BIOFILMS

Qu es un biofilm?
Comunidades microbianas adheridas a superficies, biolgicas o no, encerradas en una matriz.

Por qu son tan importantes?

Forma de vida mayoritaria. y Muy extendidos. Afectan directa e indirectamente al hombre. hombre

Aparicin de biofilms
Aparecen A pronto t en el l registro i t fsil. f il

Ambientes A bi t hid hidrotermales. t l

Caracterstica antigua y extendida.

Por qu aparecieron?
Homeostasis frente a condiciones duras y fluctuantes. fluctuantes Facilidad para desarrollar interacciones. Concentracin de nutrientes.

Por qu se forman?
Las superficies proporcionan un hbitat: E t bilid d Estabilidad. Funciones catalticas. Comunicacin C i i celular. l l Proteccin.

Estructura
Caractersticas visuales de crecimiento similares en diversos medios. Microcolonias encerradas en una na matri matriz heterognea con canales de agua. Complejidad estructural y de desarrollo.

Formacin
Unin inicial a la superficie. Formacin de una monocapa. monocapa . Migracin para formar colonias en multicapa. Produccin de matriz extracelular (EPS). Maduracin del biofilm biofilm. . Dispersin.

Dispersin
Swarming dispersal. Clumping p g dispersal. p Surface S f dispersal. di l

QUORUM SENSING Implicaciones en Biofilms

Qu es y cmo funciona el quorum sensing?

Comunicacin intercelular mediada por la secrecin de AUTOINDUCTORES en el l medio di ) Parmetros que regulan la secrecin de autoinductores:
1- Profundidad biofilm profundidad crtica 2- Tasa de muerte celular 2 3- Concentracin de clulas
www.personal.psu.edu

Baja densidad Baja [autoinductores] No respuesta Alta densidad Nivel crtico de [autoinductores] MASA CRTICA Induccin/Represin p de fenotipo, p diferenciacin celular, produccin de autoinductores, etc

Activacin/Represin transcripcional de genes

Cul es su papel p p en un biofilm?

Implicacin en biofilms A FAVOR Cepas salvajes
En las diferentes etapas del biofilm
Aeromonas hydrophila, Burkholderia cepacia, Serrata liquefacens

(sistema AHL intacto) ( ) Cepas mutantes (sistema AHL defectuoso)

Adhesin al sustrato Maduracin

Bacterias patgenas
Streptococcus mutans, Streptococcus gordonii

Mutaciones en genes implicados en QS

Desarrollo imperfecto del biofilm Reduccin de tasa de supervivencia/ Patogenicidad Patogenicidad.

Implicacin p en biofilms EN CONTRA

C Cepas salvajes l j En las diferentes etapas del biofilm
Aeromonas hydrophila, Burkholderia cepacia, Serrata liquefacens

(sistema AHL intacto) Cepas mutantes (sistema AHL defectuoso)

No se vieron diferencias apreciables en otras t etapas t del d l biofilm bi fil

La formacin de un biofilm es nicamente una consecuencia predecible derivada de las condiciones fsico-qumicas del ambiente en el que crece

Bacterias patgenas (Pseudomonas aeruginosa)

Mutantes p producen Biofilm defectuoso

Menor densidad Mayor dispersin

www.cmbi.bjmu.edu

Mutantes no muestran variacin en el biofilm

R Resultados lt d d dependientes di t d de condiciones di i experimentales

Conclusiones
Susceptibilidad p de resultados a
Sin embargo Protocolos experimentales Grupo bacteriano en estudio

Complejidad del biofilm

Expresin de mltiples genes Participacin de sistemas de regulacin

La formacin de un biofilm es nicamente una consecuencia predecible derivada de las condiciones fsico-qumicas del ambiente en el que crece

SIMPLIFICACIN

Q Quorum sensing i

Complemento Complemento que confiere adaptabilidad a las clulas en un medio cambiante e inestable

Variabilidad dentro de cada grupo bacteriano Variabilidad dentro de cada etapa del biofilm

MULTICELULARIDAD EN LOS BIOFILMS

Biofilm de S. aureus

Comportamiento multicelular
Descubrimiento quorum sensing Avances microscopia (SCLM) Avances en sistemas deteccin expresin gnica g

Estudio de multicelularidad bacteriana Estudio de organismos superiores

Microcolonias c oco o as
Estructuras multicelulares de la biopelcula. p Mecanismos de cooperacin multicelular multicelular. Alta actividad, actividad diferenciacin celular y muerte de subpoblacin en su interior. Importancia: Estrategia E t t i adaptativa d t ti en condiciones di i ambientales no favorables. Modelo M d l primitivo i iti d de multicelularidad. lti l l id d

