MEDICINA REGENERATIVA

Es la rama de la bioingeniera que se sirve de la combinacin de clulas, mtodos de ingeniera de materiales y bioqumica para mejorar o remplazar funciones biolgicas.

Su propsito no es solamente remplazar, sino tambin recuperar la funcionalidad perdida ya sea proporcionando elementos necesarios para reparar in vivo, o estimulando la capacidad de regeneracin intrnseca del propio organismo.

SEALES DE AVANCE
Leucemia

Enfermedades cardiacas

Artritis reumatoide

Diabetes Tipo I

Enfermedad de Parkinson

Ejemplos de tecnologas de medicina regenerativa

Hgado Bioartificial - muchos de los esfuerzos de investigacin han producido ayuda heptica usando hepatocitos vivos. Pncreas artificial - las investigaciones engloban el uso de islotes de Langerhan spara producir y regular insulina, particularmente en casos de diabetes. Vejigas artificiales - En la Wake ForestUniversity se ha conseguido implantar con xito vejigas desarrolladas artificialmente en siete de 20 humanos, dentro de un experimento a muy largo plazo. Cartlago - tejido cultivado en laboratorio ha sido usado con xito para reparar cartlago de rodilla.

HISTORIA
1916: Danchakoff; describi las clulas madre hematopoyticas 1988: 1er. Trasplante de clulas madre adultas de un cordn umbilical 1994: Aislamiento de clulas madre embrionarias 1998: James Thomson; primero en derivar lneas de clulas madre embrionarias humanas

Retos de la medicina regenerativa

Estimular la regeneracin de tejidos Ralentizar el envejecimiento Reparar lesiones y traumatismos Generar rganos en el laboratorio.

Reparacin
Sustitucin de clulas muertas o daadas por clulas sanas

Cicatriz
Llena defectos Restablece la continuidad morfolgica
Pero... Sustituye clulas funcionales especializadas por tejido conectivo que carece de funcin.

Clulas madre y medicina regenerativa

CLULAS MADRE
Clula que tiene la capacidad de dividirse por perodos indefinidos. Pueden dar origen a diferentes tipos de clulas y funciones especializadas.

La medicina regenerativa in vitro

Conocimiento de la clula para garantizar su supervivencia, crecimiento e incentivar su funcionalidad. Condiciones bsicas: oxgeno, pH, humedad, temperatura, nutrientes y el mantenimiento de la Presin osmtica. Introduccin de factores de estimulacin cuando el mantenimiento del cultivo no es suficiente; factores de crecimiento, hormonas, nutrientes, estmulos qumicos y fsicos son en ocasiones necesarios. Biorreactores: El uso de biorreactores permite el control preciso y continuo de las condiciones de cultivo celular y permiten tambin introducir diferentes estmulos al cultivo de tejidos.

Clasificacin de las clulas madre de acuerdo al tejido de procedencia

Clulas madre adultas

Clulas madre embrionarias

Formas de Clasificacin
Clasificacin por origen
CLULAS MADRE ADULTAS: Las clulas madre adultas son aquellas que tienen la capacidad de clonarse y crear copias de si mismas para regenerar rganos y tejidos. Sin embargo, son un tipo de clula no diferenciada, por lo que slo pueden reparar los daos de sus propios tejidos. En las personas adultas existen alrededor de 20 tipos distintos de clulas madre adultas, que son las encargadas de regenerar tejidos en continuo desgaste (como la piel o la sangre) o daados (como el hgado). Las clulas madre adultas ms conocidas y empleadas en la medicina desde hace tiempo son las clulas madre hematopoyticas de mdula sea, que son las encargadas de la formacin de la sangre. CLULAS MADRE EMBRIONARIAS: Las clulas madre embrionarias son aquellas que forman parte de la masa celular interna de un embrin de 4-5 das de edad y que tienen la capacidad de formar todos los tipos celulares de un organismo adulto. Pueden mantenerse (en el embrin o en determinadas condiciones de cultivo) de forma indefinida, formando al dividirse una clula idntica a ellas mismas, y manteniendo una poblacin estable de clulas madre. Existen tcnicas experimentales donde se pueden obtener clulas madre embrionarias sin que esto implique la destruccin del embrin.

OBTENCIN DE CLULAS MADRE EMBRIONARIAS

Quinto da

ESTADO DE BLASTOCISTO

CLULAS DE LA MASA CELULAR INTERNA

CLULAS PLACENTARIAS

Capas embrionarias

Clulas madre embrionarias (clonacin teraputica)

1- Introduccin de un ncleo diploide de la clula del paciente dentro de un ovocito enucleado.

2- El ovocito se activa y el cigoto se divide para transformarse en blastociste que contiene el ADN del donante

3- El blastociste se disocia para obtener clulas madre embrionarias.

