matraz volumtrico de 100ml. Enjuague el matraz 3 veces consecutivas con
porciones de 10ml de solucin de formaldehdo etlico, pasando cada porcin por el
crisol de filtracin al matraz volumtrico. Afore con la misma solucin y agite.
2. De los alimentos: Pese 4 a 5g de muestra con una aproximacin de 0.001 g y
desengrasela por extraccin con ter de petrleo. Transfiera cuantitativamente la
muestra desengrasada a un matraz de fondo redondo y remueva el solvente residual
con una corriente suave de aire. Contine el anlisis como previamente se seal,
iniciando con la adicin de 60 ml de solucin de formaldehdo etlico.
Determinacin
Transfiera con una pipeta de 20 ml de extracto de la muestra prepesado, segn los mtodos
descritos, a un tubo de centrfuga de 50 ml. Adicione 10 ml del reactivo de Benedict y
Hitchcock, mezcle bien y djelos reposar en la oscuridad por una hora. Centrifuge a 2000
rpm por 15 min. Retire el sobrenadante y deje escurrir por 10 min. Cuidadosamente limpie
cualquier lquido remanente sin perturbar el precipitado y adicione 20 ml de solucin de
tiosulfato de sodio. Disuelva el precipitado, agitando con una varilla de vidrio delgada. Con
una pipeta transfiera 5 ml de esta solucin a un matraz volumtrico de 200 ml conteniendo
40 ml de solucin buffer de succinato, afore con agua destilada y mezcle bien. Mida la
absorvancia de la solucin a 294 nm en celdas de slice de 10 mm comparada contra una
solucin preparada mezclando 5 ml de solucin de tiosulfato de sodio con 40 ml de
solucin buffer de succinato aforada a 200 ml con agua destilada. Determine la cantidad de
cido rico mediante una curva de calibracin.
Curva de Calibracin:
En una serie de tubos de centrfuga de 50 ml de capacidad transfiera con una pipeta 2, 4, 6,
8, 10 y 12 ml de solucin estndar de cido rico (equivalentes a una cantidad similar de
cido rico en mg) y llvelos a 20 ml con la solucin de formaldehdo etlico. Adicione a
cada tubo 10 ml de reactivo de Benedict y Hitchcock, mezcle bien y djelo reposar en la
oscuridad por una hora. Contine el mtodo como en la determinacin a partir del
centrifugado. Mida la absorvancia de la solucin y trace la curva de calibracin graficando
absorvancia (y) contra la cantidad correspondiente de cido rico en mg (x).
Expresin de Resultados
El contenido de N del cido rico como % de la muestra est dado por la frmula:
% N = A/(6 W)
Donde
A = mg de cido rico (en la alicuota del extracto de la muestra) determinado por la
medicin fotomtrica.
W = peso de la muestra en g.

FIGURA 15
Determinacin de cido rico en gallinaza e ingredientes alimenticios
4.9. Ceniza Soluble e Insoluble en Acido.
Este mtodo proporciona una estimacin de la disponibilidad de minerales en base a su
digestibilidad en cido.
Reactivos, Materiales y Equipo
Acido clorhdrico (12.5 % v/v)
Papel filtro libre de ceniza
Crisoles de porcelana
Procedimiento
Use el residuo obtenido de la determinacin de ceniza. Caliente 25 ml de cido clorhdrico
con cuidado para evitar salpicar y filtre en el papel y enjuague con agua caliente hasta que
quede libre del cido. Coloque el papel filtro y el residuo en un crisol de porcelana
prepesado seco y colquelo en la mufla a 600 C durante 2 horas o hasta que quede libre de
carbn.
Clculos
Ceniza insoluble (%) = 100(Peso de la ceniza tratada con cido/Peso de la muestra)

FIGURA 16
Determinacin de ceniza soluble e insoluble en cido clorhdrico
4.10. Determinacin de Calcio en el Alimento.
La evaluacin de calcio en la dieta reviste una gran importancia ya que un desbalance con
el fsforo u otros minerales generar un bajo crecimiento.
Reactivos
Acido clorhdrico (1 3 %)
Acido ntrico 70%
Hidrxido de amonio (1:1 v/v)
Indicador de rojo de metilo (1 g en 200 ml de etanol)
Solucin de oxalato de amonio 4.2 %

