TRABAJO de GRADO Katherine y Lizeth Annona Muricata Control Culex

EVALUACIN DE LA EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ETANLICO NATURAL DE LA SEMILLA DE Annona muricata (GUANBANA) PARA EL CONTROL DE MOSQUITOS Culex quinquefasciatus
EN ESTADO LARVARIO A CONDICIONES DE LABORATORIO DE ZOONOSIS.
KATHERINNE CORTES DAZA GLORIA LIZETH PARRA RODRGUEZ
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOS DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES BOGOT D.C 2011
EVALUACIN DE LA EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ETANLICO NATURAL DE LA SEMILLA DE Annona muricata (GUANBANA) PARA EL CONTROL DE MOSQUITOS Culex quinquefasciatus EN ESTADO LARVARIO A CONDICIONES DE LABORATORIO DE ZOONOSIS.
KATHERINNE CORTES DAZA 20081485008 GLORIA LIZETH PARRA RODRGUEZ 20081485024
Trabajo de grado en modalidad de investigacin presentado como requisito para optar por el ttulo de Tecnlogas en Saneamiento Ambiental
DIEGO TOMAS CORRADINE MORA Mdico Veterinario
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOS DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES BOGOT D.C 2011
Nota de aceptacin: ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________
______________________________ Firma del director
______________________________ Firma del jurado
______________________________ Firma del jurado
Bogot D.C., 09 de Septiembre de 2011
DEDICATORIA
Inicialmente quiero dedicar este trabajo de grado a Dios porque es quien me ha llenado de su infinita bondad y sabidura, ayudndome a levantar cada vez que he cado sin dejarme abandonar mis sueos y dndome cada vez ms fuerza, adems ha iluminado mi camino para llegar hasta donde estoy. A mi familia que siempre me ha acompaado desde el inicio de todo este proceso, por siempre estar dispuestos a brindarme su ayuda y apoyo incondicional, dndome todo su cario, haciendo crticas positivas,
esforzndose y dedicndose para mejorar mi vida da tras da y hacer de mi la persona que soy; sin ninguno de ustedes en especial sin mis queridos padres Fanny Esperanza Daza y Luis Edilson Cortes y sin mis dos hermanos Fabin y Nicols, cada uno de mis logros no los hubiera culminado exitosamente. Tambin a mi novio para Fabio la Andrs ejecucin por de toda este la ayuda prestada por estar
desinteresadamente
proyecto,
acompandome en cada momento llenndome de calma, fuerza, paciencia y lo ms importante amor, convirtindose en una de las personas fundamentales para mi vida. Por ltimo se lo quiero dedicar a mi compaera de trabajo de grado Lizeth, porque aunque no pensamos llegar juntas a este punto, me alegra que as fuera ya que aprend mucho de todos sus aportes positivos.
KATHERINNE CORTES DAZA
Quiero dedicar mi proyecto de grado inicialmente a Dios por darme la salud, la sabidura, la fortaleza y el entendimiento para el desarrollo de esta carrera, dndome la energa de levantarme todos los das con actitud positiva para ser que mis sueos y proyectos da a da se vayan cumpliendo. A mis padres GLORIA NANCY RODRIGUEZ CASTRO y JAIME PARRA LEON quienes con su apoyo incondicional, paciencia, comprensin, tolerancia, amor y esfuerzo han contribuido con mi superacin personal y profesional, que tambin han estado siempre pendiente de mis luchas diarias y les agradezco por sus consejos y valores inculcados en m porque hoy por hoy soy una persona que va creciendo para ser mejor en el maana y ser un buen ejemplo para mis dos hermanitas NAYIBE ALEJANDRA y NATALIA quienes estn siempre conmigo apoyndome, brindndome su alegra y paciencia. A mi novio BRIAN por brindarme y llenarme todos los das de su amor,
comprensin, felicidad, paciencia, apoyo, cario, compaa y la ayuda incondicional en la ejecucin de esta investigacin que hoy logro,
convirtindose en una persona muy importante y esencial para mi vida. A mis compaeros (as) y amigos (as) que estuvieron pendientes e interesados por la ejecucin del proyecto de grado. Y a mi compaera de esta investigacin KATHERINNE por que hicimos un buen equipo para alcanzar nuestra meta, por su dedicacin y sus aportes positivos e ideas objetivas para el desarrollo de est.
GLORIA LIZETH PARRA RODRGUEZ
AGRADECIMIENTOS
Como una de las personas ms importante e indispensable para el desarrollo de este proyecto queremos agradecer muy especialmente a nuestro Director de proyecto, Mdico Veterinario, DIEGO TOMAS CORRADINE MORA, por su esfuerzo, paciencia, dedicacin y por cada uno de los aportes valiosos que nos brind con un nico inters de compartir sus saberes, conocimientos, experiencias con profesionalismo y tica para enriquecer y alcanzar las metas propuestas en nuestro trabajo de grado. Tambin queremos agradecer muy especialmente a la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, por facilitarnos los espacios y equipos de los laboratorios durante toda la ejecucin del proyecto. Adems nos gustara agradecerles a los docentes MIGUEL ANGEL PIRAGAUTA AGUILAR y LUIS YIMER OLARTE ARIZA que nos transmitieron sus conocimientos y nos brindaron su ayuda con crticas positivas para llevar a cabo este proyecto de forma exitosa. Queremos agradecer al Jardn Botnico Jos Celestino Mutis por estar dispuestos a colaborarnos, aconsejarnos y facilitarnos sus instalaciones sin ningn inconveniente para la captura de larvas y adultos del mosquito Culex quinquefasciatus. Y por ltimo a todas las personas y docentes que de una u otra forma colaboraron con sus opiniones y conocimientos para la realizacin de esta investigacin.
TABLA DE CONTENIDO
Dedicatoria.....................................................4 Agradecimientos....6 ndice de tablas.......................................................10 ndice de grficas.13 ndice de fotos......14 ndice de figuras...16 Resumen...17 Abstract.....18 Introduccin......19 1. Objetivos..21 1.1. 1.2. Objetivo general21 Objetivos especficos...21
2. Marco terico..22 2.1. Marco conceptual.22
2.1.1. Mosquitos Culex quinquefasciatus22 2.1.2. Generalidades de Annona muricata (Guanbana).26 2.1.2.1. 2.1.2.2. Clasificacin taxonmica de Annona muricata (Guanbana).26 Caractersticas botnicas..27
2.1.3. Actividad biolgica, biopesticidas..29 2.2. 2.3. Antecedentes30 Marco legal31
3. Metodologa....33 3.1. 3.2. Obtencin del material vegetal..33 Captura y crianza de larvas y adultos de mosquitos Culex
quinquefasciatus..35 3.3. Observacin semanal (evolucin de las balsas con
huevos)..38 3.4. Preparacin y determinacin de las concentraciones (ppm) del extracto natural39 3.5. Bioensayos realizados en los cuatro estadios larvarios de los mosquito Culex quinquefasciatus.........................47 3.6. 3.7. Evaluacin de letalidad.......49 Anlisis estadsticos de la evaluacin..50
3.7.1. Promedio50 3.7.2. Desviacin estndar51 3.7.3. Anlisis de varianza (ANOVA) para un factor.52 3.7.4. Anlisis de comparaciones pareadas ..53 4. Resultados y anlisis de resultados.......54 4.1. Estadstica descriptiva.54
4.1.1. Porcentajes de mortalidad en los cuatro estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus expuestos a las tres concentraciones del extracto etanlico de la semilla de Annona muricata
(guanbana)....................55 4.1.1.1. Resultados de los bioensayos realizados en larvas de primer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus55
4.1.1.2.
Resultados de los bioensayos realizados en larvas de segundo estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus..57
4.1.1.3.
Resultados de los bioensayos realizados en larvas de tercer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus..........................59
4.1.1.4.
Resultados de los bioensayos realizados en larvas de cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus..........................61
4.1.2. Comparacin de los porcentajes de mortalidad obtenidos en los diferentes estadios con las diferentes concentraciones con sus respectivos controles......64 4.1.3. Anlisis de varianza (ANOVA) entre grupos experimentales68 4.1.3.1. Anlisis de la varianza (ANOVA) para los promedios de mortalidad de los mosquitos Culex quinquefasciatus en los cuatro estadios larvarios en cada una de las concentraciones del extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana)68 4.1.4. Anlisis de comparaciones en los pareadas entre y los sus tratamientos respectivos
experimentales
cuatro
estadios
controles........73 5. Conclusiones..75 6. Recomendaciones.....77 7. Bibliografa..79
INDICE DE TABLAS
Tabla 1.
Bioensayos realizados a larvas en estadio 1 de mosquitos Culex quinquefasciatus con la concentracin 100ppm y su respectivo control......56
Tabla 2.
Bioensayos realizados a larvas en 1 estadio de mosquitos
Culex
quinquefasciatus con la concentracin de 250ppm y su respectivo control......56
Tabla 3.
Culex
Tabla 4.
Tabla 5.
Culex
Tabla 6.
Culex
Tabla 7.
Bioensayos realizados a larvas en estadio 3 de mosquitos Culex quinquefasciatus con la concentracin 100ppm y su respectivo control..60
10
Tabla 8.
Culex
Tabla 9.
Culex
quinquefasciatus con la concentracin de 500ppm y su respectivo control..61
Tabla 10.
Tabla 11.
Culex
Tabla 12.
Culex
quinquefasciatus con la concentracin de 500ppm con su respectivo control..63 Tabla 13. ANOVA para larvas de primer estadio de mosquitos Culex
quinquefasciatus.69 Tabla 14. ANOVA para larvas de segundo estadio de mosquitos Culex
quinquefasciatus70 Tabla 15. ANOVA para larvas de tercero estadio de mosquitos Culex
quinquefasciatus.71
11
Tabla 16.
ANOVA
para
larvas
de
cuarto
estadio
de
mosquitos
Culex
quinquefasciatus.72 Tabla 17. Comparacin pareada entre el promedio de larvas muertas por cada estadio con adicin de extracto Annona muricata (X) y promedio de larvas muertas por cada estadio sin adicin de extracto Annona muricata (controles o testigos) (Y).74
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INDICE DE GRAFICAS
Grfica 1.
Mortalidad
de
larvas
en
primer
estadio
de
mosquitos
Culex
quinquefasciatus
con las tres concentraciones del extracto etanlico
natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control.64
Grfica 2.
Mortalidad de larvas en segundo estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus con las tres concentraciones del extracto etanlico
natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control....65 Grfica 3. Mortalidad de larvas en tercer estadio de mosquitos Culex
quinquefasciatus
natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control....66 Grfica 4. Mortalidad de larvas en cuarto estadio de mosquitos Culex
quinquefasciatus
natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control.67
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INDICE DE FOTOS
Foto 1. Foto 2. Foto 3. Foto 4. Foto 5. Foto 6. Foto 7. Foto 8. Foto 9. Foto 10. Foto 11. Foto 12. Foto 13. Foto 14. Foto 15. Foto 16. Foto 17. Foto 18. Foto 19.
Hembra hematfaga..23 Hembra del mosquito Culex quinquefasciatus colocando huevos23 Balsa de huevos del mosquito Culex quinquefasciatus...24 Estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus.24 Pupas del mosquito Culex quinquefasciatus.25 Macho y hembra del mosquito Culex quinquefasciatus..25 rbol de la especie vegetal Annona muricata...27 Flor del rbol de Annona muricata..28 Fruto de la especie vegetal Annona muricata...28 Pulpa de Annona muricata (Guanbana)...28 Semillas de Annona muricata (Guanbana)..29 Compra del fruto.34 Disposicin del fruto para extraer las semillas..34 Extraccin de semillas...34 Semillas listas para secar por 7 das..34 Jaula de crianza de los mosquitos Culex quinquefasciatus36 Alimento de los mosquitos (Dieta Sacarosa)....36 Ratn de laboratorio anestesiado37 Balsa de huevos del mosquito Culex quinquefasciatus con concentrado para conejo...38 Separacin de las larvas por estadio..39 Semillas de Annona muricata (Guanbana) seca lista para ser trituradas..40
