BIENVENIDOS

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Introduccin al estudio de la Histologa y Morfologa Haga clic para modificar el estilo de subttulo del Celular patrn
Prof. Nataly Gaerste
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Unidad I. Introduccin al estudio de la Histologa y Morfologa Celular

Objetivo General: Especificar las herramientas que utiliza la histologa para el estudio ultraestructural de tejidos y de la clula como unidad morfolgica y funcional del organismo Contenido: clnicas. Histologa. Concepto y aplicaciones Cientficas y

Tcnica Histolgica. Etapas en la preparacin de tejidos para su estudio al microscopio ptico y electrnico. Histoqumica y Citoqumica Microscopa. Tipos de Microscopios y aplicacin. Microscopio ptico: partes y funcionamiento. Microscopio electrnico: de transmisin y de barrido.

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Histologa

Es la rama de la biologa encargada del anlisis microscpico de la anatoma celular y tisular de los tejidos biolgicos.
Marcello Malpighi es reconocido fundador de la Histologa como el

Las primeras investigaciones histolgicas se hicieron en el siglo XVII gracias a la invencin del microscopio ptico por Antonio Van Leeuwenhoek
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Qu es la Anatoma?
Es el estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos organizados
Anatoma Macroscpica Anatoma Microscpica

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Qu es la Citologa? o Biologa Celular es una disciplina acadmica que se encarga del estudio de las clulas en cuanto a lo que respecta a las propiedades, estructura, funciones, organelos, su interaccin con el ambiente y su ciclo vital.

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Sistema de rganos: conjunto de rganos con funciones relacionadas

Tejido: agrupacin de clulas con la misma funcin

Clula: Unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo. Es el elemento de menor tamao que puede considerarse vivo.(Cel. Epiteliales cilindricas altas)

rgano: unidad funcional mayor compuesto por distintos tipos de tejido 4/8/12

Fisiologa

Anatoma

Histologa
Bioqumica Patolog a

Gentica
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Clnica

Tcnica Histolgica

Obtencin de la muestra. Las necropsias o autopsia Humanos Las biopsias Las piezas operadas. Animales de experimentacin

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Necropsias: Se obtienen piezas de un cadver. Para histologa normal es necesario que se trate de un cadver fresco y que no haya sido atacado por ninguna lesin, por lo menos el rgano que se quiere estudiar.

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Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnostico histopatolgico.

Piezas operadas: los tejidos han sido extrados de las intervenciones quirrgicas, generalmente tumores u rganos inflamados, tambin pueden darnos material de investigacin.

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Preparacin Histolgica de los tejidos

1- Obtencin de la muestra Fragmentos de tejido, de origen humano o animal.

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Preparacin Histolgica de los tejidos

2-Fijacin

Mtodos Qumico: por inmersin Fsico: por congelacin

Formalina: solucin acuosa de formaldehdo al 37%

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Preparacin Histolgica de los tejidos

3-Deshidratacin Se extrae el agua del tejido, utilizando para ello una serie de baos crecientes de alcohol.

Preparar al tejido para su encuentro con el medio de inclusin

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TOMADO DE: Histologa y Embriologa del ser humano. Eynard-Valentich-

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Preparacin Histolgica de los tejidos

4.- Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitucin del agente deshidratante por una sustancia miscible (mezclable) con el medio de inclusin. (Xilol)

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Preparacin Histolgica de los tejidos

5.-Infiltracin (Impregnacin o Inclusin) Proceso que tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra histolgica con el medio que se va a usar para la imbibicin (absorcin) del tejido. (Baos sucesivos de parafina fundida)

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Preparacin Histolgica de los tejidos

6.Encastramiento del tejido y confeccin de los bloques: consiste en la obtencin de un bloque slido de tejido ms medio de inclusin, mediante el enfriamiento lento a 10-15C: El bloque slido se llama TACO.

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TOMADO DE: Histologa y Embriologa del ser humano. Eynard-Valentich-

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Preparacin Histolgica de los tejidos

7-Orientacin pieza de la Para realizar el corte del tejido se monta el taco en el microtomo y se obtienen cortes sumamente delgados (510 micrmetros). Micro: pequeo / Tomo: corte 1 milmetro micrmetros
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1000

Preparacin Histolgica de los tejidos

8- Montaje: los cortes se colocan sobre lminas portaobjetos cubiertos previamente con capa de albmina o gelatina

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Preparacin Histolgica de los tejidos

9- Aclaramiento: Extraccin de la parafina con xilol (Desparafinacin).

