Avances en injertos vasculares

regenerativos

Juan Carlos Briceño T, PhD

Departamento de Ingeniería Biomédica

Universidad de los Andes

Curso de Biología Molecular, FCI

Bogotá, Colombia, Julio 29 de 2015

1
El proceso de I&D en ingeniería biomédica

IDEA PACIENTE
IMPLEMENTACIÓN

2. 3. 4. 5. 6.
1. Diseño y Evaluación Pruebas
Evaluación Comercialización
Identificación fabricación in vitro in vivo en clínicas
de necesidad modelos
animales

2
Antecedentes de ingeniería de tejidos
en Uniandes

2000
JM Díaz Sustitutos de piel para quemaduras
Especialista: mejorar métodos para procesar los
homo injertos
producción de piel sintética

2001
A González Mancera Matrices biodegradables de
PLA-PGA para regeneración de tejidos

3
 Antecedentes de ingeniería de tejidos
en Uniandes

2001
Curso de ingeniería de tejidos en Rice.
Steven Badylak

http://news.rice.edu/2012/02/10/rices-antonios-mikos-elected-to-national-acad
emy-of-engineering
/
http://www.mirm.pitt.edu/people/bios/badylak1.asp
4
Antecedentes de ingeniería de tejidos
en Uniandes
2001
DM Tabima desarrollo de matrices de SIS
Matrices biológicas vs matrices sintéticas.

A
B

SIS 10x PLLA 80% NaCl 10x

!Lo importante es la
adhesión celular!

5
SIS 40x PLLA 80% NaCl 40x
Antecedentes de ingeniería de tejidos en Uniandes
Matrices biológicas vs matrices sintéticas
Matrices biológicas
Ventajas Desventajas
Compatibilidad Disponibilidad
Baja reacción inmune Esterilidad
Alta adhesión y proliferación celular Procesabilidad
Poca reproducibilidad
Bajas propiedades mecánicas

Matrices sintéticas
Ventajas Desventajas
Procesabilidad Baja biocompatibilidad
Ajuste de propiedades Costos
mecánicas
Alta reproducibilidad Reacción alérgica

6
 Antecedentes de ingeniería de tejidos
en Uniandes
2003
DM Tabima preparación y evaluación de matrices
biodegradables
F Briceño producción de membranas de SIS y su uso clínico
Biomaster Ltda. Creación de empresa y licenciamiento.

2. 3. 4. 5. 6.
1. Diseño y Pruebas
Evaluación Evaluación Comercialización
Identificación fabricación in vitro in vivo en clínicas
de necesidad modelos 7
animales
Hipótesis: ¿Se pueden fabricar injertos
vasculares regenerativos?
[D Sánchez]
Colciencias contrato 459-2008
2005- Colciencias contrato 464-2012

8
 Hipótesis: ¿Se pueden fabricar injertos
vasculares regenerativos?

Preservar el stratum
compactum?
• Puede mejorar la
permeabilidad
• Pero puede impedir la
infiltración celular

Mantener hidratado o
deshidratar?
• La hidratación mejora la
adhesión celular
• Pero puede desorientar
la regeneración
• Y la deshidratación ha
producido resultados
satisfactorios
9
Hipótesis: ¿Se pueden fabricar injertos
vasculares regenerativos?
Hipótesis: ¿Se pueden fabricar injertos
vasculares regenerativos?

Factor 1: capa luminal de

colágeno denso

Diseño factorial 22
Preservación Remoción
(P) (R)

Hidratado
(H) PH RH
Factor 2:
Estado de
hidratación
Deshidratado
(D) PD RD

11
Microestructura
Capas y espacios vacíos
Capas Vacios

12
Microestructura
Orientación de las fibras

A, C. Representative scanning electron microscopy (SEM) images for fiber

orientation image analysis (3000×). B, D. Corresponding fiber detection. A,
B. Hydrated scaffold. C, D. Dehydrated scaffold. 13
Propiedades mecánicas biaxiales
Anisotropía

14
Propiedades mecánicas biaxiales
Ambiente micromecánico

15
Propiedades mecánicas biaxiales
Mecanotransducción

PECAM-1 eNOS Merge

16
Regeneración temprana
Modelo a 7 días

PD: 100% RD: 100%

PH: 50% RH: 75%
17
Regeneración temprana
Calificación histológica

1 2 3 4
Thrombus - diameter 100-85% 84-20% 19-6% 5-0%
Thrombus - length 100-85% 84-20% 19-6% 5-0%
Mononuclear cells >150 76-150 1-75 0
Polymorphonuclear cells >150 76-150 1-75 0
Multinucleated giant cells >5 2-5 1 0
Vascularity 0-1 2-5 6-10 >10
Fibroblasts 0 1-75 76-150 >150 18
Regeneración temprana
Macrófagos

