TOMA DE MUESTRAS Y

LABORATORIO EN INFECCIONES
ORALES
 INFECCIONES

 Manifestaciones orales de enfermedades sistémicas

 Locales:
 Caries
 Periodontitis
 Ulceras orales
 Candidiasis
 Actinomycosis
 Tuberculosis y otras
 Dificil
identificación
AGENTES

 Porphyromonas gingivalis*
 Tannerella (Bacteroides) forsythia
 Aggregatibacter actinomycetencomitans*
 Streptococcus spp (hasta nivel especie)
 Etc etc
 BACTERIAS - TINCION DE GRAM
Medicina

POSITIVAS NEGATIVAS

COCACEAS BACILOS COCACEAS BACILOS

En racimo: Difteromorfos: Diplococos: Enterobacterias: Fermentan glucosa
Corynebacterium Neisserias Oxidasa -
Staphylococcus sp L(+): E. coli
Propionibacterium* Branhamella
coagulasa: (+) S. aureus K. pneumoniae
(-) S. coag. neg. Enterobacter sp
S. saprophyticus Grandes, con esporas: Citrobacter sp
S. epidermidis Cocaceas anaer: L(-): Proteus sp
Clostridium*
Veionellas* Providencia sp
Bacillus
Tetradas: Serratia sp Morganella sp
Micrococcus sp Salmonella** Shigella**
Cocobacilos:
En pares o cadenas: Yersinia**
Ramificados: Acinetobacter
Enterococcus sp Nocardia Kingella No fermentadores:
Streptococcus
Actinomyces* Pasteurella Acinetobacter sp
hemólisis: () S. pneumoniae Brucella Pseudomonas sp
() S. viridans Alcaligenes sp
() muchas Otros: Flavobacterium sp
() S. pyogenes (A)
() S. agalactiae (B)
Listeria Stenotrophomonas
() S. grupo C (mitis) Lactobacillus Burkholderia sp
() S. grupo D (bouis) Micobacterias
() S. grupo F Fastidiosos:
() S. grupo G Haemophilus sp
Aggregatibacter
Otros: Cardiobacterium
Peptoestreptococcus * Anaerobios Otros:
Eikenella
Kingella
Peptococcus ** Enteropatógenos Bacteroides*
Capnocytophaga
Leuconostoc Fusobacterium*
Bordetella
Aerococcus Prevotella*
Fermentadores glucosa Oxidasa +
Lactococcus
Vibrio**
Pediococcus
Aeromonas**
 EXÁMENES

 Generales :
Hemograma Sospecha de infección
sistémica: derivar para
Proteina C Reactiva/VHS manejo conjunto con
infectologos
Hemocultivos

 Locales:

 Gram /Cultivo tejido corriente/hongos

 Reacción polimerasa en cadena
 Microbiología endodóntica:
últimos avances.
Rev. Estomatológica visión
dental Vol9 N°3 2006 Lima Peru.
DILEMAS
Luis Chavez de Paz, U. de
Malmö, Suecia.

Dificultades de carácter técnico :

2. Muestra no exenta de contaminación con fluido
oral y/u otro contaminante
3. Medios de cultivo óptimos para el desarrollo de
los verdaderos patógenos no siempre disponible
4. Identificación precisa de ellos limitada7
5. Susceptibilidad in vitro v/s biopelículas
.
 METODOLOGÍAS
1. Cultivo

 Ampliamente distribuido en laboratorios clínicos

 Identifica y apoya con determinación de susceptibilidad
 Tiempos de espera entre 48 a 96 hrs o más si se
incluyen anaerobios (7 días).
 Requiere conocimiento de microbiología oral para hacer
dgco apropiado… laboratorios de hospitales no
preparados para ello!
 METODOLOGÍAS
2. Biología molecular
 Limitado a laboratorios especializados y algunos
adicionados a laboratorios clínicos de rutina
 Métodología que permite identificar la mayor
diversidad bacteriana en boca
 Métodos diversos a revisar:
 PCR tiempo real
 PCR multiple
 Identificación por ARNr16S
 Arrays
 QUÉ ES LA BIOLOGÍA
MOLECULAR O PCR
El proceso de detección de un agente infeccioso por
amplificación genética se desarrolla de manera
habitual en tres etapas:
1° Extracción y purificación de los ácidos nucleicos
del microorganismo de la muestra biológica
2° Amplificación de un segmento seleccionado del
genoma del microorganismo mediante
reacción en cadena de la polimerasa, es decir,
la PCR propiamente dicha.
3° Detección de los fragmentos amplificados en la
PCR (amplicones) por electroforesis en gel de
agarosa o mediante hibridación con sondas
específicas. En general todo este proceso suele
durar aprox 24 h .
 PCR TIEMPO REAL

Los procesos de amplificación y detección se producen de

manera simultánea en el mismo vial cerrado, sin
necesidad de ninguna acción posterior.
Mediante detección por fluorescencia se puede medir durante la
amplificación la cantidad de ADN sintetizado en cada
momento, ya que la emisión de fluorescencia producida en la
reacción es proporcional a la cantidad de ADN formado.
Esto permite conocer y registrar en todo momento la cinética de la
reacción de amplificación.
Al ser simultánea se acortan los tiempos. Promedio 50 minutos. ..
Puede ser múltiple además.
 PCR MULTIPLE
Reacciones que consiguen amplificar simultáneamente y
en un único tubo diferentes secuencias diana,
permitiendo la detección e identificación simultánea de
distintos genes de interés.

