Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas EQUIPO 6

Lic. en Químico Farmacobiólogo
Laboratorio de Bioquímica II
Prof. Leticia García Albarrán
PRACTICA 4:
¿ES POSIBLE DEMOSTRAR LA ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA EN PRESENCIA Y AUSENCIA DE LA BILIS?

INTRODUCCIÓN RESULTADOS
Los lípidos son un grupo de sustancias heterogéneas que sólo tienen en común dos características: son
insolubles en agua y son solubles en disolventes orgánicos como éter, benceno, cloroformo, etc.
OBJETIVOS Matraz Gasto de KOH Gasto de KOH corregido Matraz Gasto de KOH Gasto de KOH corregido
. T1 9 ml T2 11.7 ml
Pueden estar formadas de carbono., hidrógeno, oxígeno y en ocasiones fósforo, nitrógeno y azufre; son  Demostrar la acción de la lipasa pancreática en presencia y 1 13 ml 4 ml 4 20 ml 8.8 ml
2 14.5 ml 5.5 ml 5 22.1 ml 11 ml
ésteres reales o potenciales de los ácidos grasos. Los lípidos son biomoléculas orgánicas de ausencia de la bilis. 3 15.9 ml 6.9 6 23.6 ml 11.9 ml

distribución prácticamente universal en los seres vivos y que desempeñan en ellos numerosas funciones
biológicas. Los lípidos constituyen el material fundamental de todas las membranas celulares y MATERIALES REACTIVOS: Gráfica 2:Tiempo vs Gasto corregido de KOH (con adición de
subcelulares, en las que aportan la bicapa de fosfolípidos, arreglados con las cabezas polares hacia • 8 matraces erlenmeyer de 125 • Leche homogenizada 14
bilis)
11.9
•

Gasto corregido de KOH (ml)

ml Pancreatina al 1% Gráfica 1: Tiempo vs Gasto corregido de KOH (sin
fuera y las colas no polares hacia dentro. adición de bilis)
12 10.4

La digestión de los lípidos es un proceso complejo que ocurre en la cavidad bucal, gástrica e intestinal • Pinzas para bureta • Extracto de pancreatina 8 6.9 10 8.3

Gasto corregido de KOH

5.5
• 1 pipeta de 10 ml •
8
KOH 0.05 N 6
4
del ser humano. El proceso de hidrólisis de los triglicéridos requiere de la participación de varias 4
6
• 1 pipeta de 5 ml • Etanol al 95% 4

(ml)
enzimas lipolíticas, denominadas lipasas, y de cofactores, hormonas y sales biliares que son necesarios • 1 bureta de 25 ml • Fenolftaleína
2
2
0
para la actividad específica de cada una de ellas. Las lipasas, cuya denominación bioquímica es acil- • 1 termómetro 0 10 20 30 40 50 0
0 10 20 30 40 50
Tiempo (minutos))
ester-hidrolasas, son enzimas relativamente específicas en su actividad catalítica y algunas de ellas se • Baño María a 37° C Tiempo de hidrólisis min)

