DIAGNOSTICO MOLECULAR DE

SHIGELLA SP.
Reacción en Cadena de la
Polimerasa

MSc. Robert Caballero B

Tecnologo Medico - Microbiologo
 Generalidades
 Bacilos gramnegativos, inmóviles, no
capsulados: familia Enterobacteriaceae.
 4 Especies:
 S. dysenteriae (serogrupo A),
 S. flexneri(serogrupo B),
 S. boydii (serogrupo C) y
 S. sonnei (serogrupo D).
n los países desarrollados
 En países vías de desarrollo infecciones x S.
flexneri + frecuentes que x S. sonnei; mientras
q’ serotipo 1 de S. dysenteriae (bacilo de Shiga)
tiende a aparecer en epidemias masivas,
aunque también es endémico en Asia.
A transmission electron micrograph of Shigella,
negatively stained to enhance contrast
 Epidemiología
 Considerada infección de distribución universal,
incide preferentemente en áreas de deficientes niveles
de salubridad e higiene. Distribución estacional señala
preferencia marcada estival y otoñal.
 Heces de seres humanos infectados constituyen fuente
de infección. No se conoce ningún reservorio animal.
 La transmisión se produce por vía fecal-oral,
básicamente por contacto directo de persona a
persona, pero también se ha descrito transmisión por
agua y alimentos a través de moscas.
 Shigelosis afecta principalmente a niños <10 años (+ 1
a 4 años, rara en lactantes).
 Constituye problema importante en comunidades
cerradas, como guarderías, colegios, campamentos
militares, hospitales y residencias geriátricas.
 PATOGENIA
 Estudio: todo un desafío
 En virtud de que el agente etiológico no
reproduce las clásicas lesiones humanas en
los principales animales de laboratorio; sin
embargo, los nuevos recursos de los
infectólogos han permitido realizar diversos
estudios in Vitro, según los cuales el
microorganismo se adhiere a las células
HeLa neoplásicas de cérvix humano-,
provoca que estas últimas lo engloben -por
fagocitosis no profesional1- y, a
continuación, escapa del fagosoma para
reproducirse en el citoplasma eucarionte.
 Estructura antigénica.
 Ag somático O, gracias a el son posibles
diferenciar los distintos serotipos y
 Shigella dysenteriae se puede dividir en 1,2,3,4,5
siendo el 1 el mas patógeno.
 También posee un Ag K, solamente los serotipos
capsulados como el Shigella dysenteriae 1.
 Posee una exotoxina que la presentan todas las
especies y en mayor cantidad Shigella
dysenteriae 1. Se caracteriza porque produce
acción citotoxica, enterotoxica y neurotoxica.
Tiene dos fracciones A y B. La fracción A ejerce
una acción biológica sobre la célula. La fracción
B facilita la adherencia de la toxina a la célula.
 The toxin has been given several trivial names
depending on the bacterium that produces it and the gene that encodes it.

Source Gene  Toxin Older 

Organism Designation Name Names
Shigella 
Shiga toxin
dysenteriaet stx Shiga toxin
(Stx)
ype I
Escherichia Shiga toxin 1 Shiga-like toxin I, 
stx1
coli (Stx1) Verotoxin 1
Shiga toxin 2 Shiga-like toxin II,
  stx2
(Stx2) Verotoxin 2
 Clinica
 La shigelosis o disentería bacilar corresponde a una
severa enteritis aguda y autolimitada,
 Principales síntomas son
 Fiebre
 Tenesmo
 Calambres abdominales
 Diarrea mucosanguinolenta.
 Hipersensibilidad abdominal, más pronunciada en los
cuartos inferiores, ruidos intestinales son frecuentes y,
en casos más graves, mucosa colónica se torna
hiperémica y edematosa, los folículos linfoides
aumentan de tamaño, y el exudado fibrinosupurativo
da lugar a pseudomembranas grisáceas o amarillentas
que recubren al tejido epitelial.
Rho family GTPases control entry of Shigella flexneri
into epithelial cells but not intracellular motility
Journal of Cell Science 112, 2069-2080 (1999)

 S. flexneri , patógeno bacteriano invasor,

promueve formación de dos estructuras
citoesqueléticas: el foco de entrada en células
epiteliales y una estructura de actina (actin-comet)
que permite a las bacterias separarse
intracelularmente.
 Durante el paso de la entrada, la secreción de
invasinas bacterianos causa una explosión masiva
de la polimerización subcortical de la actina que
conduce a la formación de proyecciones
localizadas en la membrana.
 La fusión de estas colmenas de la membrana
conduce al internalizacion bacteriana.
 Rho
GTPases
are major
targets
for
bacterial
virulence
factors.

TRENDS in Cell Biology Vol.13 No.5 May 2003

 Diagnostico
Microbiológico
Shigella en TSI
Diagnostico
Serológico
Diagnostico
molecular
Genes involucrados
en la virulencia de
shigella
 Virulence-associated Genes and Functions
Encoded by the Large Shigella Virulence Plasmid
Gene Protein Product MW Regulatory or effector function
Positive regulation of
virF 30 kDa virB(invE, ipaR) and
virG(icsA)
Necessary for invasion (orients
invA(mxiB) 38 kDa ipa gene products in outer
membrane)
mxiA 76 kDA Same as above
invJ Unknown Same as above
Necessary for invasion (role
invH Unknown
unknown)
invF Unknown Same as above
Not necessary for invasion
invG 24 kDa
(role unknown)
ippI 18 kDa Same as above
Necessary for invasion (may
ipaB 62 kDa mediate endocytic uptake of
 Virulence-associated Genes and Functions
Encoded by the Large Shigella Virulence Plasmid

Regulatory or effector
Gene Protein Product MW
function
ipaC 43 kDa Same as above
Same as above (may
mediate adherence of
ipaD 38 kDa
shigellae to host cell
membrane)
Not necessary for invasion
ipaA 78 kDa
(role unknown)
Positive regulation of
virB(invE,ipaR) 33 kDa
ipaABCD and invAKJHFG
Associated with intra- and
virG(icsA) 120 kDa intercellular bacterial
spread
Unknown (may inhibit
ipaH 60 kDa
coagulation)

Adapted from Hale, T. L. (2001)

Genetic Basis of Virulence in Shigella Species, Microbiological Reviews,55: 206-224
 Factors Affecting the PCR  
 Denaturing Temperature and Time
 Annealing Temperature and Primer
Design
 Primer Length
 Degenerate Primers
 Elongation Temperature and Time
 Reaction Buffer
 Cycle Number
 Nested Primer PCR
SDS-PAGE