Acido sulfrico 98 %
Solucin estndar de permanganato de potasio 0.05N
Materiales y Equipo
crisoles de porcelana
matraces volumtricos de 250 ml
vasos de precipitado de 250 ml
Papel filtro para anlisis cuantitativos libre de cenizas
Procedimiento
Calcine en crisol de porcelana 2.5g de muestra finamente molida. Adicione 40ml de HCI y
unas gotas de HNO
3
al residuo, caliente el crisol hasta ebullicin, enfre y transfiera a un
matraz volumtrico de 250ml, afore y mezcle. Pase a un vaso de precipitado 100ml de sol.
para cereales o alimentos con cereales 25ml para alimentos con minerales. Diluya a
100ml y adicione 2 gotas de rojo de metilo. Adicione NH
4
OH gota a gota hasta que vire a
pardo anaranjado, luego adicione 2 gotas de HCl para dar un color rosa. Diluya con 50ml
de agua, hierva y adicione con agitacin 10ml de sol 4.2% de oxalato de amonio. Ajuste el
pH con cido para regresar al color rosa si es necesario.
Dje reposar, filtre y lave el precipitado con la solucin de NH
4
OH (1.5%). Coloque el
papel filtro con el precipitado en un vaso, adicione una mezcla de 125ml de agua y 5ml de
H
2
SO
4
, caliente a 70C y titule con la solucin de permanganato y calcule:
Ca (%)= 0.1((ml Sol. Permanganato/Peso de la Muestra) (Alicuota usada en ml/250)

FIGURA 17
Determinacin de calcio en alimento e ingredientes alimenticios.
4.11. Determinacin de Fsforo
Al igual que el calcio, este mineral es indispensable para el buen desarrollo de los
organismos cultivados, debiendo estar presente en las dietas en cantidades suficientes para
satisfacer las necesidades metablicas de los organismos. Este elemento en protenas de
origen vegetal puede estar formando parte de fitatos, por lo cual su disponibilidad puede
estar limitada, por lo que se recomienda una determinacin de cido ftico previa al uso de
tales materiales.
Reactivos
Reactivo de Molibdato. Disuelva 40 g de molibdato de amonio 4.H
2
O en 400 ml de
agua caliente y enfre. Disuelva 2 g de metavanadato de amonio en 250 ml de agua
caliente, enfre y adicione 450 ml de cido perclrico al 70%. Gradualmente
adicione la sol. de molibdato a la sol. de vanadato con agitacin y diluya a 2 1.
Estndar de Fsforo. Prepare una solucin stock disolviendo 8.788 g de Ortofosfato
dihidrgeno potasio en agua y llvelo a 1 1. Prepare la solucin de trabajo
diluyendo la sol. stock 1 en 20 (Conc. de trabajo 0.1 mg P//ml).
Materiales y Equipo
Espectrofotmetro para leer a 400 nm
Matraces graduados de 100 ml
Procedimiento
1. Pase una alicuota como en la determinacin de Ca a un matraz de 100 ml y adicione
20 ml del reactivo de molibdovanato. Aforelo, mezcle y deje reposar por 10 min.
2. Transfiera alicuotas del estndar de trabajo conteniendo 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5 mg de P
en matraces de 100 ml y trtelos como al anterior.
3. Lea la muestra a 400 nm ajustando el estndar de 0.5 mg a 100% de transmisin.
4. Determine mg de fsforo en la muestra usando una curva estndar.

FIGURA 18
Determinacin de fsoforo en dietas e ingredientes alimenticios.
4.12. Determinacin de Cloruro de Sodio
Este mtodo permite determinar la cantidad de sal presente en harina de pescado y otros
ingredientes.
Reactivos
Solucin estndar 0.1N de Nitrato de Plata
Solucin estndar 0.1N de Tiocianato de Amonio
Indicador Frrico - Solucin acuosa saturada
Solucin de Permanganato de Potasio 6 % p/v
Solucin de Urea 5 % p/v
Acetona grado analtico
Acido Ntrico concentrado
Procedimiento
1. Pese 2 g de muestra en un matraz erlenmayer de 250 ml, humedezca la muestra con
20 ml de agua, adicione con pipeta 15 ml de la solucin de nitrato de plata y mezcle
bien.
2. Adicione 20 ml de Acido Ntrico concentrado y 10 ml de la solucin de
Permanganato de Potasio y mezcle. Caliente continuamente la mezcla hasta que el
lquido se aclare y desaparezca los vapores nitrosos, enfre.
3. Adicione 10 ml de Solucin de Urea y deje reposar por 10 min.
4. Adicione 10 ml de acetona y 5 ml de indicador frrico y titule el exceso de nitrato
de plata con la solucin de Tiocianato hasta el punto final rojo-caf.
Clculos
Calcule resultados como NaCl
%NaCI= (15.00 - ml 0.1N NH
4
CNS 0.585)/g de muestra

