UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACUL-

TAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA ESCUELA DE FAR-

MACIA Y BIOQUMICA

PROYECTO DE TESIS I

Efecto del extracto etanlico de hojas de Passiflora tripartita var. mollisima en

ansiedad de Mus musculus var. albinus evaluada por el mtodo Luz - Oscuridad

AUTORES:

CALDAS ABURTO, Damian Abrahan

CASTILLO OLIVARES, Emerson Manuel

ASESORA:

Dra. MARN TELLO, Carmen Luisa

Trujillo- Per

2017

1
 I. GENERALIDADES

1. TITULO

Efecto del extracto etanlitco de hojas de Passiflora tripartita var. mollisima en ansiedad de Mus
musculus var. albinus evaluada por el mtodo Luz-oscuro

2. PERSONAL DE INVESTIGACION

2.1. Autores.

CALDAS ABURTO, Damian Abrahan

Estudiante del XI ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad

Nacional de Trujillo.

Cdigo: 1051102511

CASTILLO OLIVARES, Emerson Manuel

Estudiante del XI ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad

Nacional de Trujillo.

Cdigo: 1021100811

2.2. Asesora:

Dra. MARN TELLO, Carmen Luisa

Ctedra: Fisiologa Humana y Fisiopatologa

Departamento Acadmico de Farmacologa

Facultad de Farmacia y Bioqumica, UNT

2
 3. TIPO DE INVESTIGACIN:

3.1. De acuerdo a la orientacin:

Aplicada.

3.2. De acuerdo a la tcnica de orientacin:

Experimental.

4. RGIMEN DE INVESTIGACIN:

Orientada.

5. INSTITUCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO

5.1. Departamento Acadmico de Farmacologa.

5.2. Facultad de Farmacia y Bioqumica.

5.3. Universidad Nacional de Trujillo

6. LOCALIDAD E INSTITUCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO

6.1. Localidad:

Provincia de Trujillo, Departamento de La Libertad.

6.2. Institucin:
Universidad Nacional de Trujillo.
Facultad de Farmacia y Bioqumica.

7. DURACIN TOTAL DEL PROYECTO

El tiempo de duracin ser de 2 meses.

8. FECHA DE INICIO
Supeditado a la aprobacin del proyecto.

3
 9. FECHA DE TRMINO

Supeditado a la aprobacin del proyecto.

10. CRONOGRAMA DE TRABAJO

Tiempo de duracin Horas semanales

ETAPAS
(Semanas) (Horas)
Recoleccin de datos 2 semanas 6

Anlisis de datos 3 semanas 8

Elaboracin del
3 semanas 8
informe
Total 8 semanas 22

11. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO

Autor: 06 horas semanales

Asesor: 02 horas semanales

12. RECURSOS DISPONIBLES

12.1 Personal investigador

- CALDAS ABURTO, Damian Abrahan

- CASTILLO OLIVARES, Emerson Manuel

12.1.2Asesor

- Dra. MARN TELLO, Carmen Luisa

12.2. Material y equipos.

4
 12.2.1. Material biolgico.
24 Mus musculus var. albinus
12.2.2 Material de Vidrio:
- El de uso comn de laboratorio.
12.2.3Equipo
- Equipo de destilacin simple
- Equipo de filtracin al vaco
- Equipo de secado
12.2.4 Material Qumico:
- Agua potable
- Agua destilada
- Alcohol etlico 70
- Suero fisiolgico
12.2.5 Otros:
- Jaulas para ratones.
- Comedero
- Candados pequeo 5cm
- Alimento para ratones
13. Local:

Laboratorios de Farmacologa, Toxicologa y bioterio. Facultad de Farmacia y

Bioqumica.

Laboratorio de Operaciones Instrumentales. Facultad de Ingeniera Qumica

5
 14. PRESUPUESTO:
CODIGO DESCRIPCION CANTIDAD PRECIO TOTAL
UNITARIO
2.3 BIENES Y SERVICIOS
2.3.11.1 ALIMENTOS Y BEBIDAS PARA EL CONSUMO HUMANO
2.3.11.11 Almuerzo 27 6.00 162.00
Bebidas 27 1.50 40.50
202.00
ALIMENTOS Y BEBIDAS PARA EL CONSUMO ANIMAL
2.3.11.12 Maz y concentrado 3.6 kg 1.50 5.40
5.40
2.3.15.1 MATERIALES Y UTILES DE OFICINA
2.3.15.12 Papel bond 1M 12.00 12.00
Memoria USB 1u 25.00 25.00
Lapiceros 9u 1.00 9.00
Lpiz 9u 0.50 4.50
Corrector 1u 2.50 2.50
Borrador 4u 0.50 2.00
Calculadora 1u 35.00 35.00
Folder manila 5u 0.50 2.50
1 cuaderno de notas 1u 1.50 1.50
Marcador indeleble 1u 2.50 2.50
97.00
2.3.15.31 ASEO LIMPIEZA Y TOCADOR
Jabn liquido 1u 5.00 5.00
Toalla de manos 6u 1.50 9.00
14.00
2.3.1 8.2 MATERIAL INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCESORIOS MEDICOS,
QUIRURGICO ODONTOLOGICOS Y DE LABORATORIO
2.3.18.21 Algodn 100g 3.50 3.50
Guantes descartables 30u 0.50 10.00
Violeta de genciana 2u 1.00 2.00

