Recombinacin

Integrantes:
Barchuk Hector
Sikorski Lisandro

Qu es la recombinacin?
La recombinacin es el proceso por el cual una hebra de
material gentico, es rota y luego unida a una molcula de
ADN diferente.

Porque tiene importancia biolgica?

1.Generacin de nuevas combinaciones de
alelos (crossing over durante la meiosis)
2. Generacin de nuevos genes (e.g., rearreglo
de los genes de las inmunoglobulinas)
3. Integracin de un elemento especfico de
DNA
4. Reparacin del DNA

Diferencia entre eucariotas y

procariotas
EN EUCARIOTAS
Es durante la meiosis. Ocurre la recombinacin
intercambio despus de la primera divisin celular

La meiosis comprende dos rondas de

divisiones nucleares sucesivas, con un
slo evento de replicacin del DNA.

COMPLEJO SINAPTONEMICO: es
una estructura proteica formada por
dos elementos laterales y uno central
que se van cerrando a modo de
cremallera y que garantiza el perfecto
apareamiento
entre
cromosomas
homlogos durante la primera divisin
meitica.

Diferencia entre eucariotas y

procariotas
EN PROCARIOTAS.
Para incorporar DNA a su cromosoma, despus de que
ste entr por transformacin, transduccin o
conjugacin. En eventos de reparacin de DNA.

Tipos de recombinacin
Recombinacin general u homloga
Involucra el intercambio genetico entre dos moleulas de DNA.
Depende de la intervencin de un equipo enzimtico caracterstico, en el
que la protena RecA (o equivalente) es central en el proceso.
Recombinacin especfica
legtima
Involucra el intercambio
gentico en secuencias
definidas de DNA
Es independiente de RecA.
Este tipo de recombinacin
es tpica de la integracin
de genomios de fagos en
sitios
concretos
del
genomio
de
bacterias
hospedadoras.

Recombinacin especfica ilegtima:

fenmenos de transposicin
Es la insercin de elementos de DNA que se
mueven de un lugar a otro y usualmente tiene
poca similitud en su secuencia
Es independiente de RecA.
El elemento transponible codifica una enzima
que reconoce secuencias especficas
inversamente repetidas en los extremos del
propio elemento, lo cual se requiere para el
proceso de transposicin.
Muchos elementos transponibles (pero no
todos) poseen un mecanismoreplicativode
transposicin.

Recombinacin homologa

Mecanismo:
1-Ruptura de las dos cadenas de DNA homologas
2-Apareamiento de las dos cadenas de DNA
3-Regeneracion de los enlaces fosfodiester para unir las cadenas homologas
4-Ruptura de las otras dos cadenas y volver a unirlas

Modelo de holliday

-Apareamiento de los DNA duplex y cortes

en las posiciones correspondientes de las
dos cadenas de DNA.
-Los extremos libres se intercambian y se
unen con los extremos formando enlaces
intermoleculares.
-Se sellan los enlaces.
-Una de las cadenas puede desplazarse en
cualquier direccin.
-Migracin de rama (Branch migration)
-Ruptura de los intermediarios.
-Las HJs pueden ser resueltas de dos
maneras aunque slo una produce
verdaderas molculas recombinantes.

Modelo de la va recBCD
Corte e intercambio
La protena RecBCD produce un corte en el extremo
3 de la secuencia Chi
RecBCD tambin tiene actividad de helicasa,
desenrrollando el DNA.
La cadena sencilla es cubierta con las protenas RecA
y SSB.
La cadena sencilla de DNA invade y desplaza una
cadena del DNA duplex.
Ocurre identificacin y apareamiento con secuencias
homlogas en el DNA duplex desplazado.
Apareamiento en la regin homloga.

