PRODUCTOS

CON ADN
RECOMBINANTE
 BIOTECNOLOGÍA;
CONCEPTO E HISTORIA

•Aplicación de los sistemas biológicos en la solución

de problemas relacionados con la mejora de la
calidad de vida del hombre.

•En éste contexto podemos apreciar que el hombre

ha desarrollado Biotecnología desde hace miles de
años.
-
La biotecnología podría definirse
como "toda aplicación tecnológica
que utilice sistemas biológicos y
organismos vivos o sus derivados
para la creación o modificación de
productos o procesos para usos
específicos".
 BIOTECNOLOGÍA MOLECULAR
La nueva era.

 En la actualidad la biotecnología se ha visto

revolucionada por la introducción de la Ingeniería
Genética o también llamada tecnología del ADN
recombinante.

 Para situar a la biotecnología tradicional en su

nueva era, se ha incorporado el concepto de
Biotecnología Molecular.
 Creación de bases
de datos
de ADN y péptidos

Producción de
SOMATOSTATINA
en bacterias

Sintesis enzimática
del ADN por PCR
Taq Primer genoma
Inicio de la
ingeniería genética secuenciado

50s 60s 70s 80s 90s 2000s

Primera proteína
terapeutica producida
por ingeniería
El codigo genético genética Clonación del primer
Es controlado. animal

Era de la genómica funcional

Chips de DNA
Diagnóstico molecular
Farmacología molecular
Biomedicina
 BIOTECNOLOGÍA;
Ambitos de desarrollo

Farmacia Diagnóstico
Antibióticos
Nuevos fármacos
Vacunas
Hormonas
Terapias génicas
Salud humana
Agricultura y ganadería
Alimentos Calidad de alimentos
Mejora de procesos Calidad ambiental
Obtención de nuevos alimentos
Desarrollo de nutraceúticos
Desarrollo de aditivos
Medio ambiente

Tratamiento de residuos
Biorremediación
Energías limpias
 Producción

Microorganismos Células Animales Vegetales

Bacterias levaduras animales Transgénicos transgénicos
Antibióticos Proteínas terapéuticas Proteínas terapéuticas Resistencias naturales
Péptidos simples Anticuerpos Anticuerpos a virus y químicos
Vacunas Moléculas complejas Moléculas complejas
Moléculas simples
Cultivos en bioreactoresCultivos celulares No hay necesidad No hay necesidad
en bioreactores de reactores de reactores

Bacterias levaduras hongos

Cultivos de Ratones de investigación
células mamarias Vacunos, ovinos

Genética simple Genética compleja Genética compleja Genética simple

Insulina Activador tisular Hormona hGH Vitamina A
Hormona hGH de plasminógeno tPA Beta Caroteno
Vacuna Hepatitis B Factor VIII
PRODUCCIÓN DE FÁRMACOS EN MICROORGANISMOS

Tecnología de bioreactores es la de mayor uso.

•Tiempos generacionales cortos
•Velocidad de crecimiento
•Metabolismo
•Manejo genético y molecular
Como carencias:
Problemas de regulación Tecnología
de operones
génica
Ingeniería
metabólica
Problemas en los
requerimientos metabólicos
Actualmente
en pleno
desarrollo

Búsqueda de nuevos
compuestos bioactivos:
Antibióticos
Antitumorales
Fármacos recombinantes producidos por IG

