ANÁLISIS CUANTITATIVO MEDIANTE

ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN

• Parámetros prácticos :
1. Absortividad molar.
2. Estabilidad y sensibilidad.
3. Efecto del pH.
4. Espectros de absorción de reactivos y productos.
5. Naturaleza de la reacción.
6. Representación de la Ley de Beer. Rango de
Linelidad.
7. Interferencias y su eliminación.
 Ley de Lambert y Beer

• T = P/P0 = transmitancia A= log P0/P = absorbancia

• A = - log T

• A= - log P/ Po
 RELACIÓN LOGARÍTMICA ENTRE
TRANSMITANCIA Y CONCENTRACIÓN

• P es luz con potencia radiante incidente. dP es disminución de potencia

• dx es espesor de una capa delgada. C es concentración de la especie
absorvente
 ECUACIONES

dP = -bPcdx b es una constante de proporcionalidad

- dP = bcdx
P Límites de integración:
P = P0 para x = 0 y P = P para x = b
dP
-∫
P
P = b c ∫b
dx
po o

- lnP – (-ln P0) = bcb ln P0 = bcb

P
 Finalmente, convirtiendo ln a log mediante la
relación ln z = (ln 10)(log z)

Log P0 = b
P ln 10
cb

Una constante
O bien:
A = ecb e es una constante de proporcionalidad
llamada absortividad molar.
 LEY DE BEER

“La ABSORBANCIA es directamente proporcional

a la concentración de las especies absorbentes”
A= abc
A= ebc
Siempre que se mantenga constante la longitud de
la celda. (b).
• a = absortividad (c = ppm, mg/L, g/L , µg /mL)

 e = absortividad molar (c = moles/L , M )

• b = Longitud de la cubeta en cm.

La absorbancia es adimensional.

La Absortividad (e) o coeficiente de extinción (M-1cm-1¨) :

Propiedad característica de las sustancias, indica cuanta luz
se absorbe a una longitud de onda dada. También indica
probabilidad de que ocurra una absorción.

El espectro de absorción indica la dependencia de A o e y la

longitud de onda.

La Absortividad también varía con el solvente, la temperatura y

en la práctica con el instrumento. Por ello, usualmente no se
usa para fines cuantitativos.

Es necesario la construcción de una CURVA DE

CALIBRACIÓN O CURVA DE TRABAJO.
 Curva de Ringbown

CCONDICIONES
CONDICIONES
Y
A
B
•Sustancia Estándar.
S •Logitud de Onda Optima.
O •Solvente Adecuado.
R
T
•Instrumento Calibrado.
A NOS MUESTRA:
N Concentraciones de trabajo.
C
I
Concentración Optima.
A X Sirve para:
Log. CONCENTRACIÓN Trazado de la Curva de Calibración
 Curva de Calibración

Y
CONDICIONES ANALÍTICAS
A •Sustancia Estándar.
B
S
2.0
•Logitud de Onda Optima.
O 1.5 •Solvente Adecuando.
R
B •Instrumento Calibrado.
A 1.0
N
VALIDACIÓN DE LA C.C
C 0.5
I Y = aX + b
A
0.0 X
a = pendiente.
CONCENTRACIÓN b = punto de corte.(0)

r = regresión líneal(1)
• SENSIBILIDAD
Está relacionada con la magnitud del cambio en un
instrumento de medida con los cambios en la concentración
del compuesto.
Indicador de cuan pequeño se puede hacer el cambio en el
material de estudio, antes de producir una diferencia en el
instrumento.
• LÍMITE DE DETECCIÓN.
Es la menor cantidad posible que podemos detectar con cierto
grado de confianza o significación estadística. En cada
ensayo hay un límite inferior en cuyo punto no estamos
seguros de si hay algo presente o no.
La forma de medida depende del aparato que se utilice.
El límite de detección se alcanza cuando la proporción de la
señal al ruido sea 3 o mayor. S/R = 3
 Curvas de calibración
• La curva de calibración se utiliza para establecer
la relación entre la concentración del analito y la
absorbancia.
• Lo mejor es preparar las disoluciones patrones con
los mismos reactivos y al mismo tiempo con la
muestra incognita. ( Complejidad de la matriz).
• Los compuestos interferentes incluyen aquellos
que absorben radiación en la misma región
espectral que el analito. Aquellos que influyen en
la absorbancia del analito. Aquellos compuestos
que reaccionan con los reactivos modificadores (
específicos para el analito).
• Las curvas de calibración pueden ser potencialmente
erróneas si la muestra incógnita y los patrones difieren con
respecto al pH, viscosidad, fuerzas iónicas, tipos de
impurezas y factores semejantes.
• Se recomienda calibrar el sistema de ensayo haciendo uso
de un PROTOCOLO DE ADICIÓN DE PATRÓN.
 A una serie de matraces se añade un volumen constante de
muestra Vu, de concentración desconocida Cu.
 A cada matraz se añade un volumen de patrón Vs, de
concentración C s. ( Cada matraz tiene volumen distinto de
patrón) Luego se enrraza todos los matraces a un volumen
total Vt.
A= k[VsCs + Vu Cu) / Vt]
Pendiente= kCs/Vt
Origen = k Vu Cu/Vt Cu= Origen/pendiente
ANÁLISIS DE SISTEMAS MULTICOMPONENETES

