APOPTOSIS

Apoptosis
Mientras los filósofos buscan el significado de la vida, los
biólogos están más interesados en el significado de la muerte
Valerie Fadok
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Apoptosis 2007 2008
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1970 1980 1990 2000
1972 Year
 Apoptosis fisiológica

Defecto Exceso

Autoinmunidad SIDA
Cáncer Alzheimer
 ÍNDICE
1. Fases y características de la apoptosis

2. Apoptosis y filogenia
2.1. Caenorhabditis elegans
2.2. Drosophila melanogaster
2.3. Apoptosis en vertebrados

3. La maquinaria de la muerte celular en humanos

3.1. Caspasas
3.2. Sustratos de caspasas
3.3. Inhibidores de caspasas
3.4. Vías de inducción de apoptosis
3.4.1. Vía extrínseca o de los receptores de muerte
3.4.2. Vía intrínseca o mitocondrial
 1) FASES Y

CARACTERÍSTICAS

DE LA APOPTOSIS
 Fases de la apoptosis
2. Ejecución
3. Fagocitosis
1. Decisión 4. Degradación y
Activación Temprana:
presentación
de receptores antígenos
Desequilibrio Activación
entre factores de proteasas y
inductores e endonucleasas
inhibidores Intermedia:
Fragmentación DNA Detección
Tardía: de fosfatidil
Evita liberación de
Emisión de serina (PS) componentes
cuerpos apoptóticos intracelulares
inflamación TGF b
 Diferencias entre Necrosis
Apoptosis
apoptosis y necrosis. (Oncosis)
Mecanismo Programada genéticamente Accidental.
Tamaño celular Disminuye aumenta
Membrana. Se mantiene Se rompe
Orgánulos. Se preservan Se desintegran

Temprana tardía
Fragmentación del DNA fragmentos fragmentos
oligonucleosomales grandes

Fragmentación celular En cuerpos apoptóticos Los contenidos

rodeados por membrana de los orgánulos
.
se liberan
Restos celulares Son reconocidos Inducen
y fagocitados inflamación local.
CARACTERÍSTICAS
DE LA APOPTOSIS
 Consecuencias de la apoptosis
La célula se fragmenta en cuerpos apoptóticos
con PS en la cara exterior de su membrana
Las células fagocíticas:
• Reconocen PS y fagocitan los cuerpos
apoptóticos
• Al fagocitarlos producen mediadores anti-
inflamatorios
Consecuencias de la apoptosis
1. Se impide la liberación de los contenidos
celulares al espacio extracelular

2. Permite muerte celular sin inflamación

3. La apoptosis permite la muerte celular

sin provocar daño a las células
adyacentes
2) APOPTOSIS Y

FILOGENIA
2. Apoptosis y filogenia
2.1. Caenorhabditis elegans
2.2. Drosophila melanogaster
2.3. Vertebrados
 2.1. C. elegans
- Primera evidencia de una base genética de la apoptosis.
- Desarrollo invariante y lineal.
- Durante la ontogenia de un gusano adulto hermafrodita, 131 céls
de la 1090 céls somáticas mueren por apoptosis (959 céls).
- Análisis genético que determinó genes específicos para la
regulación de la apoptosis:
- egl-1
- ced-3
- ced-4
- ced-9
 2.1. C. elegans
A) Mutaciones con pérdida de función en egl-1, ced-3 o ced-4
provocan la supervivencia de las 131 céls: genes
inductores de apoptosis.

B) Gen supresor de apoptosis, ced-9

- Mutantes carentes de ced-9: muerte durante el
desarrollo por muerte masiva de céls
- Ganancia de función: supervivencia de la 131 céls.
 2.1. C. elegans
La maquinaria básica de muerte celular está altamente conservada
en la evolución de los metazoos

- ced-3 es una cistein proteasa con dominios de interacción

q forman una estruc. parecida al apoptosoma: caspasa iniciadora

- ced-4 es una proteína adaptadora q desencadenaría la

activación de ced-3 si no estuviera unida a ced-9.

- ced-9 es supresora de muerte celular y homóloga a Bcl-2.

- egl-1 desplaza a ced-9 de ced-4.

2.1. C. elegans
 2.2. D. melanogaster
Similitudes con C. elegans:
- Caspasas
- Adaptadores
- Supresores

Aparecen:
- p53
- IAPs
- Mitocondria
2.2. D. melanogaster
 2.3. VERTEBRADOS
1. Tanto en C. elegans como en D. melanogaster el desarrollo está
restricto a la vida temprana o a la metamorfosis.

