CLASIFICACION

Los EIA pueden ser clasificados de acuerdo a los siguientes criterios: 1- Qu reactivo se quiere determinar, por ejemplo Ac o Ag. 2- Qu reactivo es marcado 3- Si son usados mtodos competitivos o no-competitivos. 4- Qu mtodo de separacin del reactivo libre y unido se utiliza. Existen dos tipos principales de EIA: homogneos y heterogneos. En los sistemas heterogneos, la reaccin Ag-Ac no afecta a la actividad enzimtica. En los homogneos, la interaccin Ac-Ag modula la actividad de la enzima. La modulacin de la actividad enzimtica elimina la necesidad del paso de separacin o inactivacin de la enzima. El trmino de ELISA fue usado por primera vez por Engvall y Perlmann en 1971. Los ELISA pueden ser desarrollados con diferentes configuraciones, pero, siempre uno de los reactantes debe estar inmobilizado en una fase slida.

Enzimas ms usadas

Para EIA heterogneos: 1-Horse radish peroxidasa 2-Fosfatasa alcalina 3- beta-galactosidasa 4-Glucosa oxidasa 5-Glucoamilasa 6-Anidrasa carbnica 7-Acetilcoliesterasa

Para EIA homogneos: 1- Lisozima 2- Malato dehidrogenasa 3-Glucosa6-Fosfato dehidrogensa 4- Ribonucleasa A 5- Galactosidasa

Enzimoinmunoanlisis Indirecto
Se ha aplicado de manera amplia en el diagnstico de anticuerpos virales. Los antgenos virales se inmovilizan sobre una fase slida, se agregan los sueros en estudio y se revela la reaccin con un anticuerpo especfico conjugado con una enzima, se aade un sustrato al cual la enzima convierte de incoloro a un producto coloreado.

EIA Indirecto

Anlisis inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)

Permite identificar inmunocomplejos por medio de enzimas unidas al antgeno o anticuerpo, estando uno de ellos adsorbido a un soporte slido (placa de poliestireno). La reaccin antgeno-anticuerpo se detecta mediante la utilizacin de un marcador, una enzima (peroxidasa fosfatasa), conjugada qumicamente al antgeno o al anticuerpo en su caso, se aade un sustrato y la reaccin entre ellos da un producto coloreado.

USO DE LAS ENZIMAS COMO NDICES DE CALIDAD

La presencia o ausencia de algunas enzimas en particular se relaciona con una determinada condicin microbiolgica o qumica de un producto. El ejemplo mas comn es el de la fosfatasa alcalina que se usa para verificar la efectividad de la pasteurizacin de la leche.

Despus de la pasteurizacin se determina la actividad residual de esta enzima mediante un anlisis colorimtrico.

Fosfatasa Alcalina

USO INDUSTRIAL DE LAS ENZIMAS

De las miles de enzimas conocidas, slo algunas se producen a escala industrial en la manufactura tanto de alimentos como de las materias primas para su elaboracin. El empleo d enzimas tiene muchas ventajas Son de origen natural y por lo tanto no deben ser txicas.

VENTAJAS
Son muy especficas en su manera de actuar. Funcionan en condiciones moderadas de temperatura y pH. Actan a bajas concentraciones. Su velocidad puede ser controlada. Son fcilmente inactivadas una vez alcanzado el grado de transformacin deseado.

La desventaja para el uso de las enzimas es que son muy caras y no se consiguen fcilmente

Hay muchas innovaciones tecnolgicas que estn logrando hacer ms econmicos estos catalizadores, como es el caso de la ingeniera gentica que transforma los microorganismos y los hace sobre productores de enzimas.

Las enzimas industriales son de origen animal, vegetal y microbiolgico, pero las ms abundantes son las ltimas. Tanto los hongos como las levaduras y las bacterias que se emplean para este fin, presentan muchas ventajas, ya que se puede alterar su sistema regulador de sntesis para que produzcan mayor cantidad.

FUENTES COMERCIALES DE ENZIMAS

VEGETAL
Malta Trigo -Amilasa,-amilasa,-glucanasa -Amilasa

Pia
Higo Papaya ANIMAL Estmago porcino Pncreas Hgado bovino

Bromelina
Ficina Papana

Pepsina Tripsina, lipasa Catalasa

HONGOS Aspergillus niger celulasa, catalasa, hemicelulosa, pectinasa, proteasa. Proteasa Glucosa isomerasa Glucosa isomerasa Catalasa

Mucor pusillus BACTERIAS Bacillus coagulans Streptococcus olivacens Micrococcus lysodeikticus Levaduras Saccharonmyces sp.

