FUNDAMENTOS DE

ESPESTROSCOPIA

DANIEL SANCHEZ VACA 2015

 CONTENIDO

Espectroscopa
Caractersticas de la Luz
Colores
Qu es longitud de Onda?
Relacin entre frecuencia, velocidad y longitud de onda
Absorcin / Absorbitividad
Las leyes de Lambert y Beer
Espectrofotometra
 COLORIMETRA Y ESPECTROFOTOMETRA COMO
PROCEDIMIENTOS ANALTICOS

Fotocolormetro

Especrofotmetro

Curva Patrn

Referencias e Imgenes
La luz tiene una naturaleza dual:
Como onda
Como una corriente de partculas o paquetes de energa (fotones)
Albert Einstein desarroll en 1905 la teora de que la luz
estaba compuesta de unas partculas denominadas fotones,
cuya energa era inversamente proporcional a la longitud
de onda de la luz.
 3
1

Foton

2
La teora electromagntica de la luz propuesta por
Maxwell: La perturbacin que se propaga como ondas de
luz est formada por fuerzas elctricas y magnticas, y la
perturbacin se produce en cargas elctricas en movimiento.
La naturaleza corpuscular de la luz se observa en fotos de
objetos iluminados muy dbilmente.
La imagen se forma punto a punto, y muestra que la luz
llega a la pelcula fotogrfica por unidades separadas que
los producen.
 COLOR
Los seres humanos (y algunos animales) apreciamos una
amplia gama de colores que, por lo general, se deben a la
mezcla de luces de diferentes longitudes de onda. Se
conoce como color puro al color de la luz con una nica
longitud de onda o una banda estrecha de ellas.
Cuanto ms larga la longitud de onda de la luz visible
tanto ms rojo el color.
Asimismo las longitudes de onda corta estn en la zona
violeta del espectro.
As todos los elementos existentes poseen un
espectro ***
Hay varios tipos de espectros, los ms comunes son los espectros
continuos, espectros de emisin y los espectros de absorcin.

Si es colocado frente al espectroscopio se podr ver, un elemento:

En situaciones en las que se le somete altas temperaturas y presiones y
no se presentan lneas obscuras se trata de un espectro continuo.
En situaciones normales y se observan unas lneas de colores frente a
un fondo negro, se trata de un espectro de emisin.
Y por ltimo si sucede la primer situacin y entre el elemento
afectado y el espectroscopio se coloca un elemento a menor
temperatura que el primero, se obtiene el espectro de absorcin
La luz blanca produce al descomponerla lo que se
llama un espectro continuo, que contiene el conjunto
de colores que corresponde a la gama de longitudes
de onda que la integran.
Todos los elementos poseen un espectro propio, que se puede medir
al someterse a temperaturas elevadas ya que producen espectros
discontinuos .
LONGITUD DE ONDA

La distancia entre dos picos (o dos valles) de una

onda se llama longitud de onda ( = lambda).

CARACTERSTICAS DE LAS ONDAS

nodo
La longitud y la frecuencia de onda son inversamente
proporcionales y se relacionan mediante la siguiente
ecuacin.
 U.V.
X
La luz visible es
L GAMMA slo una pequea
u parte del espectro
350 nm
z electromagntico
v con longitudes de
i onda que van
s aproximadamente
i de 350 nanmetros
b hasta unos 750
l 750 nm nanmetros
e Infrarrojo <nanmetro, nm =
Microondas milmillonsimas de metro>.
Radio
La luz blanca est compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando
un rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus componentes
de acuerdo a la longitud de onda
As la luz blanca es una mezcla de todas las longitudes de
onda visibles.
En el espectro visible, las diferencias en longitud de onda
se manifiestan como diferencias de color.
La distribucin de los colores se determina por la
longitud de onda de cada uno de ellos.
Las longitudes de onda mas largas que las del rojo se les
conoce como infrarrojas y las mas cortas que el violeta,
ultravioletas.