Foto 20. Foto 21.
Foto 22. Foto 23.
Trituracin de la semilla40 Semilla triturada lista para ser licuada con 3 litros de etanol al 95%..............................................................................................................40 Semilla triturada..41 Semilla triturada con 3 litros de etanol lista para licuar41 Licuando de la semilla durante 5 minuto aproximadamente...41
Foto 24. Foto 25. Foto 26.
14
Foto 27. Foto 28. Foto 29. Foto 30. Foto 31. Foto 32. Foto 33. Foto 34. Foto 35. Foto 36. Foto 37. Foto 38. Foto 39. Foto 40. Foto 41. Foto 42.
Semilla luego de ser licuada.41 Licuado de la semilla dejado en un recipiente para la sedimentacin..41 Equipo de filtracin al vaco..42 Sedimentacin del licuado de la semilla durante 72 horas.43 Agitacin antes de filtrar43 Filtracin cada 250mL...43 Papel de filtro en el embudo antes de filtrar..44 Filtracin del licuado de la semilla...44 Extracto de la semilla filtrado44 Sedimentos que quedaron luego de la filtracin...44 Extracto filtrado almacenado en botellas mbar de 500mL..44 Rotaevaporador..45 Rotaevaporando el extracto.46 Recoleccin del etanol destilado.46 Finalizando la rotaevaporacin46 Extracto de la semilla Annona muricata (Guanbana). Sin etanol (solucin madre)..46 Puntero metlico de punta roma..49 Punta roma del puntero.49
Foto 43. Foto 44.
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INDICE DE FIGURAS
FIGURA 1. Distribucin de los bioensayos..48
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RESUMEN
En la presente investigacin se evalu la efectividad del extracto etanlico de la semilla Annona muricata (guanbana) determinando la letalidad del mosquito Culex quinquefasciatus, en sus cuatro estadios larvarios en condiciones de laboratorio. Se realizaron bioensayos los cuales consistieron en aplicar concentraciones del extracto (100ppm, 250ppm y 500ppm) haciendo tres rplicas con su respectivo control de cada estadio larvario. El mayor efecto txico con un 100% de letalidad y en el menor tiempo de exposicin dentro de las 72 horas de experimentacin, se evidenci, en el Estadio 1 a las 24 horas en las tres concentraciones, en el estadio 2 hubo letalidad a las 12 horas en la concentracin ms alta (500ppm), en el estadio 3 la toxicidad fue a las 48 horas con la concentracin media (250ppm) y por ltimo en el estadio 4 hubo letalidad a las 24 horas con la concentracin de 500ppm, mientras en las otras dos concentraciones vivieron ms de 72 horas hasta convertirse en pupas. Esta investigacin nos permiti confirmar que la semilla de la especie vegetal Annona muricata (guanbana), tiene un alto porcentaje de efectividad como biopesticida en concentraciones mnimas debido a su composicin natural; esto nos permite dar una alternativa natural, viable, econmica y amigable con el medio ambiente para el control de esta especie y otras.
Palabras claves Annona muricata, Culex quinquefasciatus, biopesticida, extracto natural
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ABSTRACT
The present investigation evaluated the effectiveness of the extract etanlico of the seed Annona muricata (soursop) determining the letalidad of the mosquito Culex quinquefasciatus, in its four stadiums larvarios under laboratory conditions. They were carried out bioensayos which consisted on applying concentrations of the extract (100ppm, 250ppm and 500ppm) making three replicas with their respective control of each stadium larvario. The biggest toxic effect with 100 letalidad% and in the smallest time of exhibition in the 72 hours of experimentation, it was evidenced, in the Stadium 1 at the 24 hours in the three concentrations, in the stadium 2 had letalidad at the 12 hours in the highest concentration (500ppm), in the stadium 3 the toxicity went at the 48 hours with the half concentration (250ppm) and for I finish in the stadium 4 there was letalidad at the 24 hours with the concentration of 500ppm, while in the other two concentrations they lived more than 72 hours until becoming pustules. This investigation allowed us to confirm that the seed of the vegetable species Annona muricata (soursop), he/she has a high percentage of effectiveness like biopesticida in minimum concentrations due to its natural composition; this allows us to give a natural, viable, economic and friendly alternative with the environment for the control of this species and others Key words Annona muricata, Culex quinquefasciatus, biopesticida, natural extract
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INTRODUCCIN Los mosquitos constituyen un grupo de insectos de gran importancia, debido a que muchas de sus especies produce diversas molestias, adems son vectores de agentes causales de enfermedades humanas con gran importancia en salud pblica; uno de estos vectores es el mosquito Culex quinquefasciatus ya que es el causante de transmitir las principales enfermedades como la malaria, filariosis, encefalitis viral (equina), la leishmaniosis, etc. (Organizacin Mundial de la
Salud, 1998).
Una de las alternativas que ms se utiliza desde antes de la segunda guerra mundial para el control y erradicacin de dichos vectores es el uso de los insecticidas qumicos como los organoclorados, los organofosforados, los carbamatos, entre otros; su uso sin ningn control natural, su difcil degradacin y su larga persistencia en el medio ambiente, han ocasionado efectos significativos en la salud humana como intoxicaciones agudas y crnicas, impactos negativos en los animales y en el ecosistema,
contaminando los cuerpos de agua lo cual constituye un grave peligro para el abastecimiento de agua potable y agua para riego, as mismo en el aire dejando residuos en suspensin y por ltimo causando alteraciones de
fertilizacin en los suelos disminuyendo la fauna y flora; como consecuencia de esto, algunos productos agrcolas pierden calidad nutritiva que los hacen no aptos para el consumo humano. Adems su uso masivo ha llegado a provocar la resistencia a estos insecticidas por parte de algunas poblaciones del mosquito Culex quinquefasciatus. (Auditora Analtica De Gestin Al Uso Y Manejo De
Plaguicidas, 2004).
Estudios realizados han demostrado que todas las partes del rbol de la especie vegetal Annona muricata (Guanbana), poseen propiedades
insecticidas debido a la presencia de diversos compuestos como los alcaloides (muricina y muricinina), las acetogeninas entre otros; estos compuestos bioactivos adems de presentar actividad plaguicida contienen una extensa
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gama de actividades biolgicas como: antitumoral, citotxica, antimicrobiana, antoprotozoaria y antihelmntica. (Garca, 2010). Por los motivos expuestos anteriormente y con la perspectiva de incorporar un recurso alternativo para el control de mosquitos Culex quinquefasciatus, dentro de un manejo sostenible y menos nocivo para nuestro medio ambiente, se evalu la efectividad de un extracto etanlico natural de las semillas de Annona muricata (guanbana) por su excelente potencial de acetogeninas como: anonacina, asimicina y bulatacina, ingredientes activos biopesticidas, sobre larvas de primer, segundo, tercer y cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus. Esta evaluacin se llev a cabo con un total de cuarenta y ocho bioensayos divididos en doce por cada estadio, los cuales comprendieron tres rplicas de cada concentracin (100ppm, 250ppm y 500ppm) con su respectivo control, cada bioensayo cont con un total de cincuenta larvas y se mantuvieron en continua observacin. Luego de realizados los bioensayos se procedi a utilizar mtodos matemticos y estadsticos como promedios, desviacin estndar, anlisis de varianza (ANOVA) para un factor y anlisis de comparaciones pareadas, con el fin de analizar y discutir los resultados obtenidos y generar conclusiones, los cuales se encuentran en el presente documento teniendo como gua la investigacin realizada por la Facultad De Ciencias Biolgicas de Per en el 2005 sobre especies de mosquitos Aedes aegypti.
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1. OBJETIVOS
1.1. Objetivo General
Evaluar la letalidad del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) sobre los cuatro estadios larvarios del mosquitos Culex quinquefasciatus, en condiciones de laboratorio, con el fin de dar una alternativa natural para el control de esta especie.
1.2.
Objetivos Especficos
Evaluar la efectividad
al 100% del extracto etanlico natural de la
semilla de Annona muricata (Guanbana) a tres concentraciones diferentes (100ppm, 250ppm y 500ppm).
Establecer el tiempo de exposicin y la concentracin letal (CL95) del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) que cause letalidad sobre los cuatro estadios de las larvas del mosquito Culex quinquefasciatus .
Comprobar el potencial txico del extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana) en los cuatro estadios de desarrollo larvario de mosquitos Culex quinquefasciatus.
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2. MARCO TEORICO Para realizar esta investigacin se tuvieron en cuenta conceptos bsicos e importantes sobre las propiedades de la semilla de Annona muricata (Guanbana) y sobre el ciclo de vida, la capacidad vectorial y la resistencia a los insecticidas del mosquito Culex quinquefasciatus, con el fin de tener como base la informacin necesaria para llevar a cabo el anlisis de las distintas variables que se presentaron a lo largo de la investigacin, en donde adems se muestran antecedentes relacionados a estudios anteriores y referencias normativas. 2.1. Marco conceptual
2.1.1. Mosquitos Culex quinquefasciatus. Los mosquitos o zancudos de la especie Culex quinquefasciatus estn distribuidos por todo el mundo, principalmente en regiones clidas, adems son los que se encuentran asociados con mayor frecuencia al hbitat humano tanto urbano como rural. (Salazar, 2004). Son insectos dpteros (con dos pares de alas), con patas largas y trompa picadora, la hembra es hematfaga y requiere de esto para poner huevos (Foto
1),
los huevos son depositados en aguas estancadas o que contengan gran
cantidad de materia orgnica, recin puestos los huevos son de color blanco y transcurrido poco tiempo se tornan oscuros (Foto 2 y 3), los huevos son puestos en paquetes de 100 o ms y se mantienen a flote como una balsa. De los huevos emergen las larvas en un tiempo mnimo de dos das y mximo de cuatro das que se desarrollan en cuatro estadios larvarios los cuales se diferencian por su tamao (Foto 4), durante el desarrollo de estos estadios las larvas solo se dedican a nadar para conseguir comida y a respirar por medio de un sifn respiratorio largo. La duracin mnima del ciclo de vida entre el periodo de huevo a adulto es de 13 das y la mxima de 24 das, dependiendo de la
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temperatura ambiente y la disponibilidad de alimento; una vez culminado el ltimo estadio larval se convierte en pupa (Foto 5) las cuales son nadadoras muy activas y no se alimentan, cinco das despus se convierten en zancudos adultos de color marrn estos tienen dimorfismo sexual; los machos tienen palpos largos, curvos y plumosos en el extremo, as como antenas plumosas y las hembras con palpos cortos y antenas pilosas, adems el extremo del abdomen es redondeado (Salazar, 2004). (Foto 6).
Foto 1. Hembra hematfaga. (Foto tomada por Kathy Keatley Garvey, 8 de