4- Estas clulas son capaces de diferenciarse en variados tejidos ya sea por cultivo o por trasplante dentro del rgano daado del donante.

CLULAS MADRE ADULTAS

Se encuentran en la mayora de los tejidos de un individuo totalmente desarrollado.
Las clulas madre adultas, limitadas a dar origen solo a clulas de su misma procedencia ?

Lugares donde se han encontrado CMA: Cerebro Sangre Crnea Retina Corazn Grasa Piel

FENMENO DE PLASTICIDAD O TRANSDIFERENCIACIN

Es la capacidad que adquieren las clulas madre adultas de diferenciase en clulas de tejidos distintos de aquel con el cual la clula madre se encuentra aparentemente comprometida.
Mecanismos para establecer este fenmeno: Heterogeneidad de las clulas madre presentes en una poblacin celular. Fusin de las clulas madre trasplantadas con las clulas especficas residentes en un rgano. Consumacin de un proceso de desdiferenciacin y rediferenciacin celular. Persistencia de clulas madre adultas con capacidad multi o pluripotencial.

Clulas madre hematopoyticas

Clulas madre neuronales

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

Las clulas madre embrionarias:

Ventajas: Estas clulas son: Flexibles: Poseen el potencial de formar cualquier clula del cuerpo. Inmortales Fcilmente obtenibles

Las clulas adultas

madre

Desventajas: Ellas pueden: Ser difciles de controlar Entrar en conflicto con el sistema inmune del paciente: Es posible que las clulas trasplantadas difieran en su perfil inmune de las del recipiente y que sean entonces rechazadas. Ser ticamente controversiales

Ventajas: Estas clulas Ya estn ms o menos especializadas: La induccin puede ser ms sencilla. Son inmunolgicamente resistentes Son flexibles: Las clulas madre adultas pueden ser usadas para formar otros tipos de tejido. Tienen una disponibilidad variada Desventajas: Ellas pueden: Estar disponibles en cantidades mnimas: Es difcil obtenerlas en grandes cantidades. Finitas: Ellas no viven tan largo bajo cultivo como las clulas madre embrionarias. Genticamente inadecuadas

Clasificacin por potencialidad

Las clulas madre totipotentes pueden crecer y formar un organismo completo, pueden formar todo los tipos celulares. Las clulas madre pluripotentes no pueden formar un organismo completo, pero s cualquier otro tipo de clula correspondiente a los tres linajes embrionarios. Pueden, formar linajes celulares. Las clulas madre multipotentes son aquellas que slo pueden generar clulas de su misma capa. Las clulas madre unipotentes pueden formar nicamente un tipo de clula particular.

Video clulas madre

Uso de clulas para reparacin de tejidos

Stem cells para reparar tejido cardiaco OEG para reparar tejido nervioso

CELULAS MADRE Y REGENERACIN MIOCARDICA.

Dogma el corazn es un tejido terminal, sin capacidad de autorenovacin.

Existen evidencias de que el miocardio puede regenerarse a partir de clulas madre cardiacas
Los miocitos cardiacos pueden dividirse durante la vida adulta El remodelado cardiaco, en el caso de la estenosis aortica, puede ser por proliferacin de las clulas madres. El quimerismo encontrado en pacientes trasplantados de corazn puede representar un mecanismo de auto renovacin.

Porque no son suficientes para reparar el tejido daado?

Tienen una capacidad de proliferacin y de reparacin miocrdica limitada Se movilizan durante la fase aguda de un IM, pero no alcanzan la maduracin necesaria para incorporarse al miocardio daado La falta de riego sanguneo en el rea afectada reduce el nmero de clulas madre cardiacas que pueden llegar al sitio ocluido

La incapacidad de las clulas madre cardiacas para reparar el miocardio daado ha dado lugar a que se busquen clulas procedentes de otras fuentes, tanto para producir miognesis como angiognesis

Clulas propuestas para la regeneracin cardiaca

Mioblastos esquelticos Fibroblastos Clulas del msculo liso Miocitos fetales Clulas embrionarias Clulas adultas de la mdula sea

Clulas empleadas para la regeneracin cardiaca

Caractersticas Mioblastos autlogos _ _ + Mioblastos alognicos + ? +\_ Cel madre hematopoyticas _ _ ++ Cel embrionarias +\_ ++ +\_ Inmunosupresin Carcinognicas Disponibilidad

Transformacin en miocitos (plasticidad) Arritmogensis

Problemas ticos

+\_

++

FORMAS DE ADMINISTRACION
Como terapia nica o Conjuntamente con una ciruga de revascularizacin coronaria y/o angioplastia.

MOMENTO DE LA ADMINISTRACIN
En patologas agudas, como en el infarto agudo del miocardio, traumas cardiacos. Enfermedades crnicas Cardiopata isqumica crnica, miocardiopatias dilatadas , cardiopata en el curso de la enfermedad de Chagas etc.