ULTRAVIOLETA Luz visible INFRARROJO

102 -104 ~ 104 104-107

UV Violeta Azul Verde Amarillo Naranja Rojo IR

4000 A Espectro Visible 7500 A
Relacin entre frecuencia, velocidad y
longitud de onda
Frecuencia natural
Cualquier objeto oscilante tiene una
'frecuencia natural', (vibracin en ausencia
de perturbacin).
frecuencia es el Nmero de vibraciones por segundo

As Frecuencia, es nmero de veces que la onda se

repite por segundo.

La Frecuencia se mide en Hertz (Hz)

 HERTZ ES:

HEINRICH HERTZ (1857-1894), Investigador alemn que

construy un dispositivo para generar y detectar en un laboratorio
ondas electromagnticas, demostrando su existencia as como, se
reflejan estas ondas, se refractan y se comportan como las ondas de
luz

Estim que la frecuencia f de la onda era de alrededor de 3 x 107 Hz.

Y determin que su longitud l era de 10 m. Con estos valores
estableci que la velocidad v de la onda es

v = f l = (3 X 107 Hz) X (10 m)

= 3 X 108 m/s = 300 000 km/s o sea, la velocidad de la luz.

l= c / u
Donde c = vel. de la luz en m. por seg.

c = l . u (m-1s-1)
u=c/l
Las ondas electromagnticas de
frecuencias extremadamente elevadas,
como la luz o los rayos X, suelen
describirse mediante sus longitudes
de onda, que frecuentemente se
expresan en nanmetros.
Un ejemplo es: Una onda
electromagntica con una longitud de
onda de 1 nm tiene, aproximadamente
una frecuencia de 300 millones de
GHz.
 l= vel / u
El sonido se propaga a una velocidad de 340 m
cada segundo
Se tiene una frecuencia de 440 Hz
l = 340 (m/s) / 440 Hz (ciclos por seg) = 0.77 m
4 x 10-5 cm = 400 nm (luz violeta)
7 x 10-5 cm = 700 nm (luz roja)
El color de un cuerpo depende de la luz que recibe,
refleja o transmite. Por ejemplo, el color rojo se d
cuando absorbe en casi su totalidad, todas las
radiaciones menos las rojas, las cuales refleja o
deja pasar dependiendo su estructura (slida o
transparente).
La energa UV es mayor que,
cualquier color del espectro visible.
Sin embargo los rayos X son ms
energticos que la luz UV, como se
puede apreciar por su longitud de
onda.

Con base a lo anterior se

puede entender que existe
una relacin inversa entre la
longitud de onda y la
energa del fotn
correspondiente.
Entonces, las energas en el rango ultravioleta-visible
excitan los electrones a niveles de energa superiores
dentro de las molculas y las energas infrarrojas
provocan solo vibraciones moleculares
 Absorcin
Absorbitividad
Proceso de Absorcin

La energa de excitacin a una molcula proveniente de un

fotn durante el proceso de absorcin se representa as:

A + hn A* A + calor

donde:
A es el absorbente en su estado de energa bajo,
A* es el absorbente en su nuevo estado de excitacin
energtica
hn representan a la constante de Planck y la frecuencia
respectivamente
La energa del fotn incidente posee una
longitud de onda (l)

A* es inestable y rpidamente revierte a su

estado energtico ms bajo, perdiendo as la
energa trmica correspondiente.