19
Regeneración temprana
Propiedades mecánicas después de
implantación

20
Estado actual
Regeneración de aorta después de 20 semanas

21
Estado actual
Regeneración de aorta después de 20 semanas

Injerto Permeable Regenerado

SIS 7/9 8/9

Dacron 2/4 0/4

22
Estado actual
Regeneración de aorta después de 20
semanas

AA06 AA10
early termination - AA11*

AA06 AA10 AA15

23
Estado actual
Histología
l

l l

AA01 AA01 AA11* AA11*

l l

l
l

AA06 AA06 AA15 AA15

l l: lumen. Magnifications at 2x and 40x.

AA10 AA10 24
 Estado actual
Histología e inmunohistoquímica
Tricrómico de Mason

l l
l

AA10 AA11* AA15

α-actina de músculo liso

l l
l

AA06 AA10 AA15

25
Magnifications: 20x, 40x and 2x.
 Estado actual
Inmunohistoquímica

Factor VIII y elástica

l l

l
AA06 AA15

AA11 AA10

26
Top left, top right and bottom right magnifications at 40x. Bottom left magnification at 10x.
Estado actual
Pruebas mecánicas equibiaxiales

Circumferential
Longitudinal

27
Estado actual
Pruebas mecánicas fisiológicas

Circumferential
Longitudinal

28
Injertos en enfermedades de alto impacto?
Insuficiencia renal crónica

10
Ba ja%permea
Fístulas de adultos
arteriovenosas
bilidad en
Hemodiálisis
sintéticas: de (HD)
EU
10
Ba ja%sufren
primaria
Fístulas de deadultos
estas
arteriovenosas
permea bilidad en
fístulas
aproximadamente
politetrafluoroetileno
Hemodiálisis
sintéticas:
sin tética de
sde(ePTFE)
(entre (HD) a
elfístulas
2 0 una
y
insuficiencia
EU sufren
primaria
expandido estasrenal
con
89% de los
aproximadamente pacientes
politetrafluoroetileno
el 50% a
sin téticaa
crónica
longitud los
s[CDC]
entre
insuficiencia 24 yme
el402ses)
20 renal
(entre
expandido (ePTFE) con una 0cm.
y
89%
el 50%de a los24
los pacientes
20 yme
40ses)
crónica
longitud [CDC]
entre cm.

Nu
ev
as
int
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qui
rúr
gic
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qu
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m
en
ta
n
el
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o
de
inf
ec
ció
n

29
Injertos en enfermedades de alto impacto?
Insuficiencia renal crónica

30
Hipótesis: ¿Se puede desarrollar un injerto
vascular regenerativo que se pueda usar como
acceso vascular en pacientes en hemodiálisis?
Colciencias contrato 464-2012

Manufactura del injerto vascular:

Injertos de SIS, corrugados, de 6 mm de
diámetro y 10 cm de longitud.

31
Metodología
Modelo animal

Se implanta el injerto entre la arteria y la vena femoral usando los

injertos de SIS

Imagen tomada de
http://www.msdlatinamerica.com/ebooks/PracticalOrth
opaedicSportsMedicineArthrocopy/sid386101.html

32
Metodología
Punciones

Control de permeabilidad del injerto y punciones: Al cumplir el tiempo

de maduración se realizan punciones sobre el injerto con un catéter 16G.

33
Metodología
Punciones

Punciones sobre el injerto: 6 punciones desde la anastomosis arterial

pasando por la longitud del injerto hasta la anastomosis venosa.

Vena
femoral Arteria
femoral

Fístula
6 de SIS 1
5 2
4 3

Imagen tomada de http://interventions.onlinejacc.org/article.aspx?articleid=1111371 y modificada 34

Resultados

Modelo animal II:

Injertos implantados en ovejas
entre arteria carótida y vena
yugular.
Maduración a 10 semanas por
ecografía.
Punciones.
Explante.

35
Resultados

Evaluación modelo animal

II (n=5):
3 injertos funcionales por 8
semanas.
1 injerto ocluído.
1 ECV.
Encapsulación y reacción a
cuerpo extraño en todos los
injertos.
Ocurrencia de dobleces y
rotaciones al implantarlos.
36
Resultados
Nuevo diseño

Forma en C, 6 mm de diámetro, 150 mm de longitud.

Refuerzo externo.
37
Resultados

Modelo animal III:

Injertos implantados en porcinos
entre arteria carótida y vena
yugular. Control contralateral.
Maduración a 10 semanas por
ecografía.
Punciones.
Explante.