Agosto de 2008).
Foto 2. Hembra del mosquito Culex quinquefasciatus colocando huevos. (Foto

tomada por Samuel Woo, UC Davis, 17 de Junio de 2008).
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Foto 3. Balsa de huevos del mosquito Culex quinquefasciatus. (Foto tomada por
Autores. 28 de Febrero de 2011).
Foto 4. Estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus. (Foto tomada por
Autores. 16 de Mayo de 2011).
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Foto 5. Pupas del mosquito Culex quinquefasciatus (Foto tomada por Autores. 28 de
Julio de 2011).
Foto 6. Macho y hembra del mosquito Culex quinquefasciatus (foto tomada por
Emil August Goeldi. 1905).
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Debido a su antropofilia acentuada, los mosquitos crean resistencia a los insecticidas la cual puede ser de dos tipos: fisiolgica y de comportamiento. Resistencia fisiolgica cuando el mosquito elabora enzimas que hidrolizan los insecticidas. Resistencia de comportamiento cuando cambian sus hbitos.
(Organizacin Mundial de la Salud, 1992).
2.1.2. Generalidades Annona muricata (Guanbana).
La guanbana es originaria y muy comn en Amrica tropical y las islas del Caribe. De Amrica fue llevada a otros pases y continentes, como China, Australia y frica. Se cultiva a menos de 300 m de altura sobre el nivel del mar en suelos variados y requiere alrededor de 100 mm. De precipitacin anual. Es muy susceptible a las heladas. Annona muricata (guanbana) es una de las especies vegetales ms conocidas y es la que presenta mejores caractersticas para la industrializacin. (vila, 2005).
2.1.2.1. Clasificacin taxonmica de Annona muricata.

(vila, 2005)
Reino: Sub-reino: Divisin: Clase: Sub-clase: Orden: Familia: Gnero: Especie: Nombre comn:
Plantae. Embryobionta. Magnoliophyta. Magnoliopsida. Magnolidae. Magnoliales. Annonaceae. Annona. Annona muricata. Guanbana.
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2.1.2.2. Caractersticas botnicas. (vila, 2005).
El rbol tiene entre 5 y 8 metros de altura, tiene tallo nico y ramificacin simtrica (Foto 7), su fructificacin comienza entre los primeros 3 a 5 aos y alcanza su pleno desarrollo entre los 6 y 8 aos, segn las condiciones de clima y suelo. Las hojas son oblongas o elpticas, coriceas, con el haz de color verde brillante y el envs amarillo mate. Su longitud es de 6 a 18 centmetros.
Foto 7. rbol de la especie vegetal Annona muricata (Guanbana). (Foto

tomada por Autores. 24 de Junio de 2011).
Las flores son hermafroditas, se forman sobre ramitas cortas auxiliares o directamente sobre el tronco. Poseen tres spalos color verde oscuro y seis ptalos de color cremoso. Los estambres son numerosos y dispuestos alrededor de los pistilos (Foto 8). Tienen abundantes ovarios.
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Foto 8. Flor del rbol de Annona muricata (Guanbana). (Foto tomada por
Jos Marrn Marrufo, 31 de Julio de 2010).
El fruto es de forma ovoide, acorazonada o irregular, de color verde oscuro brillante cuando el fruto esta tierno y verde mate cuando est maduro. Su longitud vara de 15 a 30 centmetros y su dimetro esta entre 10 a 20 centmetros; puede llegar a pesar cuatro kilogramos o ms. La corteza es dbilmente coricea, erizada de espinas carnosas y de sabor amargo. La pulpa es blanca, carnosa, jugosa de sabor muy agradable y ligeramente cida (Foto 9 y 10).
Foto 9. Fruto de la especie vegetal Annona muricata (Foto tomada por Autores
26 de Enero de 2011)
Foto 10. Pulpa de Annona muricata (Guanbana). (Foto tomada

por Autores 27 de Enero).
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Las semillas son ovoides y aplanadas de 15 a 20 mm. De largo con testa oscura y brillante, una por carpelo (Foto 11).
Foto 11. Semilla de Annona muricata (Guanbana). (Foto tomada por Autores. 27 de
Enero de 2011).
2.1.3. Actividad biolgica, biopesticidas. Los biopesticidas son productos que contienen un ingrediente activo o bien se extraen de un ser vivo mediante procedimientos que no alteran su composicin qumica. Una gran variedad de biopesticidas naturales se han desarrollado y aprobado para el control de plagas de insectos, pestes y enfermedades bacterianas, estos nuevos derivados botnicos resultan ms amigables con el medio ambiente y adems se pueden convertir en una herramienta til para los cultivos de alimentos donde no se pueda fumigar. (Universidad Tecnolgica de
Pereira, facultad tecnolgica, 2007).
La
Annona
muricata
(Guanbana)
tiene
una
alta
concentracin
de
acetogeninas en la corteza, en las semillas, el tallo y las hojas, este compuesto posee gran potencial biopesticida, dentro de esto las acetogeninas han demostrado tener fuerte actividad ovicida y larvicida. (Universidad Tecnolgica de
Pereira, facultad tecnolgica, 2010).
Estructuralmente las acetogeninas son derivados de cidos grasos de cadenas largas las cuales presentan diferentes bioactividades como antitumoral, inmunosupresiva, pesticida, antiprotozoal y antimicrobiana, se conocen seis tipos de acetogeninas, con similares esqueletos de carbono, con uno, dos o
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tres anillos tetrahidrofuranicos. Para aislar las acetogeninas de Annonaceae se utiliza el mtodo cromatografa en capa delgada. (Las acetogeninas de Annonaceae,
2009).
2.2. Antecedentes Para realizar esta investigacin se tuvieron en cuenta experiencias, resultados y aportes de estudios anteriores. En estos estudios realizaron diferentes bioensayos a nivel de laboratorio con la misma sustancia natural pero con diferentes suspensiones de ella y con el control de diferentes gneros de mosquitos de importancia en salud pblica (Anopheles, Aedes y Culex). Lo que evaluamos en este proyecto es la eficiencia del extracto etanlico de la semilla de Annona muricata (guanbana) sobre los cuatro estadios larvarios de la especie Culex quinquefasciatus. Los que ms se tuvieron en cuenta en este estudio fueron: En el informe Evaluacin larvicida de suspensiones acuosas de Annona Muricata Linnaeus (guanbana) sobre Aedes aegypti Linnaeus (Dptera, Culicidae) del ao 2005 se evalu la toxicidad larvicida de suspensiones
acuosas provenientes de extractos etanlicos de las semillas, flores, hojas, corteza de ramas y corteza de races de Annona muricata (guanbana) sobre larvas del IV estadio de Aedes aegypti para determinar de esta manera los niveles de susceptibilidad. El mayor efecto txico correspondi a la suspensin de las semillas con un 100% de mortalidad a las 24 horas a 0,5 mg/mL, seguidos por las flores a las 48 horas a 10 mg/mL y hojas a las 36 horas a 100 mg/mL. (Facultad de ciencias biolgicas, Per, 2005) En el estudio Actividad insecticida de extractos vegetales sobre Aedes aegypti (Dptera: Culicidae) vector del dengue en Colombia del ao 2007 se evalu la toxicidad de diferentes concentraciones de los extractos etanlicos obtenidos de las semillas de Annona muricata, y de los frutos maduros de Melia azedarach, y Ricinus communis sobre larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti, para establecer la concentracin letal media hallados en estos
30
diferentes extractos Los extractos evaluados produjeron mortalidad en las larvas de Aedes Aegypti a las 24 horas. En la evaluacin de toxicidad se observ que el extracto de Ricinus communis es el ms activo con una concentracin letal media de 860 ppm, seguido por el extracto de Annona muricata con una concentracin letal de 50% en 900 ppm. (Instituto Colombiano de
Medicina Tropical, Sabaneta, Antioquia, Colombia, 2007)
En la investigacin Efecto bioinsecticida del extracto etanlico de las semillas Annona cherimolia Miller chirimoya Y A. muricata Linneaus guanbana sobre larvas del IV estadio de Anopheles sp. Del ao 2002 se evalu la mortalidad de larvas del IV estadio de Anopheles sp. Mediante el extracto etanlico de las semillas de Annona cherimolia y Annona muricata. Los mayores porcentajes de mortalidad, observando un mayor efecto txico larvario a favor de Annona muricata sobre Annona cherimolia en 4,58% de mortalidad. El trabajo permiti demostrar el efecto larvicida de ambas semillas y subraya la necesidad de realizar mayores ensayos in vitro como alternativa al control de insectos de importancia en salud pblica. (Facultad de ciencias biolgicas, Per, 2002).
2.3. Marco Legal Ley 9 de 1979 Cdigo Sanitario Nacional. Incluye normas generales sobre la produccin, formulacin, almacenamiento, distribucin, movilizacin y aplicacin de los plaguicidas. Decreto 775 de 1990 Reglamenta los Ttulos III, V, VI, VII y XI de la Ley 09 de 1979, sobre uso y manejo de plaguicidas.
31
Decreto 1847 de 1991 Reglamenta la Ley 09 de 1979 sobre uso y manejo de plaguicidas con el objeto de evitar que afecten la salud de la comunidad, la sanidad animal y vegetal o causen deterioro al medio ambiente. Decreto 1443 de 2004 Por el cual se reglamenta parcialmente el Decreto-ley 2811 de 1974, la Ley 253 de 1996, y la Ley 430 de 1998 en relacin con la prevencin y control de la contaminacin ambiental por el manejo de plaguicidas y desechos o residuos peligrosos provenientes de los mismos, y se toman otras determinaciones.
32
3. METODOLOGA Para la evaluacin de la efectividad del extracto natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) sobre larvas de primer, segundo, tercer y cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus, se realiz un estudio cuantitativo que se desarroll en el Laboratorio de Zoonosis de la Facultad de Medio Ambiente y Recursos Naturales de la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas; para obtener resultados contundentes de la evaluacin fueron necesarios realizar siete procedimientos diferentes los cuales se ejecutaron en el siguiente orden: Obtencin del material vegetal, captura y crianza de larvas y adultos de mosquitos Culex quinquefasciatus, observacin semanal de las balsas de huevos y larvas, preparacin y determinacin de las concentraciones (ppm) del extracto natural, realizacin de los bioensayos en los cuatro estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus, evaluacin de la letalidad y por ltimo se realizaron los anlisis estadsticos de esta evaluacin. Cada procedimiento se describe mejor a continuacin y de cada uno se tiene registros fotogrficos. 3.1. Obtencin del material vegetal (semillas de Anonna muricata)
El material vegetal (semillas de Annona muricata) se obtuvo de frutos maduros procedentes de los cultivos del Tolima, suministrados por el proveedor Plaza Paloquemao de la ciudad de Bogot, se compraron frutos de los cuales se sacaron dos libras de semillas las cuales fueron necesarias para luego realizar el extracto (Foto 12, 13, 14 y 15).
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Foto 12. Compra del fruto.

