Reacción en

cadena de la
polimerasa
Johanna Moncayo Olarte
Albert Ortiz Alcendra
 Base del método
La PCR amplifica secuencias específicas de ADN a lo largo del genoma microbiano. Por ejemplo, un conjunto de
cebadores de ADN se utiliza para apuntar la secuencia específica que va ser amplificada

La reacción de PCR se lleva a cabo en 3 etapas diferentes.

1. El ADN se desnaturaliza por el calor.

2. Los cebadores se alinean a las secuencias 3. Los cebadores son extendidos por la enzima
complementarias de las hebras de ADN. ADN polimerasa que resulta en dos hebras
diferentes.

Los tres pasos se repiten de nuevo por un número

determinado de ciclos, por ejemplo de 30 a 35. Una vez
la secuencia es amplificada, los productos se detectan
mediante electroforesis en gel. Sin embargo, hay
sistemas que se basan en la detección de la
fluorescencia de los productos amplificados en tiempo
real
 Preparación de la muestra
La extracción del ADN microbiano de los medios de enriquecimiento
se realiza en solo dos pasos. Para las bacterias y levaduras, una
preparación de la muestra en una solución de Tris-EDTA-Tween 20
con proteinasa K a 35 °C resulta en un ADN de alta calidad mientras
para las muestras con hongos se tiene que hacer una ebullición de
las muestras en una solución de SDS durante 1 hora. Con los últimos
avances en la genómica microbiana, la disponibilidad de secuencias
de los cebadores de ADN son ilimitadas lo cual permite el desarrollo
de cebadores universales para las bacterias, levaduras y hongos.
 Aplicaciones:
Como ejemplo de las primeras aplicaciones de esta tecnología en el área de microbiología aplicada fue su uso de para clonar y
mapear fragmentos específicos de genoma bacteriano

● Fue aplicado para la construcción por ingeniería genética de una cepa mutante de Streptomyces avermitilis capaz de producir
antiparasitarios no naturales y en otras especies.

● En los laboratorios farmacéuticos ensayos basados en PCR han demostrado ser capaz de detectar Salmonella typhimurium,
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Burkholderia cepacia, Aspergillus brasiliensis, y
secuencias eubacteriales después de un período de incubación.

● Esta técnica puede ser utilizada para la enumeración de microbios contaminantes en el área microbiológica del control de
calidad de medicamento.

● La PCR también se ha utilizado para el seguimiento de las muestras de agua en los procesos de fabricación farmacéutica.

● Actualmente usados en un número variado de industrias tales como bio-defensa, cosméticos, forense, bebidas y alimentos,
diagnóstico clínico, y productos farmacéuticos.
Equipos
Los tiempos de detección con las PCR van desde 24 a 27 horas.
Se trata de una reducción significativa en comparación con el
tiempo de detección estándar de 5-7 días. Por otra parte, la
detección de alto rendimiento de las muestras es posible
utilizando un formato de 96 pocillos.