E N Z I MAS

Dr. Byron Robalino

 Objetivo
Identificar
Los productos proteicos que cumplen con
la funcin de bio-catalizadores
 Sumario
Concepto
Componentes
Co-factor
Coenzimas
Clasificacin
de las enzimas
Modelos enzimticos
pH, Temperatura
 Enzimas
Molculas de primera clase: Protenas
- Del Griego zyma = fermento
- Facilitadores de las transformaciones
Qumicas : CATALIZADORES de las
reacciones
y cuando cumplieron su papel,
dejan el proceso sin sufrir cambio alguno.
Salen tal como entraron
 Las enzimas
son biocatalizadores especficos sintetizados por
el organismo cuya composicin es total o
parcialmente proteica.

aceleran reacciones y no se alteran

durante las transformaciones metablicas, disminuyendo
la energa de activacin.

Pueden intervenir muchas veces catalizando

la misma reaccin.
 Qu son las enzimas?

son catalizadores biolgicos

que permiten que las reacciones
metablicas ocurran a gran velocidad
en condiciones compatibles con la vida.

Como los catalizadores qumicos,

aceleran reacciones y no se alteran durante la
reaccin, por lo que pueden intervenir
muchas veces catalizando la misma reaccin.
 ENZIMAS
Una enzima es un biocatalizador de
naturaleza proteica de elevado peso
molecular, termolbil, cuyo papel es el de
acelerar la velocidad de una reacci n
qumica.
Como catalizadores, las enzimas actan
en pequea cantidad y se recuperan
indefinidamente.
 El
Sustrato (S) es transformado en Producto
(P) con intervencin de la enzima ( E)

S+E=P +E

Las Enzimas son Protenas que generalmente se

unen a fracciones no proteicas para tener
actividad
 COMPONENTES DEL SISTEMA ENZIMATICO

Enzima Protena que acelera una reaccin qumica Termolbil

Holoenzima enzima + cofactor

Apoenzima Porcin proteica de la holoenzima sin actividad
biolgica en ausencia de cofactor
Cofactor iones metlicos, Molculas orgnicas , Grupo
prosttico
Cofactor Son iones metlicos necesarios para potencializar la
accin de la enzima Termo estable
Coenzima Molculas orgnicas ( no proteicas) o Cosustrato
Derivados de las Vitaminas
Grupo Grupos compuestos por porfina hierro.
prosttico Principal el HEM
 ENZIMAS
enzimacompleta : holoenzima
Apoenzima.- porcin proteica y el cofactor

Coenzima Sustancia orgnica

se une laxamente a la enzima
transfiriendo algn componente
como electrones o parte de una
molcula sustrato. Ej. Complejo
vit- B
 COFACTOR
Cofactor Sustancia no protenica necesarias para la
actividad normal de la enzima. inorgnicos ej. Ines
metlicos.

Las isoenzimas
fsicamente diferentes de
una enzima, tienen la
misma actividad cataltica
y se cree que son el
producto de un error
parcial en la lectura de
un gen.
 Co - factor
1. Iones metalicos: 2. Molculas Orgnicas o
Mg, Mn, Zn, Cu, Se, Coenzimas
Fe, Cr, .. Vitaminas y
Ej: Zn en las derivados
carboxipeptidasas,
Mg en las quinasas, el 3. Grupos Prostticos
K en la piruvato Hem
quinasa,
 COENZIMA ABREVIATURA VITAMINA OTRA GRUPO
ESTRUCTURA ACARREADO

Nicotinadenindi NAD Nicotinamida Adenosin difosfato Hidruros

nucleotido Vit B3
Fosfato de NADP Nicotinamida Fosfoadenosin Hidruros
Nicotinadenindi Vit B3 difosfato
nucleotido
Flavinmononucl FMN Riboflavina Ortofosfato Hidrogeno
eotido Vit B2 Adenosin
Flavindinucleoti FAD Riboflavina Adenosin difosfato Hidrgenos
do Vit B2
Pirofosfato de TPP Tiamina Pirofosfato Aldehdos
Tiamina Vit B1
Lipoil lisina LSS Ac. Lipoico Lisina Acilo
Coenzima A Co.A Ac.Pntotenico Adenosin difosfato Acilo
Vit. B5
Biocitina Biotina Lisina CO2
Vit B8
Coenzima B12 B12 Deoxiadenosina Metilos

