Clase N 15

III.-Enzimas
Cintica Enzimtica

Cintica Enzimtica
Es el estudio de las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas.
Velocidad se puede medir con relativa facilidad, no es necesario tener la enzima totalmente pura. Medicin se efecta en condiciones ptimas.

Cintica Enzimtica

Velocidad de reaccin : es el nmero de molculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo. Se expresa en mM o mM de producto /minuto

Curva de progreso

La pendiente de la curva de progreso a tiempo= 0 es igual a velocidad inicial.

Factores que afectan la velocidad de reaccin Las diferentes enzimas muestran diferentes respuestas a cambios en:

a) Concentracin de enzima
b) Concentracin de sustrato

c) Temperatura
d) pH. Estos estudios se han efectuado in vitro , pero permiten inferir como es la situacin in vivo

a.-Concentracin de Enzima

Al aumentar la enzima ,aumenta la velocidad de la reaccin ( Para una misma concentracin de sustrato).

b)- Concentracin de sustrato

Al aumentar el sustrato aumenta la velocidad de reaccin hasta alcanzar V max. En este punto se considera que la enzima se ha saturado.

La curva de velocidad versus concentracin de sustrato tiene forma hiperblica en las enzimas que siguen la cintica de Michaelis Menten. Por el contrario, al graficar velocidad versus concentracin de sustrato para las enzimas alostricas , se obtiene una curva sigmodea.

Efecto de la concentracin de sustrato sobre la vi, manteniendo constante la cantidad de Enzima ( Enzima michaeliana)

Grfico de velocidad versus concentracin de E = constante sustrato

Saturacin

( Enzima michaeliana)

Esquematizando lo que sucede en los puntos A,B y C del Grafico de velocidad versus concentracin de sustrato:

c) Temperatura La velocidad de la reaccin aumenta con la temperatura hasta alcanzar un peak de velocidad ( aumenta la cantidad de molculas que tienen suficiente energa para pasar la barrera energtica). Al seguir aumentando la temperatura , disminuye la velocidad de reaccin como resultado de la desnaturalizacin de la enzima.

La temperatura ptima depende de la Enzima

d) pH 1.- Efecto del pH en la ionizacin del sitio activo: Puede favorecer o desfavorecer la catlisis al protonar o desprotonar grupos del sitio activo o del sustrato. 2.-Efecto del pH en la desnaturalizacin enzimtica: pH extremos pueden llevar a la desnaturalizacin de la enzima. 3.- El pH ptimo vara , dependiendo de la enzima.

Michaelis Menten
a) Modelo de la reaccin enzimtica.
Michaelis y Menten propusieron que las reacciones enzimticas ocurren en dos etapas:

Michaelis Menten
b) Ecuacin de Michaelis Menten ; describe como la velocidad de la reaccin vara con la concentracin de sustrato.

Ecuacin de Michaelis-Menten es la

ecuacin de una hiprbole rectangular.

La ecuacin de Michaelis -Menten proviene de:

Suposiciones efectuadas para derivar ecuacin MM La concentracin de sustrato es mucho mayor que la concentracin de Enzima, por lo que en todo momento la cantidad de sustrato unido a Enzima es pequeo.

Estado estacionario: Velocidad de

formacin de ES es igual a velocidad de descomposicin de ES. Concentracin de ES no cambia.

Slo se consideran velocidades iniciales .

De Michaelis Menten :

Caractersticas de Km
Relacin de la velocidad con la concentracin de sustrato Orden de la reaccin

Conclusiones importantes de la Cintica de Michaelis -Menten Km: Constante de Michaelis

Relacin de la velocidad respecto a la concentracin enzimtica Orden de la reaccin

Km: Constante de Michaelis

Es caracterstica de una enzima para un sustrato en particular. Es una medida de la afinidad de la enzima por su sustrato.

Km es numricamente igual a la concentracin de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la V mxima. Km no vara con la concentracin de la enzima. Km se expresa en unidades de concentracin ( Molaridad) En las cercanas de Km, pequeos cambios en la concentracin de sustrato ocasionan gran cambio en la velocidad de reaccin.

A mayor Km, menor la afinidad de la E por el S

A menor Km, mayor la afinidad de la E por el S.

Relacin de la velocidad respecto a la concentracin enzimtica

En todas las concentraciones de sustrato , la velocidad es proporcional a la cantidad de enzima.

Orden de la reaccin

S << Km v= k S ( velocidad de reaccin es de primer orden respecto al sustrato.)

S >> Km v= V mx ( velocidad es constante, independiente de la concentracin de sustrato ( de orden cero respecto al sustrato)

Algunos conceptos bsicos cintica qumica

En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de sustrato: v = k

En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos es directamente proporcional a la concentracin del sustrato: v = k [A]. Ejemplo

:
glucosa + fructosa

sacarosa + agua

La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la concentracin de sacarosa.

[A] es la concentracin de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad.

Se dice que sta es una reaccin de primer Prof. Tatiana orden. Zuvic

Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende de la concentracin de dos sustratos :

v = k [A1] [A2] (como en una reaccin de condensacin) v = k [A]2 ( como en una reaccin de dimerizacin)

Km: Constante de Michaelis

S << Km

v= k S

S >> Km

v= V mx.

S = Km

v= 1/2 V mx.

Para linearizar la ecuacin de M-M : Ecuacin de Lineweaver - Burk

Haciendo analoga con la ecuacin de la recta:

y = m

Grfico de Lineweaver - Burk