(Foto tomada por Autores. 26 de Enero de 2011).
Foto 13. Disposicin del fruto para extraer las semillas. (Foto
tomada por Autores. 27 de Enero de 2011).
Foto 15. Semillas listas para secar por 7 das. (Foto tomada por
Autores. 27 de Enero de 2011)
Foto 14. Extraccin de semillas.

(Foto tomada por Autores. 27 de 2011)
34
3.2.
Captura
y crianza de larvas y adultos del mosquito Culex
quinquefasciatus. La captura de los adultos de Culex quinquefasciatus fue realizada en el Jardn Botnico Jos Celestino Mutis, con ayuda de un tamiz de malla tupida muy fina con una apertura de 0,020 a 0,160 mm, se capturaron 17 mosquitos Culex quinquefasciatus de los cuales se pudo identificar tres machos y catorce hembras, estos fueron trasladados a una jaula artesanal con medidas de 41cm de largo x 32cm de ancho x 48cm de alto y cubierta de un forro de acetato, la cual se mantuvo en el Laboratorio de Zoonosis de la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas bajo condiciones no controladas de temperatura, luz y humedad relativa; estos mosquitos fueron alimentados con una dieta sacarosa la cual consisti en la dilucin de 10 gramos de azcar en 70 ml de agua, de esta dilucin se aplicaron 5 ml en un algodn no esterilizado y se colg dentro de la jaula, este algodn fue cambiado cada dos das. (Foto 16 y
17).
Para la obtencin de las larvas es necesario que las hembras de los
mosquitos Culex quinquefasciatus realicen hematofagia, para esto se introdujo en la jaula de los mosquitos un ratn de laboratorio ( Mus musculus), previamente anestesiado con 3 ml del anestsico ketamina (facilitada por la Universidad Nacional de Colombia) aplicados en uno de sus msculos posteriores del muslo , la cual lo dejaba inmovilizado durante una hora aproximadamente; una vez realizada la hematofagia por parte de las hembras tres das despus se obtuvieron balsas con huevos de las que eclosionaron las larvas. Este mismo procedimiento se realiz tres veces para as obtener la cantidad de larvas necesarias para la realizacin de los bioensayos con el extracto etanlico natural de la semilla de Annonna muricata (Foto 18).
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Foto 16. Jaula de crianza de los mosquitos Culex quinquefasciatus (Foto tomada
por Autores. 7 de Febrero de 2011).
Foto 17. Alimento de los mosquitos (Dieta Sacarosa).

(Foto tomada por Autores. 28 de Febrero de 2011).
36
Foto 18. Ratn de laboratorio anestesiado. (Foto tomada por Autores. 14 de Marzo de
2011).
Luego se dispusieron dos recipientes plsticos transparentes dentro de la jaula a los cuales se les agreg 500 ml de agua, para que las hembras depositaran las balsas con huevos. Una vez se obtuvieron estas balsas, fueron trasladas con ayuda de una esptula plstica a otros recipientes (una balsa por recipiente) con 500 ml de agua potable con el fin de que en esta emergieran las larvas y fuera ms fcil su identificacin por tamaos, las larvas fueron alimentadas con 1 gr de concentrado para conejo el cual fue colocado en cada recipiente al mismo tiempo en que se agreg el agua (Foto 19). El criadero se mantuvo bajo condiciones no controladas de luz, temperatura y humedad relativa durante todo el experimento.
37
Foto 19. Balsa con huevos del mosquito Culex quinquefasciatus con concentrado para conejo. (Foto tomada por Autores. 1 de Marzo de 2011).
3.3.
Observacin semanal (evolucin de las balsas con huevos)
Desde la primera obtencin de balsas con huevos del mosquito Culex quinquefasciatus se hicieron revisiones de tres das a la semana y en ocasiones cuatro das a la semana (segn la evolucin de las balsas con huevos y larvas), las larvas empezaron a emerger de las balsas luego de tres o cuatro das de haber sido colocadas por las hembras del mosquito, las larvas se identificaron por tamaos para as mismo separarlas por estadio para poder realizar los bioensayos, las larvas tardaban de dos a tres das en pasar de un estadio al siguiente y en ocasiones tardaban hasta cinco das hasta llegar a convertirse en pupas y luego en adultos (Foto 20).
38
Foto 20. Separacin de las larvas por estadio. (Foto tomada por Autores. 14 de
Marzo de 2011).
3.4.
Preparacin y determinacin de las concentraciones (ppm) del extracto natural.
Se prepar el extracto en el Laboratorio de Zoonosis a base de semillas de Annona muricata (guanbana) en concentraciones de 100ppm, 250ppm y 500ppm con el siguiente procedimiento: a. Luego de pesar la cantidad a utilizar (2 libras de semillas) las semillas de Annona muricata se lavaron con agua limpia y se dejaron secar
dispersas sobre una bandeja en un lugar con poca ventilacin e iluminacin, esto con el fin de evitar la contaminacin de las semillas por organismos externos durante siete das; pasado este tiempo se
procedi a triturar las semillas con un molino tradicional manual. (Foto 21,
22 y 23).
39
Foto 21. Semillas de Annona muricata (Guanbana) secas lista para ser triturada. (Foto tomada por Autores. 25 de
Marzo de 2011).
Foto 22. Trituracin de la semilla.

(Foto tomada por Autores. 25 de Marzo de 2011).
Foto 23. Semilla triturada.

(Foto tomada por Autores. 25 de Marzo de 2011).
b. Luego de la trituracin, y con ayuda de una licuadora, se licuaron las semillas en tres litros de etanol al 95% (por cada libra de semillas) durante cinco minutos aproximadamente, este licuado se dej en reposo durante 72 horas en un recipiente plstico (sedimentacin) a temperatura ambiente en el laboratorio de zoonosis (Foto 24 a la 28).
40
Foto 24. Semilla triturada. (Foto tomada por,

Autores. 25 de Marzo de 2011).
Foto 25. Semilla triturada con 3 litros de etanol lista para licuar. (Foto tomada por, Autores. 26 de
Marzo de 2011).
Foto 26. Licuando de la semilla durante 5 minuto aproximadamente. (Foto tomada por,
Foto 28. Licuado de la semilla dejado en un recipiente para la sedimentacin. (Foto tomada por, Autores. 26 de Marzo de 2011).
Foto 27. Semilla luego de ser licuada (Foto tomada por, Autores. 26
de Marzo de 2011).
41
c. Pasadas las 72 horas de sedimentacin, se realiz la filtracin para aislar los slidos sedimentables y suspendidos (residuos de las semillas) con la ayuda del equipo de filtracin al vaco lo cual est compuesto por una bomba de succin, un embudo Buchner en porcelana y un Erlenmeyer, estos materiales antes de ser utilizados fueron lavados y esterilizados. Antes de empezar a filtrar se agitaron las semillas licuadas, y se fue filtrando cada 250 ml servidos en un beaker de vidrio, en el embudo Buchner con un dimetro de 7.5cm en l se coloc un papel filtro con una porosidad de 20 a 25 micras y con un dimetro de siete centmetros, para que en este quedaran todos los sedimentos (este papel se cambi cada 250 ml filtrados); el extracto ya filtrado fue almacenado en botellas mbar plsticas de 500 ml, previamente lavadas y esterilizadas. (Fotos de
la 29 a la 37).
Foto 29. Equipo de filtracin al vaco. (Foto tomada por Autores. 31 de Marzo de 2011)
42
Foto 30. Sedimentacin del licuado de la semilla durante 72 horas. (Foto tomada
por, Autores. 31 de Marzo de 2011).
Foto 32. Filtracin cada 250mL (Foto tomada por, Autores. 31 de Marzo de 2011). Foto 31. Agitacin antes de filtrar.
(Foto tomada por, Autores. 31 de Marzo de 2011).
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Foto 33. Papel de filtro en el embudo antes de filtrar. (Foto tomada por Autores.
31 de Marzo de 2011)
Foto 34. Filtracin del licuado de la semilla (Foto tomada por Autores.
31 de Marzo de 2011).
Foto 36. Sedimentos que quedaron luego de la filtracin (Foto tomada por
Foto 35. Extracto de la semilla Filtrado. (Foto tomada por Autores. 31

de Marzo de 2011).
Foto 37. Extracto filtrado almacenado en botellas mbar de 500mL. (Foto tomada por
44
d. El extracto obtenido de la filtracin se destilo y se evapor con el fin de retirar todo el etanol con la ayuda del equipo Rotaevaporador en dos sesiones, este equipo fue facilitado por la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, el cual se manej a una temperatura de 27C, con presin de 74 bares y temperatura del agua a 47C. Todo el material obtenido fue recolectado en frascos color mbar de vidrio previamente lavados y esterilizados y se almaceno en refrigeracin a 4C, el cual sera la solucin madre. De esta solucin madre se observaron algunas caractersticas organolpticas como color, olor, textura y viscosidad.
(Fotos de la 38 a la 42).
Foto 38. Rotaevaporador. (Foto tomada por Autores. 11 de Mayo de 2011)
45
Foto 40. Recoleccin del etanol destilado (Foto tomada por Autores. 11 de
Mayo de 2011)
Foto 39. Rotaevaporando el extracto destilado. (Foto tomada por Autores. 11 de