38
Conclusiones

Se han diseñado y construido injertos

vasculares regenerativos de SIS.
El nuevo diseño soluciona deficiencias
iniciales.
Se ha implementado un modelo animal
porcino con injerto carótida-yugular.

39
 Apósitos tridimensionales para regeneración epitelial
V. Talero, A.Sabogal, J. Navarro, DM. Narváez, H. Groot, R. López, DM. Tabima

Financiación FCI

Se parte de láminas de
SIS y se obtienen
matrices 3D altamente
porosas.

Se han realizado cultivos celulares de 1,3 y

6 días. El análisis histológico evidenció
presencia celular en todas las
formulaciones y en todos los días.
(A) (B) (C) (D)
Láminas histológicas para diferentes formulaciones. A. S05, B. S05HA, C. S1, D. S1HA

S1 S0.5 S1 S0.5 S1 S0.5 S1 S0.5 Se han realizado modelos in-vivo

de 28 días. Para la formulación S1,
se encontró menor inflamación del
tejido, mejor proceso de
cicatrización y un cierre total a los
28d.
(A) (B) (C) (D) 40
Registro fotográfico modelo animal para las formulaciones S05 y S1. A. Día 0, B. Día 14, C. Día 22, D. Día 28
Desarrollo y evaluación preclínica de un tapón hemostático de colágeno
para biopsias percutáneas Colciencias contrato 200-2015
D. Sánchez-Palencia, J. Navarro, M. Pineda, R. López, JC. Briceño, JM. Pérez

Modelo de capacidad Modelo en hígados Modelo animal (evaluación

trombogénicas (n=7) humanos de desecho de seguridad)
(evaluación de eficacia)

• Mínima reacción
• Diametro aumentó en inflamatoria (<100 µm)
un 22,6% al exponerse a • Detuvo el sangrado en • Reabsorción e
sangre sin todos los casos integración en el tejido
anticoagulante. • Redujo el sangrado en renal
un 72%

Conclusión: El tapón hemostático de colágeno es seguro a nivel histopatológico, reduce y

detiene el sangrado eficazmente después de biópsias percutáneas
Trabajo futuro: Diseñar el estudio clínico
41
Desarrollo y evaluación in vitro de un adhesivo para huesos
FJ. Cedano, LM. Pinzón, CI. Castro, F. Salcedo, JP. Casas, CL. Moreno, JC. Briceño
Fracturas complejas en zonas
artículares
I. Adhesivos
•Quitosano (Q): presenta
propiedades de adhesión y
biocompatibilidad.
•Carbonato de Calcio (C): promueve
la gelificación del quitosano.
•Glutaraldehído (GA):
Entrecruzante, mantiene las
propiedades mecánicas del quitosano
en condiciones acuosas.
Financiación Uniandes y FSFB
Se propone el uso de un
Soluciones actuales son adhesivo para huesos en
inadecuadas este tipo de fracturas
II. Caracterización Mecánica III. Estudio de Citotoxicidad
Prueba de junta a tope para adhesivos Cultivo de fibroblastos (células vero)
con hueso esponjoso bovino
• Viabilidad celular: Ensayo
MTT
• Morfología celular: SEM
Hueso Adhesivo
MTT
Viabilidad celular [%]
80
60
40
20
0
Día 1 Día 3 Dia 6
SEM
La formulación Q2C4GA04, soporta
28kPa de adhesión después de 30 horas
en inmersión de agua a 37°C
42
 En conclusión

• Se ha avanzado en el conocimiento y la aplicación de la ingeniería

de tejidos a problemas médicos muy relevantes en Colombia.
• Éxito en tejidos blandos, aplicaciones cardiovasculares más
difíciles.
• Especialistas están viendo la utilidad de la IT y colaborando
activamente en IID.
• Conflicto entre la necesidad clínica y el entendimiento de los
mecanismos.
• Necesitamos entender mejor mecánica, biología y fisiología para
optimizar los soportes y usarlos en otras aplicaciones.
• Múltiples investigaciones y aplicaciones no cardiovasculares.

43
Agradecimientos

Proyecto 1204459-21696, contrato 459-2008

Proyecto 2778569-34609, contrato 464-2012

Diana Sánchez, postdoc Lina María Quijano, MSc

Javier Navarro, MSc Alessandra Storino, estudiante MD
Heinz Hiller, MD, MSc Juan Camilo Araque, MD
Néstor Sandoval, MD Jaime Camacho, MD
José Luis Roa, MD Jacqueline Mugnier, MD
Rocío López, MD Juan David Pérez, MD, MSc
Sergio Galvis, MVet Catalina Pérez, estudiante IM
Juan Bernardo Umaña, estudiante MD Álvaro F. Guerrero, estudiante MD
Tatiana Valencia, estudiante MSc Paolo Sánchez, estudiante PhD
44