VISUALIZACIÓN DE

ESTRUCTURAS MOLECULARES

De la Rosa Gómez Joel Alejandro.

García Miranda Ricardo Antonio.
Medina Rivera Mario Iván.
2452
Muñoz Ruiz Juan de Dios.
• DEFINICIÓN:

• En campo claro toda la luz desde el espécimen y sus alrededores es

colectada por el objetivo para formar una imagen contra un fondo
brillante.
• TECNOLOGÍA:
• El campo claro es la forma más simple de microscopía donde la luz
pasa a través de o reflejada del espécimen. La iluminación no se altera
por aditamentos que cambien las propiedades de la luz (como
polarizadores o filtros).
• APLICACIONES:
• En aplicaciones biológicas, las observaciones de campo claro son
usadas ampliamente para tinciones o pigmentos naturales o
especímenes altamente contrastados montados en un porta objetos.
El espécimen es iluminado desde abajo y observado desde arriba. El
espécimen aparece brillante, pero más oscuro que el brillante fondo.
Esta técnica es ampliamente usada en patología para ver secciones de
tejidos fijos o películas celulares/frotis. El campo claro no es muy útil
para células vivas sin teñir o secciones de tejido sin teñir, como en la
mayoría de los casos, la luz pasa a través de muestras transparentes o
traslucida con poca o sin definición de la estructura.
• La luz es reflejada desde muestras opacas y esto es explotado en los
ambientes industriales donde las imágenes de campo claro son
usadas para la inspección de obleas (WAFERS) y tarjetas de cristal
líquido.
Iluminación de Köhler
¿Qué es?
La iluminación Köhler elimina la iluminación dispareja en el campo de observación
para que todas las partes de la fuente de luz contribuyan a la iluminación del
espécimen o muestra.
 TIPOS

Transmitida Incidente

La luz es transmitida a La luz es reflejada desde

través del espécimen o el espécimen o
muestra muestra.

Usada para especímenes Utilizada para especímenes

transparentes o que no transmiten luz.
semitransparentes.
Pasos

1. Enfocar la muestra.
2. Cerrar gradualmente el diafragma de la fuente de luz hasta ver una
imagen poligonal.
Pasos

3. Descender, ligeramente el 4. Si la imagen poligonal no está

condensador hasta ver nítido el en el centro, centrarla utilizando
borde del diafragma de campo. los tornillos del condensador.
Pasos

5. Una vez centrado el condensador abrir el 6. Abrir completamente el diafragma

diafragma de la fuente de luz hasta que el del condensador, volver a cerrar lo
polígono abarque todo el campo, realizado necesario hasta que la imagen tenga
este pasó ya no mover el diafragma de un buen contraste.
campo ni la altura del condensador.
Pasos

7. Al cambiar de objetivo, enfocar con el tornillo micrométrico y

contrastar la imagen con el diafragma iris y para ajustar el brillo
modificar la intensidad de la fuente luminosa o colocar filtros.
 MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE
• Técnica óptica que utiliza los cambios en
el índice de refracción de las partes de
una célula
•
• Produce imágenes de alto contraste de
especímenes transparentes

• Revela estructuras que no son visibles en

microscopía de campo claro

• Las células vivas pueden ser observadas a

detalle sin la necesidad de teñirlas o usar
fluoroforos

• Fue desarrollada por Frits Zernike en 1932

• Esta basada en el retraso que se
produce en las ondas de luz al atravesar
objetos de distintos índices de
refracción
•
• La luz que pasa por regiones de mayor
índice de refracción experimenta una
deflexión y queda fuera de fase con
respecto al haz principal de ondas de luz
que pasaron la muestra

• Aparea otras longitudes de onda fuera

de fase por medio de una serie de anillos
ópticos del objetivo y del condensador

• Anula la amplitud de la porción fuera de

fase inicial del haz de luz y produce un
constante
• Las partes oscuras
corresponden a las
porciones densas del
espécimen

• Las partes claras

corresponden a porciones
menos densas
• El microscopio de contraste de fase es uno
de campo claro con modificaciones
(objetivos y condensadores)

• El condensador presenta un disco que

proyecta un haz de luz con forma anular

• En la lente de salida de los objetivos se

agregan unos anillos de fase

• Son discos transparentes con un diseño en

relieve

• Existen 2 tipos de anillos: Positivos y

Negativos

• Tienen efectos distintos sobre la luz

• Con el condensador se logran separar los rayos
luminosos que no son difractados por el objeto

• Al pasar por la muestra, los rayos que

atraviesan objetos más densos, experimentan
un retraso de un cuarto de lambda

• Cuando pasan por el anillo de fase, las ondas

de retrasan un cuarto de lambda más
•
• Las que no se han retrasado pasan por una
parte más delgada del anillo de fase y no se
retrasan

• Estos desfases de las ondas luminosas se

personen como diferencias en el contrast, en
tonos de gris
• Se utiliza para hacer
exámenes inmediatos

• Los objetos se ven

delimitados por un halo
brillante alrededor (contraste
de fase positivo) o por una
sombra (Contraste de fase
negativo)
Microscopio confocal
• Es un tipo de microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el
contraste y reconstruir imágenes tridimensionales utilizando un "pinhole"para eliminar la
luz desenfocada de la lente en especímenes que son más gruesos que el plano focal.
 Microscopia confocal
Es una técnica que elimina la luz fuera de foco en los
especimenes o muestras y permite obtener imágenes
tridimensionales, fluorescentes y con mayor definición que un
microscopio óptico.
Tipos:
• Escaneo láser – donde un solo punto enfocado de iluminación láser es escaneado, el
rayo esta estacionario mientras el microscopio mueve la platina a través del rayo. La
señal pasa de regreso al detector (foto-multiplicador) a través de un orificio de apertura
muy pequeño (pinhole), lo que bloquea la luz de otras regiones del espécimen.
• Disco rotatorio – donde un disco giratorio (Disco Nipkow) con varios pequeños orificios
insertado entre la fuente de luz y el espécimen. Las señales se colectan a través de los
mismos orificios, que también bloquean la luz fuera de foco. Los datos se colectan
usando una cámara CCD.
• Confocal de barrido de campo – el sistema de barrido de campo escanea el espécimen
usando una ranura de luz. Los fotones también se pueden enfocar a través de un arreglo
lineal de 32 pinholes, así cada punto en el espécimen es iluminado hasta 260 vences por
segundo.
Usos:
• – Realizar seccionamientos ópticos, para observar los tejidos
en sus diferentes niveles no es necesario dañar el tejido con
seccionamientos reales.
• – Monitorizar los movimientos de las moléculas dentro de las
células.
• – Localizar anticuerpos para estudios de inmunocitoquímica
con mayor resolución.
PREGUNTAS
1.-¿Cuáles son los tipos de iluminación
de Köhler?
• Transmitida.
• Incidente.
2.- Nombra los dos tipos de diafragma
en iluminación de Köhler.
• Diafragma de campo.
• Diafragma de abertura (iris).
3.- ¿Para que se usa la iluminación de
Köhler (transmitida)?
Es usada para especímenes transparentes
o semitransparentes
4.- ¿Quién creo la iluminación de
Köhler?
Dr. August Köhler