6
 Jeringas tuberculinas 30u 4.00 6.00
Gasa 2u 2.00 4.00
25.50
2.3.18.1 PRODUCTOS FARMACEUTICOS
2.3.18.12 Diazepam Ampolla 1u 1.5 1.50
5mg /2ml
1.50
2.3.110.1 SUMINISTRO PARA USO AGROPECUARIO, FORESTAL Y VETERINA-
RIO
2.3.110.12 Hojas de Passiflora 500g 50.00 50.00
trpartita var. mollisima
2.3.110.13 Mus musculus var. al- 24 U 7.00 168.00
binus
218.00
2.3.199.1 COMPRA DE OTROS BIENES
Goteros 3u 0.5 1.5
Impresiones 150u 0.1 15
Agua destilada 3L 1 3
Cloruro de sodio al 1u 5 5
0.9%
Jaulas 4u 20 80
Jeringas descartables 30 0.6 18
Guantes Quirrgicos 12 1.0 12
7 1/2
Caja fabricada de me- 1u 30 30
lamine (46X27X30 cm
de alto)
164.5
2.3.21.2 VIAJES DOMESTICOS
2.3.21.21 Pasaje urbano 120u 0.70 84.00
2.3.21.299 Viajes 1 viajes 100.00 100.00
184.00

7
 SERVICIOS DE TELEFONIA E INTERNET
2.3.22.21 Telefona mvil 50 min 0.50 25.00
2.3.22.23 Internet 65 hrs 1.00 65.00
90.00
PRESUPUESTO TOTAL
2.3 BIENES Y SERVICIO 207.40
2.3.15.1 MATERIALES Y UTILES DE OFICINA 97.00
2.3.15.31 ASEO LIMPIEZA Y TOCADOR 14.00
2.3.1 8.2 MATERIAL INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCE- 28.50
SORIOS MEDICOS, QUIRURGICO ODONTOLOGI-
COS Y DE LABORATORIO
2.3.18.1 PRODUCTOS FARMACEUTICOS 1.50
2.3.110.1 SUMINISTRO PARA USO AGROPECUARIO, FO- 218.0
RESTAL Y VETERINARIO
2.3.199.1 COMPRA DE OTROS BIENES 164.50
2.3.21.2 VIAJES DOMESTICOS 184.0
2.3.22.2 SERVICIOS DE TELEFONIA E INTERNET 90.0
TOTAL 1004.40

15. FINANCIAMIENTO

Con recursos propios

Recursos de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo

Proyecto Canon Minero PIC 001-2013. UNT Etnobotnica,Taxonoma, Farmacologa,

Fitoqumica y Biocomercio de Plantas con Aplicacin. Biomdica de Cachicadn. La
Libertad

8
 II. PLAN DE INVESTIGACIN

1. REALIDAD PROBLEMTICA
Toda enfermedad y el mismo hecho de enfermar tienen aspectos psicolgicos y sociales que influyen
en la aparicin, manifestacin, curso y pronstico, por lo que es muy importante tratar de establecer
relaciones entre aspectos psicolgicos, sociales y biolgicos como desencadenantes de una
enfermedad, ms que una relacin nica de causa-efecto. Los pacientes experimentan un nmero
importante de reacciones emocionales antes y despus de procedimientos mdicos, que pueden ser
de ansiedad (producida por un miedo al dolor o incertidumbre ante el futuro), o de depresin o
problemas de adaptacin (segn las expectaciones que tuviera cada individuo) o de rebelda (frente
a un destino no deseado). Lo ms comn es que se tenga miedo a lo desconocido, al dolor, a la
posibilidad de tener una enfermedad incurable, a la destruccin del cuerpo o a la prdida de
autonoma o miedo a la muerte1.

