FÍSICO-QUÍMICA DE MACROMOLÉCULAS (536.

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FÍSICO-QUÍMICA MACROMOLECULAR (535.550)

PRIMER SEMESTRE 2023

Capítulo 5: Propiedades eléctricas

C5-2: Electroforesis

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

UNIVERSIDAD DE CONCEPCIÓN
 C5-2: Electroforesis

Electroforesis (un tipo de proceso de transporte)

Transporte de partículas cargadas

por la acción de un campo eléctrico

Como en la difusión y en la sedimentación, la acción de una fuerza externa,

correspondiente al gradiente de un potencial, produce el movimiento de
partículas

Sin embargo, debido a que la electroforesis depende de la carga de la

(macro)molécula más que de su masa, este proceso ha sido muy utilizado
para el análisis y la separación de mezclas
 C5-2: Electroforesis

Para empezar, consideremos la siguiente situación simplificada:

+ +Ze ZeE

-fv

Modelo idealizado en el cual una partícula de carga Ze es colocada

bajo la acción de un campo eléctrico en un solvente no conductor
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La fuerza experimentada por una partícula en un campo eléctrico está dada

por la ley de Coulomb:
F=zeE (1)
donde z es el número de unidades de carga, e es la carga del electrón
(1,602x10-19 C) y E es el campo eléctrico aplicado

Por otra parte, la fuerza de resistencia (de fricción o de roce) está dada por la
ecuación 2:
Froce = f v (2)

donde f es el factor de fricción y v la velocidad de desplazamiento

La partícula alcanzará una velocidad constante cuando ambas fuerzas (que

tienen sentidos opuestos) se igualan:

fv=zeE
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Reordenando la expresión anterior:

v ze
= U = (3)
E f
donde U = movilidad electroforética

Si la partícula es esférica:
ze
U = (4)
6phR
donde R es el radio de la partícula y h la viscosidad del solvente

Se podría intentar generalizar la ecuación 4, considerando el efecto de la

hidratación y la desviación de la forma esférica

Sin embargo . . .
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Hay algo más importante que hacer primero: cuando la macromolécula

cargada se mueve por un medio cualquiera, se encuentra rodeada por una
atmósfera iónica

región en torno a la partícula

en movimiento en la que hay
una preferencia estadística por
iones de carga opuesta

El campo experimentado
por la macromolécula diferirá
considerablemente de aquél
impuesto por los electrodos
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La ecuación 5 permite calcular U para una macromolécula esférica con la

corrección propuesta por Debye y Hückel para considerar la existencia de la
atmósfera iónica:
ze X(kR)
U = (5)
6 p h R 1 + kR
donde:
1/2
8 p N e2
X(kR) = función de Henry y k = I 1/2
1000 D k T

N = número de Avogadro
e = carga del electrón
D = constante dieléctrica del medio
k = constante de Boltzmann
T = temperatura absoluta
I = fuerza iónica [I = (1/2)Σmi zi2, con m = molalidad y z = carga]
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Por ejemplo, para una solución 0,05 mol/kg de Ca(NO3)2:

Ca(NO3)2 Ca2+ + 2 NO3-

I = (1/2) [ 0,05 x (+2)2 + 2 x 0,05 x (-1)2 ]

I >k I >k

atmósfera iónica densa atmósfera iónica difusa

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A pesar incluso de las correcciones hechas según D-H para el cálculo de U,

la ecuación corregida no entrega una descripción adecuada de la movilidad
electroforética de macroiones reales

No se han incluido correcciones para el hecho de que la atmósfera iónica es

distorsionada (*) por el campo y (*) por el movimiento de la partícula.

Aunque se han intentado correcciones, estamos aún lejos del objetivo

Resultado neto de todas estas complicaciones: la electroforesis se utiliza

más como método de separación que de caracterización molecular
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Sin embargo: inexacta como puede ser la ecuación propuesta por D-H,
predice muy bien un punto de mucho interés: el punto isoeléctrico (PI)

PI: pH al cual una

proteína u otro
U=0
polianfolito tiene
carga neta cero

Movilidad electroforética frente al pH para

la proteína b-lactoglobulina. La línea sólida
muestra los resultados experimentales. La
curva discontinua muestra los valores de U
predichos por la ecuación 5.