FIGURA 19
Determinacin de cloruro de sodio en harina de pescado y otros ingredientes
4.13. Determinacin de Potasio
Reactivos
Acido Clorhdrico concentrado.
Solucin estndar de Potasio: Para preparar solucin stock (500 ppm), disuelva
0.477 g de Cloruro de Potasio y llvelo a 500 ml con agua destilada. Para preparar
el estndar de trabajo (10 ppm), diluya 1:50.
Aceite de oliva (puro)
Materiales y Equipo
Crisoles de Slice.
Fotmetro de flama
Mufla
Procedimiento
1. Seque 2 g de muestra en un crisol de slice a 100C para eliminar la humedad.
Adicione unas cuantas gotas de aceite de oliva y caliente sobre la flama hasta que
deje de producir flama.
2. Calcine a 500C en la mufla por 24 h, enfre y adicione 2 ml de HCI concentrado
para disolver el residuo.
3. Llvelo a 100 ml con agua destilada, tome 1 ml de la solucin y haga una nueva
dilucin a 100 ml con agua destilada.
4. Ajuste el fotmetro de flama para que de una lectura de 100 con el estndar de 10
ppm y lea la solucin muestra.
5. Si la lectura no se encuentra entre 50 y 100 haga una dilucin al momento para dar
una lectura apropiada.

FIGURA 20
Determinacin del contenido de potasio en ingredientes alimenticios.
4.14. Cuantificacin de xido de cromo en heces y
alimentos (Furukawa y Tsukahara, 1966)
El xido de cromo es el marcador ms ampliamente utilizado durante la evaluacin de la
digestibilidad en dietas experimentales para peces. El mtodo aqu presentado es una
modificacin del propuesto por Furukawa y Tsukahara, a fin de manejar micromuestras
durante la determinacin del contenido de xido de cromo en dietas y heces.
Reactivos
Acido ntrico concentrado, gr.
Acido perclrico, g.r.
Materiales y equipo
Espectrofotmetro
Digestor kjeldahl para tubos de 100 ml
Matraces kjeldahl de 100 ml
Matraces volumtricos de 25 ml
Procedimiento
Muela finamente el alimento y las heces, a las cuales se les habr eliminado previamente
escamas y cualquier otra materia extraa; mantngalos a sequedad. Pese con precisin de
0.0001g de 50 a 100mg de muestra, colquela en un matraz kjeldahl de 100 ml y pese
nuevamente la charolilla para ajustar peso de la muestra. Adicione 5ml de HNO
3
y ponga a
digerir en ebullicin suave por un mnimo de 30 min hasta que desaparezcan los vapores
amarillentos. En caso de que disminuya notablemente la cantidad de lquido y contine
habiendo vapores nitrosos, adicione otros 5ml de cido ntrico y siga digiriendo. Al trmino
la solucin debe ser clara, de color verdoso y no debe desprender vapores ocres. Deje
enfriar.
Ya fra la solucin, agregar cuidadosamente resbalando por las paredes del matraz 3ml de
cido perclrico. Realizar la adicin dentro de una campana de extraccin y con mucho
cuidado, ya que en caso de una digestin incompleta se puede presentar una reaccin
explosiva. Coloque nuevamente el matraz en el digestor y contine la ebullicin hasta que
la solucin vire de verde a amarillo limn; apague el digestor y deje enfriar. Ya fro se debe
formar un anillo rojizo en el borde del lquido; en caso de no formarse o si el lquido se
torna verde nuevamente, volver a digerir hasta que el cambio sea permanente.
Pase el lquido fro a un matraz volumtrico de 25 ml, enjuagando el matraz kjeldahl varias
veces con agua destilada y afore. Ajuste a O el espectrofotmetro con un blanco de
reactivos y leer a 350 mm. El blanco se prepara simultneo a la muestras usando solamente
los cidos y agua destilada.
Clculos
a) Calcule la cantidad de xido de cromo (mg) presente en la muestra:
X = ((Y - 0.0032)/0.2089)/4
Donde
Y = absorvancia
0.0032 y 0.2089 son constantes
b) Calcule el % de xido de cromo en la muestra:
O.C.% = 100(X/A)
Donde
X = peso del xido de cromo
A = peso de la muestra