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10.- Rehidratacin: desplazar el xilol por agua. Alcohol con agua en concentraciones decrecientes

11.- Tincin o Coloracin: con colorantes histolgicos en su mayora en solucin acuosa

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TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Mx. Fijada en Formol al 10%

Gasa e identificaci n de la Mx.

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Tejido Fijado Corte del tejido (hoja de Bistur)

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Tejido Fijado Corte del tejido (hoja de Bistur)

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Batera de Deshidratacin

Batera de Aclaramiento

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Estufa

Inclusin en parafina fundida

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Estufa, con el tejido a ser incluido FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Cajas de papel para preparar el bloque

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Preparacin del Bloque FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Tejido incluido en parafina

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Bloque terminado

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Microtomo FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Bloque de Tejido

Cuchilla del Microtomo

Corte del tejido en el Microtomo FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Bloque de Tejido

Tejido Cortado

Tejido Cortado FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Tejido Cortado

Tejido Cortado en el Bao de flotacin FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

TCNICA HISTOLGICA O DE LA PARAFINA

Tejido

Lmina Portaobjet o

Montaje del tejido en el portaobjeto para su desparafinacin

FOTOGRAFAS: LABORATORIO HITOTECNOLOGA. DPTO CS. 4/8/12 MORFOLGICAS Y FORENSES.

Para identificar hallazgos intraoperatorios inesperados, saber si se ha extirpado toda la masa patolgica y si el borde de la reseccin quirrgica est libre de tejido enfermo Se congelan fragmentos de tejido usando anhdrido carbnico comprimido o un lquido fro (isopentano) a una temp de -50C Corte del tejido congelado en un criostato (cmara refrigerada que contiene un microtomo) Montaje del corte en un portaobjetos Tincin del corte: HE, azul de metileno y PAS

Biopsias por congelacin

El proceso puede tardar 10 minutos y el resultado se comunica al cirujano inmediatamente

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Investigar: diferencias entre microtomo y ultramicrotomo

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Histoqumica y Citoqumica
Procedimientos que proporcionan informacin detallada sobre la actividad qumica que tiene lugar en clulas y tejidos.

Colorante o anticuerpo marcado

Componente celular o actividad enzimtica

Product o coloread o

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Composicin qumica de las muestras histolgicas

La composicin qumica de un tejido preparado para la coloracin de rutina es muy diferente a la del tejido vivo. Los componentes que quedan despus de la fijacin son molculas de gran tamao que no se disuelven con facilidad, entre ellos: Nucleoprotenas Protenas intracelulares del citoesqueleto Protenas extracelulares Complejos fosfolpidos-protenas
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Composicin qumica de las muestras histolgicas

Los solventes disuelven los lpidos neutros

Las macromolculas que se pierden durante la fijacin de rutina son: Glucgeno, Proteoglucanos y glucosaminoglucanos

Los componentes solubles, los iones y las molculas pequeas tambin desaparecen durante la preparacin de las muestras includas en parafina: glucosa, sodio,cloro y sustancias similares

Estos iones y pequeas molculas solubles no constituyen elementos morfognicos hsticos sino que participan en los procesos de sntesis o en las reacciones celulares.

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Colorantes usados en Microscopia ptica

Fundamento: Radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas sustancias coloreadas. Segn su afinidad tisular:
Colorantes Colorantes Colorantes Colorantes Colorantes bsicos cidos neutros metacromticos indiferentes

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Colorantes Bsicos: poseen una carga global positiva (catinicos), reaccionan con los componentes aninicos de las clulas. Ej.Hematoxilina Colorantes cidos: poseen una carga global negativa (aninicos), reaccionan con los componentes catinicos de las clulas. Ej. Eosina

Seccin de un glomrulo de un rin de mamfero teido con hematoxilina-eosina. Los ncleos aparecen de color violceo (hemtoxilina) y el citoplasma de color rosado (eosina).

