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PRUEBA DE CITOQUINAS SENSIBLES A BASE DE FIBRA ÓPTICA

PERMITIENDO LA DETECCIÓN LOCALIZADA Y ESPACIALMENTE


RESUELTA DE INTERLEUCINA-6.
Guozhen Liu, ͣ ͨ Kaixin Zhang, ͣ Annemarie Nadort, ͣ Mark R. Hutchinson, ͩ and Ewa M. Goldys ͣ
ͣ ARC Centre of Excellence in Nanoscale Biophotonics (CNBP), Macquarie University, North Ryde 2109, Australia.
ͨ Key Laboratory of Pesticide and Chemical Biology of Ministry of Education, College of Chemistry, Central China Normal University, Wuhan 430079, P. R. China.
ͩ ARC Centre of Excellence in Nanoscale Biophotonics (CNBP), The University of Adelaide, Adelaide 5005, Australia.

Juliana Peña Quiroga ͤ, Laura Yiceth Sanabria ͤ

Universidad Industrial de Santander, Facultad de Ciencias, Escuela de Física, Física III.

ͤ Estudiantes de pregrado en Química.


CITOQUINAS
• Son moléculas de bajo peso molecular
que poseen la capacidad de modular la
función de células y tejidos.
• Juegan un papel importante en la
respuesta inflamatoria e inmune.
• La expresión y la actividad de
citoquinas se puede medir mediante la
utilización de bioensayos e
inmunoensayos (ELISA).

Interleucina-6
PRINCIPIO DE LA FIBRA ÓPTICA
Las fibras ópticas están diseñadas para el
transporte y manipulación de la luz; su
estructura esta diseñada mediante dos
leyes fundamentales de la física.
 Refracción
 Reflexión
Existen varios tipos de fibras ópticas:
 Monomodo
 Multimodo
FLUORESCENCIA
Es un fenómeno propio de algunas
sustancias (fluoresceína) que tienen la
capacidad de absorber luz a una
determinada longitud de onda y emitir a
otras longitudes de onda. Es un fenómeno
que dura un corto lapso de tiempo.
BIOSENSORES
Son instrumentos analíticos que
transforman procesos biológicos en
señales eléctricas u ópticas.
Existen varios tipos de
Biosensores:
 Electroquímicos
 Ópticos
 Inmunosensores
PARTE EXPERIMENTAL

Fabricación de la interfaz de detección. Proceso:


H₂So₄ y H₂S₂ Aminopropíltrietoxisilano Solución de AuNP
(12horas) (6 horas) (5 horas)

Activación del ácido 6-mercaptohexanoico


carboxílico. (una noche ~ 8 horas)

Solución Tampón MES (EDC/NHS)


durante 30 minutos.

Anticuerpo de
captura IL-6
(3 horas)

Se sumergió Anticuerpo secundario anti-IL-


Esquema 1. Esquema de la preparación de la tira de ensayo de citoquinas basada en la en BSA 6 (fluoróforos verdes) en PBS
fibra óptica para la detección del analito localizado IL-6. (3 horas) (2 horas)
Medición de citoquinas.
Solución PBS o suero con IL-6 ;
diferentes concentraciones
(2 horas)

Microesferas basadas en poliestireno de 8


micrómetros teñido con cantidades crecientes
Lavado con solución Tampón de PBS de fluroforo Dragon Green.
y secado de N2. Dragon Green es un sustituto espectral
excelente para la fluoresceína.

Expuesto nanopartículas Dragon


Green
(1 hora)

Medición por
fluorescencia
RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Figura 1. Absorbancia UV-vis de (a) solución de coloide de oro. (b) superficie de


vidrio después de la modificación por etapas con anticuerpo de captura APTES, AuNP e
IL-6.

Figura S1. Espectros de fluorescencia del revestimiento de la cubierta de vidrio


después de la modificación gradual de diferentes componentes en la interfaz de
detección
Figura 2. (a) Relación entre la intensidad de fluorescencia y la concentración de IL-6. (b) Curva de calibración de IL-6 basada en la
interfaz de detección Fabricado en un cubreobjetos de vidrio.
Figura 3. Imágenes confocales para la modificación escalonada de fibra óptica: (a) fibra óptica original, (b) fibra óptica modificada
con AuNP, y (c) fibra óptica modificada con anticuerpo de captura de IL-6 (d) superficie de la fibra Sin modificación del anticuerpo
de captura de IL-6; Y (e) la fibra óptica modificada con anticuerpo de captura de IL-6 después de la exposición al anticuerpo
secundario marcado con colorante verde (NL493).
 Detección de Interleucina-6:

Fabricación de Dispositivo de Superficie de


citoquinas. inmunosensibilidad. captación.

 Cuantificación de Interleucina-6:

Microscopio
Fluorescencia.
confocal.

 Adsorción utilizando BSA:


Cuantificación de las Intensidad del
Reactivo de bloqueo.
proteínas. Dragon Green.
Figura 5. (a) imágenes de proyección de intensidad máxima de la pila Z de la fibra óptica después de su exposición a diferentes
concentraciones de IL-6 seguido de la incubación de Dragon Green. (b) Curva de calibración de IL-6 basada en la señal de fluorescencia y
concentración de IL-6 obtenida de (a).
 Aplicación de AuNPs:

Carga de Bajas Alta


anticuerpos. concentraciones. reproducibilidad.

 Variación del suero:

Variación de la
Perlas verdes.
distancia.

 Factores que afectan la resolución:


Anchura de la Concentración de
ventana. muestra.
CONCLUSIONES
 El análisis de citoquinas desarrollado con base en fibra óptica ofrece
sensibilidad aceptable lo que podría permitir futuros análisis de
concentraciones de citoquina localizada en vivo.
 Este tipo de tecnología proporciona una nueva estrategia de
monitorear espacialmente concentraciones de productos secretados
por células, lo cual puede ser desarrollado como un punto de amplia
importancia para múltiples condiciones de salud.
REFERENCIAS
 Sensitive Cytokine Assay Based on Optical Fiber Allowing Localized and Spatially
Resolved Detection of Interleukin-6.
 Nicola, N. A. Guidebook to cytokines and their receptors; A Sambrook & Tooze
Publication at Oxford University Press: Oxford, 1994.
 Cohen, N.; Sabhachandani, P.; Golberg, A.; Konry, T. Approaching near real-time
biosensing: Microfluidic microsphere based biosensor for real-time analyte
detection. Biosens. Bioelectron. 2015, 66, 454−460
 http://cienciayrestauracion.blogspot.com.co/2013/12/la-fluorescencia-uv.html
 http://www.bangslabs.com/products/fluorescent-microspheres
 http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/fluorescencia