Sustancia Empresa Enfermedad

Miles, Baxter, Genetics
factor antihemofílico Hemofilia A
Institute
DNasa I Genentech Fibrosis quística
Eritropoyetina (EPO) Amgen, Ortho Biotech Anemia, enf. renal
Glucocerebrosidasa Genzyme Enfermedad de Gaucher
Hormona del crecimiento Genentech Enanismo hipofsario
Insulina Eli Lilly Diabetes
ciertas leucemias, sarcoma de
Interferón alfa-2a Hoffmann-LaRoche
Kaposi
ciertas leucemias, Sarcoma de
Interferón alfa-2b Schering-Plough
Kaposi, hepatitis B y C
Interferón alfa-n3 Interferon Sciences Herpes genital
Interferón gamma-1b Genentech enf. granulomatosa crónica
Interleucina-2 Chiron Carcinoma células renales
Deficiencia hormona
Somatotropina Eli Lilly
crecimiento
Activa dor tisular del Infarto agudo de miocardio,
Genentech
plasminógeno (tPA) embolismo pulmonar masivo
 TECNOLOGIA DEL ADN
RECOMBINANTE
ES UN TÉRMINO QUE AGRUPA UNA GRAN VARIEDAD DE TÉCNICAS
EMPLEADAS EN EL LABORATORIO PARA MANIPULAR LAS
MOLÉCULAS DE ADN CON EL FIN DE ESTUDIARLAS.
CONSISTE EN LA INTRODUCCIÓN DE GENES EXTRAÑOS EN EL
MATERIAL GENÉTICO DE OTRA CÉLULA.
REQUIERE DE CULTIVOS CELULARES, ENZIMAS DE RESTRICCIÓN,
VECTORES DE CLONACIÓN, LABORATORIOS EQUIPADOS Y
PERSONAL BIEN ENTRENADO.

Esta tecnología es muy

importante para la
investigación en biología
celular y molecular.
Los procedimientos básicos de la tecnología del DNA recombinante
incluyen de manera general los siguientes pasos:

Los fragmentos de DNA se generan utilizando unas enzimas denominadas

endonucleasas de restricción, que reconocen y cortan las moléculas de
DNA por secuencias específicas.

La piedra angular de la tecnología del DNA recombinante es un tipo de

enzimas denominadas endonucleasas de restricción. Las enzimas de
restricción reconocen una secuencia específica de nucleótidos (denominada
sitio de restricción) de una molécula de DNA de doble cadena, y cortan el DNA
por esa secuencia.

Hasta la fecha, se han aislado y caracterizado casi 200 tipos de enzimas de

restricción diferentes. Las enzimas de restricción se denominan según el
organismo en el que se descubrieron, utilizando un sistema alfanumérico. La
enzima EcoRI proviene de Escherichia coli; HindIII se descubrió en
Hemophilus influenzae.
 Hay dos tipos de enzimas de restricción:

Las enzimas de Tipo I cortan las dos cadenas del DNA en una posición
aleatoria a cierta distancia del sitio de restricción. No se utilizan
normalmente en la investigación de DNA recombinante ya que el sitio de
corte no es preciso.

Las enzimas de Tipo II reconocen una secuencia específica y cortan las dos
cadenas de la molécula de DNA con absoluta precisión dentro de la
secuencia reconocida. Se usan ampliamente en investigación de DNA
recombinante puesto que cortan en sitios específicos. Las secuencias
reconocidas por las enzimas de Tipo II son simétricas (“palindrómicas”), es
decir, la secuencia de una de las cadenas leída en dirección 5’ a 3' es la
misma que la secuencia de la cadena complementaria leída también en
dirección 5' a 3'.
 CULTIVO CELULAR
• Proceso mediante el cual, células procariotas o eucariotas,
pueden cultivarse en condiciones controladas.

• Los "cultivos celulares" hacen referencia a la siembra de células aisladas de

eucariotas pluricelulares, especialmente células animales., para cultivo de
órganos y tejidos

Cultivo de células
humanas en medios
Medios de cultivo enriquecidos con
sólidos para aminoácidos, vitaminas y
siembra de las factores de crecimiento
células
(Variedad de agares)
Procesamiento de cultivo de células
madre
 5 PASOS DE LA TECNOLOGÍA DEL ADN
RECOMBINANTE

Corte del ADN en posiciones Selección del

ADN con el
precisas (secuencias palíndromes) Vector de gen de interés
con endonucleasas de restricción, clonación
Corte con enzima
de restricción
Unión de fragmentos por la
ADNligasa,