Medicina regenerativa y corazn

Objetivos: 1. Reemplazar los miocitos daados necrticos e hipofuncionantes por miocitos funcionantes (miognesis)
2. Mejorar la angiognesis y la vascularizacin del corazn daado 3. Mejorar la funcin contrctil del corazn

Trasplante de OEG como tratamiento

para promover la regeneracin del

sistema nervioso

LOS SISTEMAS NERVIOSO PERIFRICO Y CENTRAL DE MAMFEROS

ADULTOS NO RESPONDEN DE LA MISMA FORMA FRENTE A LAS LESIONES

SISTEMA NERVIOSO CENTRAL

SISTEMA NERVIOSO PERIFRICO

SISTEMA NERVIOSO PERIFRICO

Los axones lesionados en el SNP regeneran de forma espontnea mientras que los axones lesionados en el SNC son incapaces de regenerar

Seccin histolgica longitudinal de una mdula espinal lesionada

Fallo regenerativo de los axones

Cicatriz glial

Davies et al. (1999) Journal of Neuroscience 19: 5810-5822

TERAPIA CELULAR PARA REPARAR LAS LESIONES TRAUMTICAS DE NERVIOS PERIFRICOS

1. INJERTOS DE TEJIDO 2. TRASPLANTES DE CLULAS 3. COMBINACIN DE INJERTOS O TRASPLANTES CON OTRAS ESTRATEGIAS QUE POTENCIEN SU EFECTO

INJERTOS AUTLOGOS
TEJIDO: - Nervios perifricos - msculo esqueltico: favorece migracin de clulas de Schwann - Conducto venoso combinado con clulas de Schwann o matrigel - Tendones - Tejido epineural CLULAS: - Clulas de Schwann - Gla envolvente olfatoria

REGENERACIN Y REPARACIN DE NERVIO PERIFRICO CON DIFERENTES BIOMATERIALES

REGENERACIN AXONAL A TRAVS DE UN POLMERO

COMBINACIN DE INJERTOS O TRASPLANTES CON OTRAS ESTRATEGIAS QUE POTENCIEN SU EFECTO: A) Infusin de factores trficos: - GDNF: - BDNF - GDNF + BDNF B) Sobreexpresin en clulas de Schwann de: - FGF-2: - NGF: No diferencias por secuestro de - GDNF: axones.

BDNF.
SC

C) Estimulacin elctrica (1h, 20 Hz, muon rostral). Se libera D) Fototerapia: Transcutanea con laser. Incrementa proliferacin de E) Fisioterapia: incrementa BDNF, efecto sobre neuronas sensitivas.

EFECTO DEL EJERCICIO EN LA REGENERACIN AXONAL DE NERVIOS PERIFRICOS LESIONADOS

TERAPIA CELULAR PARA PROMOVER LA REGENERACIN AXONAL EN EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL

1. INJERTOS DE TEJIDO 2. TRASPLANTES DE CLULAS 3. COMBINACIN DE INJERTOS O TRASPLANTES CON OTRAS ESTRATEGIAS QUE POTENCIEN SU EFECTO:

ESTRATEGIAS EXPERIMENTALES PARA REGENERAR AXONES EN EL SNC DE MAMFEROS

D. Santiago Ramn y Cajal

Regeneracin de axones del SNC a travs de injertos de nervio perifrico

Otros investigadores
Regeneracin de axones del SNC a travs de diferentes entornos permisivos

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA UTILIZACIN DE CLULAS MADRE NEURALES EN TERAPIA

Jakel et al. (2004) Nature Genetics Reviews 5: 136-144

Utilizacin de clulas madre como estrategia reparadora de las lesiones del sistema nervioso

Trasplantes de estas clulas en la mdula espinal dan lugar a: - Neuronas (15%) - Astroglia (80%) - Oligodendrogla (5%)

La OEG promueve la regeneracin de axones en el bulbo olfatorio

Regeneracin

En adultos, la OEG es el nico tipo celular que interacciona con los axones en regeneracin en el bulbo olfatorio

(Fairless y Barnett, 2005)

LA AUSENCIA DE REGENERACIN AXONAL LA MDULA ESPINAL OCASIONA UN DFICIT

FUNCIONAL PERMANENTE E IRREVERSIBLE

Se produce una prdida motora y/o sensitiva por debajo del nivel de la lesin que es mayor cuanto ms haces estn afectados

SE DISE UNA TERAPIA CON CLULAS ADULTAS PARA REPARAR LESIONES AGUDAS DE LA MDULA ESPINAL

Ramn-Cueto et al. (Neuron 25: 425: 435, 2000

FINANCIADO POR UN MECENAS

2 inyecciones en el Cordn dorsal 1 inyeccin en la comisura gris 1 inyeccin en el cordn ventral