2011)
Foto 41. Finalizando la rotaevaporacion. (Foto tomada por

Autores. 11 de Mayo de 2011)
Foto 42. Extracto de la semilla Annona muricata (Guanbana). Sin etanol (solucin madre). (Foto
tomada por Autores. 11 de Mayo de 2011).
46
e. Con ayuda de una balanza analtica se pesaron 0.1gr, 0.25gr y 0.50gr de la solucin madre de la semilla de Annona muricata (guanbana) que equivalen a las concentraciones que se utilizaron en los bioensayos.
3.5.
Bioensayos realizados en los cuatro estadios larvarios de los mosquitos Culex quinquefasciatus.
Los bioensayos se llevaron a cabo en el Laboratorio de Zoonosis donde se utilizaron 48 recipientes plsticos de 2 L de capacidad a los cuales se les adicion 1 L de agua, la concentracin correspondiente (100, 250 y 500 ppm) del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata diluido con tres mililitros de etanol y 1 g de alimento concentrado para conejos (con la finalidad de proporcionar nutrientes a las larvas); mientras los controles solo constaron de 1 L de agua con 1gr de alimento (todo fue medido con la ayuda de un baln aforado previamente lavado y esterilizado de 1000 ml). Previo a estos, se realizaron cuatro bioensayos con tres mililitros de etanol, un litro de agua, 1 gr de alimento y 50 larvas por cada estadio, esto con el fin de evidenciar que el etanol no causara letalidad en las larvas, para comprobar que el adicionamiento del etanol para diluir el extracto natural en los bioensayos, no influyera en la efectividad de este y no alterara los resultados de letalidad. El resultado de estos bioensayos fue negativo ya que ninguna larva muri dentro de un tiempo de 72 horas. En total se realizaron 48 bioensayos, distribuidos en doce por cada estadio, sometidos a tres replicas por cada concentracin con su respectivo control. Por cada estadio se utilizaron 600 larvas repartidas en 50 por cada bioensayo para un total de 2400 larvas de Culex quinquefasciatus, esta distribucin se puede apreciar mejor en la figura 1.
47
Figura 1. Distribucin de los bioensayos

C 100 ppm
50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as
C 250 ppm
C 500 ppm
CONTROL
PRIMER ESTADIO
50 50 50 50 Larv Larv Larv Larv as as experimentales as A todos as los grupos se les agrego la concentracin del extracto 50 50 50 50 Annona muricata diluido con 3mL de etanol, todo fue medido con la ayuda de Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50
SEGUNDO un baln aforado de 1000mL. Previo a estos, se ESTADIO realiz un bioensayo con seis
mililitros de etanol en un litro de agua y 50 larvas en estadio 2 para evidenciar que causara Larvel etanol Larv no Larv Larvletalidad en estas, con el fin de comprobar que el
as as as etanol as para diluir el extracto natural no influyera en la adicionamiento del 50 50 de este 50 y no 50 efectividad alterara los resultados de letalidad. El resultado de este Larv as Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv as 50 Larv
bioensayo fue negativo ya que ninguna larva muri dentro de un tiempo de 72 horas. 50
TERCER ESTADIO
CUARTO ESTADIO
48
Estadio 1
3.6.
Evaluacin de letalidad
Las lecturas de letalidad se realizaron a las 12, 24, 36, 48, 60 y 72 horas, luego de haber aplicado el extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata, en donde las larvas se consideraron muertas cuando no
reaccionaron al momento de ser tocadas con un puntero metlico de punta roma en la regin cervical (Fotos 43 y 44).
Foto 43. Puntero metlico de punta roma. Foto 44. Punta roma del puntero.
(Foto tomada por Autores.6 de Mayo de 2011). (Foto tomada por Autores.6 de Mayo de 2011)
49
3.7.
Anlisis estadsticos de la evaluacin
Se realizaron todos los modelos matemticos y estadsticos como promedios, desviacin estndar, anlisis de varianza (ANOVA) para un factor y anlisis de comparaciones pareadas, necesarios para analizar los resultados obtenidos de los bioensayos y llegar a determinar el porcentaje de mortalidad presentado en los cuatro estadios larvarios a las tres concentraciones diferentes y establecer cules fueron los tiempos de exposicin ms eficientes, estos modelos fueron:
3.7.1. Promedios. Por tener tres rplicas de cada concentracin en cada estadio larvario fue necesario sacar un promedio de larvas muertas por estadio y concentracin para poder determinar el porcentaje de mortalidad que hubo de larvas en las diferentes concentraciones, los promedios fueron calculados con la siguiente frmula: P = X1 + X2 + X3 3 Dnde: P = Promedio. X1, X2 y X3 = cantidad de larvas muertas en el control 1 (X1), control 2 (X2) y control 3 (X3). 3 = Cantidad de rplicas realizadas.
50
3.7.2. Desviacin estndar. La desviacin estndar fue necesaria calcularla por cada promedio de larvas muertas en los diferentes estadios y concentraciones, para comprobar que la variacin en los resultados obtenidos entre las tres replicas es mnima; entre ms pequeos son los valores de las desviaciones estndar menor variacin hay en los resultados de mortalidad de las rplicas, lo que indica que los resultados de mortalidad obtenidos en las rplicas son iguales o estn muy cercanos al promedio calculado de larvas muertas; entre ms altos sean los valores de las desviaciones estndar, ms alejados estn los resultados de las rplicas, del promedio calculado de larvas muertas. La desviacin estndar fue calculada con la siguiente frmula:
Donde: S = Desviacin estndar.
Xi = Resultados de las tres replicas.

= Promedio de las tres replicas.
n= Cantidad de rplicas.
51
3.7.3. Anlisis de varianza (ANOVA) para un factor. (Wayne, 1982). El anlisis de varianza (ANOVA) para un factor se realiz con el fin de demostrar la existencia de diferencias significativas entre los promedios de mortalidad de cada una de las concentraciones definidas y entre cada uno de los estadios. Para este anlisis de varianza se utilizaron las siguientes ecuaciones:
Donde:
K = nmero de rplicas en cada estadio. n = nmero de revisiones en cada uno de los tratamientos. N = (n x K) total de datos.
52
3.7.4. Anlisis de comparaciones pareadas. (Wayne, 1982). El anlisis de comparaciones pareadas se realiz con el fin de demostrar la existencia de diferencias significativas entre los tratamientos experimentales y el grupo control, especificando que el extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana) es efectivo. Para este anlisis de comparaciones pareadas se utilizaron las siguientes ecuaciones:
Donde: = Promedio de di.
sd = Desviacin estndar. n = total de datos. X = Promedio de larvas muertas por cada estadio con adicin de extracto
Annona muricata.
Y = Promedio de larvas muertas por cada estadio sin adicin de extracto

