Contar clulas

Hemocitmetro
Basados en la
microscopa

Mtodos
para contar
clulas

Tincin de cultivos en monocapa

Medidores de la resistencia
Electrnicos

Anlisis de imagen
Citmetro de flujo
Peso

Mtodos
aproximados

Contenido de ADN
Contenido de protenas

Mtodos para contar clulas

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El hemocitmetro o cmara de Neubauer

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1 mm

Profundidad = 0,1 mm
(rojo)
(verde)
(gris)
(amarillo)
(azul)

La cuadrcula del hemocitmetro

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Se introduce la suspensin de clulas en el hemocitmetro

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La regin de recuento del hemocitmetro

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La cmara de recuento del hemocitmetro

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Recuento de clulas con el hemocitmetro

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Observacin con microscopio ptico y recuento de clulas

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De las tres lneas,

la del centro es la
que corresponde al
lmite del cuadrado

Clula muerta

Clula viva

Diferencias entre clulas vivas y muertas

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Tincin de cultivos en monocapa

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Hay tres tipos de contadores electrnicos

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Funcionamiento del contador de clulas electrnico (1)

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Funcionamiento del contador de clulas electrnico (2)

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Es importante
poner lmites a los
tamaos (dimetro
celular) que se van
a medir. El lmite
inferior elimina el
ruido electrnico y
los residuos
celulares. El lmite
superior se pone
en 30 micras o en
infinito.

7,6 50 m
Hay que establecer el rango de tamaos a medir

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El contador distingue las clulas muertas

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Con este contador no hay que marcar las clulas

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Recuento mediante anlisis de imagen

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Fundamento del recuento de clulas por anlisis de imagen

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Recuento de clulas por anlisis de imagen

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Esquema del anlisis de la imagen

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Recuento de clulas mediante citometra de flujo

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La difraccin de luz frontal permite
contar las clulas y, a la vez, nos
da informacin sobre su tamao.

Citometra de flujo

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Contar clulas

Estimacin del nmero de clulas a partir del peso

Contar clulas

Estimacin del nmero de clulas a partir contenido proteico

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Mtodo de Bradford: fundamento

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Mtodo de Bradford: protocolo

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Estimacin del nmero de clulas a partir contenido de ADN

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Determinacin de ADN por la fluorescencia del H33258

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Estimacin del ADN por la absorbancia en el ultravioleta

Contar clulas

Comparacin de los diversos mtodos para contar clulas

Contar clulas
Exclusin del azul tripn
Marcaje fluorescente
con naranja de acridina
y ioduro de propidio
Mtodos para
determinar la
viabilidad de
las clulas

Sntesis de novo de protenas:

Incorporacin de 3H-Leu o 35SMet a las protenas
Sntesis de novo de
ADN: Incorporacin de
3
H-timidina al ADN
Medidas de fluorescencia

Mtodos para determinar la viabilidad de las clulas

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Viabilidad celular mediante tincin con azul tripn

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Viabilidad celular mediante tincin con azul tripn

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Clulas vivas

Naranja de acridina: atraviesa la

membrana celular y tie los
cidos nucleicos, generando una
intensa fluorescencia de color
verde a bajas concentraciones.
Ioduro de propidio: no atraviesa
la membrana de clulas intactas,
pero s la de las clulas daadas.
Se une a los cidos nucleicos,
desplazando al naranja de
acridina y genera una intensa
fluorescencia de color rojo.

Clulas muertas
Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio

Contar clulas

Medida de la viabilidad celular a partir de la sntesis de protenas

Contar clulas

Medida de la viabilidad celular a partir de la sntesis de ADN

Contar clulas

Medida de la viabilidad celular con molculas fluorescentes

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La intensidad de la fluorescencia es directamente

proporcional al nmero de clulas presentes en la muestra.

Protocolo del Vita-Blue Cell Viability Reagent