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Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear junta o separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa

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Colorantes Indiferentes: no poseen carcter cido, bsico o salino definido. Colorean mediante impregnacin. Ejm: Plata

Fibras Reticulares Ganglio de rata

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Color aciones ms utilizadas

Coloracin Hematoxilina-Eosina (H.E): Utiliza dos tipos de colorantes. La hematoxilina que es un colorante bsico, colorea los componentes cidos de la clula (ncleo) de color morado; y la eosina que es un colorante cido se une a estructuras bsicas de la clula (citoplasma) otorgndole una tonalidad rosada
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Testculo

Coloracin con PAS (cido peridico-Shiff): se usa para determinar la presencia de macromolculas ricas en glcidos como glucgeno, glucoprotenas y glucosaminoglucanos. Se observa color fucsia al microscopio ptico. (Coloracin Histoqumica)

Hgado. Glucgeno

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Coloracin con Azn: (tricrmica): se obtiene tres colores diferentes: Azul oscuro en los ncleos de la clula; rojo en el msculo, queratina y citoplasma celular, y azul claro en el mucingeno y colgeno, o sea en el tejido conjuntivo

Tejido colgeno

Coloracin con metales: actan impregnando a ciertos componentes celulares. Se usan para demostrar aparato de golgi, y las neurofibrillas.Ej: sales de plata, tetraxido de osmio.
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Corte transversal nervio, la mielina negro) coloreada tetrxido de osmio.

de (en con

Coloracin con hematoxilina frrica: til para estudiar detalles celulares finos. Ej. Las fibras elsticas y las mitocondrias presentes en el citoplasma de ciertas clulas

Raz de cebolla

Tricrmico de Cajal y Gallego: implica el uso de tres colorantes. Para demostracin diferencial y selectiva de las fibras colgenas y del msculo.
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Tejido conectivo denso de color azul y el msculo estriado esqueltico de color rojo oscuro.

La ocrena y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras elsticas. Se observan entre bordeau y castao oscuro.

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Elementos celulares que presentan basofilia, que representan los estructuras cidas y se ven de color morado al microscopio ptico - Heterocromatina y nuclolos del ncleo - Algunos componentes citoplasmticos - Material extracelular

Elementos celulares que presentan acidofilia, que representan las estructuras bsicas y se ven de color rosado al microscopio ptico -La mayora de los filamentos citoplasmticos -La mayora de los componentes membranosos intracelulares -La mayora de las fibras extracelulares

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Microscopa
Microscopio Instrumento que amplifica una imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista.

M. ptico compuesto

Campo claro Campo oscuro Contraste de fase Fluorescencia Luz U.V.

M. Electrnico

Transmisin (MET) Barrido (MEB)

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La Luz como onda

En una onda electromagntica, por ejemplo, el campo elctrico cambia en intensidad de manera cclica as:

Cada ciclo de la onda se repite en intervalos separados por una longitud de onda La frecuencia mide el nmero de estos ciclos que ocurren cada segundo.
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 En la luz, la longitud de onda determina el color de la luz

(por ejemplo la longitud de onda correspondiente al color verde es de 550 nanmetros) EL ESPECTRO PTICO La luz blanca est compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la longitud de onda as:

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Microscopa
AUMENTO Es la relacin entre el tamao de la imagen y el del objeto en medidas lineales El Aumento de un microscopio es: Am= A lente objetivo x A Lente ocular Ej: Ocular: 10X Objetivo: 40X Cuanto es el aumento del microscopio?

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Microscopa
Poder de resolucin Es la capacidad de producir imgenes separadas de objetos que estn muy cerca uno de otro. Numricamente equivale a d o distancia mnima entre dos objetos distinguibles. Ojo humano: d= 0.2 mm Depende de: Apertura numrica (An) del sistema ptico (objetivo y condensador) Longitud de onda de la luz incidente ( )
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Microscopio ptico de Campo Claro Usa Luz Visible. D = 0.2 um.(micromtro) La luz atraviesa el objeto examinado y el objetivo capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa Utilidad: Acadmico, Diagnstico clnico (Lab. Bioanlisis, Patolgico), Investigacin. Componentes Principales: - Fuente Luminosa - Lente Condensadora: para enfocar el haz de luz a la altura de la muestra - Platina: sobre la que se coloca la muestra. - Lente Objetivo: para recoger la luz que ha atravesado la muestra - Lente ocular: a travs de la cual se puede examinar directamente la imagen formada por la lente objetivo
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PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO Mecnicas