Las absorbancias a cualquier longitud de onda son ADITIVAS :

Una solución con dos sustancias absorbentes distintas, (1) y (2) con
concentración c1 y c2 y e1 y e 2 a una longitud de onda determinada :

A1 = e1bc1 + e2 b c2 e1 y e2 a la  de onda óptima de 1

A2 = e1bc1 + e2bc2 e1 y e2 a la  de onda óptima de 2

A1 es la absorbancia de la mezcla a la  óptima de 1 y A2 es la

absorbancia de la mezcla a la  óptima de 2 .

La longitud de la celda, b, en cm..

• 2.- La absortividad e se puede determinar
experimentalmente.

• Ejemplo. La tetraciclina en medio ácido sufre una

reacción de epimerización, la forma epimerizada
es inactiva.
• Las absortivivades molares de cada uno es
diferente a 267 nm y 254 nm.
 DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER
Cuando se representa la Absorbancia vs Concentración y no se
obtiene una línea recta, entonces, la ley de Beer no se cumple en toda
las concentraciones.
Los factores más importantes que pueden causar desviación son :
1.- Condiciones ambientales. Temperatura , presión, disolvente.
2.-Errores instrumentales, dispersión de la radiación, estabilidad de la
fuente, detector, monocromador, electrónica, confiabilidad de la parte
óptica.
3.- Desviaciones químicas que afectan el equilibrio, concentración.
4.- Cambios en el índice de refracción de la muestra.
5.- Radiación no monocromática.
ERRORES ANALÍTICOS EN LA MEDIDA
DE CONCENTRACIONES
• Principal error : Lectura de las Absorbancias.
• Sabemos que :
A = log Io / I
Error Absoluto : Δ T constante ( Error debido
al instrumento) en la medida de la
transmitancia ( T = I / Io ).
Error Relativo: Δ C / C ( Error en la medida de
las concentraciones) es variable. Depende del
valor de T.
• Dicho Error Relativo de Concentración está dado por :

Δ C/C = 0,4343 Δ T / T log T

Δ T es un error instrumental constante (0,002 - 0,01)

Δ C/C es mínimo para valores de T entre 0,2 y 0,6 ( error
menos de 2%) ; correspondiente a Absorbancias entre
0,7 y 0,2. ( rango adecuado para cálculo de
concentraciones).

Se prepara: Sol. De Teofilina ( C= M x 10-5 )

C =1.16; 2,45;3,60;4,40;5,55; 6,68;8,28;9,64;10,6;11,84.
A=0,111;0,234;0,344;0,420;0,530;0,638;0,791;0,921;1,013;1,131.
T = 0,774;0,583;0,453;0,380;0,295;0,230;0,162;0,120;0,097;0,074
%Δ C/C=2,02;1,27;1,11;1,09;1,11;1,18;1,36;1,57;1,77;2,08
• Se grafica %ΔC/C v/s T.
• De los resultados se observa el valor mínimo de
error relativo de concentración es;

Δ C/C = 1,09 %.

Por tanto en el estudio espectrofotométrico de

soluciones de Teofilina la concentración teórica
más adecuada es 4,40 x 10 –5 M
 APLICACIONES DE LA LEY DE
BEER

Si se conoce la absortividad de la especie: La

concentración se halla mediante la Ley de
Beer.
A = ecb
• Sabiendo que la absortividad molar del luminal a pH
7,3 en solución acuosa es 3981 a la long. de onda de 240
nm. Calcular la concentración en mg/mL de una
solución que mostró una transmitancia de 0,48.
PM = 232,24. A -log 0,48
A = ecb c= =
eb 3981 x 1
C = 8x10-5M

C = 0,019 mg / mL.
• MEDIANTE CURVA DE CALIBRACIÓN :

• Tiene la ventaja de que es más preciso ya que

opera con una línea que pasa por una serie de
valores.
Se pueden presentar problemas como solubilidad,
pureza, estabilidad de color e instrumentales.
• Ejem: El Valium, un relajante muscular tiene un
máximo de absorción a 292 nm. Se prepara una
serie de diluciones.