Formacin
Condiciones ambientales cambiantes / condiciones de stress

Seales clula-clula

Formacin microcolonias

Dispersin en microcolonias maduras

Enzimas degradadoras de matriz de polisacridos (liasas) Disolucin localizada matriz + Subpoblacin dispersa Di Dispersin i d de clulas l l lib libres Colonizacin diferentes hbitats

Muerte celular programada (PCD)

Caracterstica habitual: Biofilms de una sola especie. Procesos de esporulacin y formacin de cuerpos fructferos. Regulada por mecanismos genticos: Genes que afectan a los receptores de fagos. fagos Sistemas toxina-antitoxina codificados en: Genoma G Elementos extracromosmicos (plsmidos, f fagos) )

 Nutrientes Activacin mecanismos genticos

Li i celular Lisis l l Nutrientes disponibles p Supervivencia de clulas viables

Conclusiones
Fuertes similitudes en la biologa de las microcolonias en el dominio Procariota. PCD tiene un importante papel en la diferenciacin celular y desarrollo de las microcolonias procariotas. Este proceso tambin existe en organismos superiores. Accin altruista: sacrificio de una minora para el beneficio de la mayora. Conocer estos procesos puede ayudar a desarrollar nuevas estrategias para el control de biofilms.

Formacin de Biofilms y Seguridad en la I d t i Alimentaria Industria Ali t i

Salmonella enterica

Staphylococcus aureus

Superficie p de alimentos
Conservas, productos avcolas y crnicos frescos, pastas, galletas y derivados, pescado y derivados, productos lcteos, cerveza, especias, vegetales

Equipos industriales de procesamiento

Sistemas de conduccin de aire, extractores, transportadores, sistemas de refrigeracin, suelos y superficies de contacto con alimentos

Biofilms ms comunes
Listeria monocytogenes S l Salmonella ll enterica i Yersinia enterocolitica Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Staphilococcus aureus Bacillus cereus

Adhesin y formacin del biofilm

Superficie celular cargada negativamente Repulsin superficie de adhesin bacteria Fimbrias - Disminuyen Flagelos repulsin l i Lipopolisacridos
- Facilitan la adhesin y la formacin del biofilm

Tefln Acero inox. Plsticos Cristal

- Atraccin de partculas orgnicas - Rugosidad derivada del uso difcil accesibilidad a ranuras y grietas - Humedad - Poca higiene

pH (cercano a 7) L. monocytogenes Temperatura (30C) S.aureus NaCl Glucosa, NaCl, Glucosa Alcohol Aerobiosis, anaerobiosis, Co2

Resistencia
Mtodos fsico-qumicos: arrastre mecnico, lavado a altas presiones, detergentes (hipocloritos, QAC) y enzimas biolgicos especficos. - Cloro - Yodo -Q QAC - cido aninico - NaCl - Alcohol - Altas temperaturas Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Listeria monocytogenes Lactobacillus

Bases genticas g
Formacin Biofilm mecanismos especficos de regulacin regulacin.
L. L monocytogenes: Protenas RelA y hpt necesarias para la sntesis de guanosina pentafosfato ( (p)ppGpp ) Adaptacin a condiciones de deprivacin nutricional. Papel en crecimiento y desarrollo del biofilm tras la adhesin inicial. Sistema agr disminucin adhesin S. enterica: Thin aggregative fimbriae (Tafi) - protena superficial f Bap A

Prevencin
Mantener las Usar mtodos de superficies de contacto arrastre mecnico lo ms lisas posibles, para dificultar la fijacin fijacin. Emplear programas de limpiezas alternos Evitar contacto cidas/alcalinas alimentos-bacterias, Detergentes cidos sobre todo en crudo disuelven los polisacridos de los Biofilms. Mejor Cumplir prcticas de penetracin del higiene exhaustivas desinfectante

Conclusiones
Biofilms en industria alimentaria li t i contaminan alimentos y superficies Pueden atraer a otros microorganismos microorganismos, siendo fuente de infecciones infecciones. Su formacin depende de mltiples factores, factores ambientales y genticos g T, pH, superficie de adhesin condiciones adhesin, higinicas Factores genticos de regulacin especfica (Listeria, Listeria Salmonella) Alto grado de resistencia a prcticas habituales de higiene (mecnicas y qumicas) q ) Necesidad de hallar nuevas medidas de prevencin y eliminacin

BIOFILMS: IMPORTANCIA CLNICA

BIOFILMS: IMPORTANCIA CLNICA

Adherencia bacteriana BIOFILM 1os observaciones de biofilms en clnica: aos 70-80
AUMENTO EN EL NMERO DE BACTERIAS RESISTENTES OBSERVACIN MICROSCPICA

POR QU SON TAN IMPORTANTES?