Annona muricata (controles o testigos).
53
4. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS Una vez realizados los bioensayos necesarios para evaluar la toxicidad larvaria del extracto etanlico de la semilla Annona muricata (guanbana) se procedi a organizar y analizar cada una de las variables contenidas en este estudio, separando los resultados por estadios y concentraciones con el fin de conocer ms detalladamente como fue el comportamiento de las larvas del mosquito Culex quinquefasciatus frente al extracto de la semilla, cul fue el porcentaje de mortalidad en los diferentes estadios larvarios y en que tiempos de exposicin se dieron estos porcentajes. 4.1. ESTADSTICA DESCRIPTIVA
Luego de organizados los resultados obtenidos por medio de tablas, se realiz un anlisis univariado interpretando el comportamiento que tuvieron las larvas de los cuatro estadios diferentes, en las tres concentraciones (100ppm, 250ppm y 500ppm) y sus respectivos controles de manera aislada. Dentro de los anlisis se evaluaron variables cuantitativas teniendo en cuenta medidas de tendencia central y de dispersin como promedios, desviaciones estndar, valores mximos y mnimos entre otros. Con este anlisis se pudo evaluar la efectividad que tuvo el extracto etanlico de la semilla de Annona muricata (guanbana) como biopesticida natural sobre los cuatro estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus. Los resultados obtenidos en los controles en larvas de primero, segundo, tercero y cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus, se hicieron en las mismas condiciones, fechas y horas en las que fueron realizados los bioensayos, con la diferencia que a los controles no se les adicion extracto etanlico de la semilla de Annona muricata (Guanabana) ni etanol, esto con el fin de comprobar que en los bioensayos la mortalidad de las larvas fuera causada por la adicin de extracto y no por algn otro factor, como, que el agua o comida estuvieran contaminadas, que los utensilios de medicin y los recipientes no estuvieran bien lavados o que durante el periodo de
54
experimentacin cayeran a los bioensayos algunas partculas del ambiente que causaran la mortalidad de las larvas. 4.1.1. Porcentajes de mortalidad en los cuatro estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus expuestos a las tres
concentraciones del extracto etanlico de la semilla de Annona muricata (guanbana), con sus respectivos controles. En las tablas de la 1 a la 12 se encuentran consignados los resultados obtenidos en los bioensayos realizados a larvas de primero, segundo, tercero y cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus con concentraciones de 100ppm, 250ppm y 500ppm del extracto de semilla de Annona muricata, cada uno con sus respectivos controles; con estos resultados se pudo determinar cul fue el mayor efecto txico causado por estas concentraciones en las larvas de los diferentes estadios y en qu tiempo se produjo esta toxicidad. ESTADIO 1 4.1.1.1. Resultados de los bioensayos realizados en larvas de primer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus. En las tablas de la 1 a la 3 se muestra que el mayor efecto txico con un 100% de mortalidad en larvas de 1 estadio, en el menor tiempo de exposicin dentro de las 72 horas de experimentacin, se evidenci a las 24 horas de haber aplicado el extracto de semilla de Annona muricata en las tres concentraciones, aunque a las 12 horas en la concentracin ms alta (500ppm) se evidenci un porcentaje alto del 98% de mortalidad, con un promedio de 49 larvas muertas y una desviacin estndar de 1,00, adems en la concentracin mnima (100ppm) y en la concentracin media (250ppm) tambin se encontr un porcentaje alto del 90% de mortalidad, con un promedio de 45 larvas muertas en ambas concentraciones y una desviacin estndar de 1,53 en la concentracin mnima y de 2,00 en la concentracin media.
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Tabla 1. Bioensayos realizados a larvas en estadio 1 de mosquitos Culex quinquefasciatus con la concentracin 100ppm y su respectivo control.
Fecha y hora del inicio de los bioensayos: 26 de Mayo de 2011 - 7:10pm Cantidad de larvas muertas Cantidad de larvas muertas en el control Revisin a partir de la con la concentracin 100 ppm hora de inicio Promedio de Porcentaje Promedio Porcentaje
larvas muertas Desviacin estndar de mortalidad de larvas muertas Desviacin estndar de mortalidad
1 revisin a las 12 horas 2 revisin a las 24 horas 3 revisin a las 36 horas 4 revisin a las 48 horas 5 revisin a las 60 horas 6 revisin a las 72 horas
45 50 50 50 50 50
1,53 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
90% 100% 100% 100% 100% 100%
0 0 1 1 3 3
0,00 0,58 1,00 0,58 1,15 1,15
0% 0% 2% 2% 6% 6%
Fuente. Autores
45 50 50 50 50 50
2,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
90% 100% 100% 100% 100% 100%
0 0 1 1 3 3
0,00 0,58 1,00 0,58 1,15 1,15
0% 0% 2% 2% 6% 6%
Fuente. Autores
56
49 50 50 50 50 50
1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
98% 100% 100% 100% 100% 100%
0 0 1 1 3 3
0,00 0,58 1,00 0,58 1,15 1,15
0% 0% 2% 2% 6% 6%
Fuente. Autores
ESTADIO 2 4.1.1.2. Resultados de los bioensayos realizados a larvas de segundo estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus. Los bioensayos realizados en larvas de estadio 2 arrojaron resultados donde se muestra que el mayor efecto txico con un 100% de mortalidad de las larvas, en el menor tiempo de exposicin dentro de las 72 horas de experimentacin se evidenci a las 12 horas de haber aplicado el extracto de semilla de Annona muricata en la concentracin ms alta (500ppm), aunque en las otras dos concentraciones (100ppm y 250ppm) y en el mismo lapso de tiempo (12 horas) se evidenciaron porcentajes altos de mortalidad, del 92% en la concentracin mnima con un promedio de 46 larvas muertas y una desviacin estndar de 1,00 y del 98% en la concentracin media con un promedio de 49 larvas muertas e igualmente con una desviacin estndar de 1,00; de estas dos concentraciones el 100% de mortalidad de las larvas se encontr a las 24 horas. Esta informacin se encuentra consignada en las siguientes tablas (tabla 4, 5 y 6).
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Fecha y hora del inicio de los bioensayos: 16 de Junio de 2011 - 5:45pm Cantidad de larvas muertas Cantidad de larvas muertas en el control Revisin a partir de la con la concentracin 100 ppm hora de inicio Promedio de Porcentaje Promedio Porcentaje
46 50 50 50 50 50
1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
92% 100% 100% 100% 100% 100%
1 2 3 4 4 4
0,00 0,58 1,53 1,73 1,73 1,73
2% 4% 6% 8% 8% 8%
Fuente. Autores
49 50 50 50 50 50
1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
98% 100% 100% 100% 100% 100%
1 2 3 4 4 4
0,00 0,58 1,53 1,73 1,73 1,73
2% 4% 6% 8% 8% 8%
Fuente. Autores
58
50 50 50 50 50 50
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
100% 100% 100% 100% 100% 100%
1 2 3 4 4 4
0,00 0,58 1,53 1,73 1,73 1,73
2% 4% 6% 8% 8% 8%
Fuente. Autores
ESTADIO 3 4.1.1.3. Resultados de los bioensayos realizados a larvas de tercer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus. En las tablas de la 7 a la 9 se muestra que el mayor efecto txico con un 100% de mortalidad en larvas de estadio 3, en el menor tiempo de exposicin dentro de las 72 horas de experimentacin, se evidenci a las 48 horas de haber aplicado el extracto de semilla de Annona muricata en la concentracin de 250ppm, aunque a las 12 horas en la concentracin ms alta (500ppm) tambin se evidenci este porcentaje (100%). A pesar de que en las larvas de este estadio (tercero) no se alcanz el 100% de mortalidad en la concentracin de 100ppm dentro del tiempo de observacin (72 horas luego de haber aplicado el extracto), si se encontr un porcentaje alto a las 72 horas del 96% de mortalidad, con un promedio de 48 larvas muertas y una desviacin estndar de 0,58; las larvas que siguieron vivas en esta concentracin luego de las 72 horas, murieron luego de pasar de ese estadio al siguiente (del tercer estadio al cuarto).
59
Fecha y hora del inicio de los bioensayos: 18 de Julio de 2011 - 6:30pm Cantidad de larvas muertas Cantidad de larvas muertas en el control Revisin a partir de la con la concentracin 100 ppm hora de inicio Promedio de Porcentaje Promedio Porcentaje
11 44 45 47 47 48
1,15 1,15 1.15 0.58 0,58 0,58
22% 88% 90% 94% 94% 96%
0 1 2 2 2 2
0,00 1,00 0,58 1,00 1,00 1,00
0% 2% 4% 4% 4% 4%
Fuente. Autores
43 46 48 50 50 50
0,58 0,94 0,58 0,00 0,00 0,00
86% 92% 96% 100% 100% 100%
0 1 2 2 2 2
0,00 1,00 0,58 1,00 1,00 1,00
0% 2% 4% 4% 4% 4%
Fuente. Autores
60
50 50 50 50 50 50
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
100% 100% 100% 100% 100% 100%
0 1 2 2 2 2
0,00 1,00 0,58 1,00 1,00 1,00
0% 2% 4% 4% 4% 4%
Fuente. Autores
ESTADIO 4 4.1.1.4. Resultados de los bioensayos realizados a larvas de cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus.
Los bioensayos realizados en larvas de estadio 4 arrojaron resultados donde se evidenci que a las 12 horas de haber aplicado el extracto de semilla de Annona muricata en la concentracin ms alta (500ppm) se alcanz el mayor efecto txico con un 100% de mortalidad de las larvas en el menor tiempo de exposicin dentro de las 72 horas de experimentacin, aunque en la concentracin media (250ppm) en el mismo lapso de tiempo (12 horas) se mostr un porcentaje alto de mortalidad, del 84% con un promedio de 42 larvas muertas y una desviacin estndar de 1,00. La mortalidad del 100% de las larvas en esta concentracin y en la mnima (100ppm), no se alcanz dentro del tiempo de observacin (72 horas luego de haber aplicado el extracto), sin embargo si hubo un porcentaje alto de mortalidad en estas dos concentraciones a las 72 horas el cual fue del 92% en ambas concentraciones
61
(100ppm y 250ppm) con una desviacin estndar de 1,53 en la concentracin mnima y una desviacin estndar de 0,58 en la concentracin media. Esta informacin se encuentra consignada en las siguientes tablas (tabla 10, 11 y 12). Tabla 10. Bioensayos realizados a larvas en estadio 4 de mosquitos Culex quinquefasciatus con la concentracin 100ppm y su respectivo control.
4 41 43 44 45 46
0,58 0,58 2,08 1,53 2,00 1,53
8% 82% 86% 88% 90% 92%
0 1 2 2 2 2
0,00 1,15 0,00 0,58 0,58 0,58
0% 2% 4% 4% 4% 4%
Fuente. Autores
42 45 45 46 46 46
1,00 0,47 1,00 0,58 0,58 0,58
84% 90% 90% 92% 92% 92%
0 1 2 2 2 2
0,00 1,15 0,00 0,58 0,58 0,58
0% 2% 4% 4% 4% 4%
Fuente. Autores
62
50 50 50 50 50 50
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
100% 100% 100% 100% 100% 100%
0 1 2 2 2 2
0,00 1,15 0,00 0,58 0,58 0,58
0% 2% 4% 4% 4% 4%
Fuente. Autores
En la informacin que se aprecia en las tablas anteriores (Tabla 1 a la tabla 12) respecto a los controles se puede apreciar que existe un porcentaje mnimo de mortalidad de las larvas en los cuatro estadios, lo cual se debe al ciclo de vida normal del mosquito Culex quinquefasciatus, ya que en el proceso larvario, al pasar de un estadio al siguiente existen larvas que no lo logran, las cuales hacen un porcentaje mnimo, esto lo sustenta un estudio realizado por estudiantes de la facultad de medicina de la Universidad Nacional de Colombia al ciclo de vida del mosquito Culex quinquefasciatus en el ao 2004. (Salazar,
2004).
63
4.1.2. Comparacin de los porcentajes de mortalidad obtenidos en los diferentes estadios con las diferentes concentraciones con sus respectivos controles.
120% 98% 90%
100%
% Mortalidad
80%
60%
100ppm y 250ppm 500ppm
40%
Control
20%
0% 0% 0 12 24 36 48 60 72 0% 2% 2% 6% 6%
Tiempos de revision en horas
Grfica 1. Mortalidad de larvas en primer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus con las tres concentraciones del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control. Fuente. Autores. Los resultados que se exponen en la grfica 1 demuestran que el primer estadio larvario de mosquitos Culex quinquefasciatus es bastante sensible al extracto de semilla de Annona muricata ya que con la concentracin mnima de 100ppm se logr un porcentaje de mortalidad bastante alto del 90% desde la primera revisin la cual se realiz a las 12 horas de haber aplicado el extracto, adems se pudo observar que a pesar de haber aumentado la concentracin del extracto a 250ppm en el mismo lapso de tiempo (12 horas) se obtuvo el mismo comportamiento que el de 100ppm, esto indica que as como el extracto causa mortalidad con una mnima parte y una media, las larvas alcanzan a
64
tener un poco de resistencia debido a que estn cambiando de estadio. Los porcentajes de mortalidad en el control indica que los factores externos no influyeron en el momento de evaluar la letalidad de las diferentes concentraciones del extracto biopesticida.
120% 100% 98% 92%
100%
% Mortalidad
80%
60%
100ppm 250ppm
40%
500ppm
Control 20%
2% 0% 4%
6% 36
8%
8%
8%
12
24
48
60
72
Grfica 2. Mortalidad de larvas en segundo estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus con las tres concentraciones del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control. Fuente. Autores. Los resultados que se exponen en la grfica 2 demuestran que el segundo estadio larvario de mosquitos es igual de sensible a las larvas de estadio 1 al extracto de la semilla de Annona muricata (guanbana), ya que con la concentracin de 100ppm y 250ppm se alcanzaron porcentajes altos de mortalidad en el mnimo tiempo de revisin (12 horas) estos fueron del 92% en la concentracin mnima y del 98% en la concentracin media y el 100% de mortalidad en ambas concentraciones fue alcanzado a las 24 horas, mientras en la concentracin ms alta (500ppm) el porcentaje se evidenci a las 12
65
horas. De igual forma la diferencia entre porcentajes de mortalidad en este estadio en las concentraciones de 100ppm y de 250ppm fue del 6%, esto muestra que el comportamiento letal de las larvas de estadio 2 fue igual a pesar de haber aumentado la concentracin. Los porcentajes de mortalidad en el control o testigo pudieron depender de las variaciones de temperatura, luz, y humedad relativa, disponibilidad de alimento y del comportamiento normal del ciclo de vida de las larvas.
120%
100%
100% 92% 88% 96% 90% 94% 94% 96%
80%
86%
% Mortalidad
100ppm 60% 250ppm 500ppm 40% Control
20%
22% 4% 36 4% 48 4% 60 4% 72
0% 0
0%
12
2% 24
Grfica 3. Mortalidad de larvas en tercer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus con las tres concentraciones del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control. Fuente. Autores. En la grfica 3 se puede apreciar que la mortalidad del 100% de las larvas se encontr desde la primera revisin (12 horas) en la concentracin de 500ppm mientras en la concentracin de 100ppm este porcentaje de mortalidad no se
66
evidenci dentro del tiempo de experimentacin (72 horas, luego de haber aplicado el extracto), pero a este tiempo si se obtuvo un porcentaje alto del 96% en este estadio las larvas siguieron vivas hasta alcanzar la siguiente etapa de su ciclo de vida, en el caso las larvas llegaron a convertirse en larvas de cuarto estadio. En la concentracin de 250ppm el porcentaje del 100% de letalidad en las larvas fue alcanzado a las 48 horas. Los porcentajes de letalidad en el control de este estadio fueron mnimos en comparacin de los obtenidos en el estadio 1 y 2, posiblemente a que el estadio 3 puede presentar mayor resistencia a los factores externos por su desarrollo alcanzado.