FIGURA 21
Determinacin de xido de cromo en alimentos y heces.
4.15. Mtodo de Carpenter para la determinacin de
Lisina Disponible (Tejada, 1985)
El mtodo permite determinar la cantidad de lisina libre que reacciona con el l-
fluorodinitro benceno.
Reactivos
Solucin madre de Mono E N dinitrofenil - lisina HCI (p. m. 366.77, 39.85 %
lisina) Disolver 314 mg en 250 ml de HCl concentrado. Se disuelve lentamente, de
manera que hay que iniciar su preparacin un da antes.
Solucin estndar diluida de DPN-lisina. Diluya 10 ml de la solucin madre en 100
ml de agua destilada para formar el estndar. Hecho lo anterior, 2 ml de la solucin
contienen alrededor de 0.1 mg de lisina y disuelto a 100 ml da una absorcin neta de
alrededor de 04 a 435 nm en celdilla de 1 cm.
Solucin de 1 - fluoro 2,4 dinitrobenceno (FDNB). Manjese con guantes de
plstico desechables. S el FDNB est slido colquese en balo de agua caliente
para que se funda, tome con una pipeta automtica aproximadamente 0.4 ml y
disuelva en 15 ml de alcohol etlico por muestra. Debe prepararse diariamente.
Cloruro de metoxicarbonil (cloroformato de metilo). El MCC es inestable por lo que
se debe almacenar en refrigeracin. Manjese con cuidado.
Solucin de bicarbonato de sodio al 8% en agua destilada.
Eter etlico libre de perxidos.
Solucin de fenoftalena, 500 mg/l de alcohol etlico al 60%.
Solucin de hidrxido de sodio al 12%. Se usa para incrementar el pH a 8.5 durante
la reaccin del MCC. Debe almacenarse en frasco de plstico. Tener a la mano un
gotero con HCI 1M para corregir cualquier exceso.
Buffer de bicarbonato de sodio - carbonato, pH 8.5. Disuelva 19.5g de NaHCO
3
y
1g de Na
2
CO
3
en 250 ml de agua destilada; ajuste el pH si es necesario. Almacenar
en un frasco bien lleno y bien cerrado para evitar prdida de CO
2