Migracin y resolucin

La cadena desplazada sufre un corte

La cadena desplazada se aparea ahora con la cadena homloga del otro cromosoma
Se sellan los cortes por accin de la DNA ligasa generando la Holliday junction.
RuvA + RuvB = Helicasa dependiente de ATP participan en el desplazamiento de la rama.
RuvC: Resolvasa, hace los cortes en las dos cadenas para la generacin de las dos molculas de DNA
duplex recombinadas.

Enzimas y protenas
RecBCD
Esta enzima tiene cinco actividades:
Exonucleasa V;
Helicasa
Endonucleasa
ATPasa
Exonucleasa sobre DNAss

La actividad de helicasa genera asas grandes antes

de que el DNA se vuelva a renaturalizar.
Cuando RecBCD encuentra una secuencia Chi, se
disocia la subunidad D y la enzima RecBC acta como
helicasa para abrir el DNA en un evento dependiente
de ATP. Se realiza el corte en el DNA y se genera la
cadena sencilla de DNA que es estabilizada por RecA
y SSB para iniciar el proceso de recombinacin.
RecBCD tiene:
1. Subunidades de endonucleasa (recBCD) que cortan
una cadena de DNA cercana a la secuencia Chi
2. DNA helicasa (subunidad recBC)
3. ATP-asa dependiente de DNA Desenrrolla al
DNA para generar regiones de DNA de cadena
sencilla (SS)

Enzimas y protenas
RecA
RecA es una protena de cadena sencilla con
mas fuerza que DNA de cadena doble.
Promueve intercambio de cadenas in vitro.
Participa en tres pasos:
Pre-sinapsis: RecA se une al DNAss
Sinapsis: Alineamiento de las secuencias
complementarias
que
participan
en
el
intercambio.
Post-Sinapsis: La cadena sencilla desplaza y
reemplaza a la cadena (+) del DNA de doble
cadena.

Condiciones para la actividad de RecA

1. Una de las dos molculas tiene una regin de DNA
de cadena sencilla a la cual se puede unir RecA.
2. Las dos molculas deben tener una regin de
homologa (casi idntica) de un mnimo de 50 150
pb.
3. Debe haber un extremo libre en esa regin de
homologa que pueda iniciar el intercambio de
cadenas.

Encimas y protenas
Ruv A
Es un tetrmero que se une a las
cuatro hebras del intermediario de
Holliday
Ruv B
Es un hexmero con actividad
helicasa y ATPasa que sirve de
motor para su movimiento. El
consumo de ATP permite a la
molcula girar
Ruv C
Es una endonucleasa que corta las
dos cadenas de DNA en la Holliday
Junction y resuelve los
intermediarios de Holliday

Recombinacin especfica legtima

Caracteres generales:
Es independiente de RecA
Es independiente de grandes regiones de homologa
entre exo- y endogenote.
El proceso est catalizado por enzimas especficas
llamadas en general "recombinasas", que tienen
unmecanismo de accin similar al de las
topoisomerasas de tipo I.
No hay replicacin de ADN durante el evento de
recombinacin especfica de sitio, por lo que
tambin se la llama "conservativa".

Significado evolutivo del mecanismo:

Permitecambios adaptativos
rpidos y reversiblesante posibles
cambios rpidos en determinadas
condiciones del medio ambiente que
son importantes dentro del nicho
ecolgico de la bacteria.
Algunas bacterias patgenas usan
este sistema para escapar al sistema
inmunitario del hospedador al que
parasitan.