120%
100% 90% 84% 80% 90% 86% 82% 100ppm 60% 250ppm 500ppm 40% Control 92% 88% 92% 90% 92%
100%
% Mortalidad
20% 8% 0% 0% 2% 4% 4% 4% 4%
12
24
36
48
60
72
Tiempos de revisin en horas
Grfica 4. Mortalidad de larvas en cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus con las tres concentraciones del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control. Fuente. Autores.
67
En la grfica 4 se observ que no se alcanz el 100% de mortalidad en las concentraciones de 100ppm y 250ppm dentro del tiempo de experimentacin (72 horas, luego de haber aplicado el extracto), pero a este tiempo si se obtuvo un porcentaje alto de mortalidad del 92% en ambas concentraciones, las larvas que siguieron vivas consiguieron alcanzar la siguiente etapa de su ciclo de vida, en este caso las larvas llegaron a convertirse en pupas y luego murieron. En la concentracin ms alta (500ppm) si se evidenci el 100% de mortalidad de las larvas del estadio 4 en la primera revisin (12 horas). En los porcentajes de letalidad en el control del estadio 4 fueron mnimos igual al estadio 3, puede ser que en estos estadios (3 y 4) presente una alta resistencia a los factores externos (temperatura ambiente, humedad relativa, luz, etc.) por su desarrollo alcanzado. 4.1.3. Anlisis de varianza (ANOVA) entre grupos experimentales. Para este anlisis se plantearon hiptesis nulas (H0) e hiptesis alternas (H1) con el fin de demostrar la existencia de diferencias significativas entre los promedios de mortalidad de cada una de las concentraciones definidas y entre cada uno de los estadios. 4.1.3.1. Anlisis de la varianza (ANOVA) para los promedios de mortalidad de los mosquitos Culex quinquefasciatus en los cuatro estadios larvarios en cada una de las concentraciones del extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana).
Hiptesis nula (H0) e hiptesis alterna (H1): H0: No hay diferencia entre los promedios de mortalidad de cada una de las concentraciones definidas. H1: Si hay diferencia entre los promedios de mortalidad de cada una de las concentraciones definidas.
68
Tabla13.
ANOVA para larvas de primer estadio de mosquitos Culex
quinquefasciatus.
Tiempo 1 2 3 4 5 6 x x (x)^2 (x)^2 x b w t glb glw MSB MSW F
100ppm 45 50 50 50 50 50 295 14495 263254 789728,444 43921 1,9382716 45,3703704 47,308642 2 15 0,9691358 3,02469136 0,32040816
250ppm 45 50 50 50 50 50 295 14525
500ppm 49 50 50 50 50 50 299 14901
F tabla
3,68
69
Tabla 14. ANOVA para larvas de segundo estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus.
100ppm 46 50 50 50 50 50 296 14616 267017 801025 44517 1,44444444 14,1666667 15,6111111 2 15 0,72222222 0,94444444 0,76470588
250ppm 49 50 50 50 50 50 299 14901
500ppm 50 50 50 50 50 50 300 15000
F tabla
3,68
70
Tabla 15. ANOVA para larvas de tercer estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus.
100ppm 11 44 45 47 47 48 241 10766 231186 687793,778 39627 320,197531 1095,7037 1415,90123 2 15 160,098765 73,0469136 2,19172526
250ppm 43 46 48 50 50 50 288 13861
500ppm 50 50 50 50 50 50 300 15000
F tabla
3,68
71
Tabla 16. ANOVA para larvas de cuarto estadio de mosquitos Culex quinquefasciatus.
100ppm 4 41 43 44 45 46 223 9676 212778 629377,778 36839 497,530864 1375,7037 1873,23457 2 15 248,765432 91,7135802 2,71241654
250ppm 42 45 45 46 46 46 270 12163
500ppm 50 50 50 50 50 50 300 15000
F tabla
3,68
En las tabla de la 13 a la 16 se muestran los anlisis de varianza realizados a los promedios de mortalidad de las larvas en estadio 1, 2, 3 y 4 de mosquitos Culex quinquefasciatus en cada una de las concentraciones (100ppm, 250ppm y 500ppm) del extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana). En los cuatro estadios, el F (estadstico de prueba) calculado es menor a F en tabla con grados de libertad entre concentraciones 2 y grados de libertad dentro de cada concentracin 15. Por lo tanto se acepta la hiptesis nula (H 0) y se rechaza la hiptesis alterna (H1), ya que H1 solo se acepta si el valor de F calculado es igual o mayor al F en tabla, es decir que no hay diferencia entre los promedios de mortalidad de cada una de las concentraciones definidas en
72
los cuatro estadios, por lo tanto estadsticamente la mortalidad de las larvas tanto en la concentracin ms baja como en la ms alta es la misma, ya que no hay una diferencia notable entre promedios debido a que las tres concentraciones (100ppm, 250ppm y 500ppm) afectaron de igual manera los cuatro estadios de las larvas, aunque se hubiera pensado que si tuvieran variacin los promedios de las larvas de tercer y cuarto estadio por la observacin que se realiz en las grficas 3 y 4, pero por los resultados del F calculado en estos estadios se puede determinar que no hay variacin a pesar de que estos F calculados son mucho ms cercanos al F en tabla que los F calculados en los estadios 1 y 2.
4.1.4. Anlisis
de
comparaciones
pareadas
entre
los
tratamientos
experimentales en los cuatro estadios y sus respectivos controles.
Para este anlisis se plante hiptesis nula (H0) e hiptesis alterna (H1) con el fin de demostrar la existencia de diferencias significativas entre los tratamientos experimentales y el grupo control, especificando que el extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana) es efectivo.
H0: t (calculado) al t (en tabla) si el extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana) no es efectivo. H1: t (calculado) al t (en tabla) si el extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana) es efectivo d se tom = 0 porque no se tiene diferencias entre la poblacin de larvas en cada estadio.
73
Tabla 17. Comparacin pareada entre el promedio de larvas muertas por cada estadio con adicin de extracto Annona muricata (X) y promedio de larvas muertas por cada estadio sin adicin de extracto Annona muricata (controles o testigos) (Y).
di Estadio 1 49 1 48 Estadio 2 50 3 47 Estadio 3 46 1 45 Estadio 4 44 2 42 Promedio 45,5 Desviacin estndar sd 2,646 4 n 2 t calculado 34,39 Grado de libertad entre (V1) 3 0,025 Valor critico de t (dos colas) 4,177
La tabla 17 muestra el anlisis de comparaciones pareadas entre los cuatro estadios y sus respectivos controles de larvas de los mosquitos Culex quinquefasciatus; en esta se muestra que el t calculado es mayor al t en tabla (valor critico) con grado de libertad entre estadios de 3 y un de 0,025 debido a que son dos muestras emparejadas. Por lo tanto se acepta la hiptesis alterna (H1) y se rechaza la hiptesis nula (H0), ya que H0 solo se acepta si el valor de t calculado es igual o menor al t en tabla, es decir que el extracto de la semilla de Annona muricata (Guanbana) es efectivo en los cuatro estadios.
74
5. CONCLUSIONES.
Adems de las observaciones realizadas y con ayuda del anlisis de comparaciones pareadas se comprob que las semillas de la especie vegetal Annona muricata tiene un alto potencial txico contra las larvas del mosquito Culex quinquefasciatus en sus cuatro estadios larvarios.
Con la concentracin mnima utilizada en esta investigacin de 100ppm y con el tiempo mnimo de exposicin de 12 horas se demostr que el extracto vegetal de la semilla de Annona muricata tiene una excelente actividad como biopesticida.
El estadio de las larvas del mosquito Culex quinquefasciatus ms afectado por el extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata fue el primero y el ms resistente a este fue el cuarto.
Para esta investigacin el tiempo mximo de almacenamiento alcanzado por el extracto natural fue de cuatro meses en refrigeracin a 4C, en este tiempo las caractersticas organolpticas (color, olor, textura y viscosidad) permanecieron iguales a las observadas inicialmente.
Al realizar los bioensayos de los controles o testigos indicaron que los factores externos no influyeron en el momento de evaluar la letalidad de las diferentes concentraciones del extracto biopesticida.
75
El extracto vegetal de la semilla Annona muricata es una excelente alternativa natural, viable, econmica y amigable con el medio ambiente para el control de esta especie y otras.
Por medio del anlisis de varianza (ANOVA) para un factor se determin que al no encontrar variacin en los promedios de mortalidad de cada una de las concentraciones definidas, el extracto de la semilla Annona muricata tuvo el mismo efecto en los cuatro estadios larvarios del mosquito Culex quinquefasciatus.
76
6. RECOMENDACIONES.
Es conveniente que en investigaciones como esta las revisiones de los bioensayos se hagan ms continuamente, para as tener una mejor informacin sobre el comportamiento que tienen las larvas del mosquito Culex quinquefasciatus frente al extracto natural de la semilla de Annona muricata, o frente a cualquier otro extracto.
Para futuras investigaciones que involucren ensayos de efectividad del extracto natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) como biopesticida sobre larvas de mosquitos de la especie Culex
quinquefasciatus, se recomienda utilizar concentraciones menores a 100ppm, para evidenciar mayor variabilidad en los resultados de mortalidad. Es indispensable tener en cuenta que antes de iniciar con la experimentacin de las larvas, se tenga una produccin de estas continua y abundante para que la experimentacin sea continua y no se tenga que parar mientras se obtienen nuevamente larvas. Se recomienda que en investigaciones parecidas, el extracto de la semilla de Annona muricata o cualquier extracto natural sea secado hasta dejar su presentacin en polvo ya que sera de ms fcil aplicacin y dilucin. Sera bueno que en prximos estudios se evale el tiempo de vida del extracto etanlico natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) o cualquier otro extracto natural.
77
Sabiendo que en general todas las partes del rbol de la especie vegetal Annona muricata (Guanbana), poseen propiedades
insecticidas, sera apropiado investigar por separado y ms a fondo cada parte del rbol (raz, tallo, hojas, fruto, semillas) y experimentar detenidamente con cada una de ellas. Es importante que en una nueva investigacin realizada con la semilla de la especie vegetal de Annona muricata (Guanbana) se realicen los procedimientos adecuados para identificar especficamente cual es el agente activo que funciona como insecticida en las larvas. En investigaciones futuras sera importante realizar experimentos con este extracto etanlico en el sector agrcola para evaluar aspectos positivos o negativos que este puede causar al ser usado y con las diferentes presentaciones de aplicacin (polvo o liquido).
78
7. BIBLIOGRAFIA
AUDITORA ANALTICA DE GESTIN, Uso Y Manejo De Plaguicidas En Colombia., Bogot D.C. Marzo de 2004.
AVILA FRANCISCO, Efecto del cido giberelico y agua a 4c en la germinacin de las semillas de guanbana (Annona muricata L.), Tesis, Instituto de investigaciones agronmicas, UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA. Guatemala. Mayo de 2005.
BOBADILLA A., ZAVALETA E., GIL F., POLLACK V., SISNIEGAS G., Efecto bioinsecticida del extracto etanlico de las semillas de Annona cherimolia Miller chirimoya Y A. muricata Linnaeus guanbana sobre larvas del IV estadio de Anopheles sp., Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM. Per., 2002.
BOBADILLA A., ZAVALETA E., ZAVALA F., MOSTACERO J., TARAMONA L., Evaluacin larvicida de suspensiones acuosas de Annona muricata Linnaeus guanbana sobre Aedes aegypti Linnaeus (Diptera, Culicidae) Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM. Per., 2005.
FLOREZ YESID, MARTINEZ ELIZABETH, Obtencin y evaluacin de extractos bioactivos presentes en semillas de Annona muricata de la regin cafetera. Trabajo de Grado, Escuela de Qumica,
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA. Pereira, Colombia, 2010.
79
GARCIA KAROL. Aislamiento y caracterizacin estructural de acetogeninas obtenidas de semillas de Annona cherimolia y Annona muricata. Evaluacin genotoxica y potencial quimioteraputico. Tesis. Instituto Politcnico Nacional, ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS. Mxico, D.F. Enero de 2009.
OCAMPO S., BETANCUR J., ORTIZ A., OCAMPO C., Estudio cromatogrfico comparativo de los cidos grasos presentes en semilla de Annona cherimolioides y Annona muricata L. UNIVERSIDAD DE CALDAS, Colombia,Diciembre 2007.
ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD (OMS), Resistencia De Los Vectores De Enfermedades A Los Plaguicidas, 15 informe del comit de expertos de la OMS en biologa de los vectores y lucha antivectorial. Ginebra, 1998.
PARRA GJ, GARCA CM, CORTES JM. Actividad insecticida de extractos vegetales sobre Aedes aegypti (Diptera: Culicidae), vector del dengue en Colombia. Colombia, Junio de 2007.
PEREZ P.,CESAREO
R., LARA R., MONTES B., RAMIREZ V.,
Toxicidad de aceites, esencias y extractos vegetales en larvas de mosquito Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae), Acta Zoologica Mexicana, Instituto de Ecologa. Xalapa, Mxico, 2004
SALAZAR MYRIAM J, MONCADA LIGIA I, Ciclo de vida de Culex quinquefasciatus Say, (Diptera: Culicidae) bajo condiciones no controladas en Bogot, Facultad de Medicina, UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA. Bogot, D.C., Colombia, 2004.
80
WAYNE W. DANIEL., Estadstica con aplicaciones a las ciencias sociales y la educacin. Mxico: Mc Graw-Hill, 1982.
FLOREZ LINA., MESA VIVIANA., Pruebas de actividad biolgica con dos organismos modelos en acetogeninas de annonaceae con actividad biopesticida. Monografa. Escuela de Qumica,
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA. Pereira, Colombia, 2007. [En lnea]: <http://recursosbiblioteca.utp.edu.co/tesisdigitales/texto/58322F634ms. pdf> Consultado el 12 de Julio de 2011.
GARCIA, Mara. La guanbana (Annona muricata L.). Propiedades y usos, Revista CitriFrut. La Habana, Cuba, Junio, 2010. [En lnea]: <http://www.actaf.co.cu/revistas/revista_citrifrut/Citrus%201%202010/R CA11_27_1_%202010.pdf> Consultado el 11 de Julio de 2011.
OSPINA L., PINZON R., Plantas usadas como antidiabticas en las medicina popular colombiana, Revista Colombiana De Ciencias Qumico Farmacuticas, UNIVERSIDAD NACIONAL DE
COLOMBIA. Colombia, Bogot D.C., 1995. [En lnea]: <http://www.ciencias.unal.edu.co/unciencias/datafile/farmacia/revista/V 23P81-94.pdf> Consultado el 11 de Julio de 2011.
SCHILE G., GONZALEZ E., LUNA C.,
Las acetogeninas de
Annonaceae: efecto antiproliferativo en lneas celulares neoplsicas. Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas. Chiapas, Mxico, 2009. [En lnea]:
<http://redalyc.uaemex.mx/pdf/856/85611265004.pdf > Consultado el 12 de Julio de 2011.
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EVALUACIN DE LA EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ETANLICO NATURAL DE LA SEMILLA DE Annona muricata (GUANBANA) PARA EL CONTROL DE MOSQUITOS Culex quinquefasciatus