La lesin medular completa a nivel T8 ocasiona una paraplejia en las ratas

Ramn-Cueto et al. (Neuron 25: 425: 435,

2000

EVALUACION DE LA RECUPERACIN DE LA FUNCIN MOTORA MEDIANTE UN TEST DE COMPORTAMIENTO

Una vez por semana durante 8 meses Ratas deben de pasar completamente a la Cuatro grados de dificultad segn la pendiente Plataforma horizontal para superar el test

Ramn-Cueto et al. (Neuron 25: 425: 435, 2000)

REPARACIN DE LAS MDULAS ESPINALES DAADAS Y REGENERACIN DE AXONES LESIONADOS TRASPLANTE DE OEG EN LA FASE AGUDA DE LA LESIN

Regeneracin de fibras nerviosas

Reparacin de la lesin visible macroscpicamente

Ratas trasplantadas Ratas no trasplantadas

Ramn-Cueto et al. (Neuron 25: 425: 435, 2000

Muoz-Quiles et al. (2009). J Neuropathol Exp Neurol 68 (12): 1294-1308

ACCESO A LA MDULA ESPINAL EN LA FASE CRNICA DE LA LESIN Y TRASPLANTE ESTEREOTXICO DE OB-OEG

Muoz-Quiles et al. (2009).

Injection: 4 sitios/mun (1.3; 1.0; 0.8; 0.5)) 0.5 ml/sitio 50.000 cel/site

J Neuropathol Exp Neurol 68

(12): 1294-1308

LAS RATAS PARAPLJICAS TRASPLANTADAS CON OEG PRESENTAN UNA RECUPERACIN MOTORA PROGRESIVA DESDE EL QUINTO MES

100 90

Chr: 1-8 months posttrasplant SA: 1-8 months posttrasplantation

Percentage of recovery (%)

80 70 60 50 40 30 20 10 0 0
Lesion Trasplant SA

No-T SA Cr

3
Trasplant Chr

10 11 12

Months post-lesion

Muoz-Quiles et al. (2009).

J Neuropathol Exp Neurol 68 (12): 1294-1308

TRABAJO SE PUDO RALIZAR GRACIAS A LA FUNDACIN I

EL TRASPLANTE DE OEG DISMINUYE LA DEGENERACIN EN LA ZONA DE LA LESIN

No trasplantado

Trasplantado con OEG

Existe una correlcin lineal entre el grado de recuperacin motora y el volumen de tejido preservado (r = 0,861; p < 0,001)

Muoz-Quiles et al. (2009). J Neuropathol Exp Neurol 68 (12): 1294-1308

SA: p = 0,016 Cr: p = 0,027

4500 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0

Vol. / U. Sup.(mm)

No1 T

SA 1

Cr 1,09

Grupo

EL TRASPLANTE PRODUCE REGENERACIN AXONAL

Number of somas
2500 2000 1500 1000 500 0

Raphe
9000 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0

Reticular formation
Number of somas

EN REGIONES MOTORAS DEL CEREBRO

No-T 1

SA 1

Chr 1,1

Sham 0,9

No-T 0,9

SA 1

Chr 0,9

Sham 1,1

C
Number of somas
2500 2000 1500 1000 500 0

Vestibula Nucleir
Number of somas
3000 2500 2000 1500 1000 500 0

Locus Coeruleus

No-T 1

SA 1

Chr 0,9

Sham 1,1

No-T 0,85

SA 1,15

Chr 0,925

Sham 1

Red nucleus
Number of somas
2500 2000 1500 1000 500 0 20000

Total number
Number of somas

15000 10000 5000 0

No-T 1,1

SA 1

Chr 0,9

Sham 0,9

No-T 1

SA 1

Chr 1,1

Sham 0,9

LA CALIDAD DEL MOVIMIENTO PROMOVIDO POR LA GLA ENVOLVENTE OLFATORIA MEJORA CUANDO SE REALIZA REHABILITACIN EN CINTA ANDADORA

BRAIN 131: 264-276 (2008)

EL TRASPLANTE DE OEG PERMITE QUE

LOS AXONES LESIONADOS DE LA MDULA ESPINAL SE RECONECTEN.

Takeoka et al (2010) J. Neuroscience

TERAPIA AUTLOGA PARA LA REPARACIN DE LAS LESIONES DE LA MDULA

ESPINAL: EL PROPIO PACIENTE ES SU PROPIO DONANTE DE CLULAS

Roedor

Aguda

Crnica

Primates No humanos

Aguda

Crnica

Humanos
Time

Aguda

Crnica

Translacionalidad a empresa
Bancos de cordn umbilical Bioingeniera (quimerizacin)