Acido clorhdrico concentrado
Materiales y Equipo
Tamiz de 0.5 mm
Matraces de fondo redondo
Matraz volumtrico de 250 ml
Bao mara
Rotoevaporador
Aparato de reflujo
Papel filtro Whatman 541
Tubos de ensaye con tapn
Perlas de vidrio
Espectrofotmetro
Procedimiento
Muela la muestra para que pase el tamiz de 0.5 mm. La cantidad de muestra a utilizar
deber contener alrededor de 12mg de lisina disponible, lo que equivale a 0.3 2g de la
muestra. Pasela a un matraz de fondo redondo. Agregue 23 perlas de vidrio y 10ml de
NaHCO
3
, agitar suavemente para que la muestra no se adhiera a las paredes.
Adicione 15 ml de FDNB y agite suavemente durante 2 horas. No permita que la muestra
se quede en las paredes. Evapore el etanol pero no el agua; en un bao de agua hirviendo el
matraz debe perder aproximadamente 12.5g.
Enfre y adicione 30ml de HCI 8.1M para neutralizar al NaHCO
3
. Sumando el agua
presente, se tendr un volumen de 40ml y una concentracin de cido de 6M. Reflujar
suavemente durante 16 horas.
Desconecte el matraz y lave el refrigerante con un poco de agua. Filtre en caliente a un
matraz volumtrico de 250 ml. Enjuague el matraz y el filtro varias veces con agua
destilada y colecte en el matraz volumtrico; afore en fro con agua destilada. En ocasiones
se forma un precipitado de dinitrofenol que se puede extraer con pipeta una vez precipitado,
o se elimina con el ter.
Colocar 2 ml del filtrado en dos tubos con tapn, etiquetndolos A y B. Agregar al tubo B 5
ml de ter y agita. Extraiga el ter (capa superior) con una pipeta automtica. Coloque el
tubo en un bao a 90C hasta que se elimine todo el ter y enfre.
Agregue una gota de fenoftalena al tubo, adicione gota a gota la solucin de NaOH hasta
que aparezca un ligero color rosado; aada 2ml de buffer de carbonato y agregue dentro de
una campana 0.5 ml de metilcloroformato. Tapar el tubo y agitar vigorosamente, liberando
la presin con cuidado. Despus de 5 10 min, adicione gota a gota 0.75 ml de HCI
concentrado agitando para evitar la formacin de espuma. Se extrae cuatro veces la
solucin con ter como se describi anteriormente. Elimine el ter residual en bao mara,
enfre y lleve el volumen 10 ml con agua destilada.
Durante las pausas de las manipulaciones del tubo B, extraiga tres veces con ter el tubo A;
elimine el ter residual y lleve a 10 ml con HCl. Lea la absorvancia de ambos tubos a 435
nm en el espectrofotmetro contra agua destilada. La lectura del tubo menos la del tubo B
(blanco) es la absorvancia atribuible al DNP - lisina.
Absorvancia del estndar DPN - Lisina
Coloque 2 ml de DNP-L diluido en dos tubos A y B siguiendo el procedimiento ya
indicado-Practicar hasta que se tenga confianza en las manipulaciones. La absorvancia neta
se usar para calcular las muestras problema. El blanco B tiene generalmente una
absorvancia de 0.01; si el valor es mucho mayor revisar el procedimiento, especialmente el
frasco de servicio, el pH del buffer de carbonato, la longitud de onda a que se est leyendo
y el ter libre de perxidos.
Precauciones con alimentos de origen vegetal.
En alimentos de origen vegetal en ocasiones no se logra una hidrlisis total a las 16 horas y
como un tiempo ms largo se descompone el DNP-L, debe hacerse una segunda digestin
con materiales desconocidos. Para lograr esto, despus de la digestin se filtra, se lava y se
procesa el filtrado como se seal. El residuo se coloca en un matraz de fondo redondo con
HCI 6 M y algunas perlas de vidrio (se pueden juntar los residuos de las rplicas); el
volumen del cido clorhdrico debe ser menor a 30 ml. Se deja en reflujo por 16 horas, se
filtra en caliente y se lleva a 100 ml segn el procedimiento ya descrito. Si el resultado es
muy pequeo se elimina, o de lo contrario, se hacen las correcciones necesarias para el
material.
Para determinar la prdida de DNP-L se debe calcular un factor de correccin, el cual vara
con el material. Para su clculo, consultar a: Makade, M.L. y Liener, I.E., 1969. Anal.
Biochem., 27:271.
Clculos
C = (Ws Au V 100 100)/Wu As a (cp)
Donde
C= g de lisina/16g de N
Ws= Peso del estndar expresado como mg de Lis en 2 ml; 0.1 s se prepara como se
indica.
Wu= Peso de la muestra en mg
As= Absorcin neta del estndar
Au= Absorcin neta del desconocido
V= Volumen del hidrolizado filtrado. Se recomienda 250 ml (menos por la segunda
digestin).
a= Alcuota del filtrado. Se recomiendan 2 ml.
CP= Protena cruda, 6.25 g N/100g material.
Para expresar el resultado como g lisina/Kg de PC, cambiar un 100 por 10 en la frmula.
NOTA:
El material de vidrio puede tomar un tinte amarillento debido al dinitrofenol. Los
hidrolizados y soluciones de DNP-Lisina deben protegerse de la luz especialmente a pH
alcalino.