distinguen por su alta estéreo-especificidad.
La lipasa pancreática es una enzima que se produce en el páncreas y se secreta en el intestino delgado
donde ayuda a descomponer las grasas (lípidos) que consumimos para convertirlas en ácidos grasos y
glicerol. La lipasa pancreática humana es una glucoproteína con un peso molecular de 45.000 daltons.
Debido a que las grasas no son solubles en agua, las enzimas deben actuar en la interface lípido-agua,
lo cual trae como consecuencia una disminución de la actividad enzimática.
CONCEPTOS
Lípidos: Es un grupo de sustancias heterogéneas que sólo tienen en común dos características: Son insolubles en
agua y son solubles en disolventes orgánicos, como éter, cloroformo, benceno, etc. Cumplen con funciones
bilógicas como: fuente de energía, reserva energética, estructural, reguladora y transportadora.
Clasificación: Existen diversos criterios para clasificar a los lípidos, presentamos la que se emplea con mayor
frecuencia basada en su composición química.
Enzima. Proteínas globulares que funcionan
como catalizadores biológicos, cuya función es
básicamente incrementar la velocidad de una
reacción.
Gráfica 1: Se presenta el gasto corregido de KOH en los Gráfica 2: Se presenta el gasto corregido de KOH en los
matraces 1, 2 y 3 en cada uno de los tiempos de matraces 4, 5 y 6 en cada uno de los tiempos de hidrólisis.
hidrólisis. Se observa que a mayor tiempo transcurrido va Se observa que a mayor tiempo transcurrido va aumentando
aumentando el volumen de gasto de KOH corregido. el volumen de gasto de KOH corregido.
PROCEDIMIENTO
Hidrolisis enzimática de los lípidos DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En nuestros resultados pudimos observar que en la titulación se gastó más volumen de KOH conforme aumentaba el
tiempo en el baño maría. En los matraces 4, 5 y 6 lo que quiere decir es que la presencia de ácidos grasos era mayor
que en los matraces 1, 2 y 3, por lo tanto; se necesitaba más cantidad para poder neutralizar la solución (se utilizó
etanol para poder disolver los lípidos); esto se debe a que en los matraces 4, 5 y 6 se agregó la bilis que contiene las
sales biliares las cuales tienen una parte hidrófoba y otra hidrófila y pueden actuar como emulsificantes en la leche
donde la fase dispersa son los lípidos y el medio dispersante es agua para formar micelas con el “centro” de lípidos, la
mayoría de ellos triacilglicéridos. De esta manera las sales biliares aumentan la interfase lípido-agua lo que favorece la
acción de la lipasa, contenida en la pancreatina, al permitir que el sitio activo se aproxime a los lípidos que son su
sustrato y poder realizar la hidrólisis dando como productos ácidos grasos libres, ya que al ser ésta una enzima
hidrosoluble sin la presencia de la bilis no es posible acercarse a su sustrato como se pudo observar en los matraces 1,
2 y 3 donde la reacción ocurrió de una manera menos favorable.
Se utilizo el matraz T1 y T2 como blancos para saber cuántos ácidos grasos libres contenía la leche desde el principio
porque al calentar la pancreatina lo que se hizo fue desnaturalizar la enzima por el aumento de la temperatura y así al
agregarla a la leche ya no pudo realizar la hidrólisis de los lípidos.

Lipasa. Son triacilglicerol éster hidrolasas, es CONCLUSIÓN

decir, enzimas que catalizan de forma natural la
hidrólisis de triacilglicérdios. Se usa en el Se pudo demostrar la actividad de la lipasa pancreática en presencia y ausencia de la bilis.
organismo para disgregar las grasas de los
alimentos de manera que se puedan absorber.
HOJAS DE SEGURIDAD CUESTIONARIOS
Hidrólisis. Reacción química entre una molécula
de agua y otra molécula, en la cual la molécula de 1.– ¿Cuál es la interpretación de las gráficas obtenidas?
agua se divide y sus átomos pasan a formar parte El gasto del titulante va a ser directamente proporcional a la actividad enzimática de la lipasa, por lo tanto, mientras
de otra especie química. mayor tiempo de hidrólisis, la lipasa habrá hidrolizado mayor cantidad de lípidos generando así una mayor cantidad de
ácidos grasos por lo que se requiere mayor volumen de KOH para neutralizar a estos ácidos grasos.
La bilis está formada por sales y ácidos biliares,
colesterol, fosfolípidos, agua pigmentos y 2.- ¿Cuál es el objeto de agregar bilis en el experimento?
químicos electrolíticos que la mantienen Emulsionar las grasas que se encuentran presentes, disminuyendo su tensión superficial, favoreciendo de este modo la
levemente alcalina, entre un pH de 7-8. hidrólisis del ácido graso.
Los solutosorgánicos más prevalentes en la bilis
son las sales biliares, las cuales están 3.- ¿Cómo se clasifican los lípidos?
compuestas de cuatro tipos distintos de ácidos
biliares libres, como el ácido cólico, el ácido
desoxicólico, el ácido quenodesoxicólico y el
ácido litocólico, cada uno de estos acidos puede
combinarse con la glicina o la taurina para formar
ácidos y sales más complejos.