Tetrahidrofolato FH 4 Ac. Flico Fragmentos de un carbn

Vit. B9
 DINUCLETIDO DE NICOTINAMIDA
NAD :

Un ejemplo representativo es el caso de el cido pirvico:

COOH COOH
l l
C = O + NAD + H+ CH OH + NAD+
l l
CH3 CH3
Piruvato + coenzima reducida = lactato + coenzima oxidada
 Clasificacin de las Enzimas
1. aadido el sufijo ASA Nombre del sustrato
Urea ...Ureasa hidrlisis de la urea

Lpidos ..Lipasa los lpidos

c. rico... Uricasa del cido rico

Fructosa 1-6 difosfatasa frutosa 1-6 difosfato

 Clasificacin. Por la accin que realizan

2.- por la accin que realizan

a. Deshidrogenacin : Deshidrogenasa
- Lactato Deshidrogenasa Lctica DHL

b Forma un ciclo o anillo ciclasa

- adenilato ciclasa

c Oxidacin : Oxidasa
- Glucosa Oxidasa
 Clasificacin general de enzimas
1. Oxidoreductasas, reacciones de oxidoreduccin -
deshidrogenasas.
2. Transferasas, transfieren grupos funcionales de un
compuesto a otro.
Ej. quinasas grupo especializado transfiere g. fosfato.
3 Hidrolasas, rompen un enlace adicionando una
molcula de agua.
4 Liasas, rompen enlaces por mecanismos distintos a la
hidrlisis o la oxidacin.
ej decarboxilasas , aldolasas
5 Isomerasas, reacciones de interconversin de ismeros.
6 Ligasas o sintetasas unen molculas ( forman enlaces)
utilizando energa del ATP.
 1.- OXIDOREDUCTASAS

Subclases

Deshidrogenasasa
Oxidasas Coenzimas
Peroxidasas NAD y FAD
Hidroxilasas

Hidroxilasas incorporan Oxgeno

Peroxidasas descomponen H2O2

 2.- TRANSFERASAS
Transfieren grupos diferentes del hidrgeno: metilo,
amino, acilo, azucares

Subclase

Metiltransferasas
Acetiltransferasas
Glucociltransferasas
Transaminasas Ej. STGO-STGP,GGT
Cinasas (transfieren fosfatos de alta energa), ej CPK
 3.- HIDROLASAS
Ruptura de enlaces ester, uniones glucocdicas,
uniones pepdicas
Subclase
1 Esterasas ej: colinesterasa, colesterol esterasa, lipasa
2 Fosfatasas; ej: fosfatasa cida, fosfatasa alcalina
3 Glucocidasas ej amilasa
4 Peptidasas ejemplos pepsina, tripsina, plasmina,
renina,quimotripsina
- Exopeptidasas: cuando actan sobre a.a. cercanos a C
terminal
- Endopeptidasas si actan en parte media de
cadenas protecas
 4.- LIASAS
Desprenden grupos qumicos del sustrato por
mecanismos no hidrolticos
Rompen enlaces C-C, C=O, C= N

Subclases

Descarboxilasas
Aldehidoliasas ej. aldolasa
Cetocido liasas
Aminoliasas
 5.- ISOMERASAS
Forman racematos, Epmeros, ismeros cis/ Trans

Subclases
Racemasas
Epimerasas
Isomerasas cis/trans
Mutasas ej. fosfoglucomutasa
 6.- LIGASAS
Unen molculas con ruptura de ATP

Subclases

Aminocidos- ARN ligasas

Acido-tiol ligasas

Ligasas cido-amonaco

Ligasas cido-aminocido
 CIMOGENOS O PROENZIMAS
Son formas enzimticas
se sintetizan y almacenan en estado
inactivo para evitar su autodestruccin

Se presentan sobre todo en el tubo

digestivo y sangre
EJ: pepsingeno, que el HCl transforma en
pepsina.
 Isoenzimas
Son formas fsicamente diferentes de una enzima
pero tienen la misma actividad cataltica,
pueden presentarse en diferentes tejidos, clulas o
compartimientos subcelulares del organismo,

Se controlan por locis genticos diferentes

Ej. la dehidrogenasa lctica LDH.