2. En vertebrados la morfogénesis, el remodelado y la regeneración

se produce abundantemente en muchos tejidos a lo largo de toda la
vida.

3. La maquinaria apoptótica es homóloga a invertebrados aunque

más elaborada y degenerada.
 2.3. VERTEBRADOS
En mamíferos aparece:

1. Familia de receptores de muerte cuyo reconocimiento

desencadena activación de caspasas y muerte.

2. Daños pro-apoptóticos impactan directamente en la

mitocondria y liberan péptidos pro-apoptóticos:

- Holocitocromo c
- Smac/DIABLO que antagoniza la actividad anti-
apoptótica de XIAP.
2.3. VERTEBRADOS
3) MAQUINARIA DE LA MUERTE

CELULAR EN HUMANOS
3. Maquinaria de la muerte celular en humanos
3.1. Caspasas
3.2. Sustratos de caspasas
3.3. Inhibidores de caspasas
3.4. Vías de inducción de apoptosis
3.4.1. Vía extrínseca
3.4.2. Vía intrínseca
3.1. CASPASAS
 CASPASAS
- Son cistein proteasas específicas de aspartato (caspase)
- Se expresan como proenzimas (zimógenos)
- Presentan 3 dominios:
1. Prodominio terminal
2. Subunidad larga (p20) que contiene el centro activo
3. C-terminal que es la subunidad pequeña (p10)

Asp Prodominio terminal

Subunidad larga (p20)
Asp
Subunidad pequeña (p10)
ACTIVACIÓN DE CASPASAS

Asp

Asp Caspasa
iniciadora

Caspasa
activa
MECANISMOS DE ACTIVACIÓN
DE CASPASAS

1. Activación por otra caspasa

2. Activación inducida por proximidad

3. Asociación con una subunidad reguladora

 1. ACTIVACIÓN POR OTRAS
CASPASAS
- Activación de una caspasa por otra previamente activada:
cascada de caspasas

- Caspasas con prodominio corto: Caspasas efectoras

- Caspasas –3, -6, -7.

- Amplificación e integración de señales

1. ACTIVACIÓN POR OTRAS
CASPASAS
2. ACTIVACIÓN INDUCIDA POR
PROXIMIDAD
- Activación de una caspasa por proximidad: Trimerización de
receptores que reclutan caspasas y se procesan mutuamente.

- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.

- Caspasa -8.

- Implicada en vía extrínseca (CD95).

2. ACTIVACIÓN INDUCIDA POR
PROXIMIDAD
 3. ASOCIACIÓN CON UNA
SUBUNIDAD REGULADORA
- Activación de una caspasa a través de un cofactor.

- No se activa por proteolisis sino por cambio conformacional.

- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.

- Caspasa -9. Cofactor: Apaf-1. Citocromo c.

- Implicada en vía intrínseca o mitocondrial.

 3. ASOCIACIÓN CON UNA
SUBUNIDAD REGULADORA

Apoptosoma
 CASPASAS
- Las caspasas efectoras se activan proteolíticamente por otras
caspasas

- Las caspasas iniciadoras son activadas mediante interacciones

reguladas proteína-proteína.
3.2. SUSTRATOS DE

CASPASAS
 SUSTRATOS DE CASPASAS
- La caspasa-3 es la última responsable de los efectos apoptóticos
junto con las caspasas -6 y –7.

- Estas 3 caspasas ejecutoras causan el fenotipo apoptótico:

1) Fragmentación de DNA
2) Alteraciones de la membrana plasmática
3) Translocación PS
 1) FRAGMENTACIÓN DEL DNA
- La caspasa-3 actúa sobre el complejo DNasa activado por caspasa
(CAD) y sobre su inhibidor, iCAD.

iCAD CAD Caspasa-3

 2) ALTERACIONES DE LA
MEMBRANA PLASMÁTICA
- La caspasa-3 actúa sobre:

- La gelsolina
- La fodrina

- Se disocia de membrana plasmática del citoesqueleto

- Formación de vesículas
- Plegamiento de la membrana plasmática
3.3. INHIBIDORES

DE CASPASAS
 INHIBIDORES DE CASPASAS
- Proteínas inhibidoras de apoptosis (IAP).

- Se identificaron en baculovirus. Hay al menos 5 en mamíferos:

- X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP)

- c-IAP1
- c-IAP2
- IAP neuronal
- Survivina

- Todos inhiben caspasa –3 y –7 activa y procaspasa-9.

 INHIBIDORES DE CASPASAS

Frenan la apoptosis por inhibición, unión y degradación:

1. Dominio repetido IAP de baculovirus (BIR) por el q el IAP se

une e inhibe a las caspasas. Entre 1-4 dominios BIR.