Leche: Es un líquido blanco de composición compleja. Entre sus componentes encontramos, mayoritariamente,
agua, grasas, proteínas y lactosa, y, en menor cantidad, sales, ácido cítrico, enzimas, vitaminas, gases y
fosfolípidos. 4.- ¿Cuáles son los ácidos grasos más importantes de la grasa humana?
Emulsión. Mezcla de dos líquidos inmiscibles de manera más o menos homogénea. Un líquido (la fase dispersa) El ácido oleico y el ácido palmitoléico.
es dispersado en otro (la f ase continua o fase dispersante).
Triacilglicérido. Compuesto formado por una molécula de gricerol y tres ácidos grasos. 5.- ¿Cuál es la importancia clínica de la lipasa en diagnóstico?
Glucoproteinas. Las glicoproteínas o glucoproteínas son moléculas compuestas por una proteína unida a uno o Útil en el diagnóstico de la pancreatitis, ya que el páncreas es el único órgano que lo segrega.
varios glúcidos, simples o compuestos.
Ácido graso. Biomolécula de naturaleza lipídica formada por una larga cadena hidrocarbonada lineal, de diferente 6.- ¿Cuál es la composición y el funcionamiento del tejido adiposo?
longitud o número de átom os de carbono (como mínimo 9 carbonos) , en cuyo extremo hay un grupo carboxilo (son El tejido adiposo esta constituido por adipocitos, además de otras células presentes de manera colectiva denominadas
ácidos orgánicos de cadena larga). fracción de estroma visceral (SVF). Este estroma está formado por preadipocitos, fibroblastos, macrófagos de tejido
Glicerol. Es un alcohol con tres grupos hidroxilos (–OH). Se trata de uno de los principales productos de la adiposo y células endoteliales. El tejido adiposo está especializado para almacenar y forma grasa, actúa como
degradación digestiva de los lípidos. almohadilla y también como un almacén de reservas nutritivas.
Hidrólisis enzimática. Hidrólisis que se produce mediante un grupo de enzimas llamadas hidrolasas. Estas
enzimas ejercen un efecto catalítico hidrolizante, es decir, producen la ruptura de enlaces por agua según: H-OH +
R-R’ → R-H + R’-OH.
BIBLIOGRAFÍA
FUNDAMENTOS · Ayudas didácticas bioquímica I. Departamento de bioquímica- alimentos. Lic. En Químico Farmarmacobiólogo (MUM) 2013.
· Ayudas didácticas bioquímica II. Departamento de bioquímica-alimentos. Lic. En Químico Farmarmacobiólogo (MUM) 2015.
Hidrólisis enzimática de los lípidos. · Nelson, David L., Cox, Michael M. Lenninger Principios de Bioquímica , 5a edición. 2006.
Al realizar la hidrólisis de los lípidos (triacilgliceridos) presentes en la leche, la lipasa es la enzima que cataliza
esta reacción. Como corresponde a su función biológica las lipasas catalizan de forma natural la hidrólisis de
ésteres, especialmente triacilglicéridos de cadena larga, para dar monoacilglicéridos, diacilglicéridos, ácidos
grasos libres y gricerol. Debido a que la lipasa presenta su mayor actividad catalítica a una temperatura de 37°
C, se introdujeron los matraces a un baño María a esta temperatura. Las grasas no son solubles en agua por
lo que la enzima debe actuar en una interfase lípido-agua, pero esto disminuye la actividad enzimática. Para
incrementar esta actividad se empleo la bilis como agente emulsificante, lo que la bilis realiza es disminuir la
tensión superficial de los lípidos originando la emulsión, en gotas de lípidos muy pequeñas, permitiendo una
mayor superficie de acción a la lipasa y aumentando de este modo la actividad enzimática.