Usos en dgco de sindromes clínicos como neumonia

comunitaria, meningitis, etc.
 ARRAYS
Los chips o arrays de ADN son una serie de sondas de
ADN unidas a un soporte sólido en una disposición
regular y prefijada.
El ácido nucleico diana que será detectado puede ser ADN o
ARN y previamente a la hibridación debe ser marcado con
una sustancia fluorescente o radiactiva.
La principal ventaja con respecto a PCR es que pueden
detectarse en un único procesamiento miles de genes.
 Investigación de la patogenia bacteriana
 análisis de la evolución bacteriana y epidemiología
 estudio de los mecanismos de acción y de resistencia de los
antibióticos
No disponible
 diagnóstico microbiológico de las enfermedades infecciosas.
clinicamente
 LIMITACIONES BIOLOGÍA
MOLECULAR
 No disponible en laboratorios clínicos generales
 Identifica MO vivos y muertos
 No posible relacionar rol patógeno
 No reproducible en cultivo
 No permite determinación susceptibilidad
 Riesgos contaminación toma muestra y procesamiento

 Identifica con mayor precisión y rapidez

 Permite cuantificar
PCR DISPONIBLES
 TOMA DE MUESTRAS

 Preparación:
 Reunir material, realizar órdenes de exámenes,
etiquetar tubos.
 Higiene de manos y colocación de guantes
(precauciones estándar que puede incluir gafas y
mascarilla).
 4 manos
 TOMA DE MUESTRAS
 Sitio exacto de la lesión
 No poner en contacto con antisépticos
 Rápido
 Idealmente aspirar abscesos cerrados por punción o
raspado, cureta (preferir por sobre hisopado) o trozo
tejido biópsico (sin preservantes).
 Previo a inicio de tto ATB (idealmente).
 Inocular en medio de transporte aerobio/anaerobio
 Transporte t° ambiente inmediato (excepto virus 4°C)
DERIVACIÓN SEGÚN AGENTE
BUSCADO
 VIRUS: DETECCIÓN
DIRECTA
detección elemento viral directamente desde la muestra
(fase aguda 5-7 días)
frotar con fuerza mucosa para desprender células infectadas con
hisopo. Conservación 4°C hasta 48 hrs o 7 días a -70°C.
 Microscopía óptica+tinción: visualización de él en células
humanas por técn.inmunológicas (IF), enzimas (ELISA) o
isótopos radiactivos (RIA). No disponible virus orales.
 Cultivo viral: cultivos celulares en forma de monocapas a partir
de tejidos animales o humanos. Detección viral se efectúa por
1. Efecto citopático o su neutralización con sueros con Ac
frente al virus sospechado.
2. Adición de Ac para detección mediante
inmunoflurorescencia (identifica Ag). Shell vial.
3. Biología molecular.
 VIRUS

PCR para los virus

sospechados desde
muestra o cultivo viral
Disponible toda la
familia Herpes
VHS 1 y 2
VVZ
CMV
VEB
HHV-6 y 8
Echo
Coxsakie
 VHS-1

Celulas infectadas de
riñón de conejo Celulas no infectadas de
riñón de conejo
 HONGOS
1. Cultivo hongos (toma y transp similar a bacterias)
 Filamentosos: lento crecimiento.
 Levaduriformes: rápido crecimiento, contaminantes/flora
v/s patógenos.
 Ojo con: dermatofitos, dimórficos como Histoplasma (no
forman parte de la rutina de laboratorios)
 Metodología:
 Siembra en agar sabouraud c/s CAF
 Morfología colonias, micromorfología.
 Levaduras: medios cromógenos, galerías identificación: API,
ID 32C; Sistemas automatizados: Vitek .
 Filamentosos: morfología colonia, tinción de colonia con
azul de lactofenol-
CHROMagar Candida.
C. albicans ATCC 90028 (arriba)
C. krusei ATCC 6258 (derecha)
C. glabrata (abajo),
C. tropicalis (abajo izq)
C. parapsilosis ATCC 90018 (arriba izq)
Candida krusei
 BACTERIAS
1. Cultivo corriente:
 Siembra en medios sólidos enriquecidos y
caldos (tioglicolato).
 Identificación a nivel especie solicitada.

2. Antibiograma:
 La mayoría de los lab: difusión con disco, insuficiente
para estomatología.
 Requerido por tipo de patógenos orales: CIM dilución
o bien E test por difusión.
 IDENTIFICACION
BACTERIANA
Identificación automatizada: sistema Vitek
 Alrededor de 94% identificación especies cocáceas
 Bajo nivel discriminación en alrededor 5%
 Menos 1% sin identificar
 Además incluye susceptibilidad con CIM
 Optimo para laboratorios clínicos no moleculares.
 ANTIBIOGRAMA: NORMA
CLSI
1. ANAEROBIOS: CIM
1. Beta lactámicos sólos y en combinación
2. Lincosamidas (clindamicina)
3. Carbapenémicos
4. Quinolonas (moxifloxacino)
2. STREPTOCOCCUS no beta hemolíticos (CIM)
6. Penicilina
7. Cefalosporinas 3° gen
8. Lincosamidas (discos)
9. Quinolonas (discos)
3. Otros: de acuerdo a la rutina de laboratorio
 CONCLUSIONES
 Diagnostico de laboratorio de infecciones
estomatológicas limitado a:
 Automatización y tecnologías del Laboratorio

 Conocimiento de patógenos orales de profesionales del

laboratorio

 Solicitud expresa de búsqueda de patógenos puntuales

por odontólogos

 Comunicación directa entre ellos oportuna

 Toma de muestra de buena calidad

Gracias