Caso mas estuciado integracion de fago a E. coli

En el estado lisognico, el ADN delse integra en el cromosoma de E. coli, y mantiene todas sus funciones
lticas "desconectadas". En esta situacin se le llamaprofago, y se comporta como una porcin "normal" del
genomio de su hopedador. Eventualmente, el profago puede inducirse, es decir, sus funciones lticas se
activan: el profago se escinde del cromosoma bacteriano, se circulariza y conecta todos los genes cuya
expresin conducir a la produccin de muchas partculas del virus, que terminan lisando la clula, y
liberndose para reiniciar el proceso.
El paso del ADN del fago desde su forma circular (vegetativa) a la forma de profago (ciclo lisognico) se
debe a un fenmeno de recombinacin especfica de sitio, en el que estn implicadas las secuencias attP(del
fago) yattB(de la bacteria). La zonaattBest situada entre los operonesgalybiodel cromosoma deE. coli.
Cada una de las zonasattest compuesta de una secuencia central , de 15 p.b., y de dos regiones
adyacentes, llamadas brazos. Los ncleos de attPy deattBsonexactamente idnticos, mientras que los 4
brazos son diferentes del ncleo y diferentes entre s.

Recombinacin especfica ilegtima:

Caracteriticas Generales
Las transposasas reconocen los terminales inversamente repetidos del transposn, y cortan en
los extremos.
Por otro lado, las transposasas cortan tambin en una secuencia diana ms o menos aleatoria
del sitio a donde se van a transponer . Los cortes son en ambas cadenas, pero en situaciones
ligeramente separadas entre s en las dos cadenas. Posteriormente hay empalmes entre las
cadenas cortadas del Tn y de la diana.
La transposicin duplicativa implica la replicacin de la corta secuencia diana y la replicacin
del propio transposn.
Tipos de elementos transponibles
Secuencias de insercin (IS):Son elementos pequeos, dotadas en sus extremos de
terminales inversamente repetidos (IR). Normalmente slo poseen un gen, que codifica la
transposasa. Por lo tanto, a diferencia de los transposones, no confieren fenotipo
seleccionable.
Transposones (Tn): Son elementos de mayor tamao que los IS . Poseen al menos un gen para
la transposasa y un gen responsable de alguna funcin no relacionada con la transposicin:
concretamente, muchos transposones portan genes cuya expresin da fenotipos fcilmente
seleccionables o detectables
Integrones (In): Los integrones son un nuevo tipo de elementos transponibles dotados de
terminales inversamente repetidos que se caracterizan por poseer un gen codificador de una
integrasa. Se transponen como una IS o un Tn, pero adems, la integrasa les ha capacitado
evolutivamente para realizar una recombinacin especfica de sitio por la que han
incorporado a su estructura algn gen procedente de otro elemento gentico

Recombinacin especfica ilegtima:

Modelo de transposicin de Tn3: ocurre en dos etapas:
Formacin de un cointegradoentre el replicn donador y el replicn receptor, reaccin
que depende de la transposasa. En ms detalle:

la transposasa reconoce los terminales IR del Tn3 y corta en el ADN diana.

Cada extremo protuberante de la secuencia diana se une a un terminal cortado del Tn3.
El extremo 3' que hay delante de cada mella sirve ahora como cebador para un proceso de
sntesis reparativa de ADN. As pues, a partir de cada "mella" surge una horquilla de replicacin,
que avanza hacia el interior del transposn, hasta llegar al otro extremo. El resultado final es
uncointegrado, en el que los dos replicones originales estn unidos a travs de dos copias

Resolucin del cointegrado: la resolvasa especfica del transposn reconoce las dos
secuenciasres, y realiza una reaccin de recombinacin especfica conservativa, anloga
a la reaccin de escisin del fagol. El resultado de esta accin es que se regenera el
replicn donador, con una copia del Tn3, y apareceuna nueva copia del Tn3 en el
replicn receptor, limitada por dos copias en la misma orientacin de la secuencia
diana
Tn3:
Es un transposn, cuyos extremos son
terminales inversamente repetidos de
38pb. Posee 3 genes:
tnpA: codifica la transposasa
tnpR: codifica la resolvasa
bla: codifica unab-lactamasa

Su importancia como herramienta

Para realizarmutagnesis por insercin.

Los elementos genticos mviles se
pueden emplear comoregiones
porttiles de homologa.
Se pueden creargenotecas
Con determinados Tn se pueden generar
frecuentesdelecciones.