La ansiedad es muy antigua. Sus orgenes fitogenticos se remontan a los del propio reino animal,
y los filsofos y pensadores han escrito largo y tendido sobre la importancia capital de la ansiedad
para la vida y la experiencia humana. La experiencia de la ansiedad es ubicua y universal, y tras-
ciende pocas y culturas1.

Proviene del latn anxietas, refiriendo un estado de agitacin, inquietud o zozobra del nimo, y
suponiendo una de las sensaciones ms frecuentes del ser humano, siendo sta una emocin
complicada y displacentera que se manifiesta mediante una tensin emocional acompaada de un
correlato somtico. En general, el trmino ansiedad alude a la combinacin de distintas
manifestaciones fsicas y mentales que no son atribuibles a peligros reales, sino que se manifiestan
ya sea en forma de crisis o bien como un estado persistente y difuso, pudiendo llegar al pnico; no
obstante, pueden estar presentes otras caractersticas neurticas tales como sntomas obsesivos o
histricos que no dominan el cuadro clnico. Hoy da, los trastornos de ansiedad constituyen el
problema psicopatolgico de mayor prevalencia en los pases de nuestro entorno. Aunque la
investigacin sobre las causas de estos trastornos y sobre sus tratamientos efectivos han sido
abundante a lo largo del siglo veinte, todava se desconocen mucho aspectos relevantes para la

9
prctica clnica relativos a la psicopatologa especfica de cada trastorno, a los indicadores de
adherencia al tratamiento, o a la eleccin del tratamiento ms efectivo para cada tipo de trastorno y
para cada paciente. Tal vez el problema central en el abordaje clnico de los trastornos de ansiedad
sea el encontrar un modelo terico comprehensivo y una metodologa de investigacin rigurosa que
permita conectar el estudio de la ansiedad patolgica con el estudio experimental de los procesos
emocionales y afectivos normales. Sin duda, los avances en la investigacin reciente sobre la
emocin, fundamentalmente desde las perspectivas psicobiolgica y psicofisiolgica, estn
abriendo nuevas vas de comprensin de los mecanismos que subyacen a los procesos emocionales
normales y patolgicos, incluyendo los trastornos de ansiedad, necesarios para orientar las
intervenciones clnicas2,3.

Las Benzodiacepinas (BZD) son los psicofrmacos ms prescritos. Surgieron en la dcada de los 60
como medicamentos ms eficaces y con mejor perfil de seguridad que sus antecesores, los bar-
bitricos. Con las BZD pareci iniciarse (y de hecho lo fue) una nueva era en relacin a los barbit-
ricos. Las BZD comenzaron a usarse ampliamente por presentar un mejor perfil de seguridad, y
fueron los primeros medicamentos en establecer una brecha cualitativa entre su efecto ansioltico e
hipnosedante, base para posteriores avances teraputicos.Si bien actualmente han surgido
alternativas aparentemente ms eficaces para el tratamiento crnico de los trastornos primarios de
ansiedad, como los inhibidores selectivos de la recaptacin de serotonina (ISRS), as como otras
terapias no farmacolgicas (particularmente de tipo cognitivoconductual), las BZD siguen siendo
ampliamente utilizadas en la prctica clnica,e grupo de frmacos, ejerce sus efectos fisiolgicos
mediante su unin a una subunidad del receptor GABA, que consta de un canal inico (de Cloruro)
y varias sub-unidades que se fijan a diferentes sustancias: una subunidad se fija al alcohol, otra a las
BZD y otra a los barbitricos4,5.

El sitio de unin especfico a las BZD en el receptor GABAA es llamado sitio de unin
benzodiacepnico, y est constituido de manera principal por el aminocido histidina en la posicin
101 de la subunidad 1 y en sitios homlogos de las dems subunidades 1. La substitucin de este
aminocido por algn otro en esta posicin evita el efecto farmacolgico de las BZD. Los ligandos
de estos sitios no estn limitados a los frmacos de estructuras benzodiacepnicas. Otros frmacos
como el zolpidem y la zopliclona se unen tambin a este sitio benzodiacepnico. El mecanismo de
activacin del receptor GABAA, tanto por benzodiacepinas como por no benzodiacepinas,
aparentemente es el mismo6.

La accin farmacolgica que llevan a cabo las BZD depende del tipo de subunidad que contenga

10
el receptor GABAA. El sitio receptor a benzodiacepinas de la subunidad 1 es el ms abundante en
el Sistema Nervioso Central, y regula las acciones anticonvulsivas, hipnticas y sedantes de las
BZD; esta subunidad se expresa principalmente en las cortezas del cerebro y del cerebelo. El sitio
receptor a BZD de la subunidad 2 regula las acciones ansiolticas y su expresin predomina en la
amgdala del lbulo temporal (particularmente en el ncleo central), el hipocampo y el cuerpo
estriado. El sitio benzodiacepnico de la subunidad 3 se conoce tambin como receptor perifrico,
la accin farmacolgica de las BZD sobre esta subunidad est relacionada con el efecto relajante
muscular. La localizacin de las subunidades 1, 2 y 3 son principalmente sinpticas, mientras
que la subunidad 5 (relacionada tambin con el efecto relajante muscular) tiene una localizacin
predominantemente extrasinptica6.

