FAMILIA RETROVIRIDAE

Dra. Dora Ruchansky

Prof. Adjunta del Dpto. Bacteriologia y Virologia. Facultad de Medicina U.D.E.L.A.R

FAMILIA

SUBFAMILIA Orthoretrovirinae

GENERO Alpharetrovirus Betaretrovirus Gammaretrovirus Deltaretrovirus Lentivirus Epsilonretrovirus

EJEMPLOS
Virus del sarcoma y leucemia de aves (AVL)*
Virus de tumor mamario de ratn (MMTV)*

Retroviridae

Virus relacionado con leucemia de ratn (Mo-MLV)*

Virus linfotrpico humano de clulas T (HTLV-1, HTLV-2)* Virus linfotrpico bovino ( BLV)* Virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1, HIV-2)* Virus de la inmunodeficiencia Simia (SIV)*

Wally dermal sarcoma virus

Spumaretrovirinae

Spumavirus

Espumavirus Humano (HFV)*

Clasificacin de acuerdo a morfologa: Tipo A: Partculas intracisternales, esfricas de 60-90 nm en dimetro con lumen central, consideradas como formas virales inmaduras no patgenas (A) Tipo B. Virin acntrico, en forma de anillo,(B) Tipo C: Partculas de 90-110 nm de dimetro, nucleocapside central. C Tipo D: Similares a las B con espculas ms prominentes

A B

ESTRUCTURA DE LOS RETROVIRUS

Virus esfrico envuelto Diametro: 90 130 nm Pequeas proyecciones en su superficie Nucleocapside esfrica o en cono truncado 2% de cido nucleico.(2 ARN (+) y 1 ARNt (trp, pro,lys). Su tamao vara entre 8 a 11 kb.

Sigla
MA

Proteina
Matriz

Funcin
Proteina de la matriz (gen gag)

CA
NC PR RT IN SU TM

Capside
Nucleocapside Proteasa Transcriptasa Reversa Integrasa Glicoprotenas de superficie Proteina transmembrana

Proteinas de la capside (gen gag); protege al core.

Proteina de la capside (gen gag); protege al genoma, forma parte del core. Esencial para el clivaje de la proteina Gag durante la maduracin Retrotranscripcin del RNA genmico, tambin tiene actividad RNAsaH Codificada por el gen pol, es necesaria para la integracin del provirus Protenas externas de la envoltura; Antigeno viral muy importante. Interviene en la union al receptor. Glicoproteinas internas de la envoltura madura

VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA

Familia Retroviridae Subfamilia Orthoretrovirinae

Gnero Lentivirus
p10 (PR)
p24 (CA) ARN+

Tipos: VIH-1 y VIH-2

p17 (MA)

Virus esfrico envuelto (90130 nm) Genoma: 2 hebras simples de ARN +

p7 (NC) p66,p51 (RT)

Protenas de Superficie

gp120-gp41 // gp105-gp36
p32 (IN) envoltura

Polimerasas unidas al ARN

p65/51; p31 // p68 p34

gp120 (SU) gp 41 (TM)

Proteinas del Core

p17 -p24 // p16 - p26

Organizacin genmica del HIV-1

ORIGEN DEL VIH

SALTO INTER- ESPECIE DESDE PRIMATES NO HUMANOS
sooty mangabeys
reservorio SIV sm

HIV-2
Pan troglodytes troglodytes
reservorio del SIV cpz

HIV-1

Cmo salt el virus simio (SIV) a los humanos?

Se cree que el virus simio se propag de los chimpancs a los humanos, mediante la matanza de los animales y el consumo de su carne.
Mascotas de primates no humanas.

