Ejercicio resuelto

Ejercicio 2. TRABAJO DIRIGIDO N 3 (Fisicoqumica II, Curso 2009-2010 , Grupo B) La hidrlisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina y N-glutaril-L-fenilalanina, est catalizada por la enzima -quimotripsina. En unas determinadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinticos obtenidos han sido los siguientes: [GPNA] / 10-4 M v / mmol L-1 min-1 2.50 2.11 5.00 3.73 10.0 5.90 15.0 7.10

a) Asumiendo una cintica de tipo Michaelis-Menten, calclense grficamente los valores de Vmax y KM . b) Determine el valor del n de recambio (k2) sabiendo que la concentracin de enzima empleada fue de 4.00. 10-6 M.
______________________________________________________________________________

La ecuacin de Michalis-Menten es:

v=

V max $ [S] K M + [S]

Tomando inversos en ambos miembros se obtiene la linealizacin de Lineweaver-Burk:

1 v

1 V max

KM V max

1 $ [S]

que tiene la forma de una lnea recta:

y = o.o. + pendiente $ x
de manera que representando 1/v frente a 1/[S] podremos obtener Vmax y KM. a) Para ello hacemos la siguiente tabla auxiliar:

1 [S]

/10 3 M 1

4.00 0.455

2.00 0.263

1.00 0.169

0.667 0.141

( 1 )/(mmol 1 L min) v

A continuacin representamos estos datos en papel milimetrado:

Hoja de problemas n 1 (continuacin )

Como:

o.o. = 0.0800 mmol 1 L min u V 1 = 0.0800 mmol 1 L min max u V max = 12.5 mmol/L min
Como:

K pendiente = 0.095 $ 10 3 mmol 1 L min M u V M = 0.095 $ 10 3 mmol 1 L min M max u K M = 0.095 $ 10 3 mmol 1 L min M $ 12.5 mmol/L = 1.19 $ 10 3 M min
b) Recordando la definicin de k2 y sustituyendo, nos quedara:

mmol/L 10 3 mol V max 12.5 min $ 1 mmol k 2 = [E] = = 3.1 $ 10 3 min 1 4.00 $ 10 6 mol/L 0 k 2 = 3.1 $ 10 3 min 1 $ 1min = 52 s 1 60 s
(este nmero de recambio significara que 1 molcula de enzima es capaz de hidrolizar 52 molculas de sustrato por segundo)