Universidad de las Fuerzas Armadas “ESPE”

Departamento de Ciencias de la Vida y Agricultura

Ingeniería en Biotecnología
Biología Molecular I

Técnicas de transformación
en plantas

Integrantes:
Wilmer Ger
Ruth Escobar
Silvana Romo
Michelle Santillán
 Agrobacterium
Técnicas Directas
Vectores virales

Técnicas de liposomas
transformación Biobalística

Técnicas Indirectas Electroporación

Sonicación
 VECTORES VIRALES

 Algunos virus que afectan especies vegetales han sido empleados como
vectores para la transformación de plantas, con el objetivo de producir
proteínas de interés.
 Se han desarrolla dos estrategias

 En la más empleada, el gen foráneo, es introducido

dentro del virus completo, precedido por el
promotor duplicado de la proteína de la capside
del virus, para que el gen de interés sea expresado
como un RNA subgenómico separado.

 La segunda estrategia el virus es completamente

reconstruido eliminando o sustituyendo regiones
virales, además de la inserción del gen de interés.
Finalmente, pueden ser empleados como una
partícula viral madura
 LIPOSOMAS
 Están conformadas por varias bicapas de lípidos que encapsulan agua o gas.
 Entre los métodos para transformación vegetal, la transferencia de genes,
mediada por liposomas, es uno de los más difíciles, su utilización ha sido muy
limitada.
 En este método, el casete de expresión es encapsulado en una esfera lipídica
(liposoma), que permite o facilita su paso, a través de la célula vegetal por
endocitosis, ya sea por el plasmodesma o directamente por la pared celular,
hasta el núcleo.
 BIOBALÍSTICA
 Esta técnica, utiliza microproyectiles recubiertos del DNA que se desea
transferir, que son disparados sobre los tejidos vegetales a altas velocidades,
atraviesan la pared y la membrana celular y llevan al interior de la célula los
genes de interés para su posterior integración en el genoma vegetal.
 Para que los microproyectiles puedan atravesar las membranas celulares y
llegar al núcleo de las células blanco, deben ser impulsados a velocidades
supersónicas.

Para ello, se desarrollaron tres sistemas:

 Por explosión de pólvora seca
 Por variación de fuerza de aceleración
 A través de descarga eléctrica o por
liberación de gas comprimido a alta
presión
 ELECTROPORACIÓN
 Con esta metodología, se busca permeabilizar las membranas, mediante
el aumento significativo de la conductividad eléctrica, causado por un
campo eléctrico aplicado externamente.
 La electroporación se lleva a cabo en un dispositivo llamado
electroporador, aparato que utiliza descargas de capacitores para
producir pulsos de alto voltaje, originando una corriente eléctrica, que
se hace pasar a través de la suspensión, que contiene las células y así
permitir o facilitar la entrada del DNA foráneo, con el que se pretende
transformar las células.

El proceso de electroporación es
aproximadamente diez veces más
efectivo que la transformación mediada
por métodos químicos
 SONICACIÓN

 Es un método nuevo de transferencia de genes, utilizado con éxito en la

transformación de tejidos vegetales, células intactas y protoplastos.
 Se emplea ultrasonido con frecuencias superiores a 20 KHz, para generar
permeabilidad en las membranas, mediante la inducción de poros transitorios, a
través de los cuales, el DNA foráneo puede ingresar al interior de la célula
vegetal. Este fenómeno también es conocido como Sonoporación.
 El dispositivo empleado para la producción de los pulsos de ultrasonido es
conocido como sonicador.
AGROBACTERIUM T.
 Formación de callos embriogénicos friables en yuca se mejora en
condiciones de nitrato, potasio y fosfato reducidos

 Revista: Plos One

 Grupo de investigación: Red Genómica
de Plantas. Centro RIKEN para la
Ciencia de los Recursos Sostenibles.
 Factor de impacto: 2.806
 Cuartil: 1
INTRODUCCIÓN

La yuca tiene uso industrial.

Problemas con heterocigocidad, baja fertilidad y calidad del fruto.

Transformación por Agrobacterium y callo embriogénico friable.

Plantas transgénicas resistentes a virus y glucósidos cianogénicos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material Embriones Callos

vegetal Somáticos embriogénicos

Plántulas del Inducción de SE

Inducido a partir
cultivar de yuca en yemas
de SE
60444 axilares

Vástagos en FIM: CIM +

Subcultivo en sal
cajas petri con 10mg/L Vitamina
MS
sales CIM B1

Plantación de 5 CIM-p NPK:

SE se transfieren
tallos en varios CIM + 0,1 mg/L
a medios DKW
medios. Vitamina B1
RESULTADOS
Adición del exceso de Vitamina B1 aumenta la frecuencia de FEC

Vitamina B en
Genes que
crecimiento de la
codifican PPCK
raíz.

Aumento de Expresión génica

vitamina permite asociada el
formación de FEC metabolismo.

Expresión génica
asociada a
estructuras
celulares.
 PPDK

Fosfolipasa

Hidrolasa

Aciltransferasa
Flujo de trabajo de transformación de la yuca

1.Producción de yema axilar.

2. Inducción de SE
3. Inducción de FEC por SE
4. Inoculación con FEC y agrobacterium
5. Selección de FEC transformadas
6. Inducción de cotiledón de FEC
7. Formación de brotes y raíces
8. Pruebas de enraizamiento