El uso y prescripcin de las BZD se ha relacionado con un alto riesgo de abuso y dependencia debido
a su manejo inadecuado ya que, aun administradas regularmente a niveles teraputicos, poseen un
potencial de dependencia mayor que otros frmacos de accin ansioltica. Es un trastorno conductual
en el cual, como resultado de los efectos biolgicos de una determinada sustancia, una persona tiene
disminuido el control sobre el consumo de esta. Los psicofrmacos, usados para tratar los problemas
mentales, son los ms susceptibles de causar farmacodependencia.Las benzodiazepinas (BZD) son
usadas en la prctica mdica y estomatolgica como terapia para la ansiedad, el insomnio y otros
estados afectivos. Los individuos que abusan de drogas estimulantes se administran con frecuencia
este medicamento para calmar su estado anmico. Los datos sobre la prevalencia de su consumo
muestran variabilidad entre los pases, en general reflejan una tasa elevada de consumo. Por
ejemplo, en el ltimo ao, en los pases occidentales, entre 10 y 20% de la poblacin reconoce el
consumo de BZD y entre 1 y 3% las ha consumido diariamente por ms de un ao 7

El uso teraputico de plantas medicinales, como sustitutas de las medicinas farmacuticas, se aplica
desde la antigedad para curar o aliviar las enfermedades, dando lugar a los fitofrmacos, y es
apreciada por su costo bajo y por los reducidos ndices de toxicidad, en comparacin con los
productos de sntesis8.

En la actualidad existe gran inters por la medicina tradicional y, dentro de esta, la medicina
herbaria, que ha generado numerosos estudios, divulgados en prestigiosas publicaciones. Pero, hay
poco uso de medicamentos de origen vegetal por pate de los profesionales de la salud; sus
tratamientos estn basados nicamente en frmacos sintticos, incluso, en el tratamiento de
problemas de salud diagnosticados como enfermedad leve8.

Passiflora tripartita. var. mollissima es una planta con origen del continente Americano, distribuye

11
en zonas fras de los Andes de Sur Amrica. El taxo se produce en Colombia, Venezuela, Bolivia y
Per. Se ha convertido en una de las frutas tropicales ms apreciadas. La variabilidad gentica en
esta especie es muy alta, por lo que se encuentra una gran heterogeneidad de plantas y frutas9.
La parte de la planta del gnero Passiflora que contiene los principios activos que ejercen el efecto
ansioltico es la parte area. Las flores contienen trazas de alcaloides indlicos (harmano), derivados
flavnicos (quercetol, luteolol), flavonoides (crisina, vitexina,) cumarinas, cidos fenlicos y aceites
esenciales. Los compuestos que supuestamente tienen la responsabilidad de la actividad ansioltica
son alcaloides indlicos (harmano) y el flavonoide (crisina).La crisina es un flavonoide que se
encuentra en la familia Passifloracea. En la medicina tradicional estas plantas se han usado como
sedantes y ansiolticos naturales. En la actualidad varios estudios han reconocido la presencia de
flavonoides como la crisina, que poseen afinidad por el receptor GABA, por lo tanto armonizan la
actividad de los canales de Cl- en las neuronas ejerciendo efectos ansiolticos. Algunos estudios
tambin dan a conocer que este flavonoide, a diferencia del Diazepam, no produce efectos
amnsicos sobre la ganancia o detencin de tres diferentes conductas aprendidas en las ratas, incluso
en dosis altas9.
Este alcaloide indlico el harmano se describe en el gnero Passiflora en la dcada de 1950, y su
biosntesis de L-triptfano se ha propuesto por Slaytor y McFarlane en 1968. Tiene actividad sedante
o hipntica; interacta con una variedad de sistemas de neuroreceptores, y es inhibidores de la mono
amino oxidasa (MAO) enzima9.
La ansiedad ha sido estudiada extensamente en modelos animales y existen ms de treinta utilizados.
Algunos recurren a respuestas condicionadas y otros modelos utilizan respuestas ms naturales de
la especie por lo cual son considerados modelos etolgicos o de respuestas no condicionadas. Las
primeras requieren necesariamente del entrenamiento exhaustivo de los animales, que son expuestos
a estmulos no habituales para determinar efectos sobre la memoria/ aprendizaje, el apetito o la
funcin perceptual. Por el contrario, las pruebas no condicionadas no requieren de entrenamiento,
por lo que son menos sensibles a procesos motivacionales y se basan en respuestas espontneas de
la conducta del ratn; stas han permitido el desarrollo de una serie de paradigmas basados en la
observacin de una variedad de conductas del roedor y la mayora de los procedimientos
conductuales para el estudio farmacolgico de la ansiedad se basan en este tipo de pruebas. Entre
las pruebas de mayor uso se encuentran: la de campo abierto, del laberinto elevado, de la caja
luz/oscuridad, de choque/enterramiento, de enterramiento de canicas y del plataforma agujereada.
Estas pruebas no requieren de un alto costo econmico para su implementacin y estn al alcance
de cualquier laboratorio universitario de investigacin10, 11.