Invertasa

ENZIMAS DISPONIBLES COMERCIALMENTE

Aplicacin Detergentes Biolgicos Enzimas usadas
Principalmente proteinasas, producidas en forma extracelular a partir de bacterias

Usos
Condiciones de pre-humectacin y aplicaciones lquidas directas

Problemas
Provoca reacciones alrgicas en los trabajadores; actualmente eliminadas por las tcnicas de encapsulacin

Enzimas amilasa

Detergentes para lavavajillas. Eliminan restos resistentes de almidn

Catalizan la ruptura del almidn de la harina en azcar para que pueda ser usado por levaduras; se usan en la fabricacin de pan y bollera Fabricacin de galletas. Se usan para rebajar el nivel proteico de la harina Degradan almidn y protenas a azcares simples, aminocidos y pptidos usados por las levaduras para estimular la produccin de alcohol En la actualidad son muy utilizadas en la industria cervecera: rompen polisacridos y protenas de la malta Mejora las caractersticas de filtracin

Pastelera industrial

-amilasas de hongos; al inactivarse a 50 C se destruyen durante el proceso

Proteinasas

Industria cervecera

Enzimas producidas por la cebada durante el braceado

Enzimas producidas industrialmente: Amilasas, glucanasas, proteinasas

Betaglucanasa

Amiloglucosidasa

Cerveza baja en caloras

Proteinasas

Evita la turbidez durante el almacenamiento

Aplicacin Industria lctea

Enzimas usadas
Renina, obtenida del estmago de rumiantes jvenes (terneras, corderos, cabras)

Usos
Fabricacin de queso, usada para romper protenas

Problemas
No se pueden utilizar animales viejos ya que a mayor edad menor produccin de renina que es reemplazada por otra proteinasa, pepsina, que no es adecuada para la fabricacin de queso. El gran aumento del consumo de queso y de produccin de carne registrado en los ltimos aos ha provocado escasez de renina y un aumento de los precios

Enzima de origen microbiano

Su uso va en aumento en la industria lctea

Lipasas

Acelera la maduracin de quesos azules

Lactasas

Rompe lactosa en fructosa y galactosa

Industria del almidn

Amilasas, amiloglucosidasas y glucoamilasas

Convierte el almidn en glucosa y otros jarabes

Glucosa isomerasa

Convierte glucosa en fructosa (los jarabes ricos en fructosa derivados de almidn tienen mejores propiedades edulcorantes y menor contenido calrico) Produccin de jarabes ricos en fructosa Muy utilizadas en EEUU y Japn. La UE prohibe su uso para proteger a los productores de remolacha azucarera

Enzimas inmovilizadas

Aplicacin Industria textil

Enzimas usadas
Amilasas

Usos
Muy utilizadas en la actualidad para eliminar el almidn que se usa como adhesivo en los hilos de ciertos tejidos para evitar roturas durante la confeccin (tradicionalmente se han utilizado compuestos qumicos potentes)

Problemas

Enzimas bacterianas

Generalmente preferidas para retirar el adhesivo ya que son capaces de funcionar a temperaturas de hasta 105-110 C

Industria del cuero

Enzimas encontradas en heces de perros y palomas

Usadas tradicionalmente para hacer ms flexible el cuero al retirar ciertos componentes proteicos

Preparacin agresiva

Enzimas tripsina procedentes de mataderos y microorganismos

En la actualidad prcticamente han reemplazado a las enzimas anteriores. Tambin se usan para retirar el pelo de las pieles

Usos mdicos y farmacuticos

Tripsina

Limpieza de heridas, disolucin de cogulos de sangre

Tripsina pancretica

Frmulas de ayuda a la digestin, tratamiento de inflamaciones, etc.

Numerosas enzimas se utilizan en qumica clnica como herramientas de diagntico

2000
10% otros
Enz. Esteroideas Acilasas y Lipasas 10,2% b-lactamasa 20,4 %

1983
Investigacin, analtica y farmacia Pectinasas Isomerasas, celulasas y lactasas a-amilasa b-amilasa Tripsina Renina Proteasas cidas 59% proteasas Proteasas neutras Proteasas alcalinas

3% lipasas

28% carbohidrasas

Glucosa isomerasa
51%

Proteasas alcalinas (detergentes)