MICROSCOPA

Cabezal Brazo Revolver Platina Carro

pticas

Lmpara

Tornillos macromtrico y micromtrico

Base

Condensad or/Diafrag ma

Objetivos Oculares

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Examen de un Preparado Histolgico con el Microscopio ptico Los artefactos o artificios son elementos que representan un error en el proceso de preparacin (partculas de polvo, fragmentos de vidrio, agregados de colorante, filamentos de gasa etc.)
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OTROS SISTEMAS PTICOS Microscopio de Contraste de Fase: Aprovecha las pequeas diferencias en el ndice de refraccin que hay en diferentes partes de una muestra de clulas o tejidos. Las partes oscuras corresponden a las regiones densas y las partes claras corresponde a las regiones menos densas Utilidad: permite observar las clulas en accin y estudiar los movimientos implicados en procesos como la mitosis o la migracin celular. Estudiar cortes semifinos no teidos

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Microscopio de Campo Oscuro La lente objetivo no capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa -El principio se consigue con un condensador especfico que permite transmitir la luz de forma circular, dejando el centro oscuro. - Con esto se logra que el fondo de la muestra aparezca negro y los especimenes brillantes. -Utilidad: En la prctica clnica para la deteccin de cristales en la orina y la identificacin de espiroquetas
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Microscopio de Fluorescencia -Aprovecha la capacidad de algunas molculas de fluorescer bajo la luz UV -Utilidad: Deteccin de molculas con autofluorescencia como la vitamina A y algunos neurotransmisores (fluorescencia natural) - En tcnicas de inmunocitoqumica (fluorescencia secundaria), - En la investigacin del trayecto de fibras nerviosas

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Microscopio de Luz ultravioleta (UV) -Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta. - La imagen depende de la absorcin de la luz UV por las molculas de la muestra. -La muestra no puede inspeccionarse directamente a travs del ocular porque la luz UV no es visible y lesiona el ojo. Utilidad: Detectar cidos nucleicos, en especial las purinas y pirimidinas. Detectar protenas que tienen ciertos aminocidos en la prctica clnica para evaluar el grado de ploidia en cortes de tumores

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MICROSCOPA ELECTRNICA Representa un gran adelanto respecto a la microscopa ptica ya que: La longitud de onda del haz de electrones es 2000 veces menor que la del haz de luz, por lo que aumenta la resolucin por un factor de 10 Los electrones no pueden atravesar el vidrio, por lo que deben remplazarse por bobinas o lentes Existen dos tipos: MET y el MEB electromagnticas

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Microscopio Electrnico de Transmisin

Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz
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La fuente es un filamento de tungsteno calentado que emite electrones

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El haz de electrones atraviesa una serie de lentes electromagnticas que Cumplen la misma funcin que las lentes cristal de un microscopio ptico
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La imagen final se observa en una pantalla fosforescente

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Microscopio electrnico de barrido - El haz de electrones no atraviesa la muestra sino que explora (barre) su superficie. - Forma una imagen de tipo tridimensional en un tubo de rayos catdicos de alta resolucin.

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GRACIAS

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INVESTIGAR

1-La clula: Concepto, funcin, tipos (procariotas y eucriotas), tamaos y formas y organizaciones celulares. 2-Citoplasma: Organelas membranosas: Membrana plasmtica o Plasmalema: Modelos

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INVESTIGAR

3-Movilizacin de sustancias, receptores. Transporte vesicular. Exocitosis y endocitosis. 4-Endosomas, lisosomas, retculo endoplasmtico liso y rugoso, aparato de Golgi, mitocondrias, peroxisomas.
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INVESTIGAR

5-Organelas No membranosas: (citoesqueleto) Microtbulos, Microfilamentos, filamentos intermedios, centriolos y centros organizadores de microtbulos, cuerpos basales.Citosol. Inclusiones citoplasmticas:

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