BIOFILMS: IMPORTANCIA CLNICA

1. PUEDEN ALBERGAR MICROORGANISMOS PATGENOS 2. SON MS RESISTENTES A AGENTES ANTIMICROBIANOS 3 PUEDEN SUPONER UNA FUENTE 3. PERSISTENTE DE INFECCIN 4. PERMITEN EL INTERCAMBIO DE PLSMIDOS

PAPEL DE LOS BIOFILMS

NORMALMENTE SE ASOCIAN A PROCESOS INFECCIOSOS TAMBIN PAPEL PROTECTOR!!
LACTOBACILOS EN LA VAGINA ESTREPTOCOCOS Y ACTINOMYCES EN LOS DIENTES, ETC.

CARACTERSTICAS DE UNA INFECCIN POR BIOFILM

(Parsek M M.R, R Singh P P.K. K Ann Ann.Rev.Microbiol, Rev Microbiol 2003)
1 1. 2. PATGENOS ASOCIADOS A UNA SUPERFICIE OBSERVACIN DIRECTA MUESTRA AGRUPAMIENTO DE BACTERIAS 3. 4. MICROORGANISMOS ESTN EMBEBIDOS EN UNA MATRIZ INFECCIN ES RESISTENTE A LA TERAPIA ANTIMICROBIANA Y MENOS SENSIBLE A SISTEMA INMUNE

INFECCIONES RELACIONADAS CON BIOFILMS

INFECCIONES ASOCIADAS A IMPLANTES
o Gran diversidad: Staphilococcus spp.

ENDOCARDITIS (VEGETACIONES) ( )
o Streptococcus spp. ; Staphilococcus spp.

ENFERMEDADES RESPIRATORIAS (NEUMONA ASOCIADA A FIBROSIS QUSTICA)

o Pseudomonas, S. aureus, Haemophilus influenzae

OTITIS MEDIA, MEDIA PROSTATITIS, PROSTATITIS ETC. ETC

INFECCIONES RELACIONADAS CON BIOFILMS

BIOFILMS Y RESISTENCIA A ANTIBITICOS

BARRERA DE DIFUSIN A TRAVS DE LA MATRIZ

RESISTENCIA INTRNSECA

MENOR TASA DE CRECIMIENTO DE LOS FORMADORES DEL BIOFILM Penicilinas CONDICIONES DEL MICROAMBIENTE QUE RODEA EL BIOFILM Aminoglucsidos

RESISTENCIA ADQUIRIDA

TRANSFERENCIA HORIZONTAL DE GENES

BIOFILMS Y SISTEMA INMUNE

INFECCIN SINTOMTICA, , INFLAMACIN Y POSIBLE DISEMINACIN DE LA INFECCIN MAYOR PROTECCIN FRENTE A CLULAS FAGOCTICAS Y ANTICUERPOS EN EL INTERIOR DEL BIOFILM LAS INFECCIONES CAUSADAS POR BIOFILMS SON DIFCILES DE RESOLVER LOS TEJIDOS QUE RODEAN AL BIOFILM PUEDEN SUFRIR DAOS COLATERALES POR EL SISTEMA INMUNE Y SER INVADIDOS POR NEUTRFILOS MUCHOS ESTUDIOS EN INFECCIONES ASOCIADAS A IMPLANTES desorganizan la respuesta del husped y mecanismos inmunes. Ej: S. epidermidis

CONCLUSIONES
Los biofilms tienen una gran importancia clnica, debido a su papel tanto beneficioso, como perjudicial en algunos casos, causando infecciones. Pueden suponer un importante problema de salud pblica, por su menor susceptibilidad tibilid d a l los agentes t antimicrobianos ti i bi y su capacidad id d para evadir el sistema inmune Las terapias futuras contra este tipo de infecciones deben actuar sobre la matriz, los productos de genes implicados en la formacin de estas estructuras y utilizando anlogos de molculas sealizadoras Aunque se acepta que los biofilms son ubicuos en ambientes naturales, a veces no es reconocida su significancia clnica

EL EL TODO ES MS QUE LA SUMA DE LAS PARTES