ACIDO DOCOSAHEXAENOICO (DHA), DESARROLLO CEREBRAL, MEMORIA Y APRENDIZAJE: LA IMPORTANCIA DE LA SUPLEMENTACIN PERINATAL

RESUMEN El cido docosahexaenoico (DHA) es un cido graso omega-3 de cadena larga derivado del cido alfa-linolnico. El DHA, junto con el cido araquidnico, es el cido graso poliinsaturado que se encuentran en mayor concentracin en el tejido nervioso. Se ha propuesto que el DHA tiene un importante rol en la formacin y en la funcin del sistema nervioso, particularmente en el cerebro. Su mecanismo de accin an no est totalmente dilucidado pero se propone que actuara a nivel de las membranas celulares regulando sus funciones metablicas y tambin a nivel de la expresin de genes relacionados con la funcin cerebral. Se ha correlacionado el contenido cerebral de DHA con la capacidad de aprendizaje y con el nivel de inteligencia de los recin nacidos y lactantes. Numerosos ensayos en animales de experimentacin y en nios han demostrado la necesidad del cido graso durante el desarrollo cerebral. El DHA, formado a partir de su precursor, proveniente de la dieta, o desde las reservas tisulares, es aportado por la madre al feto durante el perodo gestacional y a travs de la leche durante la lactancia. Se ha sugerido la necesidad de suplementar a la madre con DHA durante el perodo gestacional, e incluso antes de este, para asegurar el adecuado aporte del cido graso para el normal desarrollo del cerebro fetal. La suplementacin se puede realizar a travs de aceites con alto contenido de DHA, a partir de fosfolpidos, en la forma de etil esteres de DHA, o como monoglicridos que contienen DHA como nico cido graso. En este trabajo se discute el rol del DHA en el desarrollo del sistema nervioso y en la funcionalidad del cerebro, y las evidencias que lo relacionan con una mayor capacidad de aprendizaje de las cras provenientes de madres previamente suplementadas con DHA. Adems, se discute cual podra ser la mejor forma de suplementar con DHA la nutricin de la madre y del recin nacido a partir de los productos disponible para la suplementacin. Palabras claves: Desarrollo del cerebro, DHA y funcin cerebral, DHA y aprendizaje, suplementacin con DHA.

INTRODUCCIN
El sistema nervioso y particularmente el cerebro son tejidos cuya composicin es principalmente lipdica ya que ms de un 60% de su peso seco est constituido por lpidos, especialmente por fosfolpidos (1). El desarrollo del cerebro ocurre particularmente durante el ltimo trimestre de la gestacin en el humano y finaliza, aunque no del todo como se discutir ms adelante, al tercer ao de vida (2). En este complejo proceso los cidos grasos, como principales componentes de los lpidos cerebrales, tienen importantes funciones y en el caso especfico del desarrollo cerebral, el cido graso omega-3 docosahexaenoico (C22:6, DHA) parece tener un rol fundamental y muy especfico en la estructura y funcionalidad del tejido nervioso (3,4). El presente trabajo presenta el conocimiento actual sobre el tema y revisa las evidencias que relacionan el contenido de DHA del tejido cerebral con las funciones de aprendizaje y de adaptacin al medio del individuo. Tambin se discute sobre la forma de aportar una mejor suplementacin con DHA.

