Introduccin a la

Histologa
Jos Roberto Guajardo
Martnez

Histologa

Rama de la anatoma que estudia los tejidos animales y

plantas, sinnimo de anatoma microscpica, ya que su
materia no slo incluye la estructura microscpica de los
tejidos sino tambin la de la clula, rganos y sistemas.
El cuerpo est compuesto de:
Clulas
Matriz intercelular
El lquido extracelular
(derivado del plasma sanguneo)
que transporta nutrientes y sustancias
de desecho.

Preparacin de los tejidos

Los pasos para la preparacin de tejidos para la

microscopia de la luz son:
Fijacin
Deshidratacin y aclaramiento
Inclusin
Corte
Montaje e inclusin de los cortes

Fijacin
Tratamiento del tejido con sustancias qumicas que retardan las
alteraciones celulares subsecuentes de la muerte y conservan su
estructura.
-Formalina y fijador de Bouin: que permite el entrecruzamiento de las
protenas y por lo tanto una imagen similar al tejido vivo.

Fijador de boiun: 75 ml de solucin acuosa saturada de cido pcrico,

25 ml de formol y 5 ml de cido actico glacial.

Deshidratacin y
aclaramiento

Se realiza la deshidratacin con alcohol empezando con el

50% hasta el 100% para eliminar el agua despus, el tejido
se trata con xileno, una sustancia qumica que es miscible
con parafina fundida.
Este proceso se conoce como aclaramiento, ya que el
tejido se torna transparente en xileno.

Inclusin

Con objeto de distinguir entre s las clulas superpuestas en

un tejido y la matriz extracelular, se debe incluir los tejidos
en un medio apropiado y a continuacin seccionarlos en
cortes delgados.
Se coloca el tejido en un recipiente adecuado con parafina
fundida hasta que se infiltra por completo.
Una vez que se impregna el tejido con parafina, se coloca
en un rectanguloulo pequeo, recubierto con parafina
fundida y se deja endurecer para formar un bloque de
parafina que incluya al tejido.
INCLUSION
Estufa a 58 grados con los tres baos de parafina (wax en ingls).

Seccin

Se realiza con un micrtomo, un aparato equipado con una

hoja y un brazo que desciende en el bloque de tejido para
el corte de 5-10 micras.

Tambin se pueden efectuar cortes en tejidos congelados,

usando nitrgeno liquido, se seccionan a temperaturas
inferiores a 0 C.

En ambos casos se procede a teir con colorantes

especficos.

Montaje y tincin

Los cortes para microscopia de luz convencional , son

seccionados por hojas de acero inoxidable, se montan
portaobjetos de vidrio recubiertos con un adhesivo
La tincin para microscopia de luz se llev a cabo
principalmente con colorantes hidrosolubles despus se
elimina la parafina del corte, despus de lo cual se
rehidrata y tie el tejido.
Una vez teido, se deshidrata el corte de nueva cuenta

3 clases de colorantes
- Colorantes que diferencian los componentes cidos y bsicos de la
clula
- Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la
matriz extracelular
- Sales metlicas que se precipitan en los tejidos y forman depsitos de
metales en ellos
-

Los colorantes mas usados son hematoxilina y eosina

Hematoxilina: Es una base que tie los componentes cidos de la

clula en azul (DNA, RNA, ribosomas y ncleo; se denominan basfilos)

Eosina: Es un acido que tie los componentes bsicos de color rosado

(los componentes del citoplasma son bsicos en su mayora; acidofilos)

Microscopio

La calidad
tambin
depende de la
resolucin (la
capacidad de la
lente que tiene
para mostrar 2
puntos
separados entre
si).

Procedimientos avanzados de
observacin
Aprovechan la actividad enzimtica, qumica y otros fenmenos
fisicoqumicos relacionados con el mtodo en cuestin.
Histoqumica
Las reacciones de inters se tornan evidentes mediante la
formacin de un precipitado insoluble que toma cierto color.
Con frecuencia, la histoqumica se efecta en tejidos
congelados y puede aplicarse tanto en la microscopia de luz
como en la electrnica.

En una reaccin histoqumica se utiliza el reactivo cido

perydico de Schiff (PAS ), que forma un precipitado de color
magenta con molculas ricas en glucgeno y carbohidratos.

Inmunocitoquimica

En la inmunocitoqumica se utilizan anticuerpos marcados

con fluorescena y anti anticuerpos para identificar una
localizacin intracelular y extra celular de las
macromolculas ms precisa de la que es posible con la
histoqumica.

Este procedimiento exige desarrollar un anticuerpo contra

la macromolcula particular a localizar y marcar el
anticuerpo con un colorante fluorescente (fluorescena o
rodamina).

Hay procedimientos directo e indirecto

 Microscopia
electrnica de
transmisin:
-

Cortes mucho ms delgados, en

comparacin con los de la
microscopia de luz, para teir los
tejidos y se requieren tcnicas de
precipitado de metales pesados
en lugar de colorantes
hidrosolubles.

Microscopio electrnico requiere

enlaces cruzados de protenas
ms finos y especficos. Estos
fijadores, por ejemplo soluciones
amortiguadas de
glutaraldehdo,
paraformaldehdo, tetrxido
de osmio y permanganato de
potasio.

 Microscopia electrnica de
barrido
La microscopia electrnica de barrido proporciona una
imagen tridimensional del espcimen. A diferencia de la
microscopia electrnica de transmisin, la de barrido se usa
para observar la superficie de un espcimen slido. Con esta
tcnica es posible ver una imagen tridimensional del objeto.
Por lo general, el objeto que se observa se prepara en una
forma especial que permite depositar en la superficie del
espcimen una capa delgada de un metal pesado, como oro o
paladio.