La absorcin de determinadas longitudes de

onda depende de la estructura de la molcula
absorbente (absortividad, a)
Cuando un rayo de luz monocromtica con una intensidad I0
pasa a travs de una solucin, parte de la luz es absorbida
resultando que la luz emergente I es menor que I0

Luz incidente (I0) Luz absorbida Luz emergente (I)

a a = absortividad

I0
I
c = concentracin.
(nmero de partculas por
cm3)
b
Longitud del medio
absorbente o ancho de la
celda
Absortividad (a)

a es una constante de proporcionalidad que

comprende las caractersticas qumicas de
cada compuesto, o molcula y su magnitud
depende de las unidades utilizadas para b y c.
Cuando se expresa la concentracin en moles por
litro y la trayectoria a travs de la celda en
centmetros, la absortividad se denomina
absortividad molar y se representa con el smbolo e
En consecuencia cuando b se expresa en
centmetros y c en moles por litro.
A = e bc
Donde A representa la absorbancia del compuesto
LAS LEYES DE LAMBERT Y BEER

Los fundamentos de la interrelacin de la luz

que se absorbe y la que se transmite
Ley de Lambert: cuando un rayo de luz
monocromtica (I0) pasa a travs de un medio
absorbente, su intensidad disminuye
exponencialmente (I) a medida que la longitud del
medio absorbente aumenta
I = I0e-ab

I0 I I0 I I0 I

1 cm. 2 cm. 3 cm.

Ancho de la celda
Ley de Beer: Cuando un rayo de luz monocromtica pasa
a travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye
exponencialmente a medida que la concentracin del
medio absorbente aumenta

I = I0e-ac
I I
I0 I I0 I0
Lo que significa que combinando ambas leyes se crea la Ley de Beer-
Lambert donde la fraccin de luz incidente que es absorbida por una
solucin es proporcional a la concentracin de soluto y al espesor de la
sustancia atravesada por la luz. La relacin entre la luz incidente (I0) y
la reflejada (I) dar una idea de la cantidad de radiacin que ha sido
absorbida por la muestra.
Ley de Lambert Beer:

I = I0e -abc

Si despejamos: I/I0 = e -abc

Al cociente de las intensidades se denomina
Transmitancia

T = I/I0 = e-abc
Sacando logaritmos:

Loge I/I0 = abc

Convirtiendo a log10:
Log10 I/I0 = 2.303 abc

Log10 I/I0 = abc

Absorbancia = Log10 I/I0 = abc

La Transmitancia (T): Es la relacin entre la
intensidad de luz transmitida por una muestra
problema (I) con la intensidad de luz incidente
sobre la muestra (Io):

T = I / I0

Se expresa como % T
La absorbancia es directamente proporcional a la
longitud del recorrido b a travs de la solucin y la
concentracin c del color absorbente. Estas
relaciones se dan como:

A = abc

A menudo b es dada en trminos de cm. y c en

gramos por litro, entonces la absortividad tiene
unidades de lg1cm1.
 Qu relacin guardan la transmitancia y la
absorbancia?

De acuerdo a las caractersticas de la sustancia

analizada, la luz que no se absorbe atraviesa la
solucin

LUZ
A
B
S Luz transmitida
O

I0 R
B
I
I
D T = I/I0
A
 Por lo tanto la absorbancia es reciproca de la
transmitancia
Absorbancia contra concentracin (comportamiento lineal)

Absorbancia

Concentracin
% Transmitancia contra concentracin (pendiente con signo negativo
y comportamiento exponencial)

% Transmitancia

Concentracin
 Absorbancia

De lo anterior se desprende que la Absorbancia (A) o luz que

es absorbida por la muestra es igual al logaritmo en base diez
del recproco de la transmitancia (T) o bien al -log10 de la
transmitancia, en el que el disolvente puro o (blanco) es el
material de referencia; esto es:

A = log10 1/T = log101- log10 T = 0 log10 T = log10 T

La representacin grfica correspondiente a absorbancia y
transmitancia en un gradiente de concentraciones es la
siguiente:

Concen
tracin
OBTENCIN DE TRANSMITANCIA UTILIZANDO VALORES
DE ABSORBANCIA
Con base en la relacin: T = 10-abc y considerando que T se
menciona en porcentaje (%)
%T = 10-abc x 100.
Aplicando logaritmos a la expresin anterior
log10 %T = -abc log 10 10 + log10 100
Invirtiendo trminos
log %T = log10 100 -abc log 10 10 = 2 abc * 1
log10 %T = 2 abc
Como abc = Absorbancia = A
log10 %T = 2 A.
 log10 %T = 2 A.
Ejemplo:
Una absorbancia de 0.6 a que equivale en % T?