Sus isoenzimas difieren por su estructura cuaternaria

Molcula oligomrica de 130.00 que tiene cuatro protmeros
de dos tipos llamados H y M
con un peso molecular de 34.000.
Solo la molcula tetramrica posee actividad cataltica
 ESPECIFICIDAD ENZIMATICA
Enzimas con Especificidad Relativa
Actan sobre una clase de unin particular
ej:
Sobre enlaces covalentes: lipasa sobre las
grasas
Enzimas con Especificidad Absoluta
Actan sobre un sustrato determinado ej.
ureasa sobre la urea
 Especificidad enzimtica
Las enzimas catalizan las reacciones qumicas
aumentado 10 a la 3 a 10 a las 8 veces la
velocidad de una reaccin qumica.
Y cada enzima es capaz de transformar miles
de molculas de sustrato por segundo
Algunos tipos de DNA como las endonucleasas
de restriccin pueden actuar como enzima

SON UTILIZADAS PARA LA DETECCIN

PRENATAL DE TRASTORNOS HEREDITARIOS
Y PARA EL MAPEO DEL DNA
 Modelos
1. Fisher o de llave en cerradura: compatibilidad
geomtrica
La llave y la cerradura Fisher, 1890)

Centro activo y sustrato son perfectamente

Complementarios Sustrato Reconocimiento molecular
1. Koshland o de ajuste inducido: se produce un
cambio de conformacin en la enzima para su
acoplamiento entre centro activo y sustrato
 Ajuste inducido Koshland, 1958)

La unin del sustrato induce un cambio en el centro activo

que aumenta la complementariedad
Reconocimiento molecular dinmico
 Factores que afectan la velocidad de la reaccin :

1. pH Las reacciones qumicas funcionan a un

pH y temperatura ptima mas all o menos de
sus lmites la enzima se desnaturaliza
2. TEMPERATURA: La velocidad de la reaccin
se acelera hasta alcanzar un valor ptimo
Debido a que un mayor nmero de molculas
alcanzan el estado de transicin.
3. Concentracin del sustrato
4. Concentracin de la Enzima-coenzima
 EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Los aumentos de T aceleran las reacciones qumicas: por
cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se
duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta
ley general.
Por ser protenas, a partir de cierta temperatura, se
empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la
cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura
ptima. Por encima de esta temperatura, prdida de actividad
cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad
enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.
 pH
cada enzima tiene un pH ptimo, en el cual
la actividad cataltica es mxima.
Generalmente este pH oscila entre 5 y 9,
El pH influye porque afecta
la ionizacin del sitio activo,
la ionizacin del substrato y
los cambios de conformacin espacial de
las enzimas
 EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables

(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en
las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del
medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o
neutra.
Como la conformacin de las protenas depende, en parte,
de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la
conformacin ser la ms adecuada para la actividad
cataltica. Este es el llamado pH ptimo.
 pH optimo

Generalmente este pH oscila entre

5 y 9,

Pepsina gstrica ..1.5-2.5

Acetil colinesterasa...7
Fosfatasa alcalina..9.
Catalasa ..7.0-7.6
Ureasa . 7
arginasa ..10
Cada enzima tienen un pH y temperatura ptimos

Variacin de la actividad
de una
enzima mitocondrial
(fumarasa) adistintos pH

.
.
El interior de la clula es denso y, aunque
los sustratos y las enzimas estn en
nmero relativamente pequeo, se pueden
encontrar y dar lugar al complejo ES
porque estn en continuo movimiento.