2. Dominio RING q actúa como una ligasa de ubiquitina:

degradación del IAP y de cualquier caspasa unida a él.

3. Dominio CARD: regulación directa o indirecta del

procesamiento de las caspasas. c-IAP1 y c-IAP2
INHIBIDORES DE CASPASAS

RING BIR3 BIR2 BIR1 XIAP

c-IAP1
CARD RING BIR3 BIR2 BIR1
c-IAP2
3.4) VÍAS DE INDUCCIÓN

DE APOPTOSIS
3.4) VÍAS DE INDUCCIÓN DE APOPTOSIS

Existen dos vías de inducción de apoptosis:

3.4.1. Vía extrínseca o vía de los receptores de muerte

3.4.2. Vía intrínseca o vía de la mitocondria

 3.4.1. VÍA EXTRÍNSECA
- A través de receptores superficiales: receptores de muerte.
Receptores de la familia de TNFR: CD95, TNFR1, TNFR2. Tb
DR3, TRAIL...

- Requiere trimerización para la transducción de la señal.

- Al receptor activado se le asocia un complejo de proteínas:

dominio de señalización inductor de muerte (DISC, death-
induced signalling domain)
 DISC
1. El adaptador FADD se une a través de su dominio de muerte
(DD) al dominio de muerte del receptor activado

2. FADD contiene un dominio efector de muerte (DED) que por

homología atrae procaspasa-8 o FLICE que se activa.

3. Inhibición debida a proteínas con dos dominios DED: proteína

inhibidora de FLICE (FLIP, FLICE-inhibitory protein).
 CD95L

CD95

DD DISC
Procaspasa-8
DED
FADD

c-FLIP Caspasa-8

Bid Caspasa-3
 3.4.1. VÍA EXTRÍNSECA
FasL Fas

MORT/FAAD

caspasa 8 Bid Vía mitocondrial

caspasa-7 caspasa-3
caspasa-6

Deshidratación
citoplásmica
Externalización Formación Fragmentación
de PS de cuerpos Hidrólisis Fragmentación
DNA nuclear
apoptóticos
Condensación de NuMA
Cambios apoptóticos cromatina Cambios apoptóticos
extranucleares nucleares
3.4.1. VÍA EXTRÍNSECA
 3.4.2. VÍA INTRÍNSECA
- La regulación de la apoptosis en esta vía es debida a la familia de
Bcl-2.

- Bcl-2 fue descubierto como un proto-oncogén en el linfoma

folicular de células B y es homólogo a ced-9.

- Existen 19 miembros que se dividen en tres grupos.

- Cada miembro posee al menos uno de los cuatro motivos

conservados denominados dominios de homología con Bcl-2
(BH): BH1-BH4.
 FAMILIA DE Bcl-2
1. Grupo I:
- Actividad anti-apoptótica
- Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-w...
- 4 motivos BH: BH1-BH4
- Cola hidrofóbica en el C-terminal
2. Grupo II:
- Actividad pro-apoptótica
- Bax, Bak, Bok...
- Carecen de BH4
3. Grupo III:
- Actividad pro-apoptótica
- Bid, Bik, Bad, Bim...
- Sólo poseen el dominio BH3
- Pueden o no tener región transmembrana
 CONTROL DE LA APOPTOSIS
POR LA FAMILIA DE Bcl-2
- Los miembros de la familia de Bcl-2 intentan bloquear el
siguiente movimiento de otro.

- Algunos homodimerizan

- Se forman heterodímeros de miembros pro y anti-apoptóticos

neutralizándose
Gradiente
pro-apoptóticos
Gradiente
Anti-apoptóticos
MITOCONDRIA: CENTRO DE
LA MUERTE CELULAR
La mitocondria no es sólo la central productora de energía de la
célula, también es un arsenal pues secuestra un potente
combinado de proteínas pro-apoptóticas:

1. Citocromo c: Componente junto con Apaf-1 y caspasa

9del apoptosoma

2. Smac/DIABLO (second mitochondria-derived activator

of caspases/direct IAP-binding protein with low pI): es
una proteína que inhibe IAPs secuestrándolas.
 Daño genotóxico

Bcl-2 p53

Apaf-1 Bax

citocromo c

Procaspasa-9
Procaspasa-3 Smac/DIABLO

IAPs

caspasa-3
Apoptosoma
INTEGRACIÓN DE LAS DOS VÍAS
 APOPTOSIS
- Características definidas

- Regulada genéticamente

- Conservada en la evolución

- Muy regulada: patologías

- Inducida por señales externas e internas