Diversidad Gentica del VIH

TIPO GRUPO M (mayor) SUBTIPO RECOMBINANTES

HIV-1 P

O (outlier)

A,B,C,D,E,F G,H,I,J,K,L

A/E, B/F, A/G A/G/H/K/U

N (no M, no O)

HIV-2

A,B,C,D,E,F

CICLO DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA

Muerte celular Destruccin sist. Inmunologico

enfermedades oportunistas

Clulas blanco:

SIDA

Linfocitos T CD4, Monocitos, Macrofagos, Cl de Langherans, Cl dendrticas

HISTORIA NATURAL DE LA INFECCION POR VIH

Primoinfeccin Infeccin asintomtica pero progresiva

SIDA

Riesgo de transmisin Diversidad viral

Anticuerpo VIH

Cel T Citotxicas CD8+

Cel T CD4+

4-8 semanas

aprox. 10 aos

2-3 aos

Terapia antirretroviral (TARV)

La finalidad del Tratamiento Antiretroviral (TARV) es reducir al mximo y durante el mayor tiempo la replicacin viral.El otro objetivo es preservar o restaurar el sistema inmune de la persona infectada. Su aplicacin, de acuerdo a las buenas prcticas clnicas ha disminudo la morbimortalidad y ha logrado una sustancial mejora en la calidad de vida y aos de sobrevida de los pacientes.

Inhibidores de la retrotranscripcin

Inhibidores de la Fusin

Inhibidores de la Proteasa

Inhibidores de la Integrasa

FACTORES DE VARIABILIDAD GENETICA DEL VIH

Alta tasa de mutacin:

1 nucletido/genoma/ciclo

Recombinacin:
~ 7-30/genoma/ciclo

Rpida replicacin:
4,4 x 1010/ partculas virales/da

Taylor et al, N Engl J Med 2008;358:1590-602.

FACTORES DE VARIABILIDAD GENETICA DEL VIH

Recombinacin retroviral: Coinfeccin de subtipos distintos

CRF: formas recombinantes circulantes,

URF : formas recombinantes nicas

ESTRUCTURA GENMICA DE LAS FORMAS RECOMBINANTES

CRFs

URFs

http://www.hiv.lanl.gov/content/sequence/HIV/CRFs/CRFs.html

Sin Clasificar

Sin Secuenciar

Impacto de la Variabilidad Gentica en la Epidemia de VIH

Transmisin y Progresin de la enfermedad

Resistencia antirretroviral
Diagnstico y Monitoreo

Formulacin de Vacunas

Evolucin de la Pandemia

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Estudio de respuesta inmune humoral: IgM, IgA, IgG
Test de Tamizaje :

Enzimo inmuno anlisis (EIA) Test rpidos Aglutinacin de partculas

Test Confirmatorios

Western Blot (WB) Ensayo en Lnea (LIA)

Deteccin directa de presencia viral

Estudio de Proteinas virales (Ag p24) Estudio de Acidos nucleicos: ADN proviral

ARN viral

Estudio de respuesta inmune humoral: IgM, IgA, IgG

Los test serolgicos se basan en la interaccin Antgeno Anticuerpo. Test de Tamizaje Son altamente sensibles para poder detectar los Ac en la muestra.

Detectan anticuerpos para HIV-1 y HIV-2 (sin lograr discriminar)

Detectan anticuerpos contra grupo M y O Antgenos: Lisado total de virus, Proteinas recombinantes, Peptidos sintticos Test Confirmatorios Son altamente especficos para confirmar con certeza la presencia de Ac. Especficos contra HIV. Pueden discriminar infeccin por HIV-1 o por HIV-2

EIA 4 GENERACION
Sustrato

Proteinas recombinantes

HIV-2 env HIV-1 env

HIV-1gag

Peptidos sinteticos
Ac paciente Ag viral Ac conjugado

HIV-O

Muy buena especificidad Detecta bajos ttulos de Anticuerpos (seroconversin) Buena sensibilidad para Ac. anti HIV-2 y Ac. anti grupo M y O de HIV-1, Detecta IgG e IgM Detecta Ag virales HIV-1 (grupo M y O)
Soporte Solido

E
HIV-2

HIV-2

TEST RAPIDOS

TEST CONFIRMATORIOS
Western Blot LIA
ID muestra

WB mejorado

3.+ 1+ +/-

gp120
gp 41 p31 p24

P17

Criterios: WB Positivo: p24,gp41,gp120/160 (p24 con al menos otra) WB Negativo: Ausencia total de Bandas

gp105 gp36

Algoritmo para el diagnstico serolgico de la infeccin por VIH

No Reactivo informar
Tcnicas de Tamizaje Reactivo

Laboratorio Perifrico Banco de Sangre

No Reactivo (-/-) informar

2 Tcnicas de Tamizaje
Distinta Configuracin antignica

Laboratorio de Referencia

Reactivo (+/+)