Las enzimas se mueven ms lentamente

que los sustratos y la velocidad de
encuentro va a depender de la
concentracin de sustrato presente
REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Cambios pH

Cambios temperatura

Presencia Cofactores

Las concentraciones del sustrato y de los

productos finales

presencia de inhibidores

Modulacin alostrica

Modificacin covalente

activacin por proteolisis

Isoenzimas
 ACTIVIDAD ENZIMTICA
Reaccin qumica que produce transformacin de
una sustancia inicial, reactivos o sustratos (S),
a otra sustancia final o producto (P).
Esta transformacin no se verifica directamente,
ya que es necesario un paso intermedio en el cual
el reactivo se active, de forma que sus enlaces se
debiliten y se favorezca su ruptura.
Este paso intermedio recibe el nombre de
complejo activado y requiere un aporte de
energa, generalmente en forma de calor, que se
conoce como energa de activacin
Energa libre de activacin y la
velocidad de reaccin
 Las enzimas pueden actuar de dos formas

1.- Fijndose con enlaces fuertes (covalentes)

al sustrato, de modo que se debiliten sus
enlaces y que no haga falta tanta energa
para romperlos

2.- Atrayendo a las sustancias reaccionantes

hacia su superficie de modo que aumente
la posibilidad de encuentro y que la
reaccin se produzca ms fcilmente.
 Las reacciones catalizadas por enzimas tienen cintica
de saturacin

Cuando se miden las

velocidades iniciales (vo) de
una reaccin enzimtica con
distintas concentraciones de
sustrato [S] en las mismas
condiciones de pH y
temperatura y manteniendo
constante la concentracin
de enzima [E], se obtiene
una curva como se
representa a continuacin:
 Ecuacin de L. Michaelis y M. L. Menten

La velocidad de reaccin (V )
depende de
1.- la concentracin del sustrato [S],
2.- de la velocidad mxima (Vmx.)
que se puede alcanzar con una
determinada concentracin de
enzima y
3.- De la constante de Michaelis-
Menten, KM, que depende de la
afinidad entre la enzima y el
sustrato.
La constante KM es igual a la relacin
entre la concentracin del sustrato,
para la cual la velocidad de la
reaccin corresponde a la mitad de
la velocidad mxima
 Mientras menor sea la energa de
activacin, mayor ser el nmero de
molculas que alcancen el estado de
transicin, y por tanto mayor ser la
velocidad de la reaccin qumica

KM BAJA = alta afinidad de la enzima por

el sustrato
KM ALTA= baja afinidad de la enzima por
el sustrato
 Inhibidores.
son sustancias que disminuyen la actividad
y la eficacia de una enzima o bien impiden
completamente la actuacin de la misma.

La inhibicin puede ser de dos tipos:

irreversible y reversible.
 La inhibicin irreversible
o envenenamiento de la enzima tiene lugar :
cuando el inhibidor o veneno se fija
permanentemente al centro activo de la
enzima alterando su estructura y, por
tanto, inutilizndola
 La inhibicin reversible
tiene lugar cuando no se inutiliza el centro
activo, sino que slo se impide
temporalmente su normal funcionamiento.
Existen dos formas:
- competitiva y
- no competitiva.
 La inhibicin reversible competitiva

se debe a la presencia de un
inhibidor cuya molcula es
similar al sustrato, por lo que
puede competir con el
sustrato en la fijacin al
centro activo de la enzima.
Si se fija el inhibidor, la enzima
no puede romperlo, como
hara con el sustrato.
Por tanto, la enzima no puede
actuar hasta que no se libera
de dicho inhibidor
 La inhibicin reversible no competitiva
Cuando el efecto de una sustancia
inhibidora no se puede revertir
aumentando la [S], el inhibidor es
no competitivo.
Este compuesto se une a un sitio
distinto al sitio activo y por
eso puede formarse el complejo
enzima-sustrato-inhibidor (EIS)
que no da productos. De hecho, la
presencia del inhibidor acta como
si disminuyera la [E] presente y por
eso nunca se llega a la Vmx por
ms que se aumente la [S]. Las
molculas de E libre que estn en
condiciones de actuar y dar
producto, se comportan como si no
hubiera inhibidor y por eso el Km de
la reaccin no vara.
 Desnaturalizacin y renaturalizacin

Rompimiento arreglo tridimensional (unfolding)

Puede ocurrir por cambios en pH,
temperatura, uso de solventes orgnicos,
detergentes, agentes caotrpicos, o
concentraciones elevadas de urea o
cloruro de guanidino.
 Desnaturalizacin y renaturalizacin

En 1960, Anfinsen demostr que una

enzima desnaturalizada poda recuperar su
estructura tridimensional ( folding).
Contribuyen a este proceso las chaperonas,
isomerasa de disulfuro , isomerasa de
peptidil