EL DESARROLLO DEL CEREBRO Y EL ESTABLECIMIENTO DE LOS CIRCUITOS NEURONALES

La formacin del tejido nervioso comienza con la formacin del tubo neural a partir de la induccin del neuroectoderma, proceso que ocurre en el humano entre la tercera y cuarta semana gestacional (5). Posteriormente ocurre la etapa proenceflica que conduce a la formacin de los hemisferios, proceso que se produce entre la quinta y dcima semana gestacional y durante el cual se desarrolla una activa neurognesis a partir de clulas precursoras neuronales. Entre la octava y dcimo octava semana gestacional se produce una activa proliferacin neuronal, las clulas precursoras comienzan a diferenciarse para producir nuevas clulas precursoras y clulas neuronales que se diferencian a neuronas propiamente tales y a clulas gliales (astrocitos y oligodendrocitos) (6). La velocidad de proliferacin en este perodo es abismante ya que se forman alrededor de 200.000 neuronas por minuto. El qu determina esta diferenciacin es an un misterio, aunque que se sabe que depende de factores neuronales especficos, de la regin del cerebro donde ocurre y de las funciones que ejercer. Las clulas diferenciadas comienzan a emigrar desde las zonas ventriculares (centrales) hacia las zonas mas perifricas del cerebro en formacin (neocorteza). Esta emigracin radial de las neuronas hacia la periferia utiliza las clulas gliales como "gua" ya que estas forman un verdadero andamiaje que facilita el movimiento de las neuronas (7). La emigracin neuronal se produce en dos modalidades. En el tlamo e hipotlamo las neuronas ms antiguas son "empujadas" por las neuronas ms nuevas, por lo cual las primeras se ubicarn en la periferia. En cambio, en las regiones del cerebro de estructura laminar, como es el caso de la corteza y el cerebelo, las neuronas ms jvenes emigran traspasando a las mas antiguas, con lo cual estas ltimas van a quedar ms cerca del neuroepitelio y las ms jvenes en la periferia (8). El proceso de emigracin neuronal ocurre entre la dcimo segunda y la vigsimo cuarta semana gestacional. Durante la neurognesis y la emigracin neuronal aproximadamente un 50% de las neuronas sufren apoptosis, esto es mueren en forma programada, probablemente porque no siguen el curso de emigracin

correcto y/o porque no reciben los estmulos adecuados. Una cierta proporcin de las neuronas (20%) emigra horizontalmente una vez finalizada la emigracin radial, permitiendo la formacin de la laminacin (segmentacin) cortical. Las neuronas buscan su camino, motivadas por estmulos qumicos (los factores neurotrficos), prolongando su estructura en uno de sus extremos, lo que origina los llamados "conos" de crecimiento axonal. En forma simultnea a la emigracin neuronal se produce la sinaptognesis, aunque esta es muchsimo mas intensa entre la duodcima y la duodcimo cuarta semana gestacional, pero persiste en forma muy activa hasta el octavo o noveno mes post natal. La sinaptognesis contina an en la pubertad y comienza a disminuir notoriamente con la edad del individuo. En la etapa mas activa pueden producirse hasta 40.000 nuevas sinpsis por segundo (9). Es interesante destacar que la sinaptognesis pre natal est determinada principalmente por el patrimonio gentico del individuo. Sin embargo, en la etapa post natal la sinaptognesis tambin es afectada por las experiencias sensoriales, particularmente por el proceso de aprendizaje (10). Durante la pubertad, se produce una especie de "congelamiento" de la neurognesis, el cual se ha asociado a la adquisicin del carcter propio y particular de cada individuo. La mielinizacin es un proceso tardo que se inicia en forma mas intensa a partir de la 40ava semana, se produce en la sustancia blanca y en las neuronas perifricas (5). La neurognesis y las etapas posteriores asociadas a este proceso morfognico conducen a la formacin de aproximadamente 100 mil millones de neuronas en un cerebro adulto y a varios trillones de sinpsis. Esto implica que un nmero importante de los 30.000 genes que poseemos deben estar involucrados en este complejo proceso, expresndose coordinadamente en forma simultnea y/o secuencial. Sin embargo, nos cuesta an comprender este prodigioso proceso, ya que un nematodo que posee 20.000 genes, solo forma 302 neuronas y el tejido nervioso que forman dista mucho de tener la funcionalidad del cerebro humano (5).