Discordante (+/-)

WESTERN BLOT

INFORMAR

Positivo *

Indeterminado
Repetir serologa en 30 das

Negativo

Aplicacin de Tcnicas de Biologia Molecular en la Infeccin por VIH

ADN proviral PCR (cualitativa) Carga Viral (cuantitativa) ARN viral Test de Resistencia

Aplicacin de Tcnicas de Biologia Molecular en la Infeccin por HIV

Deteccin cualitativa de Acido Nucleico (ADN proviral o ARN viral) Diagnstico en nios nacidos de madres seropositivas. Serologa indeterminada Hipoglobulinemia Deteccin cuantitativa de Acido Nucleico (ARN viral) Carga Viral ( n copias de ARN v/ml) en pacientes infectados Inicio de tratamiento Evaluacin de tratamiento Cambios de tratamiento
Estudios de variabilidad gentica del VIH Caracterizacin molecular de tipos (VIH1-VIH2), subtipos y recombinantes Estudio resistencia a drogas antiretrovirales

infectado

serorrevertido
IgA en sangre: indicador de una respuesta inmunolgica especfica a la infeccin viral en el nio.

Seguimiento en el laboratorio del nio nacido de madre VIH +

48 hs 2 semanas de vida
PCR PCR, Elisa, Western Blot

PCR+PCR Carga Viral Poblacin Linfocitaria PCR + PCR Carga Viral Poblacin Linfocitaria PCR -

1 2 meses de vida

PCR

PCR -

PCR + PCR Carga Viral Poblacin Linfocitaria PCR -

>5 meses de vida

PCR

PCR

PCR PCR + PCR PCR +

PCR -

PCR +

Infeccin poco probable

nueva PCR

infectado

nueva PCR

Seguimiento en el laboratorio del nio nacido de madre VIH + Diagnostico de no infeccin: 3 PCR 2 muestras negativas en dos momentos distintos en nios >1 mes de vida, ms 1 muestra negativa en > 4 meses de vida

Diagnostico de infeccin: 3 PCR +

3 muestras positivas en dos momentos distintos y al menos una de ellas en nios > 4 meses

Diagnostico de serorreversin:
2 o ms muestras con ELISA y Western Blot negativos entre los 6 y 18 meses de edad y dosificacin de inmunoglobulinas normales

En todos los casos seguir con ELISA hasta 18 meses de edad

El LABORATORIO de VIROLOGA EN LA INFECCIN POR VIH EN PEDIATRIA

Diagnostico de la Infeccin por VIH

Nios mayores de 18 meses: ELISA - Western Blot Nios menores de 18 meses: Determinacin Cualitativa ADN proviral ARN viral

Seguimiento de Nios infectados

Carga Viral : n de copias de ARN v/ ml
Inicio de tratamiento

Evaluacin de tratamiento Cambios de tratamiento

Estudio de Resistencia a drogas antirretrovirales

Distribucin mundial de nios y adultos viviendo con VIH / 2009 Principales vas de transmisin por regin.

Amrica del Norte

Europa occidental y central

Europa oriental y Asia central

1,5millones
HSex, HSH, UDI Caribe

820 000
HSH, UDI
frica del norte y Oriente Medio

1,4 millones
UDI

Asia oriental

770 000
HSex, UDI, HSH Asia meridional y sudoriental

240 000
HSex, HSH Amrica Latina

460 000
HSex, UDI frica subsahariana

4,1millones
HSex, UDI Oceana

1,4 millones
HSex, HSH, UDI

22,5 millones
HSex

57 000
HSH

Total: 33,3 (31,4 35,3) millones

HSex: Heterosexual, HSH: hombres que tienen relaciones sexuales con hombres, UDI: Usuarios de Drogas Inyectables.

Distribucin Geogrfica del VIH Tipos, Subtipos y CRFs

A A

B,A,C,D,G

A,B

A,C,D,F

A,D,E,O

A,B
B

A,B B,D

A,B, C,D B
,C

B/F
CRF B/C

VIH-1 VIH-2

Epidemia de VIH en Uruguay

Epidemia Concentrada:
baja prevalencia en poblacin total (< al 1% )y la prevalencia mayor de 5% en grupos de poblacin clave.

Total de casos notificados a

7/ 2010: 13405 (VIH = 9443; SIDA = 3962) Prevalencia en Poblacin general: 0,42% (2008)

Prevalencia en poblaciones vulnerables:

- UDI = 18.5% (2004) - Usuarios cocana no inyectable: 9.5% (2004) - Trabajadores sexuales masculinos: 19.3% (2008-09) - Trans 36.5% - HSH: 9% (2008-09) - PPL: 5.5% (2008)

MSP. ONUSIDA. PITS/SIDA. FCS. OPS. 2008/2009. Informe Epidemiolgico VIH/SIDA, DEVISA. MSP, 2010.

Epidemia de VIH en Uruguay

En relacin al anlisis geogrfico, 75% de los casos de VIH notificados en Montevideo 25% restante al interior, (> Canelones y Maldonado; siguen Rivera, Tacuarembo, Paysand y Colonia.

En relacin al sexo (casos notificados 1/2005- 7/2010)

54.1% poblacin de varones 45.9% poblacin de mujeres

En relacin a la edad
Edad de mxima incidencia entre 25 y 34 aos, aunque afecta a todos los grupos etarios.

Mecanismos de Transmisin VIH en Uruguay

Sexual

Sangunea Vertical

Informe Epidemiolgico ITS -VIH/Sida Diciembre 2010

Epidemia de VIH en Uruguay Distribucin porcentual de genotipos*

Subtipo B 45,6 %
89

71
90 99

Recombinantes BF 50,9% Subtipo C 1,16 %

0.01

9 9 99

9 4

K F2 H G Subtipo F1 HJ 1,16% A Subtipo A1 2 0,58 %

Subtipo D 0,58 %

*Ruchansky,D, et al. XVCongreso Panamericano de Infectologia Uruguay 2011#SP1A006 Ruchansky D et al. 2009 AIDS Res Hum Retroviruses 25, 351-6.

Objetivos de la estrategia de ONUSIDA para 2015:

Reducir a la mitad la transmisin sexual del VIH, tambin entre los jvenes, los hombres que tienen relaciones sexuales con hombres y dentro del contexto del trabajo sexual. Eliminar la transmisin vertical del VIH y reducir a la mitad la mortalidad materna relacionada con el sida. Prevenir todas las nuevas infecciones por el VIH entre usuarios de drogas. Acceso universal a la terapia antirretrovrica para las personas que viven con el VIH que son elegibles para recibirla. Reducir a la mitad las muertes por tuberculosis en personas que viven con el VIH. Incluir en las estrategias de proteccin social nacionales a las personas que viven con el VIH y a los hogares afectados por el virus, quienes adems tienen acceso a servicios de atencin y apoyo esenciales. Reducir a la mitad el nmero de pases con leyes y prcticas punitivas en torno a la transmisin del VIH, el trabajo sexual, el consumo de drogas o la homosexualidad que bloquean las respuestas efectivas. Eliminar en la mitad de los pases que las imponen las restricciones en la entrada, estancia y residencia relacionadas con el VIH. Abordar las necesidades relacionadas con el VIH de mujeres y nias en, al menos, la mitad de las respuestas nacionales al VIH. Tolerancia cero con la violencia de gnero.

Bibliografa:
Temas de Bacteriologa y Virologa Mdica. 3 Edicin. 2008 Oficina del Libro FEFMUR
Fields Virology. David M. Knipe and Peter M. Howley. Fifth edition. Lippincott Williams and Wilkins. 2007. HIV/AIDS epidemiology, pathogenesis, prevention, and treatment. Lancet. 2006 Aug 5 ;368(9534):489-504. The challenge of HIV-1 subtype diversity. Taylor BS, Sobieszczyk ME, McCutchan FE, Hammer SM. N Engl J Med. 2008 Apr 10; 358(15):1590-602. http://www.msp.gub.uy/homepidemiologia_198_1.html http://www.unaids.org/es/