Selección de un fragmento de ADN

capáz de autoreplicarse,

Insertar los vectores de clonación a

células específicas que contienen Plásmido
toda la maquinaria genética para la recombinado Cromosoma
bacteriano
expresión de la información contenida
en el vector

Selección o identificación de las

células que contienen al ADN Plásmido dentro
de la bacteria
recombinante. cultivo de bacteria
recombinada
 Manipulación del ADN
Las 2 moléculas de ADN
son digeridas con la
misma endonucleasa de
restricción,
La enzima corta
extremos
complementarios que se
aparean,
La ligasa repara hebras
cortadas de ADN y
rehace las nuevas
bicatenarias.
 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Catalizan la hidrólisis de los enlaces fosfodíester de los ácidos nucleicos y son
capaces de cortar ambas hebras del DNA en sitios específicos
Ciertas cepas de E. coli degradan (cortan) el DNA de ciertos virus fagos
infectivos, a menos que los ácidos nucleícos presenten metilación (adición de
grupos metilo) en algunos residuos de adenina o citosina del sitio de corte.
 VECTORES DE CLONACIÓN
Son moléculas que transportan y replican fragmentos de ADN que
llevan insertados.

Plásmidos son
moléculas de ADN
extra cromosómico
de forma circular en
bacterias

Cosmidos son
Bacteriófagos: son virus vectores sintéticos que
que sirven de portadores de combinan
Material genético a bacterias características del fago
lambda que posee
extremos cohesivos o
regiones cos
VIRUS BACTERIÓFAGOS
Partículas infectantes de bacterias,

Algunos (Lambda y M13) han sido utilizados por biólogos moleculares, que
han modificado oportunamente sus genomas.

 Pueden tener efecto lìtico o lisogènico en las bacterias.

Actividad de los virus bacteriófagos
MANIPULACIÓN DE CÉLULAS
HUMANAS
UTILIDAD DE LA BIOTECNOLOGÍA

Utiliza
microorganismos
modificados
geneticamente, asi
como plantas y
bacteriófagos) animales
transgénicos para
elaboración de
antibióticos,
hormonas y variedad
de sustancias de
utilidad para el
hombre.
El sistema tradicional de obtención de
vacunas a partir de microorganismos
patógenos inactivos, puede comportar un
riesgo potencial.

Muchas vacunas, como la de la hepatitis B,

se obtienen actualmente por ingeniería
genética.
Como la mayoría de los factores antigénicos
son proteinas lo que se hace es clonar el gen
de la proteina correspondiente.
EN AGRICULTURA
-En el ámbito de la agricultura siempre se ha
pretendido obtener plantas cultivables, cuyos
rendimientos sean óptimos.

Desde hace muchos años se utilizan los

conocimientos de la Genética, aunque muchas veces
de una forma inadvertida, y en este sentido deben
entenderse los procesos de selección génica
realizados provocando cruces y originando
poliploidías, para luego seleccionar aquellas plantas
de buenos resultados y multiplicarlas asexualmente,
formando clones con ellas.
Los principales caracteres conseguidos en las
plantas transgénicas, son:
a)resistencia a herbicidas, a insectos y
enfermedades microbianas.
b)incremento del rendimiento fotosintético.
c)mejora en la calidad de los productos
agrícolas.
Las primeras plantas obtenidas mediante estas
técnicas fueron un tipo de tomates, en los que
sus frutos tardan en madurar algunas semanas
después de haber sido cosechados.
EN ANIMALES
-En animales, la aplicación de las técnicas de la Ingeniería
Genética persiguen los objetivos siguientes:

a)favorecer la investigación biomédica para estudiar la

fisiología de los genes y la biología del desarrollo.

b)mejorar la productividad o la resistencia a las

enfermedades de animales útiles para los hombres.

c)producción de proteínas de valor farmacológico.

La corrección de errores innatos de metabolismo mediante

terapia génica.