Por: Andrea Hernández Giraldo.

John Fernando Gómez Restrepo.

 ¿QUÉ ES EL PERIFITON?
Es el conjunto de microorganismos como algas, hongos, bacterias,
protozoos, entre otros que se encuentran adheridos a un sustrato
natural o artificial.

Imagen tomada de: http://www.jmarcano.com/graficos/images/65.gif

 RECOLECCIÓN DE MUESTRAS

• Selección de la estación de muestreo: En ríos, poca distancia aguas arriba y en uno

o más puntos aguas abajo de la fuente de contaminación. En aguas leníticas se
localizan en áreas cercanas a la fuente de desechos y en áreas no afectadas.

• Recolección de las muestras:

a) Sustrato Natural: Muestras cualitativas raspando piedras, palos y otros
sustratos sumergidos.
b) Sustrato Artificial: Portaobjetos estándares 25x75 mm, placas de acrílico.
• Periodo de exposición: La colonización avanza a ritmo exponencial durante las 2
primeras semanas. Un lapso de 2 semanas constituye un intervalo de muestreo
óptimo. En el invierno el periodo de exposición es más largo.

• Preservación de la muestra:
Las muestras tomadas para el conteo y la identificación deben preservarse
en formaldehido al 5% neutralizado con lugol o merthiolate.
En la determinación de peso seco y peso libre de cenizas almacenar en
botellas de vidrio de 3 a 7cm.
Para análisis de clorofila almacenar en acetona, mantenerlas en hielo seco
hasta el análisis y guardar en botellas oscuras.
•
 Conteo de Sedgwick-Rafter.

Remover el perifiton de las placas con una cuchilla y una espátula de laboratorio,
dispersar el raspado en 100ml de preservativo, tomar un 1ml y hacer un conteo en
franjas en el microscopio. Expresar el resultado como células o filamentos por
milímetros cuadrados de área de sustrato:

𝑪é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔 𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒𝑙 𝑟𝑎𝑠𝑝𝑎𝑑𝑜

𝟐
= 𝑥
𝒎𝒎 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑟𝑎𝑠𝑝𝑎𝑑𝑜 𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑑𝑜 á𝑟𝑒𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑓𝑟𝑎𝑛𝑗𝑎 𝑒𝑛 𝑚𝑚2
 Conteo por el método del microscopio invertido.

Extraer 1ml de la muestra y depositarla en una cámara de sedimentación, allí se hace un conteo en
30 campos aleatorios. Calcular de la siguiente manera:

𝑶𝒓𝒈𝒂𝒏𝒊𝒔𝒎𝒐𝒔 𝑁𝑥𝐴𝑡 𝑥𝑉𝑡

=
𝒎𝒎𝟐 𝐴𝑐 𝑥𝑉𝑠 𝑥𝐴𝑠

Dónde:
N = número de organismos contados.
At = área de la superficie del fondo de la cámara.
Vt = volumen total de suspensión de la muestra.
Ac = área de los campos aleatorios.
Vs = volumen de muestra utilizada en la cámara.
As = área de la superficie del sustrato o de la placa.
 CONTEO DE ESPECIES DE DIATOMEAS.
Las sustancias orgánicas se deben descomponer por medio de oxidación antes de montar la
muestra. Cuando se haya oxidado la materia orgánica transferir con una pipeta una gota de la
suspensión de diatomeas a un portaobjetos, evaporar, secar y contar. Contar como mínimo 500
frústulas y expresar el resultado como organismos por 𝑚𝑚2 .

http://www.artelista.com/obra/7793000739161017-
diatomeas.html
 PREPARACIÓN Y CONTEO DE LA MUESTRA TEÑIDA.

Permite distinguir las algas de los ditritos y las diatomeas vivas de las muertas. Las
células se exponen a un colorante que diferencia entre algas activas, senescentes y
muertas. Se utiliza tetrazolio de violeta.
Algas activas: Se tiñen de un precipitado violeta.
Algas senescentes: Presenta clorofila pero no se evidencia un precipitado
violeta.
Algas muertas: No contiene clorofila y hay un precipitado violeta.