EN ESTADO LARVARIO A CONDICIONES DE LABORATORIO DE ZOONOSIS.

KATHERINNE CORTES DAZA GLORIA LIZETH PARRA RODRGUEZ

KATHERINNE CORTES DAZA 20081485008 GLORIA LIZETH PARRA RODRGUEZ 20081485024

DIEGO TOMAS CORRADINE MORA Mdico Veterinario

Nota de aceptacin: ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________

______________________________ Firma del director

______________________________ Firma del jurado

______________________________ Firma del jurado

Bogot D.C., 09 de Septiembre de 2011

KATHERINNE CORTES DAZA

GLORIA LIZETH PARRA RODRGUEZ

2. Marco terico..22 2.1. Marco conceptual.22

2.1.3. Actividad biolgica, biopesticidas..29 2.2. 2.3. Antecedentes30 Marco legal31

quinquefasciatus..35 3.3. Observacin semanal (evolucin de las balsas con

controles........73 5. Conclusiones..75 6. Recomendaciones.....77 7. Bibliografa..79

Bioensayos realizados a larvas en 1 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 250ppm y su respectivo control......56

Bioensayos realizados a larvas en 1 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 500ppm y su respectivo control......57

Bioensayos realizados a larvas en 2 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 250ppm y su respectivo control......58

Bioensayos realizados a larvas en 2 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 500ppm y su respectivo control......59

Bioensayos realizados a larvas en 3 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 250ppm y su respectivo control......60

Bioensayos realizados a larvas en 3 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 500ppm y su respectivo control..61

Bioensayos realizados a larvas en 4 estadio de mosquitos

quinquefasciatus con la concentracin de 250ppm y su respectivo control......62

Bioensayos realizados a larvas en 4 estadio de mosquitos

con las tres concentraciones del extracto etanlico

natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control.64

con las tres concentraciones del extracto etanlico

con las tres concentraciones del extracto etanlico

natural de la semilla de Annona muricata (guanbana) y su respectivo control.67

Foto 20. Foto 21.

Foto 22. Foto 23.

Foto 24. Foto 25. Foto 26.

Foto 43. Foto 44.

FIGURA 1. Distribucin de los bioensayos..48

Palabras claves Annona muricata, Culex quinquefasciatus, biopesticida, extracto natural

1.1. Objetivo General

al 100% del extracto etanlico natural de la

los huevos son depositados en aguas estancadas o que contengan gran

Foto 1. Hembra hematfaga. (Foto tomada por Kathy Keatley Garvey, 8 de

Foto 2. Hembra del mosquito Culex quinquefasciatus colocando huevos. (Foto

2.1.2. Generalidades Annona muricata (Guanbana).

2.1.2.1. Clasificacin taxonmica de Annona muricata.

2.1.2.2. Caractersticas botnicas. (vila, 2005).

Foto 7. rbol de la especie vegetal Annona muricata (Guanbana). (Foto

Foto 10. Pulpa de Annona muricata (Guanbana). (Foto tomada

Foto 12. Compra del fruto.

Foto 14. Extraccin de semillas.

y crianza de larvas y adultos del mosquito Culex

Para la obtencin de las larvas es necesario que las hembras de los

Foto 17. Alimento de los mosquitos (Dieta Sacarosa).

Observacin semanal (evolucin de las balsas con huevos)

Preparacin y determinacin de las concentraciones (ppm) del extracto natural.

Foto 22. Trituracin de la semilla.

Foto 23. Semilla triturada.

Foto 24. Semilla triturada. (Foto tomada por,

Foto 35. Extracto de la semilla Filtrado. (Foto tomada por Autores. 31

Foto 38. Rotaevaporador. (Foto tomada por Autores. 11 de Mayo de 2011)

Nota de aceptacin: