Descripción en detalle del

sistema experimental utilizado

por Zavafer et al. (2015) para
demostrar como la luz visible
causa foto-inhibición sobre el
PSII.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
 tampón estándar
Triturar (1) Solubilizar (2) • 400 mM de sacarosa
• 25 mM de MES-NaOH
• 15 mM de NaCl Filtrar (3)
100 g de hojas • 5 mM de MgCl2
despetioladas • pH 6.5
(Berthold, Babcock, and Yocum
1981)

tampón A Medir el contenido

• tampón Mes 40 mM de clorofila
• pH 6,5 150 µg de clorofila mL-1
• sacarosa 40 mM).

a -80 ° C
Almacenar (5) Centrifugar (4)

Repetir (4) y
Resuspender (6)
300 × g durante 1 minuto
4000 × g durante 10 minutos
TRATAMIENTOS DE FOTODAÑO
 DPC PPBQ

Exponer
(400–530 nm; 5 min) (530–590 nm; 30 min) (590–720 nm; 15 min)

DPC PPBQ

DPC PPBQ
Donador aceptador
(10 μ M) (0,6 mM)
difenilcarbazida fenil-p-benzoquinona

lámpara halógena MAX-303, Asahi Spectra Co. Ltd. Japón filtros de paso corto y largo

espesor para la iluminación de la muestra se ajustó a 2,5 mm 1000 μ mol de fotones m − 2 s − 1

 ACTIVIDAD DE PSII TOTAL Y ENSAYO DE
ACTIVIDAD DE CENTRO DE REACCIÓN DE PSII
 Centrifugar Resuspender

Para cada muestra

Tampon fresco A
(16000 × g, 10 min)
7,5 μ g de clorofila mL − 1

La actividad del centro de reacción

de PSII y la actividad total de PSII se
midieron espectrofotométricamente

actividad total de PSII

actividad de centro de reacción de PSII

Cary 300, Varian

Referencias
• Berthold, Deborah A., Gerald T. Babcock, and Charles F. Yocum. 1981. “A Highly Resolved, Oxygen-
Evolving Photosystem II Preparation from Spinach Thylakoid Membranes.” FEBS Letters 134 (2):
231–34. https://doi.org/10.1016/0014-5793(81)80608-4.
• Zavafer, Alonso, Mun Hon Cheah, Warwick Hillier, Wah Soon Chow, and Shunichi Takahashi. 2015.
“Photodamage to the Oxygen Evolving Complex of Photosystem II by Visible Light.” Scientific
Reports 5 (1): 16363. https://doi.org/10.1038/srep16363.