Log10 % T = 2 0.6 = 1.4

Log10 % T = 1.4

%T = 1 / Log10 1.410

Aplicando antilog. a

1.4 = 15 % de transmitancia
Obtencin de absorbancia a partir de un valor de %
de transmitancia

RECORDANDO:
A = log10 1/T
Ejemplo de clculo
%T = 30
T = 0.30
Sustituyendo (1/T) 1/0.30 = 3.33
Log10 3.33 = 0.523 de absorbancia
ESPECTROFOTOMETRIA
Se le llama espectrofotometra a la medicin de la
cantidad de energa radiante que absorbe un
conjunto de elementos o un elemento en su estado
puro, en funcin de la longitud de onda de la
radiacin lumnica y a las mediciones a una
determinada longitud de onda.
Cmo se puede medir la radiacin que emiten o
absorben los cuerpos?.
Un aparato capaz de obtener el espectro de una radiacin, es
decir, de separar la radiacin en sus componentes, se llama
un espectroscopio.
Si el aparato es capaz de fotografiarla se llama un
espectrgrafo.
Y si es capaz de medirla diremos que se trata de un
espectrmetro.
Cuando es capaz de medir tambin la intensidad de la
radiacin, se llama espectrofotmetro.
ESPECTROFOTOMETRA COMO
PROCEDIMIENTOS ANALTICOS
Un espectrofotmetro: Es un instrumento
que descompone un haz de luz (haz de
radiacin electromagntico), separndolo en
bandas de longitudes de onda especficas,
formando un espectro atravesado por
numerosas lneas oscuras y claras, semejante
a un cdigo de barras del objeto, con el
propsito de identificar, calificar y
cuantificar su energa.
* Distribucin de la luz en el
espectrofotmetro
Espectrofotmetro Mecanismo Interno
 COLOR LONGITUD DE ONDA (l)
Rojo (R) 700 nm
Verde (G) 546.1 nm
435.8 nm
Azul (B)
Porque leer a diferentes l (longitudes de onda)
compuestos parecidos pero diferentes?

La explicacin radica en el hecho de que cada

producto qumico se caracteriza por zonas del
espectro visible o no visible en el cual absorbe con
mayor o menor intensidad conformando en su
conjunto el espectro de absorcin de tal sustancia.
Cada compuesto (de complejo a simple) presenta un espectro de absorcin
caracterstico

Absorbancia

l
Las longitudes de onda con mayor absorcin (picos) correspondern de forma
general a aquellas con las que se leer la muestra para determinar su
concentracin

Absorbancia

l
La relacin entre la absorbancia por una sustancia a una l determinada y su
concentracin es directamente proporcional es decir: a mayor concentracin
mayor proporcin de luz absorbida.

Absorbancia
Conc.
As, el espectro de absorcin de la clorofila es:
 Colorante comn, la Rodamina 6G en Metanol..

Espectro de Absorcin (lnea contnua) y Espectro de

Transmisin (lnea discontnua).
celda de 5uL

La muestra se coloca en una cubeta* de

forma prismtica
Se asume que el tubo, celda o cubeta en la cual se vierte
la solucin a leer no debe desviar la trayectoria de la luz
como requisito para el cumplimiento de la ley de Beer
Como el cuarzo aparte de ser muy transparente presenta un
comportamiento constante ante la variacin de la longitud de
onda es comn que las celdas del espectrofotmetro o
colormetro sean de este material .
 Curva Patrn