También se pueden estudiar sin sacrificar taxonómicamente la diatomea utilizando la

ecuación para el conteo del método del microscopio invertido.
 PESO SECO Y PESO LIBRE DE CENIZAS.
Recolectar por lo menos 3 placas repetidas para las determinaciones de peso.
a) Secar el raspado a peso constante a105 °C y someter a ignición por una hora
a 500°C . Si provienen del material secado en el campo, humedecer con agua d
estilada, remover de las placas y aplicar el procedimiento anterior.
b) Corregir la perdida de agua rehumedeciendo las cenizas con agua destilada,
esto reintroduce agua de hidratación y otros minerales.
Cálculos:
Calcular el peso promedio de las placas y reportarlo como peso seco y libre de cenizas
por 𝑚2
𝑔 𝑔/𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎 (𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜)
2 =
𝑚 0,00375
Donde el valor 0,00375 es el valor del área de las caras de la placa.
 CLOROFILA Y FEOFITINA.
El contenido de clorofila es un índice utilizado en la determinación de la biomasa del
perifiton, la muestra se puede almacenar durante 30 días en la oscuridad.
El índice autotrófico (IA) se usa para determinar la naturaleza trófica de la comunidad
de perifiton:

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑎𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎 𝑜𝑟𝑔á𝑛𝑖𝑐𝑎 𝑙𝑖𝑏𝑟𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎)

𝐼𝐴 = 𝑚𝑔
𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 𝑒𝑛 2
𝑚

Los valores normales oscilan entre 50-200 y valores mayores indican asociaciones
heterótrofas o mala calidad del agua.
 ACUMULACIÓN DE BIOMASA
A) Peso seco y peso libre de cenizas: la tasa de acumulación de materia orgánica
en sustratos ha sido utilizada en la estimación de la productividad de arroyos y
reservorios.
𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑠𝑒𝑐𝑜 𝑦 𝑙𝑖𝑏𝑟𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑚𝑔/𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎
𝑃=
𝑡𝑥𝐴
Dónde:
P= productividad neta.
t= Tiempo de exposición.
A= Área de una placa en 𝑚2 .

B) Estimaciones de la ATP: Medición de adenosín trifosfato (ATP), se extrae el ATP

hirviendo el agua durante 10 minutos.
 MÉTODO DEL OXÍGENO.
A) Productividad del agua en aguas leníticas: Se utilizan botellas claras y oscuras en las que se
mide la cantidad de oxígeno disuelto en el cuerpo de agua.
2 𝑉𝐶 𝐶′𝑓𝑐 − 𝐶′𝑖𝑐 + 𝑉𝑜 𝐶′𝑖𝑜 − 𝐶′𝑓𝑜
𝑷𝑮 =
𝐴
DÓNDE:
𝑷𝑮 = Producción bruta.
𝑽𝑪 = Volumen de la botella clara en litros.
𝑽𝒐 = Volumen de la botella oscura en litros.

𝑪′𝒇𝒄 𝒚 𝑪′𝒊𝒄 = Concentración final e inicial, respectivamente del oxígeno disuelto en la botella clara.

𝑪′𝒊𝒐 𝐘 𝑪′𝒇𝒐 = concentración inicial y final, respectivamente del oxígeno disuelto en la botella oscura.
Se deben hacer correcciones en los efectos del metabolismo y respiración del fitoplancton en las
botellas.
B) Productividad del agua en aguas lóticas: El análisis en estos cuerpos de agua se
realiza mediante tramos.
𝑉𝑐 𝐶 ′𝑓𝑐 − 𝐶 ′ 𝑖𝑐 𝐵
𝑷𝑵 =
𝑡𝑥𝑊𝑐
𝑷𝑵 = Tarifa por hora de producción primaria neta.
𝑽𝒄 = Volumen de la botella clara.
B = Biomasa promedio de perifiton estimado para el tramo de estudio.
T = Tiempo de incubación.
𝑾�𝒄 = Biomasa total de perifiton contenido en la botella clara.
𝑪′ 𝒇𝒄 − 𝑪′ 𝒊𝒄 = Concentración final e inicial de oxígeno en la botella clara.
 MÉTODOS CUALITATIVOS (INDICADOR DE ESPECIES Y
COMUNIDADES)
Se refieren a la composición taxonómica de las comunidades en zonas de
contaminación.
El sistema de saprobiedad desarrollado por Kolkwitz y Marsson es ampliamente
utilizado, divide las corrientes contaminadas registrando las zonas como polisaprobicas,
mesosaprobicas y oligosaprobicas, enlistando las características de cada una.

http://www.unirioja.es/ecophys/imagenes/briofi2.jpg
 MÉTODOS CUANTITATIVOS.

Se ocupan de la estructura comunitaria utilizando índices de diversidad, similitud e

índices numéricos de saprobiedad. Este método usa conteos de células por unidad
de área de sustratos e índices numéricos de contaminación o calidad del agua.
 APLICACIONES DE CALIDAD DEL AGUA.
El análisis cualitativo puede indicar el grado de contaminación, eutrofización y problemas de
higiene.

http://bibliotecadeinvestigaciones.files.wordpress.com/
2012/09/agua-2.jpg