FIGURA 22
Determinacin de lisina disponible en ingredientes alimenticios.
4.16. Anlisis de Melazas
Los peces, segn su especie, presentan una capacidad diferencial para utilizar carbohidratos
en su dieta, por lo cual se considera importante contar con un mtodo rpido para la
determinacin de azcares totales disponibles.
Reactivos:
Solucin de Fehling (modificada por Soxhlet):
a. Disuelva 34.639g de Sulfato de Cobre 5H
2
O en agua destilada, afore a
500ml, filtre.
b. Disuelva 173 g de tartrato de sodio y potasio 4.H
2
O y 50 g de Hidrxido de
Sodio en agua destilada, diluya a 500 ml, deje reposar por 2 das y filtre a
travs de asbesto preparado.
Estndar de Azcar invertida. Prepare una solucin stock adicionando 5ml de HCL
(Sp. g 1.18) a 9.5g de sacarosa en solucin y diluya a 100ml con agua destilada.
Despus de almacenar por 2 das a temperatura ambiente, afore a 1000 ml con agua
destilada. Prepare soluciones de trabajo que contengan 5mg/ml, para lo cual mida
con una pipeta volumtrica una alcuota de 100 ml de la solucin stock. Vace a un
matraz volumtrico de 200 ml y neutralice con una solucin de NaOH al 20%,
usando fenoftalena como indicador, lleve a volumen y mezcle.
Acido Clorhdrico concentrado (Sp.g 1.18).
Acido Clorhdrico (0.5N).
Hidrxido de Sodio, Solucin 20%.
Indicador de Fenoftalena (1% en etanol).
Indicador de azul de metileno (1% en agua).
Materiales y Equipo
Calentador elctrico
Matraces erlenmayer de 500 ml
Procedimiento
Disuelva 8g de melaza y llvela a 500ml con agua destilada (filtre). Hidrolice 100 ml del
filtrado con 5ml de HCI (Sp. g 1.18) y deje reposar por 24 h. Neutralice con NaOH al 20%
usando fenoftalena como indicador y diluya a 200 ml.
Estandarizacin de la Solucin Soxhlet: Mida 10ml de la solucin Soxhlet (a) y (b) con una
pipeta volumtrica y vace a un matraz erlenmayer, mezcle y agregue 30ml de agua.
Adicione con una bureta un volumen de estndar de trabajo casi suficiente para reducir el
Cobre en la solucin Soxhlet. Llvelo a ebullicin y djelo hervir por 2 min., adicione 4
gotas de azul de metileno y rpidamente complete la titulacin mientras est hirviendo,
hasta que se obtenga un color naranja brillante. Repita varias veces y determine el volumen
de solucin requerido para reducir completamente 20 ml de solucin Soxhlet.
Titulacin de Muestra: Primero realice una titulacin aproximada; pase a un matraz 10ml
de las soluciones (a) y (b), adicione alcuotas de 10ml de la solucin muestra. Aada 40 ml
de agua y llvelo a ebullicin. Si persiste el color azul, titule con una solucin estndar de
trabajo y calcule el contenido aproximado de azcar en la muestra. Para determinar con
precisin el contenido de azcar, pase a un matraz 10 ml de las soluciones Soxhlet (a) y (b);
adicione una alcuota de la solucin muestra. El volumen de muestra usado depender del
contenido de azcar en la muestra. Adicione agua como se indica en la tabla, mezcle y
hierva. Durante la ebullicin, agregue estndar de trabajo con una bureta hasta que la
titulacin sea casi completa. Aada azul de metileno y complete la titulacin.
VOLUMEN DE MUESTRA USADO EN LA TITULACION SOXHLET (AOAC,
1970)
ml de H
2
O ml de muestra g de muestra en alcuota Total como azcar invertida (%)
40 10 0.08 73
35 15 0.12 82-58
30 20 0.16 61-41
25 25 0.20 49-35
20 30 0.24 49-29
Calcule el % de azcar (como invertida) = (F - M) I 100/w
Donde:
F= Volumen de estndar necesario para reducir 20 ml de Solucin Soxhlet.
M= Volumen de solucin estndar de azcar requerido para completar la titulacin
I= Peso de la azcar invertida en 1 ml de Standard de trabajo.
W= Peso de la muestra en la alcuota usada.

FIGURA 23
Determinacin de azcares totales disponibles en melaza