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Existen varios tipos de electroforesis, entre los cuales, los que mas resaltan:
ELECTROFORESIS DE FRENTE MOVIL O LIBRE
ELECTROFORESIS EN PAPEL
ELECTROFORESIS DE ZONA ELECTROFORESIS • PAGE- nativa
EN GEL • SDS- PAGE
• Isoelectroenfoque
ELECTROFORESIS CAPILAR
FUNDAMENTO FÍSICO
El movimiento de las moléculas está gobernado por dos fuerzas:
● La fricción con el solvente dificultará este movimiento por una fuerza que se opone.
● El movimiento browniano debido a que poseen energía cinética propia.
Clave: La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una
manera homogénea, sino que comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura
aumentara con el tiempo.
Esta separación se basa en la diferente velocidad de migración de partículas con carga diferente
dentro de un campo eléctrico.
V= µ.E
µ = Q /6Πηr
PARÁMETROS QUE AFECTAN LA MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA
La mayoría de las proteínas intracelulares tienen carga negativa, ya que su punto isoeléctrico es
menor que el pH fisiológico (aprox. 7,4)
CÁMARA ELECTROFORÉTICA
1. COMPONENTES
2. PREPARACIÓN DE LA CAMARA
3. ACCIONAMIENTO DE LA CAMARA
COMPONENTES
PREPARACIÓN DE LA CÁMARA
ELECTROFORÉTICA
1. Ensamblaje de las placas de vidrio y
espaciadores en la base
2. Introducción del peine en la cámara
3. Adición del gel de resolución y de
forma posterior del gel de
empacamiento
4. Disposición del peine y
polimerización
5. Proveer en una zona plana la cubeta
electroforética
ACCIONAMIENTO
APLICACIONES DE
ELECTROFORESIS
• Electroforesis en gel de agarosa como método de separación de fragmentos
de ADN
1. Cuando se aplica un campo eléctrico al ADN este se desplaza del polo negativo al polo
positivo. Para dicho proceso se utilizan:
❖ TAMPON TBE: Trisbase 0,4M, Acido Bórico 0,4M, EDTA 10mM, pH=8
❖ TAMPON DE CARGA: 40% sacarosa, 0,25% azul de bromofenol, EDTA 0,1M
❖ GEL DE AGAROSA: Disolver la agarosa en tampón TBE
4. Tinción de gel con Bromuro de Etidio (Iluminación de gel con luz ultravioleta)
5. Resultados
Procedimiento
Aplicabilidad de la electroforesis en biología
molecular
• Southern blot: separación de secuencias especificas de ADN.