El razonamiento para el proceso de determinacin

de una concentracin desconocida es:
A partir de concentraciones conocidas de las cuales
tambin se sabe su absorbancia (curva patrn), es
posible interpolar (intercalar) la concentracin del
problema sabiendo su absorbancia (lnea roja en
figura siguiente)
 CURVA PATRN

0.6

0.5

A
Absorbancia del problema
B 0.4
S
0
R 0.3

B
A
0.2
N
C
Interpolacin
I
0.1
A

0
0 2 4 6 8 10 12

Concentracin mg/lt
Con base en que la Absorbancia guarda una relacin lineal con la
concentracin, se comprende la existencia de una relacin de
proporcionalidad entre la Absorbancia y la concentracin:

A1 / A2 = C1 / C2
Donde:
A1 = Absorbancia del problema.
A2 = Absorbancia de un estndar de concentracin conocida.
C1 = Concentracin del problema.
C2 = Concentracin del estndar.

Si despejamos C1 = Conc del problema

A1 (problema) * Conc estndar
Conc. (problema) =
A2 (estndar)
Ejemplo de curva patrn para la determinacin de A; donde se
solubiliza este colorante nicamente en agua siendo por tanto el agua
el tubo blanco o de referencia para la calibracin del equipo
espectrofotmetro.

TUBO Stock de A Agua Destilada ml

(3 x10 -4 g/ml) ml

1 0 10
2 0.05 9.95
3 0.10 9.9
4 0.20 9.8
5 0.40 9.6
6 0.80 9.2
En este ejemplo de determinacin de Glucosa, en la
preparacin de los tubos para la lectura de la curva patrn,
se incluyen ms elementos y por lo cual el tubo blanco (0)
contiene todos los componentes excepto la glucosa con el fin
de poder calibrar la absorbancia del equipo a cero.

Compuesto 1 2 3 4 5 6 7
(blanco)

Glucosa 0,1 mg/ml

0.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
(mL)
Agua destilada
1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0
(mL)
Fenol al 5% (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Acido sulfrico
5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
(mL)
 RESULTADO: De la curva patrn anterior
Absorbancia en el Espectrofotmetro a 490 nm

Tubos Absorbancia Curva de calibracin de glucosa

1 0
1
2 0.135 0.8

Absorbancia
3 0.253 0.6

4 0.417 0.4

5 0.658 0.2

6
0
0.574 1 2 3 4 5 6 7
7 0.768 Tubos
 Un aspecto importante de la evaluacin espectrofotomtrica, es
que muchas molculas orgnicas no absorben en el intervalo del
espectro visible sino en el rango de longitudes de onda acordes al
ultravioleta o al infrarrojo

Por lo que es comn, actualmente, que la mayora de los

espectrofotmetros, actuales, se encuentren provistos con lo
necesario para leer en de tales intervalos.

As, los grupos carbonilo presentes en los aldehdos (RCHO),

cetonas (RCOR), cidos carboxlicos (RCOOH), l steres (RCOOR)
y amidas (RCONHR) dan lugar a absorciones intensas en la regin
del espectro de infrarrojo situada entre <1780-1640 cm-1.
Absorciones mximas (picos de absorcin) de algunos compuestos
que absorben en la regin ultravioleta:
Grupos funcionales cuyos picos de absorcin se localizan en la regin
del infrarojo
 Tipos de Espectrofotmetro

Existen en la actualidad diversos tipos de aparatos con los

mismos principios los hay mecnicos y digitales; unos
miden solo la luz visible, otros son ms precisos y miden
tambin luz U.V. , Infrarroja, de absorcin atmica (AA),
flurescencia de rayos-X de emisin de plasma (ICP),,
multipropsitos (para medir directamente la solucin con
suspensin, muestras slidas y biolgicas), acoplado a
masas,etc..
 MCI MCI
Para medir Luz Visible Para medir Luz Visible y U.V.

MCI

Para medir Luz Visible y U.V.

Diferentes tipos de espectrofotmetros