• 5.00 x 10-6 M 0.22 de absorbancia.

1.00x 10-5 M 0.43
2.00x 10-5 M 0.85

• Problema : 0.73 de absorbancia.

• Cuál es su concentración?
 Aplicaciones de la Ley de Beer

• POR COMPARACIÓN CON UN PATRÓN:

La absorbancia de la muestra desconocida A1 y del patrón A2
se describe mediante la Ley de Beer. b=1 y e es el mismo
para A1 y A2
A 1 /A2 = c1/ c2
• ADICIÓN DE PATRÓN INTERNO:
Se miden dos soluciones: La A que contiene el desconocido y
la B que tiene el desconocido más un Volumen de patrón

A (desconocido) = ebc ( desconocido)

A (desco + patrón) = e b (V1c desc + V2 c patrón )/ V total.

Dividiendo ambos:

C desc = A desc. V2 c patrón/ V total Adesc+patrón - A desc V1

• Ejemplo.
Se disuelve 1 g de acero con HNO3, se oxida hasta
KMnO4 y se diluye a100 mL . Se mide dos alícutas de 5
mL de la muestra, a una se le añade 5 ml de patrón
KMnO4 de 1.00x10-4M.
Si la Abs. Del desconocido es 0, 7 y del desconocido +
patrón es 0.465,halle la concentración del desconocido.
(0,7)(5mL)(1 x 10 -4 M)
C descono = ____________________
(10 mL)(0.465)-(0,7)(5mL)

= 3,04 x 10 -4 M
Se preparan 5 soluciones estándar de un analito, de 25 mL
cada una, a cada solución se le agrega 25 mL de muestra y se
lee las absorbancias respectivas.
Se hace una gráfica que es una recta que no pasa por el
origen.
El valor de la concentración del problema
es el cociente de la ordenada en el origen( b ), dividida entre
la pendiente. Cx = b / tagδ = b / m

mg/mL 0 0,2 0,4 0,6 0,8

Absorbancia 0.28 0.37 0,46 0,55 0,63

• Una variante consiste en prepara una curva de
calibración por el método directo..

• Se realizan dos lecturas: de muestra problema y de

mp+ cantidad conocida de analito.

• A partir de éstas y con la curva de calibración

calculamos las concentraciones correspondientes y
luego hallamos las concentraciones reales:

• C problema real / C problema aparente = C patrón agregado/ C patrón aparente.

• Se desea conocer el contenido de calcio de un agua
subterránea, para ello se preparó una curva de
calibración:
mg / L 0 2 4 6 8 10
Absorb 0 0.12 0,24 0,36 0,48 0,60

• Se preparó una muestra con 5 mL de problema diluido

a 100 mL con agua destilada.
• De ésta se tomaron dos alícuotas:

La primera dio 0,30 de lectura.

La segunda con contenido adicional de calcio

de 4mg/L dio 0,47 de absorbancia.

Con ayuda de la curva de calibración

obtenemos las concentraciones aparentes para
el st. y la solución problema+ st.
• Con ayuda de la C de C se determina las concentraciones
aparentes:

Para la primera 0,30 5mg/L = C1 aparente de

mp.
Para la segunda 0,47 – 0,30 = 0,17 que es la
lectura para la concentración del patrón
agregado de 4mg/L.
0,17 2,8mg/L que es la concentración
aparente del estándar.

C problema real = ? C real de patrón=4mg/L

C problema aparente = 5mg/L C patrón aparente=2,8mg/L.
• Reemplazando en la ecuación :

• C problema real / C problema aparente = C patrón agregado/ C patrón

aparente.

C real problema = ( 4 / 2,8 ) 5 = 7,14 mg/L

7,14 x 100/5 = 142,8 mg/L.

PATRÓN INTERNO :

Es un producto que no está presente en la

muestra, cuyo comportamiento es similar al del
analito y que no interfiere en la determinación.
Se prepara una serie de disoluciones con distinta
relación de analito (A) y manteniendo
constante el patrón interno (P).

Absorb.de A/ Absorb patrón v/s CA / CP