12
 2. ANTECEDENTES

El principal uso del gnero Pasiflora es alimenticio, como fruta fresca o jugo. Sin embargo, existen
especies silvestres y cultivadas con propiedades medicinales en hojas, flores y frutos, asociadas
con efectos antioxidantes, sedativos, antiansiedad y anticonvulsivo Adems, algunas presentan
compuestos utilizados en la industria cosmtica para la fabricacin de productos de importancia
comercial, mientras que otras son empleadas como especies ornamentales debido a la belleza
extica de sus flores. Por lo anterior, las tacsonias o curubas son uno de los grupos ms promisorios
dentro de las pasifloras por compartir las caractersticas antes mencionadas12.

Existen algunas investigaciones acerca del extracto de hojas, flores de Passiflora manicata y
Passiflora tripartita via oral en ratones Mus musculus tales como la efectuada en la facultad de
Ciencias Escuela de Farmacia y Bioqumica. Escuela Superior Politcnica de Chimborazo
Riobamba-Ecuador donde se ha comprobado la actividad ansioltica del extracto de Passiflora
manicata y tripartita se evidenci el mejor extracto con actividad ansioltica, en el ensayo de
laberinto elevado considerando la variable tiempo total de permanencia en brazos abiertos fue
el de hojas de Passiflora tripartita en extracto acuoso y flores de P. tripartita en metanol. En
general el top tres de los extractos usados son en primer lugar en extracto de hojas de P. tripartita
en metanol, en segundo lugar el de hojas de P. manicata en metanol y en tercer lugar el de flores
de P. tripartita en metanol13.

Adems otro estudio realizado en Facultad de Qumica Farmacutica, Universidad de Antioquia,

Medelln- Colombia. El uso local presenta las hojas de maracuy como tranquilizante. Rodrguez et
al. (2008) han reportado que el extracto de Passiflora lquido (60 gotas en combinacin con cloidina
0,8mg/da) parece ser significativamente mejor que la cloidina sola, cuando se utiliza para reduccin
de sntomas como la ansiedad, irritabilidad e insomnio. Este efecto puede verse relacionado con los
flavonoides presentes en las hojas14.

As como otro estudio realizado en la facultad de Ciencias Escuela de Farmacia y Bioqumica. Es-
cuela Superior Politcnica de Chimborazo Riobamba-Ecuador donde se logr comprobar el efecto
ansioltico de la flor de taxo Passiflora tripartita. var. Mollissima en ratones (Mus musculus) utili-
zando el Test de Laberinto Elevado el test de Actividad Exploratoria (laberinto), Test de Curiosidad,
Test de Incapacitacin Motriz (Chimenea) y Test de Actividad Miorelajante (Rota-Rod)15.

13
3. JUSTIFICACION

La ansiedad es uno de los trastornos psicolgicos que ms se registra, afectando al 20% de la

poblacin mundial siendo los pases desarrollados como estados Unidos considerado como el
trastorno mental ms comn existen en una poblacin entre los 18 y 54 aos de edad. Con mayor
registro en los centros de salud y con mayor presencia en al mbito universitario. Cuando se
mantiene en unos niveles equilibrados resulta beneficiosa, pues ayuda por a afrontar los retos que
se presentan en la vida universitaria. Sin embargo, si es excesiva puede tener efectos insidiosos en
la trayectoria del estudiante, con descenso de su rendimiento acadmico, deterioro de sus relaciones
interpersonales y de su salud. Las benzodiazpinas son las principales drogas en la terapia de los
trastornos de la ansiedad, Los mdicos suelen ser los que inician la prescripcin de estos frmacos
y luego el paciente contina con patrones de uso y automedicacin, olvidando que estos
medicamentos poseen el riesgo de crear dependencia, tolerancia y posibilidad de inducir sntomas
de abstinencia.