EL DHA EN LA ESTRUCTURA Y FUNCION DEL CEREBRO

La importancia del DHA en la estructura y funcin del cerebro es casi universalmente aceptada por el mundo cientfico por la sola razn de que el cido graso se encuentra altamente concentrado en este tejido (11). El 60-65% de los lpidos totales del cerebro son cidos grasos poliinsaturados y de este porcentaje mas del 85% est constituido por el DHA (35-40%) y por el cido araquidnico (C20:4, AA) (40-50%) (12). El AA es otro cido graso altamente poliinsaturado que pertenece a la serie omega-6 y si bien su participacin en la estructura y funcin cerebral no es menos importante que la del DHA, su aporte por parte de la dieta (como tal o a travs de su precursor, el cido linoleico) o durante el perodo gestacional (por parte de la madre), es mucho mas alto y de mayor constancia (13). El AA es abundante en todos los tejidos, en cambio el DHA est principalmente concentrado en el tejido nervioso (neuronas y gla), visual (conos y bastoncitos de la retina) y reproductivo (flagelo espermtico y clulas de Sertoli) (8). Por esta razn la investigacin se ha focalizado mayormente en el DHA, el que est mucho menos disponible a partir de la dieta y cuya carencia parece ser crucial durante el perodo gestacional y durante la lactancia. (a) El DHA en la estructura y funcin de las membranas neuronales El DHA se acumula principalmente en los fosfolpidos cerebrales, particularmente en la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina, y en menor proporcin en la fosfatidilserina, en los lpidos del inositol y en una gran variedad de plasmalgenos (esfingolpidos) (14). El porcentaje de triglicridos del tejido cerebral es muy bajo en comparacin a los fosfolpidos, por lo cual el contenido total de DHA en los primeros es muy pequeo. El DHA se acumula principalmente en la posicin sn-2 de los fosfolpidos esto es, esterifica al hidroxilo central del glicerol que forma parte de los fosfolpidos (14). La posicin sn-1 es ocupada por la colina, la etanolamina, la serina o el inositol, segn el fosfolpido de que se trate. La posicin sn-3 es casi siempre ocupada por un cido graso saturado, principalmente cido palmtico (C16:0). El AA comparte la misma posicin sn-2 que el DHA en los fosfolpidos aunque en pequea proporcin tambin puede estar en la posicin sn-3, particularmente cuando la posicin sn-2 est ocupada por DHA (15). En su estructura espacial, el DHA adopta una conformacin semi helicoidal debido al largo de su cadena y a las seis insaturaciones (dobles enlaces) que presenta y que le otorgan una alta flexibilidad (16). Esta conformacin permite que los fosfolpidos que poseen DHA sean estructuras moleculares muy expandidas, por lo cual por unidad de volumen en una membrana se van a acomodar menos molculas (17). Esto significa que las membranas que posean fosfolpidos que contienen DHA van a ser estructuras de gran fluidez y con muy baja tendencia a la formacin de estructuras cristalinas de carcter mas denso (18). Muchos investigadores han propuesto que esta sera una caracterstica fundamental de las membranas que poseen DHA ya que la mayor fluidez facilitara el movimiento de molculas en la membrana (receptores, protenas G, canales inicos, enzimas, factores de crecimiento neuronal) y la transduccin de seales que es propia de las clulas excitables, como es el caso de las neuronas. Las membranas de los sinaptosomas y de las mitocondrias neuronales son las que presentan mayor proporcin de DHA (14). Es destacable el hecho que las neuronas no tienen la capacidad de formar DHA a partir de su precursor el cido alfa-linolnico (C18:3, LNA) y son las clulas gliales, especialmente los astrocitos los que desaturan y elongan al LNA para convertirlo en DHA, el que posteriormente es traspasado a las neuronas (19, 20). Los astrocitos y los oligodendrocitos presentan una proporcin mucho menor de DHA, y tambin de AA que las neuronas (19). De esta forma, la mayor fluidez de las membranas neuronales

