PRACTICA NO.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS POR EL MTODO DE
DILUCIONES Y VERTIDO EN PLACA

1.- Investiga las tcnicas que existen para el conteo total de
microorganismos e indica su fundamento.
DILUCIONES Y VERTIDO DE PLACA
El conteo de poblaciones microbianas por dilucin en placa es un mtodo
simple y rpido para la cuenta viable de clulas microbianas.
Fundamento
El mtodo de dilucin en placa se fundamenta en que cualquier clula viable
inoculada en un medio de cultivo se multiplica y produce datos de fcil
identificacin, como la formacin de colonias en placas de agar. Este mtodo
consiste en la preparacin de una serie de diluciones de una muestra en un
diluyente apropiado, esparciendo una alcuota de una dilucin sobre la
superficie de un medio de cultivo slido e incubando la placa de agar bajo
condiciones ambientales apropiadas. La dilucin debe permitir generar colonias
separadas, cada colonia puede proceder de una sola clula o de una
agrupacin, la cual se contar como una bacteria. Bajo este fundamento, estas
placas pueden ser usadas no slo para el conteo de poblaciones microbianas,
sino tambin para el aislamiento de organismos.

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia
eficiente de estimacin de densidades poblacionales especialmente cuando
una evaluacin cuantitativa de clulas individuales no es factible. La tcnica se
basa en la determinacin de presencia o ausencia (pos o neg) en rplicas de
diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos
presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito
importante de este mtodo es la necesidad de poder reconocer un atributo
particular de la poblacin(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El
estimado de densidad poblacional se obtiene del patrn de ocurrencia de ese
atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilstica.
2.- Para qu se utilizan estas tcnicas en la industria o en la clnica?
En la industria son utilizados para el control de calidad de un alimento
determinando la carga microbiana.
En la clnica para determinar el nivel de infeccin de una muestra.

5.- Qu ventajas e inconvenientes presenta el mtodo utilizado en la
prctica?
DESVENTAJAS
a) Que durante la realizacin de las diluciones no se logre separar
perfectamente los agregados bacterianos y ms de una bacteria forme una
colonia.
b) Durante el recuento se pueden producir dificultades ocasionadas por la
carencia de uniformidad en la extensin de los microorganismos.
VENTAJAS
Permite obtener un mayor nmero de colonias aisladas que el mtodo de
siembra por estra, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a
partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos.
Permite conocer un nmero representativo de la cantidad de UFC por ml.

6.- Escribe 3 ejemplos donde se aplique este procedimiento.
Muestras de alimentos
Muestra clnicas
Suelos

7.- Por qu es necesario hacer diluciones en esta tcnica?
Para disminuir la carga microbiana, es decir disminuir la concentracin de
microorganismos en cada dilucin para que en cada siembra stos crezcan
separados permitiendo un fcil conteo en la placa representativa, cabe
mencionar que si se conoce que la muestra presenta gran carga deben
hacerse ms diluciones para facilitar el conteo despus de la incubacin.


8.- Escribe el nmero de UFC encontradas en las placas sembradas en las
diferentes diluciones:
10-__10________
10
2
_100___________
10
3
_1000_________
10
4
_10000___
10
5
100000__________
10
6
_1000000__

9.- Cul es el criterio para seleccionar la placa representativa?
Se debe observar la placa que tenga un mejor aspecto en cuanto al nmero de
colonias apreciables, si es imposible contar las bateras no se elige y por el
contrario si casi no se observan bacterias la placa tampoco es viable.
El criterio utilizado para le eleccin de la placa representativa, es la placa que
contenga de 25 a 250 colonias en el medio multiplicando as, el nmero
obtenido por el inverso de su dilucin.

10.- Cul fue tu placa representativa y cul fue la dilucin de la placa?
Fue la que contena 126 UFC, la 10

11.- Calcula el no. de UFC/mL presente en la muestra:
126UFCx 10= 1260 UFC/ ml en la muestra de helado de vainilla.