Las hierbas medicinales son hoy en da muy populares y se ha generalizado su uso para paliar
sntomas de alteraciones fisiolgicas. Muchos trastornos psicolgicos tienen asociadas
manifestaciones fisiolgicas que encajan en las normalmente tratadas con hierbas medicinales.
Como el caso de la planta que tiene efectos calmantes, induce el sueo y alivia los espasmos
musculares. Se encuentra en productos herbales que se usan como sedantes para promover la calma
y la relajacin. De hecho, muchos frmacos tienen esta doble indicacin; insomnio y ansiedad, por
ejemplo las benzodiacepinas.

El tratamiento con hierbas medicinales se le supone menos efectos secundarios y una eficacia, al
menos, moderada. Pero para poder afirmar esto han de hacerse estudios controlados en los que se
comparen los efectos del tratamiento con estas sustancias. Por esta razn es que en la presente
investigacin se pretende determinar los efectos del extracto etanolico de Passiflora tripartita var.
millosima como medicamento en la ansiedad.

4. PROBLEMA

Cul es el efecto del extracto etanlico de las hojas de Passiflora tripartita var. mollisima en la
ansiedad de Mus musculus var albinus al ser evaluada por el mtodo de luz oscuridad?

5. HIPOTESIS

14
 El extracto etanlico de las hojas de Passiflora tripartita var. mollisima posee efecto ansioltico
en Mus musculus var albinus al ser evaluada por el mtodo de luz oscuridad

6. OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL

- Determinar el efecto del extracto etanlico de Passiflora tripartita var. mollisima en Mus
musculus var albinus evaluada por el mtodo de luz-oscuridad

OBJETIVO ESPECIFICO

- Evaluar el efecto del extracto etanlico de Passiflora tripartita var. mollisima a la dosis de

50 y 100 mg/kg en la ansiedad de Mus musculus var albinus.

- Comparar el efecto del extracto etanlico de Passiflora tripartita var. mollisima y

Diazepam en ansiedad de Mus musculus var albinus.

7. VARIABLES:

- Variables independientes:

Dosis de extracto etanlico de Passiflora Tripartita var. mollisima

- Variables dependientes:

Ansiedad

III. MATERIAL Y MTODO

1. MATERIAL:
1.1 MATERIALES PARA EL ANLISIS:
1.1.1 Material botnico:

Se emplear las hojas de Passiflora tripartita var. mollisima obtenida en las laderas
del cerro la botica distrito de Cachicadn Santiago de chuco -La Libertad.

Se recolectara a las horas de 6:00am a 9:00 am. Luego se proceder a la

identificacin taxonmica en el herbario de la Universidad Nacional De Trujillo.

15
 1.1.2 Material biolgico:

Se utilizarn 24 animales de experimentacin Mus musculus var. albinus, machos,

adultos, aparentemente sanos, con un peso corporal promedio de 20 a 30 g
procedentes del bioterio de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad
Nacional de Trujillo-La Libertad.

Todos los animales sern sometidos con anterioridad a un mismo tipo de

alimentacin. En todo momento se seguirn los Principios ticos Internacionales
para Investigacin Biomdica con Animales del CIOMS.

CIOMS es una organizacin cientfica (internacional y no gubernamental)

establecida por la Unesco y la OMS en 1949. 16

1.1.3 Material De Laboratorio:

- El de uso comn en el laboratorio

- Algodn

- Agujas N 23

- Jeringas descartables de 1 y 5 mL

- Placas petri

- Jaula para ratones

1.1.4 Material qumico y/o farmacolgico:

- Diazepam en ampolla al 0.5 % .MEDIFARMA. Lote : 1050345

- Cloruro de sodio al 0.9%

1.1.5 Instrumentos y equipos de laboratorio:

- Rotvapor " Heidolph"

- Estufa de laboratorio "Memmert"

- Balanza de plstico

- Caja (46X27X30 cm de alto)

16
 1.1.6 Reactivos:

- Violeta de genciana BREMER. Lote :125-22014

- Etanol 96 G.L. MIFARMA. Lote: R1070606

- Agua destilada. LABOT. Lote: 140542

2 METODO:

2.1 TIPO Y DISEO DE ESTUDIO

Tipo de estudio: Experimental

Diseo de estudio: Con estmulo creciente

GB GBS
GD GDX
GP1 GPZ1
GP2 GPZ2

Leyenda:

GB: Grupo Blanco, Conformado por 6 ratones que recibir 1ml/kg de suero fisiolgico
va intraperitoneal.

GD: Grupo Diazepam, Conformado por 6 ratones que recibir diazepam, diluido en
solucin salina (0.9%) en una dosis 1mg/kg por va intraperitoneal

GP1: Problema 1, conformado por 6 ratones que recibir 50mg/kg de extracto etanlico

de Passiflora tripartita var. mollisima, diluido en solucin salina (0.9%), por va

intraperitoneal

GP2: Problema 2, conformado por 6 ratones que recibir 100mg/kg de extracto etanlico

de Pasiflora tripartita var. mollisima, diluido en solucin salina (0.9%), por va

intraperitoneal

s: cloruro de sodio 0.9 %

17
 x: Diazepam a 1 mg/kg

z1: Passiflora a concentracin 50mg/kg

z2: Passiflora a concentracin 100mg/kg

2.2 METODOLOGIA DEL TRABAJO

2.2.1 Recoleccin, identificacin y tratamiento de la planta.

2.2.1.1 recoleccin, identificacin taxonmica

La planta ser recolectada del cerro Botica del distrito de Cachicadn. Provincia de
Santiago de Chuco.Ser identificada en el Herbario Truxillense de la Universidad
Nacional de Trujillo.

2.2.1.2 tratamiento de la planta.

Las hojas sern seleccionadas luego deshidratadas en el estado natural bajo sombra,
por un tiempo de 96 horas. Posteriormente sern sometidas a una molienda
utilizando un molino mecnico, se proceder a tamizar para igualar el tamao de
partculas y se almacenar en un recipiente color mbar21. (Bruneton j.
Farmacognosia. Fotoqumica. Plantas medicinales. (2 ed). Ed. Acrribia.
Zaragoza. Espaa. 2001.)

2.2.2 Elaboracin del extracto y anlisis fotoqumico de la planta:

2.2.2.1 Elaboracin del extracto etanlico. (gil)

Se realizar una maceracin de 97g de muestra seca pulverizada con 2L

de etanol al 45 % por 7 das a temperatura ambiente agitndose
ocasionalmente.

Luego la muestra se llev a un tratamiento con rota evaporador para

eliminar el solvente (alcohol) y se obtuvo un extracto blando ms
concentrado. El extracto se distribuir en placas Petri aproximadamente

18
 con 20 ml del extracto cada placa que posteriormente se llev a la estufa
a 37 C durante 48 horas para eliminar la humedad restante. El extracto
se almacenar en las mismas placas en un ambiente que mantenga su
esterilidad, oscuro y seco para su conservacin. Finalmente, para su
utilizacin a la cantidad necesaria que se administrara empleando
solucin salina fisiolgica.

2.2.2.2 Anlisis fotoqumico:

El anlisis fitoquimico fue proporcionado por el proyecto financiado por el canon

minero denominado Etnobotanica, taxonoma, farmacologa, fitoquimica y
valorizacin de plantas con aplicacin biomdica de cachicadan. La Libetad

Universidad Nacional de Tujillo. PIC:320213201.2013.

2.3 Administracin Va intraperitoneal:

(Marn C.CONCYTEC. Informe de Pasantia post doctoral: Efecto biolgico de

metabolitos secundarios de pasiflora tripartita, pasiflora incarnata y mycianthes
myrsinoides en ratones. Universidad de Limoges. Francia. 2016.)

2.3.1 Clculo y preparacin de la dosis de pasiflora tripartita var. mollisima

Se trabajar con la dosis de 100 mg/ kg pasiflora. En donde el grupo seleccionado de

ratones pesara un promedio de peso corporal, se utiliza la regla de tres simple (se
multiplico x 100 mg/ kg de la dosis a emplear y se divide entre los 1000g de peso
corporal estndar). La cantidad resultante es la dosis perteneciente a un ratn, pero se
calcular supuestamente para 10 ratones entonces se multiplica por 10, esta cantidad
saliente en mg se pes del extracto etanolico seco y se colocar en un vial, luego se
agrega 2 gotas de alcohol y 1 ml de suero y se agitar, finalmente se cargar en una
jeringa de 1ml de la cual se aplicar 0.1 mL de extracto V.I.P

De similar forma, se trabajar con la dosis de 50 mg/ kg pasiflora. En donde el grupo

seleccionado de ratones pesara un promedio de peso corporal, se utiliza la regla de tres

19
 simple (se multiplico x 50 mg/ kg de la dosis a emplear y se divide entre los 1000g de
peso corporal estndar). La cantidad resultante es la dosis perteneciente a un ratn, pero
se calcular supuestamente para 10 ratones entonces se multiplica por 10, esta cantidad
saliente en mg se pes del extracto etanolico seco y se colocar en un vial, luego se
agrega 2 gotas de alcohol y 1 ml de suero y se agitar, finalmente se cargar en una
jeringa de 1ml de la cual se aplicar 0.1 mL de extracto V.I.P

2.3.2 Clculo y preparacin de la dosis de Diazepam:

Se trabajar con la dosis de 1mg/kg Diazepam. En donde el grupo seleccionado de

ratones pesara un promedio, igualmente se utiliza la regla de tres simple (se multiplico
por 1mg de la dosis a emplear y se dividi entre los 1000g de peso corporal estndar).
La cantidad resultante es la dosis de un ratn, pero se calcular supuestamente para 10
ratones entonces se multiplica por 10, el resultado nuevamente se llev a regla de tres
simple: se multiplico por 2 ml y se divide entre 10 mg (diazepam 10 mg/2ml), la
cantidad resultante se midi en una jeringa y el resto se completa 1ml con suero
fisiolgico, del cual se aplica 0.1 mL de esta solucin V.IP.

2.4 Valoracin de la ansiedad17:

El aparato utilizado consistir en una caja rectangular abierta por arriba (46X27X30 cm
de alto) ser dividido en un rea pequea (18X27 cm) y una grande (27X27 cm), con
una puerta de apertura (7.5 a 7.5 cm) situado en el centro de la particin a nivel del
suelo. Los ratones se alojan de seis en seis por jaula con acceso a comida y agua. Se
alojan por separado un grupo blanco de 6 especmenes y los otros grupos en el control.
Las pruebas conductuales se realizan entre las 9:00 de la maana. y 6:00 p.m. Todas las
jaulas que contienen ratones son transferidas a la sala de pruebas de comportamiento 5
min antes de que comience el primer ensayo. Un Compartimento estar pintado de
negro e iluminada por una tenue la luz roja 60 W, mientras que el compartimento grande
era pintado de blanco y brillantes con un sistema de iluminacin de 100 W fuente de
luz. Los ratones se colocan en el lado oscuro. Se permite que los ratones se muevan
libremente entre las dos cmaras con la puerta abierta durante 5 minutos. La distancia
recorrida en cada cmara, el nmero total de transiciones, el tiempo pasado en cada
cmara y la latencia para entrar en la cmara de luz se registran mediante una cmara
digital. Despus de cada ensayo, todas las cmaras se limpian con alcohol de 96 para
evitar un sesgo basado en seales olfativas.

20
 2.5. Tiempo de permanencia y nmero de transiciones11:

Un incremento entre el nmero de transiciones entre el lado oscuro y brillante, o un

aumento en el tiempo de permanencia en el lado iluminado, se considera como un
indicativo de la reduccin en la ansiedad. Aunque los roedores pueden explorar con
libertad ambos compartimientos, muestran una clara preferencia a permanecer en el
lado oscuro. Los agentes ansiolticos, incrementan la exploracin del rea iluminada,
as como las transiciones entre ambos compartimientos.

24 ratones Mus musculus var. albinus

Grupo Blanco Grupo Diazepam Grupo Problema 1 Grupo Problema 2

(6 ratones) (6 ratones) (6 ratones) (6 ratones)

0.1 mL de dosis de 0.1 mL de extracto

0.1 mL de extracto etanlico 100 mg/
1ml/kg de suero diazepam diluido en
etanlico 50 mg/ kg kg Pasiflora
fisiolgico V.I.P solucin salina
Pasiflora tripartita tripartita var.
(0.9%) V.IP.
var. mollisima V.I.P mollisima V.I.P

Cada grupo ser llevado a la caja

luz-oscuridad por separado

Se medir el nmero de transiciones

y el tiempo de permanencia en la
caja luz-oscuridad

21
 2.5 INSTRUMENTOS DE RECOLECCION DE DATOS

2.7.1 Observacin analtica

La observacin del comportamiento ser grabada con cmara digital, y se realizar un

anlisis minucioso del comportamiento del animal.

2.7.2 Diario de campo

Diariamente se elabora sobre las notas realizadas en campo, los datos, informacin
sobre el peso, tiempo de permanencia y nmero de transiciones de los especmenes.

2.7.3 Dispositivos mecnicos

Videocmara: mediante este dispositivo se grabara la actuacin e incidencias del

espcimen al someterlo en el experimento.

3 ANALISIS ESTADISTICO

Se aplicar el anlisis de varianza (ANOVA), para realizar la comparacin de los

parmetros tiempo de permanencia y nmero de transiciones mediante el mtodo luz-
oscuridad entre los 4 grupos: GB, GD, GP1, GP2, con un nivel de significancia menor a
0.05.

22
 IV. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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