estara vinculada a la funcin del DHA en el tejido cerebral facilitando la formacin de los conos de crecimiento axonal, el establecimiento de las sinapsis y la interaccin de las dendritas, mejorando as la plasticidad del tejido cerebral (21). Cabe destacar que esta misma propiedad es de gran importancia en los procesos de neurognesis, migracin neuronal y de sinaptognesis, propias del desarrollo del sistema nervioso. (b) El DHA y la regulacin de la expresin de genes en el cerebro y otros rganos Este es un aspecto de la funcin del DHA mucho menos estudiado, pero sobre el cual se ha acumulado cierta evidencia en los ltimos aos. El DHA producira una sobre expresin selectiva de ciertos genes neuronales al mismo tiempo que reprimira la expresin de otros genes en las neuronas (22). De esta forma, el DHA regulara los procesos de apoptsis que son determinantes en la neurognesis (23). Recientemente se describi el efecto regulador del DHA en la expresin de genes de la retina que es un tejido de derivacin neuronal (24). El efecto inductor de la expresin de genes del DHA ha sido descrito en el tejido heptico (25) y adiposo (26). Los genes particularmente regulados por el DHA estaran relacionados con la funcin de generacin de energa en las neuronas, esto es con la sntesis de ATP y con el funcionamiento de la cadena respiratoria y particularmente con la expresin de las synucleinas (protenas relacionadas con el control de la plasticidad cerebral y el aprendizaje) (27). Cabe destacar que mas de un 50% del ATP formado por las neuronas es consumido por la Na+/K+ ATPasa, cuya funcin es la mantencin del equilibrio inico, fundamental para la actividad elctrica neuronal (22). La suplementacin con cidos grasos omega-3, particularmente con DHA, producira una estimulacin de la termognesis al desacoplar la oxidacin mitocondrial y estimular la oxidacin peroxisomal de los cidos grasos (28). Este efecto termognico producira una menor acumulacin de tejido adiposo en el recin nacido, la que ha sido observada en animales de experimentacin (29), y tambin en humanos (30). La mayor termognesis se debera a una estimulacin por parte de los cidos grasos omega-3 en la actividad de los receptores nucleares de los proliferadores peroxisomales (PPARs), en sus diferentes isoformas (PPARa, b,g), pero particularmente del PPARa. (31). Este receptor se expresa principalmente en el hgado y es el factor mas importante de transcripcin que estimula la sobreexpresin de productos gnicos relacionados con la termognesis (32). Este efecto podra explicar la menor tasa de ganancia de peso y menor grosor de la piel observada en lactantes alimentados con frmulas suplementadas con cidos grasos omega-3 (33).

DHA Y APRENDIZAJE
Numerosos autores han asociado la mayor incorporacin de DHA en el tejido cerebral con una mayor capacidad de aprendizaje y de memorizacin. Los estudios se han realizado en ratones (34, 35) ratas (36), primates (37) y en humanos (revisada en 38). En el caso de los ratones, ratas y primates no humanos, ha sido posible correlacionar la mayor incorporacin de DHA en el hipocampo y en la corteza frontal con un mejor desempeo en pruebas realizadas en laberintos elevados con espacios ciegos (39), en el laberinto de agua de Morris (34, 35, 40) o en la caja de Skinner (41). Estos experimentos consisten en la suplementacin de la madre con DHA mediante algunas de las formas de suplementacin que sern discutidas mas adelante y, dependiendo del protocolo, en la evaluacin del contenido de DHA en diferentes tejidos de la madre, en su secrecin lctea y en el cerebro de las cras. En este ltimo caso, se ha analizado el contenido total de DHA, el contenido del cido graso de diferentes segmentos cerebrales, y la presencia del DHA en los diferentes tipos fosfolpidos que forman la estructura lipdica del cerebro (34, 35,42). La suplementacin de las madres se ha realizado durante la etapa gestacional, antes de la etapa gestacional o durante ambos perodos (43). El laberinto elevado con espacios ciegos es una estructura de conductos en forma de cruz que se coloca a cierta altura del suelo siendo dos conductos abiertos y dos cerrados (ciegos). El animal se coloca en el conducto ciego y se evala el tiempo que toma el que el animal perciba que el acercarse a los conductos abiertos constituye un peligro (44). Tambin se evala el tiempo de latencia que media entre el aprendizaje y la prdida de esta habilidad. La utilizacin del laberinto de agua de Morris (45) se basa en la medicin del tiempo que toma un ratn o una rata en conocer donde se encuentra una plataforma sumergida y no visible que le permite al animal salvar un estado de inmersin en el lquido del laberinto. El test mide el aprendizaje espacio-temporal de los animales. En este caso, se ha observado en las cras provenientes de madres suplementadas con DHA un menor tiempo en la adquisicin de la habilidad para aprender a conocer donde est la plataforma que les permite salir del lquido, y un mayor perodo de latencia en la prdida de la habilidad cuando se deja de aplicar el entrenamiento peridico. Los resultados se interpretan como una mayor capacidad de aprendizaje y una mejor retencin o memorizacin de la habilidad adquirida. Recientemente nuestro grupo utiliz la caja de Skinner para evaluar capacidades de discriminacin en las cras de madres suplementadas con DHA. En este test de habilidades se evala el tiempo que le toma a una rata asociar la presin de una palanca con el aporte de alimento, todo esto operado en un contenedor de material sinttico. Una versin ms compleja del test permite asociar la presin de la palanca por parte de la rata slo cuando est prendida una luz de la caja que es accionada por el operador. De esta forma, este test no slo evala la capacidad de aprendizaje y retencin de este, sino adems permite determinar la capacidad de discriminacin en la aplicacin de la habilidad adquirida frente a una variable de mayor complejidad, en este caso la luz. Hemos podido determinar que la suplementacin de la madre con DHA preformado permite a las cras una significativa mayor capacidad de discriminacin que las cras provenientes de madres suplementadas con el precursor LNA y estas a su vez muestran puntajes muy superiores a los animales controles (41). Es interesante destacar que la suplementacin con DHA y LNA permite obtener una acumulacin similar de DHA en los diferentes segmentos cerebrales estudiados (corteza frontal, cerebelo e hipocampo) (42), por lo cual la mejor respuesta de

discriminacin obtenida con la suplementacin con DHA correspondera a una "sintona fina" (modificacin de otros parmetros estructurales y/o bioqumicos) que actualmente estamos estudiando. En el caso de los humanos, diferentes autores (46-48) han correlacionado los mayores puntajes obtenidos por nios de diferentes edades, provenientes de madres que han aportado exclusivamente lactancia natural, o lactancia natural apoyada con frmulas suplementadas con DHA, o slo aporte de frmulas suplementadas con DHA, en la aplicacin de test que determinan habilidades de aprendizaje tales como el test de Kaufman (49), las escalas de Bayley para la evaluacin del desarrollo infantil (50), el test de desarrollo psicomotor de Brunet-Lzine (51, 52), el test de evaluacin de inteligencia de Fagan (53), la capacidad para resolver problemas segn Willatts (54) o la adquisicin de un mejor vocabulario (55). Sin embargo, a diferencia de los protocolos realizados con animales, en los cuales es posible establecer un mejor control en los protocolos y por consiguiente obtener mejores correlaciones entre los resultados, en el caso de los humanos no existe un consenso respecto a la suplementacin postnatal con DHA y un mejor desempeo en actividades relacionadas con el aprendizaje y la evaluacin de inteligencia. Sin embargo, tambin es necesario considerar que se trata solo de protocolos de suplementacin postnatal. En cambio, en los protocolos desarrollados con animales de experimentacin se ha utilizado principalmente suplementacin prenatal, ya sea durante la etapa gestacional o incluso antes del apareo del los animales. Adems, la correlacin entre niveles cerebrales de DHA y habilidades de aprendizaje ha sido mucho mas fina ya que se ha analizado el contenido cerebral del cido graso en diferentes segmentos del tejido. En el caso de los humanos solo es posible correlacionar las pruebas de aprendizaje con los niveles plasmticos y eritrocitarios de DHA, criterio que no es uniformemente aceptado. Otro aspecto derivado de la suplementacin postnatal con DHA, se refiere a un supuesto efecto negativo en el crecimiento de los lactantes pero que no se correlaciona con la adquisicin de mejores habilidades de aprendizaje discutidas anteriormente. Sin embargo, una extensa recopilacin realizada por Lapillone y Carlson (56) sobre los resultados de 32 estudios realizados por diferentes grupos de investigacin y en los cuales se aport suplementacin con DHA y AA en diferente forma, durante diferentes perodos de suplementacin, a lactantes de pretrmino y de trmino, y combinando lactancia materna con la administracin de frmulas suplementadas, no permite obtener resultados concluyentes sobre el efecto de la suplementacin en la ganancia de peso de los lactantes. Esto es, la suplementacin con DHA y AA no afectara el crecimiento normal de los nios.

COMO Y CUANDO SUPLEMENTAR CON DHA

La suplementacin de frmulas con DHA y AA se realiza desde hace muchas aos en pases como Japn, Corea y tambin en Europa y slo a partir de 2002 en Estados Unidos (57), ya que en este pas la discusin y posterior aceptacin del beneficio derivado de la suplementacin tom mucho mas tiempo. Inicialmente se utiliz aceites marinos altamente refinados y desodorizados. Sin embargo, problemas de aceptabilidad y de la composicin del aceite que contiene, adems, cido eicosapentaenoico (C20:5, EPA, omega-3) el que compite metabolicamente con el AA, desmotivaron la utilizacin de estos productos. Posteriormente se utilizaron esteres etlicos del DHA con resultados variables en cuanto a su biodisponibilidad. En la actualidad existen dos formas principales de suplementacin con DHA: como triglicridos ricos en DHA (sobre 40%) obtenidos de microalgas de cultivo, o como fosfolpidos (6% de DHA) obtenidos de la yema de huevos de gallina (4). Los triglicridos de microalgas se utilizan principalmente en Estados Unidos, los fosfolpidos en Europa. En los pases orientales se preparan formulas que utilizan ambas fuentes, adems de algunos productos que incorporan DHA como etilester. Otra modalidad mas reciente como posible producto para suplementar con DHA es en la forma de un monoglicrido que slo contiene DHA como cido graso sustituyente y en una gran proporcin en la posicin sn-2 (central) del glicerol, ya que esta posicin es de mas alta biodisponibilidad (58). Nuestro grupo ha realizado evaluaciones comparativas de la biodisponibilidad de las diferentes fuentes, encontrando que los mejores resultados se obtienen con los fosfolpidos y el monoglicrido (59). Los triglicridos de microalgas tienen menor biodisponibilidad que los anteriores y en el caso de los steres, es mas baja an. Un factor importante a favor de los fosfolpidos es que tambin contienen colina como sustituyente, ya que la colina se requiere en el cerebro para la sntesis de acetilcolina (60), un neurotransmisor importante para la funcionalidad de segmentos cerebrales involucrados en la memoria y aprendizaje como es el caso del hipocampo y el cerebelo (61). Hay evidencias que la colina en la forma de un fosfolpido es mucho mas biodisponible para los tejidos, incluido el cerebro, que la colina como tal (62, 63), por lo cual un fosfolpido que adems de poseer DHA aporte colina podra ser una excelente fuente de ambos nutrientes en las etapas mas crticas del desarrollo cerebral. Otro antecedente importante es que la 2-acil-lisofosfatidil colina, esto es una glicerofosfocolina que posee un cido graso esterificando la posicin sn-2 del glicerol, es eficientemente transportada por la albmina plasmtica y puede traspasar la barrera hematoenceflica con gran facilidad (64). Esto significa que una fosfaditilcolina que contenga DHA como sustituyente en la posicin sn-2 del glicerol, al ser hidrolizada por las fosfolipasas A1 intestinales, se convertir en una sn-2 DHA-lisofosfatidilcolina, molcula que de acuerdo a lo ya comentado sera de alta biodisponibilidad para el cerebro (65). Este antecedente tambin estara a favor del mejor efecto de la suplementacin con DHA a partir de fosfolpidos, particularmente de fosfatidilcolina. Actualmente trabajamos en el desarrollo de una lisofosfatidilcolina que contenga una alta concentracin de DHA a partir de la yema de huevo con alto contenido de DHA.

La suplementacin fue concebida originalmente a travs de las frmulas para la nutricin del lactante, sin embargo actualmente se postula que tanto o mas crtica que la suplementacin durante la lactancia, es el aporte de DHA durante la gestacin (66 - 68), e incluso antes que esta ocurra (4), ya que la mayor incorporacin de DHA al tejido cerebral ocurre en la etapa prenatal (69). Existe an poca informacin sobre la mejor efectividad de una suplementacin prenatal en comparacin con la suplementacin postnatal. Nuestro grupo ha demostrado en modelos experimentales que la suplementacin materna prenatal (antes y durante la gestacin) permite una mayor incorporacin de DHA en diferentes segmentos cerebrales de los fetos y de las cras (59). Mas an, hemos demostrado preliminarmente, que los animales provenientes de madres suplementadas durante el perodo prenatal muestran una mayor capacidad de aprendizaje discriminatorio frente a un test de evaluacin como el de Skinner (41). La suplementacin prenatal puede resultar ms eficiente, segura y de mucho menor costo que la suplementacin postnatal a travs de frmulas, ya que no sera necesario aportar directamente DHA, siendo suficiente un adecuado aporte de su precursor el LNA, el cual est disponible en aceites comerciales de bajo costo (70). An queda mucho por definir en el campo de la suplementacin pre y postnatal, pero la activa investigacin que se realiza sobre el tema con seguridad permitir establecer los mejores protocolos y seleccionar los mejores productos para realizar una efectiva y segura suplementacin perinatal con DHA.